CC BY
53
УДК 619.616 - 98:578.831:615.37:636.5 - 053.2
ПРИМЕНЕНИЕ ИММУНОСТИМУЛЯТОРОВ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ БОЛЕЗНЕЙ ЦЫПЛЯТ И СВИНЕЙ
А.В. ПРУДНИКОВ УО «Витебский государственный университет им. П.М. Машерова» г. Витебск, Республика Беларусь, 210015 М.В. КАЗЮЧИЦ, В.С. ПРУДНИКОВ УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» г. Витебск, Республика Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 25.01.2010)
Введение. Специфическая профилактика инфекционных болезней животных занимает одно из ведущих мест в комплексе проводимых ветеринарных мероприятий. В условиях Республики Беларусь наряду с применением отечественных биопрепаратов также широко используются вакцины ближнего и дальнего зарубежья. Вместе с тем, иммуногенез при вакцинации животных зарубежными вакцинами изучен недостаточно. При этом установлено, что многие живые вакцинные штаммы вирусов обладают иммунодепрессивным действием, снижают иммунный статус организма, что может приводить к ослаблению иммунной защиты и наслоению условно патогенных бактериальных инфекций, снижению напряженности поствакцинального иммунитета, возникновению поствакцинальных осложнений и гибели животных после иммунизации. Для устранения этих недостатков в последние годы широкое применение в ветеринарии получили иммуностимуляторы, представляющие собой большую группу веществ, гетерогенных по природе, свойствам и механизму действия [1,4,5]. Они играют важную роль в борьбе с первичными и вторичными иммунодефицитами животных, усиливают иммуногенность и снижают реактогенность вакцин [2,3]. Все это свидетельствует о том, что дальнейшие исследования по изучению возможности усиления иммунного статуса организма животных путем применения иммуностимуляторов и иммуно-модуляторов имеют важное научно-теоретическое и практическое значение.
Цель работы - изучить иммуноморфологические реакции у цыплят-бройлеров, одновременно вакцинированных против болезни Марека, инфекционного бронхита и болезни Нъюкасла сухими живыми вакцинами производства Голландии, и у свиней, иммунизированных против классической чумы, сальмонеллеза, пастереллеза и стрептокок-коза.
Материал и методика исследований. В первой серии опытов исследования были проведены на 80 цыплятах суточного возраста, разделенных на 4 группы по 20 голов в каждой. Интактные цыплята 1-й группы служили контролем. Птицу 2-й группы иммунизировали в су-
точном возрасте сухими живыми вакцинами против болезни Марека из штамма РВ - ТИУ 1(внутримышечно), инфекционного бронхита и болезни Нъюкасла из штамма МА 5+СЬОКБ 30 (методом спрея). Цыплят 3-й группы вакцинировали указанными вакцинами совместно с иммуностимулятором гала-вет, который вводили внутримышечно совместно с вакциной против болезни Марека. Иммунизацию птицы 4-й группы против указанных болезней проводили на фоне применения иммуностимулятора нуклевита, который выпаивали с водой в дозе 0,1 мл на одного цыпленка в течение 5 дней, начиная в день иммунизации.
Вакцинацию цыплят против данных инфекций и парентеральное введение иммуностимулятора гала-вета проводили согласно наставлению по их применению. На 14-й день после 1-й вакцинации проводили ревакцинацию цыплят 2-й и 3-й групп против инфекционного бронхита и болезни Ньюкасла (методом выпаивания с водой). После иммунизации за всеми цыплятами было установлено клиническое наблюдение, определяли среднесуточный прирост живой массы. Для изучения иммуногенеза от всех цыплят на 5, 9 и 14-й день после 2-й вакцинации брали кровь для морфологического исследования, проводили биохимическое и серологическое исследование и изучали бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови.
Одновременно в эти же сроки по 4 цыпленка из каждой группы убивали для изучения иммуноморфологических изменений в органах иммунной системы.
Во 2-й серии опытов изучали иммунологические реакции у 60 поросят 5-месячного возраста. Все подопытные животные были подобраны по принципу аналогов и разделены на три группы по 20 голов в каждой. Свиней 1-й группы иммунизировали сухой живой вакциной против классической чумы из штамма ЛК ВНИИЭВ и М без иммуностимулятора. При вакцинации животных 2-й группы в качестве разбавителя вакцины использовали 30%-ный раствор натрия тиосульфата. Контролем служили интактные свиньи 3 -й группы, получавшие внутримышечно только изотонический раствор натрия хлорида.
До вакцинации на 5, 14, 21-й день и через 1,5 месяца после иммунизации от пяти животных каждой группы проводили морфологическое исследование крови и от трех животных - морфологические исследования органов иммунитета. Напряженность иммунитета проверяли после иммунизации путем исследования сыворотки крови методом ИФА на наличие специфических антител. Одновременно изучали ли-зоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови.
В третьей серии опытов для изучения иммуноморфогенеза у поросят при вакцинации их ассоциированной поливалентной вакциной против сальмонеллеза, пастереллеза и стрептококкоза совместно с иммуностимуляторами натрия тиосульфатом и аскорбиновой кислотой и без них опыты были проведены на 40 поросятах крупной белой породы 30-35-дневного возраста, полученных от неиммунных свиноматок на фоне принятой технологии кормления, содержания и схемы ветери-
нарных мероприятий. Животные подбирались по принципу аналогов. Поросята были разделены на 4 группы по 10 голов в каждой.
Поросят 1-й группы вакцинировали против сальмонеллеза, пасте-реллеза и стрептококкоза вакциной СПС; животных 2-й группы - вакциной СПС совместно с витамином С; животных 3 -й группы - вакциной СПС совместно с иммуностимулятором натрия тиосульфатом. Контролем служили интактные поросята 4-й группы, которым вводили изотонический раствор натрия хлорида.
Иммунизацию животных проводили согласно наставлению по применению вакцины, двукратно, внутримышечно с интервалом 7 дней, в дозах 4 мл первично и 5 мл повторно. Витамин С добавляли в вакцину в дозе 0,05 г на голову непосредственно перед вакцинацией. Натрия тиосульфат применяли с вакциной в 30%-ной концентрации. Вакцины готовили на Витебской биофабрике.
После иммунизации за всеми животными было установлено клиническое наблюдение.
На 7-й день после первой, 14-й и 21-й день после второй вакцинации от четырех животных из каждой группы проводили морфологическое исследование крови. В эти же сроки по три поросенка из каждой группы убивали для иммуноморфологических исследований.
Кровь для исследования получали из орбитального венозного синуса угла глаза. В периферической крови поросят определяли морфологические и биохимические показатели с помощью гематологического анализатора MEDONIC CA 620 и биохимического анализатора Cormay Lumen по принятым методикам.
Литическую активность лизоцима сыворотки крови определяли по В.Г. Дорофейчуку, а бактерицидную активность - по О.В. Смирновой и Г.А. Кузьминой в модификации Ю.М. Маркова.
При исследовании органов применяли комплекс общегистологических, морфометрических и гистохимических исследований, совокупность которых позволяет судить об иммуноморфологических изменениях в органах.
Результаты исследований и их обсуждение. Полученные результаты исследований показали, что применение иммуностимуляторов нуклевита и гала-вета при одновременной вакцинации цыплят суточного возраста против болезни Марека, инфекционного бронхита и болезни Нъюкасла способствует ускорению роста и развития птицы и активизации иммунных реакций. Так, в периферической крови вакцинированных цыплят под действием нуклевита статистически достоверно увеличивалось по сравнению с птицей контрольной группы и цыплятами, вакцинированными без иммуностимулятора, количество лейкоцитов и тромбоцитов, а в лейкограмме возрастало число Т- и В-лимфоцитов. Наиболее выраженными эти изменения были на 5-й день после 1-й и 9-й после 1-й и 2-й вакцинации.
Под действием гала-вета в периферической крови иммунной птицы, особенно после 1 -й иммунизации, на 10,3х109/л возрастало количество лейкоцитов и на 17,3х109/л число тромбоцитов по сравнению с
птицей, вакцинированной без иммуностимулятора. Одновременно у цыплят, вакцинированных с иммуностимуляторами, в 1,5-2,3 раза увеличивалась фагоцитарная и переваривающая способность тромбоцитов, статистически достоверно повышалось содержание РНК в лимфоцитах и гликогена в псевдоэозинофилах.
В сыворотке крови иммунных цыплят под действием нуклевита и гала-вета почти во все сроки исследований увеличивалась бактерицидная (БАСК) и лизоцимная (ЛАСК) активность, так на 9-й день после 2-й вакцинации под действием нуклевита бактерицидная активность возрастала по сравнению с интактными цыплятами и птицей, вакцинированной без иммуностимулятора, соответственно на 18,7 и 7,4% ^<0,001; P<0,001), а лизоцимная - в 1,5-2,2 раза.
Среди глобулинов сыворотки крови наиболее заметно под действием нуклевита возрастало содержание гамма-глобулинов. При этом количество их у птиц данной группы на 14-й день после 2-й вакцинации превышало аналогичный показатель у контрольных цыплят и вакцинированных без иммуностимулятора соответственно на 14,4 и 5,5% ^<0,001^0,05).
При серологическом исследовании методом ИФА титры специфических антител у вакцинированных цыплят против инфекционного бронхита на 14-й день после 2-й иммунизации составили: при применении нуклевита - 2357,7±21,18; при применении гала-вета -2962,4±26,34, у вакцинированных без иммуностимулятора -1838,7±19,60 и у интактных цыплят - 685,7±34,82. Титры специфических антител у вакцинированных цыплят против болезни Нъюкасла были: при применении нуклевита - 545,3±22,16; при применении гала-вета - 630,0±25,14; у вакцинированных без иммуностимулятора -334,3±12,16 и у интактных цыплят - 18,7±6,14.
При морфологическом исследовании органов иммунной системы у всех вакцинированных цыплят с иммуностимуляторами заметно активизировались по сравнению с птицей, вакцинированной без них, плаз-моцитарная, микро- и макрофагальная реакции в селезенке, слепоки-шечных миндалинах и бурсе Фабриция. Среди плазматических клеток при применении нуклевита чаще встречались плазмобласты и плазмо-циты, а при применении гала-вета - проплазмоциты и плазмоциты.
Проведенные исследования на свиньях по изучению влияния натрия тиосульфата на иммуногенность сухой живой вакциной из штамма ЛК ВНИИЭВ и М против классической чумы свиней показали, что под действием иммуностимулятора происходит активизация и развитие иммунных реакций, которые способствуют формированию более напряженного иммунитета.
У животных, которым в качестве иммуностимулятора для стимуляции поствакцинального иммунитета применяли 30%-ный раствор натрия тиосульфата, отмечали повышение количества эритроцитов с (6,45±0,07) до (6,78±0,13)*10/л и лейкоцитов с (17,9±0,43) до (20,88±0,42)*109/л. Содержание гемоглобина к 14-му дню после вакцинации существенно не изменялось, достоверно повышалось с 101,8±0,6 до 104,9±0,72 г/л.
В лейкограмме у поросят, вакцинированных с натрия тиосульфатом, снижалось количество сегментоядерных нейтрофилов и увеличивалось число лимфоцитов. Количество В-лимфоцитов у поросят, вакцинированных с натрия тиосульфатом, было в 1,5 раза выше, чем у поросят, которым вводили вакцину на изотоническом растворе, и в 3 раза выше по сравнению с интактными животными.
Иммунизация поросят против классической чумы на фоне применения натрия тиосульфатам приводила к наиболее высокой активизации гуморального иммунитета по сравнению с животными других опытных групп. Так, титр специфических антител у данных животных на 14-й день после вакцинации составлял 3,4±0,07 ^<0,02). На 21-й день отмечали дальнейший рост титра антител к вирусу классической чумы до 4,6±0,06. Через 1,5 месяца после вакцинации отмечали максимальное значение показателя, который к этому периоду исследования находился на уровне 6,4±0,13.
Одновременно у животных, вакцинированных с иммуностимулятором, по сравнению с поросятами, иммунизированными без него, увеличивалась лизоцимная (с 12,33±0,08 до 15,53±0,44 %) и бактерицидная активность сыворотки крови (с 33,69±0,16 до 42,84±3,04 %).
Полученные результаты исследований также показали, что в периферической крови поросят, иммунизированных вакциной СПС с добавлением в нее иммуностимуляторов на 14-й день после повторной вакцинации по сравнению с поросятами, иммунизированными без них, было достоверно выше количество лейкоцитов, а в лейкограмме абсолютное содержание Т-лимфоцитов соответственно на 0,91 и 0,52x10%. Абсолютное количество В-лимфоцитов к этому времени было наиболее высоким у поросят, вакцинированных вакциной СПС с витамином С (2,48±0,13х109/л).
На 14-й день после второй иммунизации наиболее высокой лизо-цимная активность сыворотки крови была у животных, иммунизированных вакциной с витамином С и натрия тиосульфатом, и составила соответственно 7,60±0,24 и 7,75±0,31 против 5,94±0,12 у интактных поросят и 6,33±0,16 у животных, иммунизированных без иммуностимуляторов. Аналогичная закономерность была получена при изучении бактерицидной активности сыворотки крови, которая возрастала по сравнению с поросятами, иммунизированными согласно наставления на 2,33% при применении витамина С и на 3,15% при применении натрия тиосульфата.
При морфологическом исследовании органов иммунной системы наиболее выраженные изменения отмечались на 14-й день после второй иммунизации в регионарных месту введения вакцины левых подчелюстных лимфоузлах и характеризовались увеличением размеров лимфоидных узелков с выраженными реактивными центрами. При этом соотношение первичных и вторичных узелков составляло у контрольных животных 8:2, у вакцинированных без иммуностимуляторов -6:4, у вакцинированных с натрия тиосульфатом - 4:6, и у вакцинированных с витамином С - 5:5. Во вторичных лимфоидных узелках увеличивалось количество плазмобластов и В-лимфоцитов. Мякотные
275
тяжы в лимфоузлах были хорошо выражены. В них выявлялось большое количество В-лимфоцитов и возрастало число плазматических клеток с 45,1±5,18 до 133,7±21,14 - 207,7±16,19 (p<0,001). При этом у поросят, вакцинированных с натрия тиосульфатом, количество незрелых и зрелых плазматических клеток было самым высоким и составляло по видам: плазмобласты - 71,6±11,42; проплазмоциты -54,6±8,61; плазмоциты - 81,5±12,14.
В селезенке на 14-й день после второй иммунизации под действием иммуностимуляторов в 2-3 раза возрастало количество вторичных лимфоидных узелков, и в 1,2-1,6 раза увеличивалось содержание плазматических клеток по сравнению с животными, вакцинированными без них.
В корковом слое тимуса иммунных животных всех групп к этому сроку исследования активизировалась бласттрансформация лимфоцитов. При этом корковое вещество заметно сужалось и было заполнено преимущественно малыми лимфоцитами с высокой митотической активностью. Мозговое вещество тимуса иммунизированных животных было несколько расширено и заполнено преимущественно тимоцитами средних размеров, а также лопатковидными эпителиальными клетками и интердигитальными дендритными клетками. Наиболее выраженными указанные морфологические изменения в тимусе были у поросят, вакцинированных с иммуностимуляторами.
К 21 -му дню после ревакцинации поросят показатели в органах иммунной системы постепенно нормализовались. Однако у животных, вакцинированных с иммуностимуляторами, по-прежнему оставались высокими по сравнению с поросятами, вакцинированными без них, показатели плазмоцитарной реакции.
Заключение. Одновременная вакцинация цыплят суточного возраста живыми вакцинами против болезни Марека, инфекционного бронхита и болезни Нъюкасла производства Голландии приводит к снижению у цыплят прироста живой массы, уменьшению массы тимуса, бурсы Фабриция и селезенки по сравнению с контролем. Применение иммуностимуляторов нуклевита и гала-вета в период одновременной вакцинации птиц вышеуказанными вакцинами способствует снижению реактогенности вакцин, активизации иммунных реакций и формированию более напряженного иммунитета.
Использование 30%-ного раствора натрия тиосульфата в качестве растворителя вакцины против классической чумы свиней из штамма ЛК- ВНИИЭВ и М способствует созданию у животных напряженного поствакцинального иммунитета, что свидетельствует о высоких стимулирующих свойствах указанного препарата. При этом случаев поствакцинальных осложнений и прорыва иммунитета после иммунизации животных против классической чумы не наблюдалось.
Применение иммуностимуляторов натрия тиосульфата и витамина С в период вакцинации поросят вакциной против сальмонеллеза, пас-тереллеза и стрептококкоза способствует активизации иммуноморфо-
генеза, усилению иммуногенности и снижению реактогенности вакцины, предупреждает поствакцинальные осложнения у животных и вызывает формирование иммунитета высокой напряженности.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бабина, М.П. Повышение резистентности и стимуляция у цыплят-бройлеров / М. П. Бабина //Информационный бюллетень по птицеводству. Минск, 2002. № 2. С. 38 - 40.
2. Бабина, М.П. Профилактика иммунной недостаточности и связанных с нею болезней цыплят-бройлеров / М. П. Бабина // Проблемы микробиологии и биотехнологии: матер. междунар. конф. Минск, 25-27 ноября 1998 г. Минск, 1998. С. 152-153.
3. Бирман, Б.Я. Иммунодефицита птиц / Б.Я. Бирман, И.Н. Громов // Минск: Бизнесофест, 2001. 139 с.
4. Иммунитет и его коррекция в ветеринарной медицине / П. А. Красочко, А. С. Ястребов, В. С. Прудников, А. И. Новиков, А. И. Ятусевич [и др.]. Смоленск, 2001. 323 с.
5. Прибытько, С.П. Влияние иммуностимулятора натрия тиосульфата на имму-номорфогенез у цыплят, вакцинированных против болезни Марека: дисс. ... канд. вет. наук: 16.00.02 / С.П. Прибытько. Витебск, 1998. 114 с.
6. Придыбайло, Н.Д. Иммуностимулирующие свойства тималина у птиц, роль полипептидных биорегуляторов (цитомединов) в регуляции гомеостаза/Н. Д. Придыбайло, Г. Е. Афанасьева, Л. П. Якушева // Тезисы докл. науч. конф., Ленинград, 24-25 ноября 1987 г. Ленинград, 1987. С.83.
7. Прудников, В.С. Стимуляция иммунного ответа натрия тиосульфата при вакцинации свиней против сальмонеллеза/ В. С. Прудников, Е. И. Большакова // Международный аграрный журнал. 1998. N° 5. С.55-56.
8. Прудников, В.С. Влияние иммуностимуляторов на напряженность иммунитета у свиней, вакцинированных против классической чумы/ В. С. Прудников, В. П. Жал-дыбин // Проблемы аграрной отрасли в начале XXI века: матер. междунар. науч.-практ. конф. Смоленск, 12-13 марта 2002 г. Смоленск, 2002. Ч. 1. С. 203-206.
УДК 619:616.98:[578.823.91+579.842.11]:632.2:612.117:615.37
ИЗУЧЕНИЕ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ И БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У КОРОВ ПОСЛЕ ВАКЦИНАЦИИ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНОЙ ПРОТИВ РОТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ И ЭШЕРИХИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Я.П. ЯРОМЧИК УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» г. Витебск, Республика Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 25.01.2010)
Введение. Одной из важнейших задач развития народного хозяйства в Республике Беларусь является интенсивное ведение мясного и молочного скотоводства, способного обеспечить нужды населения в продуктах питания и сырье животного происхождения. Однако при интенсивном ведении животноводства повышается опасность возникновения и распространения инфекционных болезней, в том числе и таких, как ротавирусная инфекция и эшерихиоз. В Республике Беларусь эшерихиоз занимает первое место по количеству заболевших и павших животных [2,4,8].
