CC BY
13
ИЗ ПРАКТИКИ
Доц. Б. Г. ВАЙНБЕРГ, д-р Е. И. БРУТМАН, д-р К. Т. ГРЯНКО и д-р. Н. Л. АНИНА-РАДЧЕНКО (Одесса)
Новый метод фильтрования воды с целью выделения из нее патогенных микробов
кишечной группы1
\ \ Из кафедры микробиологии Одесского мединститута (зав. кафедрой—проф.15. Л. Елин)
Несмотря на существование множества методов обнаружения в питьевой воде и сточных водах патогенных микробов тифозно-пара-тифозной группы, мы, к сожалению, до сих пор не располагаем простыми и вполне надежными способами выделения из воды этих микробов. Авторы данной статьи поставили перед собой задачу устранить по возможности недостатки методов, связанных с фильтрованием воды для концентрации количества -г
патогённыхм икробов. ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
Предлагаемый нами упрощенный <1
фильтр представляет
собой разделительную мИНЙННИ 1
воронку цилиндриче-Йщ ской формы емкостью ^ИЯ^^Н
/ \ закрытом притертом Н кране над небольшим слоем рыхло заложен-ной гигроскопической ваты, закрывающей выход в отводный канал, насыпается слой пред- Н
хорошо ЗШНПНИНКтНИЯ высушенной и тщательно растертой в ДИгЩгГ^^." ступке порошкообраз-
ной инфузорной земли ' У^Ш^ж, У т-1ж: ЖШли
в количестве 3 — 5 г ДВЭЬйГ
(в зависимости от диаметра воронки), которая не очень плотно утрамбовывается.
В ряде опытов для улучшения фильтрующей способности инфузорной земли мы предварительно обрабатывали последнюю серным эфиром, который сливали, а следы его подвергали испарению, помещая землю в термостат (рис. 1 и 2).
Рис. 1. Схема фильтра: 7— вода, 2 —слой фильтровальной бумаги, 3— слой инфузорной земли,4—слой фильтровальной бумаги, 5—слой ваты, 6 — слой бус
1 Доложено 6.III.1936 г. в гигиенической секции III научной сессии Одесского медицинского института.
Между ватой и слоем инфузорной земли хорошо сделать прокладку из небольшого количества стеклянных бус и листочка фильтровальной бумаги над ними. Листочком фильтровальной бумаги прикрывается также поверхность инфузорной земли в воронке. Таким образом смонтированный фильтр, заткнутый ватной пробкой, подвергается суховоздушной стерилизации. Исследуемая вода в нужном количестве пропускается при открытом отводном кране через фильтр, после чего кран закрывается!. 1 л воды в зависимости от количества инфузорной земли, степени ее утрамбовки и гигроскопичности ватной прослойки проходит через фильтр за 30 минут — 2 часа в среднем. Е1о окончании фильтрования (подавляющее большинство микробов задерживается инфузорной землей) при закрытом кране воронка заполняется примерно на у3 своего объема питательной средой и помещается в термостат. Такой способ засева фильтрующего слоя гарантирует от каких бы то ни было потерь и, как видно из изложенного, весьма прост.
В наших опытах для выделения В. coli мы пользовались для заливки обычным мясо-пептоннъьм бульоном, для выделения холерных вибрионов — 1% пеп-тонной водой, для выделения тифозной палочки — средой Кауфмана-Мюллера.
I Среда Кауфмана-Мюллера готовилась по такой прописи. В эрленмейеровской колбе стерилизовалось 4,5 г углекислого кальция (очищенного мела), после чего в колбу прибавлялось 90 сма стерильного мясо-пептонного бульона, 10 см3 стерильного 50% раствора гипосульфита (50 г химически чистого гипосульфита +-дестиллированная вода до 100 см3) и 2 см' раствора иода (20 г иода + 25 г иодистого калия + до 100 см3 дестиллированной воды). На 100 см3 указанного состава среды мы прибавляли 1 см3 водного 1 : 1 000 раствора бриллиантовой зелени и 5 см® стерильной бычьей желчи. Тщательным перемешиванием мел равномерно распределялся в среде.
Закончив фильтрование воды, закрыв отводный кран и залив фильтрующий слой в воронке 50—100 см3 жидкой питательной среды указанного выше для разных микробов состава, мы помещали воронку в термостат на 1—2 суток при 37°, после чего производили пересев из полученной жидкой культуры на плотные среды (среда Endo для В. coli и В. typhi, щелочный мясо-пептонный агар для холерных вибрионов), выделяли культуру из подозрительных в отношении искомого микроба колоний и цдентифицировали последнюю обычным путем (морфолого-биологические свойства, биохим. активность, серологические свойства).
Таблица 1
Опыты с В. coli
Задерживающая способность фильтра
№ опыта количество водопроводной стерилизованной воды количество прибавленной культуры количество В, coli во взятом объеме длительность фильтрации в минутах результаты
1-2 800,0 0,001 1 200 000 25—40 В. coli при последней
3—4 800,0 0,0001 100 000 30—60 заливке МПБ выделен
5—6 800,0 0,00001 13 000 40—50
7—10 500,0 0,000001 1 400 15-40
11—12 500,0 0,0000001 ' 130 25-50
13—16 500,0 0,00000001 12 20-70
17-20 500,0 0,000000005 6-7 30—100
21-24 500,0 0,000000002 3—4 20-40 В 1 случае из 4 В. coll
25—26 500,0 0,000000001 1—2 30—45 выделен
Возможность выделения В. coli из водопроводной воды
количество длитель-
№ опыта водопроводной нестери-лизован-ной воды прибавленной суточной культуры В. coli, прибавленное к воде ность фильтрации в минутах результаты 1
27-28 29—30 500,0 500,0 0,000001 0,0000001 1 500 120 35—50 60-70 В. coli при последующей заливке МПБ выделен
31—32 500,0 0,00000001 от 30-40
33—36 500,0 0,00000с002 3-5 45—60 В 1 случае из 4 В. coli
37-38 500,0 0,000000001 1-2 20-30 выделен В. coli не выделен
Приведенные в табл. 1 и 2 результаты опытов касаются исследований, предг принятых с В. coli, V. cholerae asiaticae и В. typhi.
Первые две серии опытов служили для нас ориентировочными исследованиями для постановки основного опыта с В. typhi abdominalis, выделение которой из воды представляет наибольшие трудности.
В каждой серии опытов изучались задерживающая способность фильтра в отношении исследуемого микроба (культура микроба прибавлялась к стерильной водопроводной воде) и возможность выделения из нестерильной водопроводной воды, к которой также прибавлялась в разных количествах культура.
Мы пользовались лабораторными штаммами соответствующих культур. Как видно из табл. 1, нами поставлено 38 опытов с В. coli, из которых 26 на задерживающую способность фильтра и 12 на возможность выделения В. coli из нестерильной водопроводной воды. Количество микробов, прибавлявшихся ко взятому объему воды, устанавливалось в ряде опытов путем контрольного высева применявшейся бульонной суточной культуры для подсчета числа колоний, а и большей части опытов — по оптическому стандарту. Представленные в таблице цифры количества бактерий во взятом объеме воды являются результатом теоретического вычисления и, конечно, абсолютной точностью не отличаются.
Опыты с В. coli показывают, что задерживающая способность фильтра высока, так как даже при наличии 1—4 микробов во взятом объеме стерильной воды удавалось выделить В. coli. В опытах с нестерильной водой возможность выделения В. coli несколько меньше, так как лишь в одном случае из 4 при. прибавлении 3—5 микробов к взятому объему воды нам удалось выделить В. coli. Это число, однако, не соответствует физическому количеству В. coli во взятом объеме воды, так как водопроводная нестерильная вода содержит всегда некоторое количество В. coli. При коррекции на титр В. coli водопроводной воды одесского водопровода фактическое число соответствует 6—7 микробам. Правда, мы не пользовались в данном случае элективной питательной средой.
Нами проведено 41 исследование с холерными вибрионами, из них 10 на определение задерживающей способности фильтра и 21 с выделением культуры V- cholerae из водопроводной (нестерильной) воды. Наши опыты привели нас к весьма благоприятным результатам. Даже при наличии единичных вибрионов в профильтрованном объеме воды их часто удавалось выделить. Эти опыты показали нам, что сочетание предлагаемой нами методики концентрации микробов на фильтрующем слое инфузорной земли с применением элективной среды может дать точные результаты. В табл. 2 представлены основные наши опыты с В. typhi abdominalis. Всех поытов было поставлено 48, из них на задерживающую способность фильтра 24 и столько же с выделением тифозной палочки на нестерильной (водопроводной) воде. Опыты с фильтрованием стерильной воды, к которой прибавлялись тифозные бактерии в разных количествах, нам показали» что при наличии во взятом объеме воды 6—7 бактерий (расчет количества бактерий сделан по вышеуказаному принципу) они фильтрующим слоем могут быть задержаны и затем выделены (для выделения применялся обычный мясо-пептон-ный бульон). Что касается возможности выделения В. typhi из нестерильной воды при применении среды Кауфмана-Мюллера, то в наших опытах нам удалось получить положительный результат при наличии 10—3 микробов во взятом объеме воды.
Таблица 2
Опыты с В. typhi
Задерживающая способность фильтра
количест в о
№ опыта водопроводной стерильной воды прибавленной суточной культуры В. typhi ео взятом объеме длительность фильтрации в минутах результаты
1-2 3—6 7-8 800,0 800,0 500,0 0,01 0,01 0,0001 10 000 000 1 000000 120000 20-35 15—60 40-45 При последней заливке фильтра МПБ и высеве на среду Endo В. typhi выделен
9—10 500,0 0.00С01 13 000 20—30
11—12 500,0 0,000001 1 500 30-70
13-14 500,0 0,0000001 150 25-50
15—18 500,0 0,00000001 13 30-60
19—20 500,0 0,000000001 6-7 25—45
21-24 500,0 0,000000001 1—2 20-45 В. typhi не выделен
Продолжение
Возможность выделения В. typhi из водопроводной воды
количест в о
№ опыта водопроводной нестерильной .воды прибавленной суточной культуры В. typhi во взятом объеме воды длительность фильтрации в минутах результаты
25 26 27-28 500,0 500,0 500,0 0,000001 0,0000001 0,00000002 1 000 100 26 15 25 30—45 При последней заливке фильтра средой Кауфмана-Мюллера и высева на Endo В. typhi выделен
29—32 500,0 0,00000001 13 40—65
33 500,0 0,00000001 10 40
34—35 36-37 500,0 500,0 0,000000005 0,000000005 7-8 6-7 30-40 50т-55 В. typhi не выделен
38-40 500,0 0,0000000033 4-5 25—70
41-42 500,0 0,0000000025 3-4 20-35
43—48 500,0 0,000000002 2-3 30—80
Хотя этот результат можно считать удовлетворительным, однако следует стремиться к еще большему уточнению методики. Повиди-мому, как об этом можно судить по результатам опытов с холерными вибрионами, дальнейшее усовершенствование методики должно
итти по пути поисков более элективной для тифозной палочки среды, нежели примененная нами (одна из лучших) среда Кауфмана-Миллера.
Мы не производили специального исследования на стерильность прошедшей через фильтр ©оды, так как, во-первых, наша задача заключалась в учеУе количества задерживающихся на фильтре микробов и только с этой точки зрения мы оценивали предлагаемый нами фильтр, не ставя перед собой задачу определить его пригодность для получения стерильных фильтров; во-вторых, мы не располагаем методом, более точным, чем предлагаемый нами, для улавливания в том объеме фильтра, который1 мы получали, тех единичных микробных экземпляров, которые, возможно, проходят в него. Наши опыты с холерными вибрионами могут свидетельстве вать о весьма высокой задерживающей способности фильтра. Как видно из изложенного, предлагаемый нами метод фильтрования воды прост, вполне доступен для проведения в любой обстановке, фильтр обладает вполне надежной задерживающей микробы способностью, а, кроме того, при применении предлагаемого нами фильтра исключается какая бы то ни была возможность потери подлежащих засеву с целью выделения задерживающихся фильтром микробов.
Фильтр нами испытан в условиях эксперимента; дальнейшей задачей являются практическое его использование и проверка при разрешении задачи анализа питьевой воды (а также льда, напитков и, возможно, других объектов) на наличие патогенных микробов.
Выводы
1. Ряд предложенных до настоящего времени методов исследования воды на присутствие в ней микробов тифозно-паратифозной группы не разрешает полностью задачи разработки простой и надежной методики подобного анализа.
2. Предлагаемый нами метод фильтрования воды через слой инфузорной земли в разделительной химической воронке с последующей заливкой при закрытом притертом кране фильтрующего слоя элективной питательной средой с помещением воронки в термостат и в дальнейшем с выделением искомых культур отличается простотой и доступностью для проведения в любой обстановке.
3. Опыты с фильтрованием стерильной воды, к которой прибавляется разное количество культуры В. coli, показали, что задерживающая микробы способность фильтра высока (улавливание 1—4 микробов); аналогичные результаты получены с V. cholerae asiaticae и достаточно благоприятные (улавливание 6—7 микробов) с В. typhi, что может свидетельствовать о надежности фильтра.
4. Опыты с выделением из обычной водопроводной воды, к которой прибавлялась культура V. cholerae в разных количествах, указанных микробов показали, что при применении высокого качества элективной среды возможно выделение единичных экземпляров холерных вибрионов.
5. При применении в качестве элективного способа «обогащения» среды Кауфманна — Мюллера для выделения брюшнотифозной палочки из воды нам удавалось последнюю выделить при наличии 10—13 микробов в профильтрованном объеме воды.
6. Предлагаемый нами метод исследования воды на присутствие брюшнотифозно-паратифозных бактерий проверен в экспериментальных условиях, может быть уточнен применением более элективной-для «обогащения» роста этих бактерий средой, а также должен быть проверен в условиях практической работы по анализу подозрительных образцов воды.
------------VB- то_I_I__i--I----
