CC BY
36
8. Левченко, В.I. Пшморбщшсть патологи у високопродуктивних KopiB / B.I. Левченко, В.В. Сахнюк // Вюник Бiлоцеркiвського державного аграрного унiверситету. Вип. 3. Ч. 1. Бша Церква, 1997. С. 89-92.
9. Левченко, В. I. Етюлогтя, патогенез та дiагностика внутрiшнiх хвороб у високопродуктивних корiв / B.I. Левченко, В.В. Сахнюк // Вюник аграрной науки. 2001. № 10. С. 28-32.
10. Левченко, В. I. Множинна внутртня патолопя у високопродуктивних корiв / В.! Левченко, В. В. Сахнюк // Здоров'я тварин i лжи. 2007. №2 (63). С. 14-16.
11. Левченко, В.I. Поширення, етюлогтя, особливостi перебшу та дiагностики множинно1 внутрiшньоï патологи у високопродуктивних корiв / В.! Левченко, В.В. Сахнюк, О.В. Чуб // Науковий вюник ветеринаржй медицини: зб. наук. праць. Бша Церква, 2010. Вип. 5 (78). С. 97-102.
12. Левченко, В. I. Профшактика внутршних хвороб у високопродуктивних корiв/ В.! Левченко, В.В. Сахнюк // Аграрш вютг 2003. №3. С. 17-18.
13. Методические рекомендации по диагностике, терапии и профилактике нарушений обмена веществ у высокопродуктивных животных / разраб. М.И. Редкий [и др.]; Рос. акад. с.-х. наук Всерос. науч.-исслед. ин-та патологии, фармакологии и терапии. Воронеж, 2005. 94 с.
14. Рекомендации по ранней диагностике и профилактике остеодистрофии крупного рогатого скота. Витебск: УО «ВГАВМ», 2002. 21 с.
15. Холод, В. М. Справочник по ветеринарной биохимии / В.М. Холод, Г.В. Ермолаев. Минск: Ураджай, 1988. 168 с.
16. Herdt, T.H. Therapy of diseases of ruminant intermediary metabolism / T.H. Herdt, R.S. Emery // Veterinary Clinics of North America. 1992. Р. 91-106.
УДК 619:616.98:578.823:615.37:636.5
МОРФОЛОГИЯ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ЦЫПЛЯТ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ ГАМБОРО НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛЯТОРОВ
С.А. БОЛЬШАКОВ, В.С. ПРУДНИКОВ, Е.И. БОЛЬШАКОВА УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» г. Витебск, Республика Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 05.01.2011)
Введение. Промышленное птицеводство Республики Беларусь -наиболее интенсивная и динамичная отрасль сельского хозяйства по насыщению рынка диетическим мясом и яйцом птицы. Для обеспечения роста производства продукции в отрасли существенная роль отводится ветеринарно-профилактическим мероприятиям. В этой связи важнейшей задачей является совершенствование мер специфической профилактики заболеваний птицы, невозможной без качественных и недорогих вакцин [2]. Болезнь Гамборо (инфекционная бурсальная болезнь, ИББ) представляет серьезную опасность для птицеводческих хозяйств промышленного типа. В стадах, не подвергавшихся вакцинации, отмечается циркуляция вариантных штаммов вируса ИББ разной патогенности, что создает потенциальную угрозу новых вспышек болезни. В комплексе мероприятий по профилактике и ликвидации болезни Гамборо основное внимание уделяется проведению специфиче-
121
ской профилактики, которая предусматривает применение инактиви-рованных и живых вакцин [3]. Установлено, что вакцинные штаммы вируса способны вызывать в органах иммунной системы птиц изменения, присущие самой болезни, обуславливая развитие иммунодефи-цитного состояния [1, 5]. Поэтому при иммунизации следует применять иммуностимулирующие препараты, которые необходимы для повышения напряженности и длительности иммунитета.
Активно внедряются в ветеринарную медицину биологические иммуностимуляторы природного происхождения (препараты из вирусов и бактерий, крови, молозива и кроветворно-лимфоидных органов), а также препараты растительного и животного происхождения [4, 6-8]. На основе нуклеината натрия разработан новый иммунокорригирую-щий препарат «Нуклевит», включающий нуклеиновые кислоты дрожжевой РНК и витамин С.
Цель работы - выявить влияние иммуностимуляторов (нуклевит, альвеозан) на морфологию поствакцинального иммунитета у цыплят, вакцинированных против болезни Гамборо.
Материал и методика исследований. Опыты были проведены на 60 цыплятах 9-41-дневного возраста, подобранных по принципу аналогов, разделенных на 4 группы по 15 птиц в каждой. Цыплят 1-й группы иммунизировали против болезни Гамборо сухой живой вирус-вакциной из штамма «КМИЭВ-13» (разработана в ИЭВ им. С.Н. Вы-шелесского НАН Беларуси) совместно с нуклевитом. Птице 2-й группы указанную вакцину задавали совместно с альвеозаном. Цыплят 3 -й группы иммунизировали одной вакциной, согласно Наставлению, двукратно, перорально, в 10 и 20-дневном возрасте. Контролем служила интактная птица 4-й группы.
На 7-й день после 1-й вакцинации и на 7-й и 14-й дни после 2-й вакцинации для проведения иммуноморфологических исследований по 5 птиц из каждой группы убивали. У них отбирали кусочки бурсы Фабриция, тимуса, селезенки, слепокишечных и пищеводной миндалин, а также дивертикула Меккеля. Отобранный материал фиксировали в жидкости Карнуа, 10%-ном растворе формалина, а затем подвергали уплотнению путем заливки в парафин или замораживанием. Гистологические срезы готовили на санном и замораживающем микротомах.
Для изучения общих структурных изменений срезы окрашивали гематоксилин-эозином, а для дифференциации плазматических клеток - метиловым зеленым - пиронином по Браше. Для объективной оценки характера изменений в органах иммунитета подсчитывали количество плазмобластов, незрелых и зрелых плазмоцитов, Т-лимфоцитов, наличие микро- и макрофагальной реакции, определяли число и размеры лимфоидных узелков. Подсчет клеточных элементов проводили в 50 полях зрения микроскопа (объектив х 90, окуляр х 10, бинокуляр х 1,5). Абсолютные размеры коркового и мозгового вещества долек тимуса, лимфоидных узелков бурсы Фабрициуса определяли с помощью микроскопа «О11ушрш ВХ-41» и программы «Се11-А».
Затем вычисляли соотношение размеров паренхимы и стромы органов, определяли количество лимфоцитов в мозговой и корковой зонах тимуса и бурсы Фабрициуса, приходящихся на условную единицу площади.
В периферической крови во все сроки исследования определяли содержание гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов. Лейкограмму выводили на основании подсчета 100 клеток в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимза. Дифференцирование Т- и В-лимфоцитов проводили с учетом размера клеток, величины ядра, цитоплазмы и интенсивности их окраски. Кроме того, определяли фагоцитарную активность псевдоэозинофилов крови. Относительное содержание РНК в лимфоцитах оценивали по трехбалльной системе, подсчитывая по 100 клеток в каждой категории. Для объективного сопоставления полученных результатов выводили средний цитохимический коэффициент (СЦК). В сыворотке крови определяли содержание общего белка рефрактометрически, а белковых фракций -методом пластинчатого электрофореза в полиакриламидном геле.
Полученные цифровые данные статистически обрабатывали с помощью компьютерной программы Microsoft Excel 2003 .
Результаты исследований и их обсуждение. Результаты показали, что во все сроки исследования у иммунных цыплят 1-3-й групп отмечалось увеличение по сравнению с контролем числа лейкоцитов, тромбоцитов, относительного и абсолютного содержания Т- и В-лимфоцитов, а также их насыщение рибонуклеиновой кислотой (РНК). При этом более высокий уровень этих клеток наблюдался у птицы, иммунизированной с нуклевитом. Так, на 7-й день после 2-й вакцинации у цыплят этой группы число тромбоцитов было выше в 1,7 раза, чем у интактных цыплят, и на 60 % больше по сравнению с птицей, иммунизированной одной вакциной. Одновременно под действием иммуностимуляторов у вакцинированной птицы увеличивалось содержание РНК в лимфоцитах.
В лейкограмме вакцинированных цыплят под действием иммуностимуляторов происходило снижение процентного содержания эози-нофилов, базофилов и моноцитов с одновременным увеличением числа Т-лимфоцитов, а затем В-лимфоцитов по сравнению с интактной и иммунизированной одной вакциной птицей.
Во все сроки исследования отмечалась активизация фагоцитарной активности псевдоэозинофилов у иммунной птицы всех трех групп. Особенно выраженные изменения наблюдались у цыплят, вакцинированных с нуклевитом, где процент фагоцитоза, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс были выше контрольных показателей в 1,42,1 раза и на 9-50 % больше, чем у птицы, вакцинированной без иммуностимулятора. Одновременно активизировалась переваривающая способность псевдоэозинофилов. При этом под действием нуклевита у вакцинированной птицы процент переваривания и индекс переварива-
123
ния превышали в 1,3 - 2 раза аналогичные показатели у иммунизированных цыплят одной вакциной, а также были достоверно выше в 1,52,1 раза, чем у вакцинированных с альвеозаном.
В сыворотке крови содержание общего белка у всех иммунных цыплят было в 1,2-1,6 раза достоверно выше по сравнению с контролем. Однако у цыплят, вакцинированных с альвеозаном и нуклевитом, уровень общего белка был достоверно больше на 20-30 %, чем у птицы, иммунизированной одной вакциной. Одновременно у цыплят 1-й и 2-й групп происходило достоверное повышение содержания альбуминов и а! -глобулинов по сравнению с интактной птицей и цыплятами, вакцинированными без иммуностимулятора. С возрастом содержание общего белка и уровня альбуминов снижалось, при этом одновременно увеличивалось количество белков глобулиновой фракции. У птиц, иммунизированных с альвеозаном, уровень р-глобулинов был в 1,6 раза выше, чем в контроле, и на 20 % больше по сравнению с цыплятами, вакцинированными без иммуностимулятора. Содержание у-глобулинов в сыворотке крови птицы, вакцинированной с иммуностимуляторами, был больше на 29 - 40% по сравнению с птицей, иммунизированной одной вакциной, и в 1,5-1,7 раза выше, чем в контроле.
В миелограмме цыплят 1 -й и 2-й групп отмечалось достоверное увеличение общего количества клеток миелобластического ряда по сравнению с птицей, иммунизированной одной вакциной, и интактной птицей. Одновременно под действием нуклевита и альвеозана у иммунной птицы увеличивалось количество лимфоцитов. Так, у цыплят 1-й и 2-й групп данный показатель достоверно возрастал в 3,1-4,3 раза по сравнению с контролем и в 1,7-2,4 раза - по сравнению с цыплятами 3-й группы. С возрастом у вакцинированных цыплят всех групп сохранилась тенденция к повышению содержания зрелых форм псев-доэозинофилов и эозинофилов при уменьшении числа клеток эритроб-ластического ряда. Кроме того, прослеживалась дальнейшая возрастная тенденция роста содержания лимфоцитов птиц опытных и контрольной групп. Однако количество плазмоцитов у цыплят, вакцинированных с нуклевитом, было выше в 1,3-1,4 раза по сравнению с контролем и птицей, иммунизированной с альвеозаном.
В тимусе на 7-й день после 1-й вакцинации у иммунных цыплят всех групп ширина коркового вещества была в 1,3-1,7 раза больше, чем у интактной птицы. При этом соотношение размеров коркового и мозгового вещества долек в тимусе вакцинированных цыплят возрастало на 40-50 % по сравнению с контрольными данными. Кроме того, у вакцинированных цыплят 1-й группы (вакцина+нуклевит) размеры мозгового вещества были в 2 раза достоверно выше, чем у птиц, иммунизированных одной вакциной. С возрастом под действием иммуностимуляторов у иммунных цыплят 1 -й и 2-й групп расширялись размеры коркового вещества. При этом у молодняка, вакцинированного с нуклевитом, этот показатель был достоверно больше на 30 % по сравнению с бройлерами, иммунизированными с альвеозаном, и соот-
124
ветственно выше в 1,7-2,8 раза, чем у цыплят, вакцинированных без применения иммуностимуляторов, по сравнению с контролем. Изменение площади корковой зоны сопровождалось незначительным снижением плотности расположения в ней тимоцитов. Кроме того, у иммунных цыплят всех групп с возрастом повышалась плотность содержания тимоцитов в мозговой зоне тимуса, и уровень их был достоверно выше в 1,3-1,4 раза, чем у интактной птицы. На 14-й день после 2-й вакцинации у иммунных цыплят 1 -й группы происходило уменьшение размеров корковой и расширение мозговой зон с одновременным снижением плотности тимоцитов. Однако в эти сроки исследования у бройлеров 1-й группы плотность расположения лимфоцитов в корковом веществе долек была в 1,4 раза выше уровня контроля.
В бурсе Фабрициуса у иммунных цыплят всех групп отмечалось увеличение размеров коркового, а затем мозгового вещества узелков. При этом данный показатель достигал наивысшего уровня в 1 -й и 2-й группах бройлеров, иммунизированных с нуклевитом и альвеозаном, и был соответственно выше в 1,2-1,3 раза по сравнению с птицей, вакцинированной без иммуностимуляторов, а также на 19-26 % больше, чем в контроле. Кроме того, у вакцинированных цыплят 1-3-й групп по сравнению с интактной птицей с возрастом происходило увеличение площади и периметра лимфоидных узелков с одновременным снижением плотности расположения лимфоцитов в них. В бурсе отдельных бройлеров 3-й группы отмечались атрофические процессы: разрушение узелков с формированием кист и превращение их в железистые структуры с эпителиальной выстилкой.
При изучении плазмоцитарной реакции у цыплят 1-3-й групп общее число плазматических клеток достоверно превышало аналогичные показатели у интактной птицы в 1,3-1,5 раза. Увеличение количества плазмоцитов происходило за счет бластных форм с последующим накоплением дифференцированных форм клеток. Кроме того, на 7-й день после 1-й вакцинации у птицы всех трех групп происходила активизация митотической активности. Однако у цыплят 1 -й группы количество всех форм плазматических клеток и митозов было значительно выше, чем у бройлеров других групп.
В селезенке иммунизированной птицы на 7-й день после 1-й вакцинации уже сформировались единичные лимфоидные узелки. Площадь и периметр их с возрастом увеличивались по сравнению с контрольной птицей. Иммунологическая перестройка в селезенке этих цыплят характеризовалась активизацией процессов бласттрансформации с накоплением проплазмоцитов и плазмоцитов. При этом у иммунных цыплят 1 -й группы количество этих клеток было выше на 24-91% по сравнению с птицей 2-й и 3-й групп и превышало аналогичный показатель у интактных бройлеров в 1,8-2,1 раза.
В пищеводной миндалине иммунных цыплят во все сроки исследований отмечалось увеличение общего количества плазматических клеток в 1,3-1,4 раза по сравнению с контролем. Рост данного показателя
125
происходил за счет размножения плазмобластов и проплазмоцитов. Применение нуклевита и альвеозана при вакцинации цыплят активизировало пролиферацию и созревание всех форм плазматических клеток и стимулировало образование лимфоидных узелков, размеры которых превышали аналогичный показатель у интактной птицы. Количество бластных форм и митотическая активность клеток с возрастом уменьшались, но были в 1,2-1,7 раза достоверно выше у иммунной птицы по сравнению с контролем.
В дивертикуле Меккеля вакцинированных цыплят во все сроки исследования число плазматических клеток достоверно превышало аналогичные показатели у контрольной птицы. Однако у молодняка, вакцинированного с иммуностимуляторами, уровень этих клеток было выше в 1,2-2,6 раза по сравнению с бройлерами, иммунизированными одной вакциной. С возрастом у цыплят 1 -й и 2-й групп наблюдалось увеличение числа и размеров лимфоидных узелков по сравнению с контролем. Одновременно применение нуклевита способствовало увеличению количества плазмоцитов у цыплят 1 -й группы, и уровень их был на 27 % больше, чем у бройлеров, вакцинированных с альвеоза-ном, а также в 1,3-2,1 раза выше по сравнению с молодняком, вакцинированным без иммуностимуляторов, и контролем соответственно.
В слепокишечных миндалинах иммунных цыплят 1, 2 и 3-й групп во все сроки исследований общее количество плазматических клеток было в 1,2-1,3 раза достоверно выше, чем у интактной птицы. Число клеток в состоянии митоза у подопытных бройлеров всех трех групп был также на 10 - 40 % больше, чем в контроле. У иммунизированного с нуклевитом молодняка с возрастом отмечалось снижение числа лим-фобластов при одновременном увеличении количества плазмоцитов. Содержание этих клеток было больше на 21% по сравнению с птицей, вакцинированной и получавшей альвеозан, на 31% - чем вакцинированный молодняк без иммуностимуляторов и в 1,6 раза выше контрольных показателей.
Заключение. Полученные результаты исследований показали, что иммунизация цыплят отечественной вирус-вакциной из штамма «КМИЭВ-13» против болезни Гамборо способствует развитию в периферической крови и органах иммунной системы характерных иммуно-морфологических изменений, проявляющихся статистически достоверным повышением по сравнению с контролем количества лейкоцитов и тромбоцитов, абсолютного и относительного содержания Т- и В-лимфоцитов, насыщенных РНК, усилением костномозгового кроветворения и фагоцитарной активности псевдоэозинофилов, расширением коркового и мозгового вещества долек тимуса и лимфоидных узелков в бурсе Фабрициуса, увеличением числа и размеров лимфоидных узелков в селезенке, активизацией бластной и плазмоцитарной реакций в периферических органах иммунитета. При этом плацентин и нуклевит оказывают выраженное стимулирующее действие на ход им-муноморфологических реакций у вакцинированных птиц. Кроме того,
126
под воздействием иммуностимуляторов в сыворотке крови иммунизированных цыплят происходит достоверное увеличение содержания общего белка, альбуминов и глобулинов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бирман, Б.Я. Иммунодефицита птиц: практ. пособие / Б.Я. Бирман, И.Н. Громов. Минск: Бизнесофсет, 2001. 140 с.
2. Бирман, Б.Я. Диагностика, лечение и профилактика иммунодефицитов птиц: монография / Б.Я. Бирман, И.Н. Громов. Минск: Бизнесофсет, 2004. 102 с.
3. Вакцинация - основа эпизоотического благополучия птицехозяйств / О.Ф. Хох-лачев [и др.] // Био. 2008. №5. С. 23-24.
4. Гласкович, М.А. Фагоцитарная активность псевдоэозинофилов крови у цыплят-бройлеров при введении в рацион препарата «Апистимулина-А» / М.А. Гласкович, В.А. Медведский, П.А. Красочко // Исслед. молодых учен, в решении проблем жив-ва: сб. статей III междунар. науч.-практ. конф., Витебск, 30 мая 2003 г. Витебск: ВГАВМ, 2003. С. 53-54.
5. Грушин, В.Н. Иммуноморфогенез у цыплят при пероральной вакцинации их против болезни Гамборо с применением «Апистимулина-А»: автореф. дис.... канд. вет. наук: 16.00.02 / В.Н. Грушин; Витебская гос. акад. вет. медицины. Витебск, 2005. 20 с.
6. Дягилев, К.К. Стимуляция поствакцинального противовирусного иммунитета у птиц / К.К. Дягилев, П.А. Красочко, В.Н. Грушин // От медоцелительства до научной пчелотерапии III тысячелетия: материалы I Междунар. науч.-практ. конф. по пчеловодству и пчелотерапии «Белорусский мед-2002». Минск, 2002. С. 114-116.
7. Иммунитет и его коррекция в ветеринарной медицине / П.А. Красочко, В.С. Прудников, О.Г. Новиков [и др.]. Смоленск, 2001. 323 с.
8. Красочко, П.А. Иммунология / П.А. Красочко, Ю.Н. Федоров, В.С. Прудников. Минск: Аверсет, 2005. 126 с.
УДК 619:639.1.091(476)
ЗАРАЖЕННОСТЬ ВОДОПЛАВАЮЩИХ ПТИЦ ОЗЕРА НАРОЧЬ ПАРАЗИТАМИ И ВОЗБУДИТЕЛЯМИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИИ
Ю.Г. ЛЯХ, Е.Э. ХЕЙДОРОВА Государственное научно-производственное объединение «НПЦ НАН Беларуси по биоресурсам» г. Минск, Республика Беларусь, 220034
(Поступила в редакцию 05.01.2011)
Введение. Эпизоотологическое и эпидемиологическое значения разных видов птиц определяются в основном их восприимчивостью к тем или иным возбудителям, плотностью популяций в гнездовой период, характером контакта с кровососущими переносчиками, направлением сезонных миграций, способностью к хронической инфекции, степенью контакта с человеком и домашними животными.
Нельзя в этой связи не затронуть вопрос миграции пернатых. Этой проблемой люди интересовались задолго до нашей эры и по многим причинам. Именно перелетным птицам во многом обязаны своим существованием природные очаги болезней и генетическая изменчивость возбудителя [1 - 4]. В настоящее время известно, что пернатые
127
