CC BY
17
конф. с междунар. участием "Актуальные вопросы нутрициологии. Роль биологически активных пищевых добавок в обеспечении здоровья населения". - К., 2004. - С. 148-150.
9. Inhibitory effects of suppressor of cytokine signa-ling-3 on tumor necrosis factor-alpha induced signaling in pancreatic beta cells / Bruun C., Heding P.E., Ronn S.G. et al. // Diabetologia. - 2005. - N 48. - P. 181-206.
УДК 616.441-006.6-078.33-091.8
1.С. Шпонька, О. О. Бондаренко, М.М. Федченко
Дтпропетровсъка державна медична академiя кафедра патологiчноi анатома та судовоХ медицини (зав. - д. мед. н., проф. 1.С. Шпонъка)
Ключовi слова: щитовидна залоза, папшярний рак, тiреоглобулiн, р53, Ki-67 Key words: thyroid gland, papillary carcinoma, thyroglobulin, p53, Ki-67
recurrence.
Проблема раку щитовидно1 залози (РЩЗ) зай-мае в сучаснш онкологи особливе мюце у зв'язку з тенденщею до збшьшення кшькосп зах-ворювань [1, 2, 6, 10]. За даними Е. Vаrkondi та сшвавт. [6], при високоточному ультразвуковому
10. Mandrup-Poulsen T. Beta cell death and protection // Ann. N. Y. Acad. Sci. - 2003. - Vol. 1005. - P. 32-42.
11. Santangelo C., Scipioni A., Marselli L. Suppressor of cytokine signaling gene expression in human pancreatic islets: modulation by cytokines // Eur. J. Endocrinology. - 2005. - Vol. 152. - P. 485-489.
скануванш вузли у щитовиднш залозi (ЩЗ) виявляються у кожного другого дослщжуваного. Найбшьш поширена форма злояюсного ново-утворення в цьому оргаш - пашлярний РЩЗ (ПРЩЗ).
ПРОГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ ЕКСПРЕСП Т1РЕОГЛОБУЛ1НУ ТА ОНКОМАРКЕР1В (Р53 ТА К1-67) В Р1ЗНИХ ВАР1АНТАХ ПАП1ЛЯРНОГО РАКУ ЩИТОВИДНОÏ ЗАЛОЗИ
Резюме. Проведено иммуногистохимическое исследование материала, полученного от 27 больных папиллярным раком щитовидной железы. Иммуногистохимический метод в сочетании с количественным и полуколичественным анализом материала был использован для определения прогностической ценности таких маркеров, как тиреоглобулин, р53 и Ki-67. Было выявлено снижение экспрессии тиреоглобулина и, наоборот, увеличение экспрессии онкобелков р53 и Ki-67 в более инвазивных вариантах папиллярного рака. Таким образом, увеличение экспрессии Ki-67 и р53, со снижением окрашивания на тиреоглобулин, в папиллярных раках щитовидной железы отражает более злокачественный потенциал опухоли.
Summary. The surgical material obtained from 27 patients with papillary thyroid carcinoma (PTC) was immunohistochemically studied. Immu-nohistochemistry with quantitative and semiquantitative analyses of the results of test was used to define the prognostic expression of such oncoproteins as thyreoglobulin p53, and Ki-67. It was defined decrease of the thyroglobulin expression and, on the contrary, overexpression of p53 and Ki-67 in more invasive variants of PTC. So, increase of Ki-67 expression reflects a malignant potential of papillary carcinoma of the thyroid and may be recommended as a predictive marker. Low expression of thyreoglobulin and high expression of p53 are markers of a poor prognosis and tumor
Прогноз переб^у захворювання та вижи-ванiсть хворих у рядi випадкiв не корелюють з пстолопчним типом, стадieю захворювання. Даш останнiх рокiв [1, 10] свщчать про 93,2—98% 5^чно! та 87,8—91,8% 10^чно! тсляопе-рацшно! виживаностi хворих iз ПРЩЗ. Особли-вий iнтерес у плаш прогнозу становить вивчення ^реоглобулшу та онкомаркерiв, зокрема гена-супресора р53, та маркера пролiферащ! Ю-67.
Показано, що в РЩЗ виразшсть експреси тiреоглобулiну безпосередньо залежить вщ сту-пеня диференцiювання пухлини навт до повно! И вiдсутностi в анапластичнш карциномi та може використовуватися в ощнщ ступеня диферен-щювання аденокарцином ЩЗ [1].
Найважливiшим онкогеном, або геном-супре-сором зростання пухлини, е ген, що кодуе бшок iз назвою р53. Однак даш лiтератури з експреси р53 в залежносп вiд стади ПРЩЗ суперечливi [8]. Iмовiрно, це пов'язано з гетерогеншстю ПРЩЗ та рiзним ступенем чутливосп вико-ристаних методiв, а також з особливостями ра-дiацiйного та нерадiацiйного ПРЩЗ. Встанов-лено, що в диференцшованих формах РЩЗ р53 мае прогностичне значення та пухлини з його експресiею частiше дають рецидиви та метастази пiсля операци [5, 8, 10]. Особливу увагу в наш час придшяють мутащям р53 у радiацiйних карциномах легень та ЩЗ [3, 7, 10].
Мета дослщження - вивчення залежносп експреси тiреоглобулiну та онкомаркерiв (р53, Ю-67) в рiзних варiантах ПРЩЗ.
МАТЕР1АЛИ ТА МЕТОДИ ДОСЛ1ДЖЕНЬ
Дослiджено операцшний матерiал видалених ЩЗ вiд 27 хворих, що були проопероваш у вщдшенш ендокринологiчноl хiрурri! ОКЛ iм. 1.1. Мечникова (27 випадкiв за перюд 2006-2007 рр.) з приводу вузлових новоутворень ЩЗ. У 23 випадках була виконана тiрео!дектомiя, в 4 -субтотальна резекцiя ЩЗ. За ктшчними стадiями цi хворi розподiлялись наступним чином: 8 хворих — Т^ЭД,, 15 - Т2М)ОД), 1 - Т3^М<) та 3-T4NoMo.
Готували сершш гiстологiчнi зрiзи, якi за-барвлювали гематоксилiном та еозином за за-гальноприйнятими методиками.
Для проведення морфологiчного дослщження операцiйний i бiопсiйний матерiал хворих фш-сувався в 10% розчиш нейтрального формалiну. Пiсля фшсацп i проводки матерiал, забарвлений гематоксилiн-еозином, шддавався рутинному мiкроскопiчному дослiдженню. Потiм зрiзи тов-щиною 4-5 мкм наносились на предметне скло, попередньо оброблене адгезивним розчином по-
л^^зину, слщом за чим депарафiнiзувалися вщповщно до прийнятих стандартiв. Для демас-кування антигенiв (HIAR) використовувалося на-грiвання на водянiй банi в 10 мМ цитратному буферi з рН 6,0 (протягом 30 хвилин тсля до-сягнення температури 98°С) або обробка в автоклавi (5 хвилин при температурi 121°С). Як первинш антитiла використовувалися монокло-нальш антитiла до TTF-1, тiреоглобулiну (Tg), вiментiну та панцитокератину AE1/AE3 (Dako®). Позитивним контролем у реакцiях i3 прео-глобулiном та AE1/AE3 були фолшули оточу-ючо! тканини ЩЗ в контрольнш групi, для вiментину ним була реакцiя зi стромальними клiтинами. Негативний контроль проводився без використання первинних антитш.
Подальшу обробку проводили за допомогою системи вiзуалiзащ! LSAB2, EnVision™ (Dako®) протягом 10 хвилин (з бютишзованими анти-тшами i стрептавiдин-пероксидазним комплексом). Пюля цього проводили забарвлення дiамiн-бензидином (Dako®). Як фоновий барвник використовували гематоксилiн Маера.
Кiлькiсть забарвлених клггин виражали у вiдсотках за сшввщношенням кiлькостi забарвлених клiтин до 300 переглянутих кттин. Результати iмуногiстохiмiчно! реакци (штенсив-нiсть забарвлення) ощнювали методом нашвкшь-кiсного аналiзу за легендою: „-" - експресiя вiдсутня, „+" - слабка, „+ +" - помiрна, „+ + +" -сильна. Спостереження проводили на свггловому мiкроскопi Leica® DMLS.
РЕЗУЛЬТАТИ ТА IX ОБГОВОРЕННЯ
Гiстологiчнi варiанти ПРЩЗ видiляли згiдно з Мiжнародною гiстологiчною класифiкацiею ВОЗ вiд 2004 р.: папшярний варiант, фолiкулярний варiант, довгоклiтинний варiант та оксифiльний варiант (табл. 1).
Основною морфологiчною ознакою трьох варiантiв ПРЩЗ — папшярного, фолiкулярного та довгоклiтинного — стала наявшсть у пух-линних кттинах патогномонiчних ядер: великих, овально! або овально-округло! форми, оптично прозорих, що накладалися одне на одне (так зваш ядра типу "ground glass"), з борознами та еозинофшьними внутршньоядерними включениями, з нерiвними зазубреними контурами. Ядра з такими ознаками мали переважно дифузне розподшення у пухлиш.
Iмуногiстохiмiчне дослiдження продемон-струвало, що морфолопчш варiанти ПРЩЗ мають характерш молекулярно-бiологiчнi вла-стивостi, про що свщчить експресiя преогло-булiну, онкомаркерiв — р53 та Ki-67.
Розподш ПРЩЗ за основними гктолопчиими вар1антами з урахуванням розм1ру
пухлини та вираженост1 капсули
Вар1ант ПРЩЗ Розм1р пухлини Виражетсть капсули
< 1 см > 1 см повна з шваз1ею зруйнована чи ввдсутня
Паплярний 5 12 2 5 10
Фол1кулярний 3 5 0 5 3
Оксифшьний 0 10 1 0
Довгоклпинний 0 10 0 1
Всього 8 19 2 11 14
Експрешя тiреоглобулiну була знайдена у вшх пухлинних фолiкулiв, дещо рiдше тiльки на
пухлинах, що вивчалися, де вона виявлялася у ашкальнш мембранi клiтин. Експресiя даного
виглядi темно-коричневого зернистого забар- маркера була рiзною у рiзних пстолопчних
влення здебiльшого в цитоплазмi на ашкальнш варiантах ПРЩЗ та, як правило, нижче, шж в
мембраш пухлинних клiтин, а також у коло1да оточуючiй тканинi залози (рис. 1).
Рис. 1. Експремя т1реоглобулшу в р1зних г1столог1чних вар1антах папшярного раку щитовидно!' залози. А - папшярний; Б - фол1кулярний вар1ант. 1мунопероксидазний метод, фонове забарвлення
гематоксилшом Майера, Ч400
При порiвняннi рiвнiв експресп ^реогло-булiну було вiдмiчене 1х достовiрне зниження (р=0,15) у шдгруш карцином iз виразною ш-вазieю капсули та паренхiми залози, здебшьшого при фолiкулярному варiантi ПРЩЗ (табл. 2). Достовiрнiсть даних щодо експреси цього маркеру в довгокттинному та онкоцитарному вар>
антах не уявлялася можливою, тим не менш, слiд зазначити, що помiрне та слабке забарвлення на цей маркер найчаспше характерне для довгокттинного та онкоцитарного варiантiв ПРЩЗ, але завжди високе для папiлярного «класичного» варiанту [4].
Р1вш експресн т1реоглобулшу в р1зни\ вар1антах папшярного раку
Вартит ПРЩЗ Ступ1нь швази
без ознак швази з шваз1ею капсула зруйнована чи в1дсутня
Пап1лярний +++ +++ +++
Фол1кулярний - +++ ++
Оксифiльиий - ++ -
Довгоклiтиииий - - ++
Мутантний р53 експресувався у всiх спосте- пухлинних клiтин у виглядi темно-коричневого реженнях, продукт реакцп локалiзувався в ядрах забарвлення цих клiтинних структур (рис. 2).
Рис. 2. Експреая р53 у рпних г1столог1чних вар1антах пап1лярного раку щитовидно!" залози (стр1лки): А - папшярний; Б - фол1кулярний вар1ант. 1мунопероксидазний метод, фонове забарвлення
гематоксил1ном Майера, Ч400
При iмуногiстохiмiчному методi визначення експреси р53 негативнi пухлиннi клггини мо-жуть: мiстити нормальний дикий р53; втратити обидва алелi даного гену; мати таю глибою мутаци, що вiдсутнiй синтез даного бшку [9]. Таким чином, кiлькiсть р53, що експресуеться, виявлена за допомогою iмуногiстохiмiчних методiв, не завжди е прогностичним фактором.
Тим не менш, рiвень експреси р53 у патлярному варiантi був досить iнтенсивний та
зус^чався в середньому в 19,3% кттин при виразнiй швази, в 15,1% - при помiрнiй, та в 10,4% клггин при наявносп цшо! капсули. Фолiкулярний варiант характеризувався штен-сивним забарвленням та був присутшм у 17,3% клiтин при виразнш швази та в 16,1% - при помiрнiй (р=0,45). Виразними були рiвнi експреси р53 у довгокттинному та оксифiльному варiантi, але кшьюсть спостережень (п = 1) була дуже малою (табл. 3).
Поширешсть експресн онкобшку р53 в р1зних вар1антах пап1лярного раку (% клггин з
позитивным забарвленням)
Вар1ант ПРЩЗ Стутнь швази
без ознак швази з 1нваз1ею капсула зруйнована чи в1дсутня
Пап1лярний 10,4 15,1 19,3
Фолкулярний - 16,1 17,3
Оксифiльиий - 21 -
Довгоклпинний - - 18,6
Ю-67 експресувався в ушх спостереженнях, пухлинних клiтин у виглядi темно-коричневих продукт реакци локалiзувався переважно в ядрi включень (рис. 3).
Рис. 3 Експреая К1-67 в рпних г1столог1чних вар1антах пап1лярного раку щитовидно!" залози (стр1лка): А - папшярний; Б - фолжулярний вар1ант. 1мунопероксидазний метод, фонове забарвлення
гематоксилшом Майера, Ч400
Схожим чином, як i у випадках експреси р53, вiдбивались результати дослiдження маркера кл^инно! пролiферацil Кi-67. Спостерiгалася стiйка тенденщя до збiльшення експреси цього маркера вщ малоiнвазивних до широко-швазивних варiантiв; до того ж стутнь забарвлення ядер клiтин фолшулярного варiанту
ПРЩЗ був значно вищим за такий при «кла-сичному» типi карциноми (таблиця 4). Ю-67 експресувався виразнiше при висококлiтинному та онкоцитарному варiантах раку, однак мала кшьюсть випадкiв не дозволяе розрахувати до-стовiрнiсть отриманих результатiв у шдгрупах вiдповiдних гiстологiчних варiантiв.
Поширешсть експресн бшку Ki-67 в р1зни\ вар1антах папшярного раку (% клiтин з позитивним забарвленням)
Вар1ант ПРЩЗ Ступень ¡нвази
без ознак ¡нвази з шваз1сю капсула зруйнована чи ввдсутня
Патлярний 13,6 17,5 18,8
Фолшулярний - 34,3 38,7
Оксиф1льний - 35 -
Довгоклпинний - - 34,5
П1ДСУМОК
Резюмуючи вищесказане, слiд вiдмiтити, що визначення piBM eKcnpeciï тiреоглобулiну, р53 та Ki-67 може використовуватись як таке, що вщображае злояюсний потенцiал ПРЩЗ та може бути рекомендоване як прогностичний метод дослiдження злоякiсних новоутворень щито-видноï залози. Можна припустити, що маркерами поганого прогнозу та рецидивування пухлини е зменшення рiвня експресiï преогло-
булiну, збшьшення рiвня експресiï р53 та Ki-67. У подальших перспективах дослiджень - вив-чення прогностичних та дiагностичних маркерiв фолiкулярних пухлин щитовидно!' залози, а саме фолшулярних карцином та аденом. В цьому свiтлi юнуе певна практична зацiкавленiсть вив-чення можливосп застосування маркерiв бюло-пчних властивостей для диференцiйноï дiаг-ностики мiж цими пухлинами.
СПИСОК Л1ТЕРАТУРИ
1. Морфологическая и молекуляно-генетическая характеристика рака, аденом и окружающей ткани щитовидной железы / Свиридова Т. Е., Коган Е. А., Пальцев М. А., Середин В. П. // Арх. патологии -2002. - Т. 64, вып. 6. -С. 19-23.
2. A prognostic index for thyroid carcinoma. A study of the E.O.R.T.C. Thyroid Cancer Cooperative Group / Byar D.P., Green S.B., Dor P. et al. // Eur. J. Cancer. - 1979 - Vol. 15. - P. 1033-1041.
3. Applicacion de las oncoproteinas P21ras, P53, bcl-2 y del factor de proliferacion celular Ki-67 (MIB-1) en el diagnostico de tumores tiroideos / Almudevar E., Puras A., De Miguel C. et al. // Anales del Sistema Sanitario de Navarra. - 2000. - Vol. 23, issue 2. - P.247-255.
4. Immunohistochemical Quantification of Tumour Cell Proliferation in Different Types of Thyroid Carcinoma / Herrmann C., Muller Cl., Schumm-Draeger P.-M. et al. // Clin. Endocrinol. - 1993. - Vol. 101. - P. 23-27.
5. Nishida T. Immunocytochemical detection of p53 in human thyroid carcinomas is associated with mutation
and immortalization of cell lines // Surgery. - 1996. - Vol. 119, N 5. -P. 568-575.
6. Papillary thyroid carcinoma: prognostic significance of hi stological subtypes / Varkondi E., Gyfry F., Nagy A. et al. // Hung. Oncol. — 2001. - Vol. 45. - P. 424-429.
7. p53 gene mutations in radiation-induced thyroid cancer / Fogelfeld L., Bauer T. K., Schneider A. B. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1996. - Vol. 81, N 8. - P. 3039-3044.
8. Proliferative Activity of Human Thyroid Tumors Evaluated by Proliferating Cell Nuclear Antigen/Cyclin Immunohistochemical Studies / Sobrinho-Simoes M., Preto A., Rocha A. S. et al. // Virchows Arch. - 2005. -Vol. 447, N 5. - S. 787-799.
9. Role of p53 in differentiating between benign and malignant follicular neoplasms of the thyroid / Lo H.-W., Xia W., Wei Y. et al. // Cancer Res. - 2005. -Vol. 65, N l.-P. 338-348.
10. WHO. Pathology and Genetics of Tumors of Endocrine Organes. — Lyon: 2004. - P. 57-66.
♦
