CC BY
67
ВестникВГУИТ, №1, 206
УДК 57.083.133
DOI: http://dx.doi.org/10.20914/2310-1202-2016-1-191-197
Аспирант Ле Ань Туан, профессор А.В. Канарский, доцент З.А. Канарская
(Казанский национальный исследовательский технологический университет) кафедра пищевой биотехнологии. тел. (843) 231-89-13 E-mail: alb46@mail.ru доцент Т.В. Свиридова
(Воронеж. гос. ун-т. инж. технол.) кафедра биохимии и биотехнологии.
тел. (473) 255-07-51
E-mail: sviridovatv@yandex.ru
Graduate Le Anh Tuan, professor A.V. Kanarskii, associate professor Z.A. Kanarskaya
(Kazan national research technological university) Department of food biotechnology.
phone(843)231-89-13
E-mail: alb46@mail.ru
associate professor T.V. Sviridova
(Voronezh state university of engineering technologies) Department of biochemistry and biotechnology. phone (473) 255-07-51 E-mail: sviridovatv@yandex.ru
Эффективность синтеза p-фруктофуранозидазы дрожжами Debaryomyces hansenii при культивировании на питательной среде из мелассы
The efficiency of synthesis of p-fructofuranosidase by Debaryomyces hansenii yeast when cultured on a nutrient medium from molasses
Реферат. Распространение D. hansenii в различных субстратах можно объяснить достаточно высокой гидролитической активностью, что является предпосылкой их применения в биотехнологии для получения различных биопродуктов, в частности литических ферментов. В работе определена продуктивность и эффективность синтеза внеклеточного фермента в-фруктофуранозидазы дрожжами D. hansenii на питательной среде из мелассы. Показано, что эффективность культивирования дрожжей D. hansenii на питательной среде из мелассы зависит, прежде всего, от штамма. Установлено, что наиболее продуктивным и эффективно синтезирующим внеклеточный фермент в-фруктофуранозидазу являются дрожжи D. hansenii штамм Н4651. Наибольшая продуктивность и эффективность синтеза внеклеточного фермента в-фруктофуранозидаза у дрожжей D. hansenii штамм Н4651 проявляется при культивировании на питательной среде из мелассы без дополнительных биогенных веществ при температуре 20 oC. Установлено, что потребление редуцирующих веществ не адекватно количеству синтезируемой биомассы дрожжей D. hansenii. Содержание редуцирующих веществ после 50 час культивирования дрожжей D. hansenii Н4651 начинает увеличиваться. Полученную закономерность увеличения РВ в культуральной жидкости можно объяснить синтезом дрожжами D. hansenii внеклеточного фермента в - фруктофуранозидаза, которая гидролизует сахарозу в питательной среде. Наибольшая удельная скорость роста наблюдается у дрожжей D. hansenii Н4651 при температурах культивирования 15 и 20 °С. Выход биомассы дрожжей D. hansenii Н4651 превышает выход биомассы при культивировании дрожжей D. hansenii штаммов Н433 и Н18-3.
Summary. Distribution D. hansenii in different substrates can be explained sufficiently high hydrolytic activity, which is a prerequisite for their use in biotechnology to produce various biological products, in particular lytic enzymes. The paper is picked productivity and efficiency of synthesis of extracellular enzyme в-fructofuranosidase D. hansenii yeast nutrient medium from molasses. The efficiency of D. hansenii yeast culture in a nutrient medium of molasses depends primarily on the strain. It was found that the most productive and efficient synthesizing extracellular enzyme в-fructofuranosidase is yeast strain D. hansenii H4651. Maximum productivity and efficiency of the synthesis of the extracellular enzyme в-fructofuranosidase D. hansenii yeast strain H4651 seen when cultured in a nutrient medium from molasses without additional nutrients at a temperature of 20 oC. It was found that the consumption of reducing substances is not an adequate amount of yeast biomass synthesized D. hansenii. The content of reducing substances after 50 hours of cultivation D. hansenii yeast H4651 Uwe-creases. The resulting pattern PB increase in liquid culture may explain synthesis drozh-Jamie D. hansenii в - fructofuranosidase extracellular enzyme which hydrolyzes sucrose medium. The highest specific growth rate observed in yeast D. hansenii H4651 at temperatures cultivated-tion 15 and 20 ° C. Out D. hansenii yeast biomass H4651 exceeds the yield of biomass when cultured yeast D. hansenii strains H433 and H18-3.
Ключевые слова: меласса, дрожжи Debaryomyces hansenii, культивирование, в - фруктофуранозидаза.
Keywords: molasses, yeast Debaryomyces hansenii, cultivation, в - fructofuranosidase.
Для цитирования Ле Ань Туан, Канарский А.В., Канарская З.А., Свиридова Т.В. Эффективность синтеза ß-фруктофуранозидазы дрожжами Debaryomyces hansenii при культивировании на питательной среде из мелассы // Вестник Воронежского государственного университета инженерных технологий. 2016. №1. C. 191-197. doi:10.20914/2310-1202-2016-1-191-197.
© Ле Ань Туан, Канарский А.В., Канарская З.А., Свиридова Т.В., 2016
For cite
Le Anh Tuan, Kanarskii A.V., Kanarskaya Z.A., Sviridova T.V. The efficiency of synthesis of P-fructofuranosidase by Debaryomyces hansenii yeast when cultured on a nutrient medium from molasses. Vestnik voronezhskogo gosudarstvennogo universiteta inzhenernyh tekhnologij [Proceedings of the Voronezh state university of engineering technologies]. 2016, no. 1, pp. 191-197. (In Russ.). doi: 10.20914/ 2310-1202-2016-1-191-197.
ВестникВГУИТ, №1, 206
Наиболее распространенный вид аско-мицетовых дрожжей - это телеоморфные аскос-поровые дрожжи Debaryomyces hansenii, которые обнаруживаются в почвенно-растительных субстратах. Дрожжи D. hansenii находят в помете растительноядных животных [1], в гниющей древесине [2] на скорлупе яиц птицы [3], в воде с высоким содержанием солей [4].
В значительных количествах дрожжи D. hansenii обнаруживается в соленых богатых белком животного происхождения продуктах питания: сыре, колбасных изделиях [5]. D. НатепИ участвует в традиционной ферментации растительного сырья, в частности оливок [6].
Присутствие D. УатепИ в субстратах с высоким содержанием солей связано с наличием у них галотолерантности. Этот наиболее солеустойчивый вид дрожжей способен расти при концентрации более 10 % [7].
Дрожжи D. hдinsemi обладают широкими пределами толерантности по отношению к кислотности среды, что обусловливает широкое распространение этих дрожжей в разнообразных местах обитания. Некоторые штаммы D. hжsenii способны расти при рН 10 и более, что позволяет относить эти дрожжи к умеренно ал-калотолератным видам [8]. Отмечается, что D. hдinsemi устойчивы к дегидротации [9]. Установлено, что для дыхания некоторых штаммов D. Hжsenii, в частности штамма ВКМ Y-2482, оптимальным для роста является температура от 15 до 25 0С и рН от 6, 8 до 7,2 [10]. В этих условиях дрожжи D. Ha^nsenii способны окислять субстрат, содержащий до 25 % солей.
Распространение D. hжsenii в различных субстратах можно объяснить достаточно высокой гидролитической активностью. Рассмотренные особенности экологии D. hдinsenii являются предпосылкой их применения в биотехнологии для получения различных биопродуктов, в частности литических ферментов [11, 12, 13].
Цель настоящей работы - определение продуктивности и эффективности синтеза внеклеточного фермента Р-фруктофуранозидазы дрожжами D. Уатепп на питательной среде из мелассы.
Для достижения данной цели определено влияние температуры и продолжительности культивирования на рост клеток дрожжей, количество биомассы дрожжей, потребление редуцирующих веществ и синтез внеклеточной Р-фруктофуранозидазы. На основании полученных результатов были рассчитаны кинетические и экономические факторы роста дрожжей D. УатепИ на питательной среде из мелассы.
Методическая часть
В работе использованы штаммы дрожжей D. Hansenii:
- Н433, предоставленный Всероссийской коллекцией непатогенных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института сельскохозяйственной микробиологии (г. Пушкин);
- Н4651 - предоставленный коллекцией кафедры «Бионанотехнология и биоорганический синтез» Московского государственного университета пищевых производств;
- Н18-3 - предоставленный коллекцией кафедры биологии почв Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова. Штамм выделен 6.06.2011из купола муравейника колонии муравьев Formica aquilonia в Новосибирской области.
Культуры дрожжей выращивали на питательной среде, приготовленной из мелассы при pH 5,5 с начальным содержанием редуцирующих веществ 0,9 ± 0,1 % с добавлением и без добавления биогенных веществ. Определение редуцирующих сахаров проводили по методике, приведенной в работе [14]. К 120 мкл исследуемой пробы добавляли 1200 мкл дистиллированной воды и 600 мкл DNSA. Выдерживали пробы 10 минут при 100 °С, затем 5 мин. при 0 °С. Далее добавляли во все пробы по 6 мл дистиллированной воды и измеряли оптическую плотность при 540 нм при ширине кюветы 5мм. В контрольный образец вместо пробы добавляли дистиллированную воду - 120 мкл.
Кроме начального содержания редуцирующих веществ в питательной среде определяли общее содержание редуцирующих веществ. Для этого проводили гидролиз всех углеводов питательной среды в закрытых пробирках при pH 12 нагреванием до температуры кипения в течение 60 мин. Общее содержание редуцирующих веществ в экспериментах составляло 15 ± 1 %.
Предварительно разбавленную мелассу стерилизовали в автоклаве при 120С в течение 20 минут. Затем в стерилизованный раствор мелассы добавляли (NH02SO4 и KH2PO4 исходя из начального содержания редуцирующих веществ и выхода дрожжей. В питательной среде pH составило 6,65.
Культивирование осуществлялось в колбах Эрленмейера объемом 100 мл при 15±1 oC; 20±1 оС; 25±1 oC при непрерывном перемешивании на шейкере инкубатора ES-20 в течение 5 суток. Отбор проб проводили каждые 24 часа.
ВестпикВВТУИТ, №1, 206
Определение биомассы дрожжей проводили фотометрическим методом с предварительным построением калибровочного графика. Оптическую плотность биомассы дрожжей определяли при длине волны 540 нм и ширине кюветы 5 мм [15]. Для определения количества дрожжевых клеток использовали камеру Горяева - Тома [16].
Активность Р-фруктофуранозидазы определяли по скорости ферментативной реакции гидролиза сахарозы, которую устанавливали по количеству образовавшегося инверта в реакционной жидкости [17].
Удельную скорость роста, продолжительность генерации и выход дрожжей рассчитывали согласно рекомендациям в работе [18].
Результаты и обсуждение Как видно из представленных на рисунках 1 и 2 результатов исследования, эффективность культивирования дрожжей D. Уатепи на питательной среде из мелассы зависит, прежде всего, от штамма. В частности, у дрожжей D. Уатепи Н4651 непродолжительные периоды лаг-фазы и экспоненциального роста. При этом в экспоненциальный период роста дрожжей D. Уатепи штамма Н4651 наблюдается более интенсивное накопление клеток и их биомассы по сравнению с штаммами Н433 и Н18-3.
О 20 40 60 80 100 120 140
Продолжительность культивирования, ч
а)
0 20 40 60 80 100 120 140
Продолжительность культивирования, ч
Ь)
Продолжительность культивирования, ч
С)
Рисунок 1. Влияние продолжительности и температуры (а -15 0С, Ь - 20 0С, с - 25 0С) культивирования дрожжей D. УатепИ на питательной среде из мелассы на рост числа клеток. 2а, 1Ь, 2с - Н4651 с дополнительными биогенными веществами
1а, 2Ь, 1с - Н4651 - без дополнительных биогенных веществ
3а, 5Ь, 3с - Н433 с дополнительными биогенными веществами
4а, 3Ь, 4с - Н433 без дополнительных биогенных веществ
6а, 6Ь, 5с - Н18-3 с дополнительными биогенными веществами
5а, 4Ь, 6с - Н18-3 без дополнительных биогенных веществ
Максимальное количество клеток накапливается дрожжами D. Уатепп штамма Н4651 также за менее продолжительный период культивирования на этапе линейного роста, чем штаммами Н433 и Н18-3. При равной продолжительности культивирования накопление количество биомассы на данном этапе культивирования также происходит интенсивней дрожжами D. Уатепп штамма Н4651.
На продолжительность линейной фазы роста и последующую фазу замедленного роста дрожжей D. УатепИ влияет температура культивирования. Наиболее благоприятная температура культивирования дрожжей D. Уатепи штамма Н4651 20 0С. При этой температуре культивирования наблюдается максимальное накопление клеток и количество биомассы этим штаммом дрожжей за более короткий период культивирования, чем при температурах 15 0С и 25 0С. Следует отметить, что дрожжи D. Уатепп штамма Н4651 выходят на стационарную фазу роста за более короткий период культивирования и с максимальным количеством клеток и биомассы при температуре 20 0С по сравнению со штаммами Н433 и Н18-3.
ВестникВТУИТ, №1, 2016_
Биогенные вещества, дополнительно внесенные в питательную среду, существенного влияния на рассмотренные фазы роста клеток дрожжей D. hansenii и рост биомассы не оказывает. Видимо, присутствующих в мелассе соединений азота, калия и фосфора достаточно для жизнедеятельности всех использованных в настоящей работе штаммов дрожжей D. hansenii.
го 40 во ко юо 130 продолжительность культивирооанип, ч
продолжительность культивирован и я, ц
Ъ)
0 20 40 60 30 100 120 140
Продолжительность культивирования, ч
c)
Рисунок 2. Влияние продолжительности и температуры (a -15oC, b - 20 oC, c - 25 oC) культивирования дрожжей D. hansenii на питательной среде из мелассы на синтез биомассы.
1a, 1b, 1c - Н4651 с дополнительными биогенными веществами
2a, 2b, 2c - Нет - без дополнительных биогенных веществ 4a, 4b, 3c - Н4зз с дополнительными биогенными веществами
3 a, 3b, 4c - Н«3 без дополнительных биогенных веществ 5a, 6b, 5c - Н18-3 с дополнительными биогенными веществами
6a, 5b, 6c - Н18-3 без дополнительных биогенных веществ
20 40 ео 60 100 150 140 Продолжительность культи си рпалннлг ■
а)
20 40 60 80 100 120 Продолжительность культивирования, ч
РВ,%4
Ъ)
0 20 40 60 SO 100 120 140 Продолжительность культивирования, ч
c)
Рисунок 3. Влияние продолжительности и температуры (a -15 oC, b - 20 oC, c - 25 oC) культивирования дрожжей D. hansenii на питательной среде из мелассы на содержание редуцирующих веществ в культуральной жидкости
3a, 3b, 2c - Н4651 с дополнительными биогенными веществами
1a, 1b, 3c - Н4651 - без дополнительных биогенных веществ 6a, 5b, 4c - Н433 с дополнительными биогенными веществами
2a, 2b, 1c - Н433 без дополнительных биогенных веществ 4a, 6b, 5c - Н18-3 с дополнительными биогенными веществами
5a, 4b, 6c - Н18-3 без дополнительных биогенных веществ
При культивировании дрожжи D. hansenii потребляют редуцирующие вещества. Однако, как показали исследования, потребление редуцирующих веществ не адекватно количеству синтезируемой биомассы дрожжей D. hansenii. Содержание редуцирующих веществ после 50 ч культивирования дрожжей D. hansenii Н4651 и Н433 начинает увеличиваться (рисунок 3). На образование дополнительных РВ этими штаммами дрожжей существенного влияния температура культивиро-
Вестпик<ВТУИТ, №1, 206
вания не оказывает. Присутствие в питательной среде дополнительных биогенных веществ влияет не однозначно на образование РВ веществ. Следует заметить, что увеличение содержания РВ в культуральной жидкости сочетается с ростом числа клеток до примерно 70 часов культивирования и практически накоплением биомассы до окончания культивирования дрожжей D. Уатепп Н4651 и Н433. Дрожжи D. Уатепп Н18-3 в рассматриваемых условиях культвирования практически не склонны к образованию в культуральной жидкости избыточного количества РВ.
Установленную закономерность увеличения РВ в культуральной жидкости можно объяснить синтезом дрожжами D. УатепИ внеклеточного фермента в - фруктофуранози-даза, которая гидролизует сахарозу в питательной среде. Анализ результатов, представленных в таблице 1 показывает, что наибольшая активность внеклеточного фермента в -фруктофуранозидаза наблюдается в культу-ральной жидкости при культивировании дрожжей D. Уатепп Н4651 при температуре 20 0
C. При этом внесение дополнительных биогенных веществ в питательную среду приводит к снижению активности внеклеточного фермента в - фруктофуранозидаза.
Активность внеклеточного фермента в-фруктофуранозидаза, ситезируемового дрожжами D. Уатепи Н433, ниже, чем активность этого фермента, синтезируемого дрожжами D. Уатепи Н4651. При культивировании дрожжей
D. УатепИ Н433 с внесением дополнительных биогенных веществ в - фруктофуранозидазная активность в культуральной жидкости не наблюдается. И, наконец, дрожжи D. Натепп Н18-3 не синтезируют внеклеточный фермент в - фруктофуранозидаза, активность это фермента в культуральной жидкости отсутствует и, соответственно, в культуральной жидкости не наблюдается увеличение РВ при культивировании этих дрожжей (рисунок 3).
Т а б л и ц а 1
Активность внеклеточной в - фруктофуранозидазы, синтезируемой дрожжами D. Натепи, при культивировании на питательной среде из мелассы
* числитель - культивирование без дополнительных биогенных веществ;
знаменатель - культивирование с внесением дополнительных биогенных веществ Продолжительность культивирования дрожжей 120 час.
Наибольшая удельная скорость роста наблюдается у дрожжей D. Уатепп Н4651 при температурах культивирования 15 и 20 0С. Применение дополнительных биогенных веществ существенно на этом показателе не сказывается. Продолжительность генерации дрожжей D. УатепИ Н4651 значительно ниже продолжительности генерации дрожжей D. Уатепп штаммов Н433 и Н18-3.
Выход биомассы дрожжей D. Уатепп Н4651 при культивировании без дополнительных биогенных веществ при температурах культивирования 15 и 20 0С значительно превышает выход биомассы при культивировании дрожжей D. УатепИ штаммов Н433 и Н18-3. Как показано выше, культивирование дрожжей D. УатепИ Н4651 на питательной среде из мелассы без дополнительных биогенных веществ при температуре 20 0С являются благоприятными условиями синтеза этими дрожжами внеклеточного фермента в - фруктофуранозидазы.
Т а б л и ц а 1
Кинетические и экономические факторы культивирования дрожжей D. УатепИ на питательной среде из мелассы*
Наименование штамм Факторы** Температура культивирования, о С
15 20 25
Н433 Удельная скорость роста ц, ч-1 0,015/ 0,016 0,02/ 0,018 0,016/ 0,020
Продолжительность генерации Q, ч-1 46,20/ 43,30 34,60/ 38,50 43,30/ 34,60
Выход биомассы, % 30,00/ 39,20 17,00/ 35,00 14,00/ 28,60
Н4651 Удельная скорость роста ц, ч-1 0,030/ 0,026 0,031/ 0,032 0,028/ 0,027
Продолжительность генерации Q, ч-1 23,10/ 26,60 22,30/ 21,70 24,70/ 25,70
Выход биомассы, % 55,00/ 56,00 49,40/ 19,00 25,00/ 60,00
Н18-3 Удельная скорость роста ц, ч-1 0,013/ 0,013 0,017/ 0,015 0,012/ 0,014
Продолжительность генерации Q, ч-1 53,30/ 53,30 40,70/ 46,20 57,70/ 49,50
Выход биомассы, % 18,00/ 24,20 22,50/ 31,50 10,00/ 15,00
* числитель - культивирование без дополнительных биогенных веществ;
Знаменатель - культивирование с внесением дополнительных биогенных веществ **общая продолжительность культивирования 120 час.
Штамм дрожжей D. Натепп Активность в-фруктофуранозидазы, мкмоль/мл культуральной среды при температуре культивирования, о С
15 20 25
Н433 0,94/0,00 1,63/0,00 1,15/0,00
Н4651 1,32/0,15 3,50/0,46 1,62/0,09
Н18-3 0,00/0,00 0,00/0,00 0,00/0,00
&естнщ<ВТУИТ, №1, 206
Выводы
1. Установлено, что наиболее продуктивным и эффективно синтезирующим внеклеточный фермент Р-фруктофуранозидазу являются дрожжи D. hansenii штамм Н4651.
2. Показано, что наибольшая продуктивность и эффективность синтеза внеклеточного
ЛИТЕРАТУРА
1 Abranches J., Valente P., Nóbrega H.N., Fernandez F.A.S. et al. Yeast diversity and killer activity dispersed in fecal pellets from marsupials and rodents in a Brazilian tropical habitat mosaic // FEMS Microb. Ecol. 1998. V. 26. P. 27-33.
2 Zhang H.B., Yang M.X., Tu R., Gao L. et al. Fungal communities in decaying sapwood and heartwood of a conifer Keteleeria evelyniana // Curr Microbiol 2008. V. 56. № 4. P. 358-362.
3 Musgrove M.T., Jones D.R., Hinton A.Jr., Ingram K.D. et al. Identification of Yeasts Isolated from Commercial Shell Eggs Stored at Refrigerated Temperatures // J. Food Protection. 2008. V. 71. №. 6. P. 1258-1261
4. Butinar L, Santos S., Spencer-Martins I., Oren A. et al. Yeast diversity in hypersaline habitats // FEMS Microbiol Lett. 2005. V. 244. P. 229-34.
5 Capece A., Romano P. «Pecorino di Filiano» cheese as a selective habitat for the yeast species, Debaryomyces hansenii // International Journal of Food Microbiology. 2009. V. 132. № 2-3. P. 180-184.
6 Arroyo-López F.N., Querol A., Bautista-Gallego J., Garrido-Fernández A. Role of yeasts in table olive production // Int J Food Microbiol. 2008. V. 128. № 2. P. 189-96.
7 Prista C., Loureiro-Dias M.C., Montiel V., García R. et al. Mechanisms underlying the halotolerant way of Debaryomyces hansenii // FEMS Yeast Res. 2005. V. 5. P. 693-701.
8 Kurita O., Yamazaki E. Growth under alkaline conditions of the salt-tolerant yeast Debaryomyces hansenii IF010939 // Curr Microbiol. 2002. V. 45. № 4. P. 277-280.
REFERENCES
1 Abranches J., Valente P., Nobrega H.N., Fernandez F.A.S. et al. Yeast diversity and killer activity dispersed in fecal pellets from marsupials and rodents in a Brazilian tropical habitat mosaic. FEMS Microb. Ecol. 1998, vol. 26, pp. 27-33.
2 Zhang H.B., Yang M.X., Tu R., Gao L. et al. Fungal communities in decaying sapwood and heart-wood of a conifer Keteleeria evelyniana. Curr Microbiol 2008, vol. 56, no. 4, pp. 358-362.
фермента в-фруктофуранозидаза у дрожжей D. hansenii штамм Н4651 проявляется при культивировании на питательной среде из мелассы без дополнительных биогенных веществ при температуре 20 oC.
9 Khroustalyova G., Adler L., Rapoport A. Exponential growth phase cells of the osmotoler-ant yeast Debaryomyces hansenii are extremely resistant to dehydration stress // Process Biochemistry. 2001. V. 36. № 12. P. 1163-1166.
10 Юдина Н.Ю., Арляпов В.А. Зайцева А.С, Решетилов А.Н. Влияние времени культивирования, состава исследуемых проб и условий анализа на окислительную активность дрожжей Debaryomyces hansenii // Естественные науки. 2012. Вып.3. С.186-197.
11 Breuer U. H, Harms Debaryomyces hansenii - an extremophilic yeast with biotechnologi-cal potential // Yeast. 2006. V. 23. P. 415-437.
12 Чернов И.Ю. Дрожжи в природе. М.: Товарищество научных изданий КМК. 2013. 336 с.
13 Бабьева И.П., Чернов И.Ю. Биология дрожжей. М.: Наука, 2004, 221 с.
14 Морозова Ю.А., Скворцов Е.В., Алимова Ф.К., Канарский А.В. Биосинтез ксиланаз и цел-люлаз грибами рода Trichoderma на послеспирто-вой барде // Вестник Казанского технологического университета. 2012. Т. 15. № 19. С. 120-122.
15 Чакчир Б.А., Алексеева Г.М. Фотометрические методы анализа: Методические указания. СПб.: Изд-во СПХФА, 2002. 44 с.
16 Нетрусов А.И., Егорова М.А., Захар-чук Л.М. и др.: Практикум по микробиологии: учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений. М.: Издательский центр <Академия», 2005. 608 с.
17 Полыгалина Г.В., Чередниченко В.С., Римарева Л.В. Определение активности ферментов. Справочник. М.: ДеЛи принт, 2003. 375 с.
18 Скиба Е.А. Технология производства дрожжей: учебное пособие. Бийск: Изд-во Алт. гос. техн. ун-та, 2010. 121 с.
3 Musgrove M.T., Jones D.R., Hinton A. JR., Ingram K.D. et al. Identification of Yeasts Isolated from Commercial Shell Eggs Stored at Refrigerated Temperatures. J. Food Protection, 2008, vol. 71, no. 6, pp. 1258-1261.
4. Butinar L., Santos S., Spencer-Martins I., Oren A. et al. Yeast diversity in hypersaline habitats. FEMS Microbiol Lett. 2005, vol. 244, pp. 229-34.
5 Capece A., Romano P. «Pecorino di Filiano» cheese as a selective habitat for the yeast species, Debaryomyces hansenii. International Journal of Food Microbiology 2009, vol. 132, no. 2-3, pp. 180-184.
BecmnvKjBTy^T, №1, 206
6 Arroyo-López F.N., Querol A., Bautista-Gallego J., Garrido-Fernández A. Role of yeasts in table olive production. Int J Food Microbiol. 2008, vol. 128, no. 2, pp.189-96.
7 Prista C., Loureiro-Dias M.C., Montiel V., García R. et al. Mechanisms underlying the halotolerant way of Debaryomyces hansenii. FEMS Yeast Res. 2005, vol. 5, pp. 693-701.
8 Kurita O., Yamazaki E. Growth under alkaline conditions of the salt-tolerant yeast Debaryomyces hansenii IF010939. Curr Microbiol. 2002, vol. 45, no. 4, pp. 277-280.
9 Khroustalyova G., Adler L., Rapoport A. Exponential growth phase cells of the osmotoler-ant yeast Debaryomyces hansenii are extremely resistant to dehydration stress. Process Biochemistry, 2001, vol. 36, no. 12, pp. 1163-1166.
10 Yudin N.Yu., Arlyapov V.A. Zaitsev A.S., Reshetilov A.N. Influence of time of cultivation, the composition of the test sample and assay conditions on the oxidation of asset-yeast Debary-omyces hansenii. Estestvennye nauki. [Science]. 2012, no. 3, pp.186-197. (In Russ.).
11 Breuer U. H, Harms Debaryomyces han-senii - an extremophilic yeast with biotechnologi-cal potential. Yeast. 2006, vol. 23, pp. 415-437.
12 Chernov I.Yu. Drozhzhi v prirode [Yeast in nature]. Moscow: KMK Partnership scientific publications, 2013. 336 p. (In Russ.).
13 Babeva I.P., Chernov I. Yu. Biologiya drozhzhei [Biology yeast]. Moscow, Nauka, 2004, 221 p. (In Russ.).
14 Morozova Yu. A., Skvortsov E.V., Alimo-va F.K., Canarskii A.V. The biosynthesis of xylanase and cellulase of Trichoderma fungi to in slespirtovoy bard. Vestnik Kazanskogo tekhnologicheskogo uni-versiteta. [Herald of Kazan Technological University], 2012, vol. 15, no. 19, pp. 120-122. (In Russ.).
15 Chakchir B.A., Alekseeva G.M. Photo-metricheskie metody analiza [Photometric methods of analysis]. Saint-Petersburg, Publishing house SPHFA, 2002. 44 p. (In Russ.).
16 Netrusov A.I., Egorova M.A., Zakharchuk L.M. et al. Praktikum po mikrobi-ologii [Workshop on microbiology]. Moscow, Akademiya, 2005. 608 p. (In Russ.).
17 Polygalina G.V., Cherednichenko V.S., Rimareva L.V. Opredelenie aktivnosti fermentov [Determination of activity enzymes]. Moscow, DeLee print, 2003. 375 p. (In Russ.).
18 Skiba E.A. Tekhnologiya proizvodstva drozhzhei [Technology of production of yeast]. Biysk, AltGTU, 2010. 121 p. (In Russ.).
