CC BY
29CZU: 616.98:578.834.1+612.017
COVID-19 -TESTE DE NEUTRALIZARE
Mariana ULINICI, Valentina VOROJBIT,
IP Universitatea de Stat de Medicina si Farmacie
Nicolae Testemitanu
Rezumat
Studiileprivind seroprevalenta recentpublicate demonstreaza ca, intr-o populatie randomizata, incidenta SARS-CoV-2 constituie aproximativ 5%. Lupta cu pandemia "COVID-19" va depinde de testarea anticorpilor neutralizanti, indiferent daca acestia au aparut ca rezultat al expunerii la virus sau sunt indusi de vaccin. Scopul acestei sinteze a fost de a elucida disponibilitatea sau existenta unor teste ce arpermite studierea prezentei anticorpilor neutralizanti la pacientii infectati cu SARS-CoV-2. Revizuirea literaturii a fost realizata accesand baza de date "Scopus" (in conformitate cu cadrul metodo-logic sugerat de Arksey si O'Malley, anul 2005) si folosind motorul de cautare "GoogleScholar". Au fost analizate 22 de articole publicate inainte de 1 iunie 2020, in vederea studierii existentei metodelor de testare a anticorpilor neutralizanti fata de SARS-CoV-2. Standardul de aur de testare a anticorpilor neutralizanti include utilizarea virusului, care in cazul SARS-CoV-2 va necesita facilitati de biosecuritate BSL-3. Un studiu publicat recent ne ofera o abordare cu totul noua, care poatefi realizata in laboratoarele BSL-2. Doua solutiipot fi considerate in acest sens: pseudovirusurile si virusurile-surogat. Pseu-dovirusurile pot realiza un singur ciclu de infectie, deoarece isi pierd capacitatea de autoreplicare, fiind, astfel, mai sigure din punct de vedere biologic decat virusurile infectioase. In cazul unui test de neutralizare a virusului-surogat pentru SARS-CoV-2, surogatul ar imita receptorul de legare al virusului. Cuantificarea anticorpilor neutralizanti este importanta pentru a evalua imunitatea postinfectioasa.
Cuvinte-cheie: SARS-CoV-2, teste de neutralizare, imunitate COVID-19
Summary
COVID-19 - neutralization tests
Recently published seroprevalence studies indicate that in a randomized population the incidence of SARS-CoV-2 is approximately 5%. The road out of the "COVID-19"pandemic will depend on the testing for neutralizing antibodies; whether they resulted from virus exposure, or they are vaccine induced. The aim of this review was to elucidate the availability or the existence of tests that would allow the study of the presence of neutralizing antibodies in patients infected with SARS-CoV-2. The literature review was performed by accessing the "Scopus" database (according to the methodological framework suggested by Arksey and O'Malley, year 2005) and the "GoogleScholar" search engine. We analyzed 22 articles published before June 1, 2020, in order to study the existence of methods for testing neutralizing antibodies to SARS-CoV-2. The gold standard for neutralizing antibody testing includes the use of the virus, which in the case of SARS-CoV-2 will
require BSL-3 biosecurity facilities. A recently published study offers a completely new approach that can be done in BSL-2 laboratories. Two solutions can be considered in this regard: pseudoviruses and surrogate viruses. Pseudoviruses can perform a single cycle of infection because they lose their ability to self-replicate, thus being safer from a biological point of view than infectious viruses. In the case of a SARS-CoV-2 surrogate virus neutralization test, the surrogate would mimic the virus binding receptor. Quantification of neutralizing antibodies will be important to assess post-infectious immunity.
Keywords: SARS-CoV-2, neutralization tests, COVID-19 immunity
Резюме
COVID-19 - тесты нейтрализации
Недавно опубликованные исследования серопревалент-ности показывают, что в общей популяции заболеваемость SARS-CoV-2 составляет приблизительно 5%. Выход из пандемии "COVID-19" будет зависеть от тестирования на нейтрализующие антитела, возникшие в результате непосредственного воздействия вируса или после вакцинации. Целью обзора являлось выяснение доступности или существования тестов, которые позволили бы изучить наличие нейтрализующих антител у пациентов, инфицированных SARS-CoV-2. Обзор литературы осуществлен путем доступа к базе данных "Scopus" (согласно методологической структуре предложенной Arksey и O'Malley, год 2005) и поисковой системе "GoogleScholar". Мы проанализировали 22 статьи, опубликованные до 1 июня2020 г., чтобы изучить существование методов тестирования нейтрализующих антител к SARS-CoV-2. Золотым стандартом тестирования нейтрализующих антител является использование вируса, который в случае SARS-CoV-2 требует средств биологической защиты BSL-3. Недавно опубликованное исследование предлагает совершенно новый подход, который может быть реализован в лабораториях BSL-2. В данном случае возможны два решения: псевдо-вирусы и суррогатные вирусы. Псевдовирусы могут выполнить только один цикл заражения, поскольку теряют способность к самовоспроизведению, что делает их более безопасными с биологической точки зрения, чем инфекционные вирусы. В случае теста нейтрализации суррогатного вируса SARS-CoV-2, суррогат будет имитировать рецептор, связывающий вирус. Количественная оценка нейтрализующих антител важна для оценки постинфекционного иммунитета.
Ключевые слова: SARS-CoV-2, тесты на нейтрализацию, иммунитет COVID-19
Introducere
ín decembrie 2019, in orasul Wuhan, China, a izbucnit o serie de cazuri de pneumonie de origine necunoscutä. Agentul cauzal a fost identificat in ia-nuarie 2020 de cätre cercetätorii chinezi, fiind numit 2019-nCoV [1], desemnat ulterior SARS-CoV-2 [2], a cärui analizä filogeneticä aratä cä virusul este foarte asemänätor coronavirusului sindromului respirator acut sever (SARS-CoV) [3], dar cu tendintä de a se transmite de la o persoanä la alta mult mai usor.
Deoarece nu existä niciun medicament sau vaccin inregistrat impotriva COVID-19 [4], sistemul imun este cea mai bunä apärare. Räspunsul imun la SARS-CoV-2 implicä atat imunitatea celularä, cat si producerea de anticorpi [5]. Celulele T citotoxice joa-cä un rol vital in clearance-ul si eliminarea celulelor infectate cu virus [6].
Formarea anticorpilor neutralizanti reprezintä o linie importantä de apärare in lupta contra noului coronavirus SARS-CoV-2. Acesti anticorpi pot elimina particulele virale si au potential mare de a fi utilizati pentru prevenirea si tratamentul infectiei cu SARS-CoV-2.
Glicoproteina S (spike) a virusului SARS-CoV-2 determinä penetrarea in celulele-gazdä si este tinta principalä a anticorpilor neutralizanti. Detectarea anticorpilor impotriva SARS-CoV-2 nu indicä direct imunitate protectoare si nu au fost incä stabilite corelatiile de protectie impotriva COVID-19 [7, 8].
Testele serologice pentru COVID-19 pot fi utilizate pentru identificarea persoanelor care au fost anterior infectate cu SARS-CoV-2, lucru important pentru sistemul de sänätate, deoarece reactia de polimerizare in lant (PCR) si alte teste rapide de diagnostic, utilizate actualmente, identificä prezenta materialului viral care se gäseste doar la persoanele infectate la momentul testärii [9].
Scopul acestei cercetäri a fost de a elucida disponibilitatea sau existenta unor teste ce ar permite studierea prezentei anticorpilor neutralizanti la pacientii infectati cu SARS-CoV-2.
Materiale si metode
t
Revizuirea literaturii de specialitate a fost reali-zatä accesand baza de date Scopus (in conformitate cu cadrul metodologic sugerat de Arksey si O'Malley, anul 2005) si folosind motorul de cäutare GoogleScholar. Au fost analizate 22 de articole publicate inainte de 1 iunie 2020, in vederea studierii existentei metodelor de testare a anticorpilor neutralizanti fatä de SARS-CoV-2.
Rezultate obtinute
Anticorpii neutralizanti sunt foarte important in lupta cu COVID-19, iar testele de neutralizare sunt relevante si ne ajutä sä intelegem cum avanseazä gazda in dezvoltarea räspunsului imun la boalä. Stu-
diile de seroprevalentä publicate recent demonstrea-zä cä la o populatie aleatorie, incidenta SARS-CoV-2 este de aproximativ 5% [10,11]. Aceste studii aratä, de asemenea, cä in localitätile cu densitate mare a populatiei, seroprevalenta poate creste panä la aproximativ 10%. Unele studii (in majoritate cele cu populatii autoselectate) au raportat o seroprevalentä panä la 20% [12, 13].
ín mai multe articole am atestat una dintre cele mai promitätoare abordäri in combaterea bolii. Aceste cercetäri studiazä utilizarea serului convalescent de la pacientii cu COVID-19 care s-au recuperat, transferandu-l la pacientii aflati in stadiul acut al bolii. Una dintre sarcinile importante ale acestor studii va fi determinarea potentialului protector al serului convalescent, pentru a sti care este titrul de anticorpi neutralizanti prezenti si care este longevi-tatea acestora, precum si cat timp dureazä protectia räspunsului imun [13, 14]. Titrarea anticorpilor cu aju-torul testelor de neutralizare este foarte importantä, mai ales la mäsurarea imunitätii induse de vaccin. Prin urmare, testele de neutralizare ne vor ajuta atat in etapa de elaborare a unui vaccin impotriva SARS-CoV-2, cat si in etapa de testare preclinicä pe animale si apoi clinicä a acestor vaccinuri pentru a putea determina dacä vaccinurile functioneazä in modul in care se presupune.
La moment sunt in desfäsurate un numär mare de studii privind vaccinurile, cele mai multe din ele fiind studii asupra sigurantei. Ele vor determina, cu ajutorul testelor de neutralizare, räspunsul imun, dacä au apärut sau nu anticorpi in urma vaccinärii, care este titrul de anticorpi neutralizanti, care e longevitatea acestora. De asemenea, cercetarea anticorpilor neutralizanti se referä la tratament, molecule mici inhibitori de intrare, folosite ca medicament, care se bazeazä pe capacitatea de a preveni penetrarea virusului in celulä; de asemenea, trebuie mäsurate si sistemele de neutralizare ce dispun de un astfel de mecanism [9].
Dezvoltarea anticorpilor si a imunitätii
Aproape toate persoanele imunocompetente vor dezvolta un räspuns imun in urma infectiei cu SARS-CoV-2. Panä in prezent, au fost raportate detalii serologice limitate ale infectiei cu acest virus. Conform unui studiu preliminar, un pacient a prezentat un titru maxim al IgM specific la a 9-a zi dupä debu-tul bolii si seroconversia in IgG cätre säptämana a doua [15]. Serurile de la cinci pacienti cu COVID-19 confirmä o reactivitate incrucisatä cu SARS-CoV, dar nu si cu alte coronavirusuri. Mai mult, serurile de la toti pacientii au fost capabile sä neutralizeze SARS-CoV-2 in vitro, ceea ce sugereazä dezvoltarea reusitä a räspunsului imun umoral [15]. Rämane de investi-gat dacä titrul anticorpilor specifici se coreleazä cu severitatea bolii.
Conform datelor disponibile În prezent, anti-corpii IgM si IgG Împotriva SARS-CoV-2 apar dupá 6-15 zile de la debutul bolii [16]. Timpul mediu de seroconversie pentru anticorpii totali, IgM si apoi IgG a fost: ziua a 11-a, ziua a 12-a si, respectiv, a 14-a de la debutul simptomelor. Astfel, detectarea IgM fárá IgG este ceva neobisnuit. Nu se cunoaste cât timp anticorpii IgM si IgG rámân detectabili În urma unei infectii, dar se stie cá anticorpii Împotriva altor coronavirusuri scad În timp (intervalul: 12-52 de sáptámâni de la debutul simptomelor) si au fost demonstrate reinfectii omoloage [17].
În plus, poate fi evaluatá dezvoltarea anticorpilor neutralizanti. Acestia inhibá replicarea viralá in vitro si, la fel ca În cazul multor boli infectioase, prezenta lor se coreleazá cu imunitatea la o infectie ulterioará, cel putin temporar [5].
Eforturile initiale de obtinere a anticorpilor neutralizanti s-au concentrat pe reevaluarea anticorpilor monoclonali specifici contra SARS-CoV, izolati dupá izbucnirea epidemiei din 2003, care ar putea neutraliza Încrucisat SARS-CoV-2 [18, 19]. Desi au fost descrise douá tipuri de anticorpi monoclonali pen-tru a neutraliza Încrucisat SARS-CoV-2, majoritatea anticorpilor neutralizanti anti-SARS-CoV nu au legat proteina S a virusului SARS-CoV-2 si nici nu au neu-tralizat virusul respectiv [18, 19]. Recent, accentul s-a deplasat de la anticorpii de neutralizare mcrucisatá a SARS-CoV la izolarea a noi anticorpi neutralizanti anti-SARS-CoV-2 de la pacientii care s-au vindecat de COVID-19 [20].
Rui Shi si colab. (anul 2020) au raportat izolarea a doi anticorpi monoclonali umani specifici (numiti CA1 si CB6) de la un pacient care a suportat COVID-19. CA1 si CB6 au demonstrat o activitate puternicá de neutralizare specificá a SARS-CoV-2 in vitro. În plus, CB6 a inhibat infectia cu SARS-CoV-2 la maimutele rhesus atât În testárile profilactice, cât si În cele de tratament. Rezultatele sugereazá cá CB6 necesitá studii suplimentare În calitate de candidat pentru interpretarea clinicá [21].
Tipurile testelor de neutralizare
Testele de neutralizare determiná capacitatea functionalá a anticorpilor de a preveni infectia viralá in vitro. Un test de neutralizare implicá incubarea se-rului sau a plasmei pacientului cu virusul viu, urmatá de infectarea si incubarea culturilor celulare. Testele de neutralizare trebuie sá fie efectuate În laboratoa-rele de biosecuritate (BSL) cu nivel 3 sau BSL-2, În functie de forma virusului SARS-CoV-2 utilizat.
Se efectueazá trei tipuri de teste de neutralizare si anume:
1. Teste de neutralizare a virusului viu, cum ar fi testul de neutralizare a reducerii formárii plajelor si microneutralizarea, utilizeazá virusul SARS-CoV-2
dintr-un izolat clinic sau proteinele raportoare ce ex-primâ SARS-CoV-2 recombinant. Aceastâ metodâ este consideratâ standardul de aur al testârii neutralizârii virusului si este efectuatâ în laboratoare BSL-3, iar rezultatele pot fi obtinute în aproximativ cinci zile.
2. Testele de neutralizare a pseudovirusului folosesc pseudovirusuri recombinante (cum ar fi virusul stomatitei veziculare), care încorporeazâ proteina S a virusului SARS-CoV-2. Acest test poate fi efectuat în laboratoarele BSL-2, în functie de tulpina virusului stomatitei veziculare utilizatâ.
3. Testele de neutralizare a virusului-surogat folosesc un virus-surogat ce imitâ receptorul de legare a virusului SARS-CoV-2 si pot fi efectuate în laboratoarele BSL-2.
Standardul de aur - metoda conventional de testare a neutralizârii virusului
Standardul de aur al neutralizârii virusului viu a fost descris de câtre Johns Hopkins Center for Health Security la mijlocul lunii mai 2020 [9]. În figura 1 sunt descrise etapele si principiul testului de neutralizare în care sunt utilizate culturi celulare si virusul viu. Ceea ce câutâm sâ facem prin aceastâ metodâ este sâ mâsurâm cantitatea de anticorpi neutralizanti din serul pacientului, care pot inhiba intrarea virusului în celulâ. Punctele cenusii de pe plâcile din partea de jos a schemei reprezintâ monostratul de culturâ celu-larâ pusâ pe cutia Petri. Înainte de a inocula culturile celulare cu suspensia ce contine serul pacientului în dilutii seriale si tulpina de virus SARS-CoV-2, este necesarâ incubarea prealabilâ. În cazul în care serul pacientului nu contine anticorpi, virusul va intra în celule, iar acest fapt va fi demonstrat prin formarea plajelor de lizâ sau a gâurilor în monostratul de culturi celulare [9].
Acestea sunt studii destul de complexe si necesitâ facilitâti cum ar fi cultura de virus, nivelul de biosecuritate si reactivii utilizati la efectuarea testului. Echipamentul pentru efectuarea unui astfel de test nu este atât de complex si implicâ folosirea microscoapelor si a incubatoarelor. Având în vedere faptul câ virusul este încâ putin studiat, precum si potentialul virusului de a suferi mutatii, ceea ce ar afecta testul în sine, infectivitatea virusului asupra culturilor celulare, precum si rezultatul testului, este necesarâ o corijare permanentâ.
Testele de neutralizare a pseudovirusului
Pseudovirusurile sunt similare plasmidelor bac-teriene. La intrarea în celulele sensibile, pseudoviru-surile sunt capabile sâ se reproducâ o singurâ datâ, comparativ cu virusurile sâlbatice, care se reproduc de multe ori. În plus, pseudovirusurile lipsesc virusul-mamâ de componentele virulente, ceea ce eliminâ practic posibilitatea ca aceste particule sâ poatâ provoca o infectie activâ la un individ expus [16, 22,
Seri al dilutions are made from patient serum arid mixed
ispensiorv Concentration of the-viral suspension «ains constant
u
suspension
Virus and antibody-oontaïning lerum is allowed to incubate before being plated on monolayer host ceils
Viral
suspension (same
concentration dilutions)
Cell monolayer + viral suspension + serum is cowered with agar and incubated for
several days
I si
Figura 1. Testul de neutralizare a virusului viu [9]
Dilution at wtiich antibody concentration is able to reduce- plaque formation by 50% is known as the PRNTs«, Undlcates that antibodies exist >ri th»e pataent that are able to neutra lize f u rther vi ral activity
23]. Aceste proprietâti unice ale pseudovirusurilor permit manipularea lor în conditii de sigurantâ în laboratoarele cu biosecuritate de nivel 2. Desi aceste virusuri sunt mult mai sigure de manipulat decât cel de la care au provenit, structura conformational a proteinelor de suprafatâ ale pseudovirusurilor seamânâ foarte mult cu cea a virusului nativ. Astfel de asemânâri în structura proteinelor de suprafatâ le permit pseudovirusurilor sâ râmânâ eficiente în capacitatea lor de a intra în celule.
Pe lângâ aceste avantaje, pseudovirusurile pot fi cuantificate si pot fi produse rapid. Numeroasele beneficii asociate cu efectuarea studiilor stiintifice asupra pseudovirusurilor au însotit cercetâtorii în timpul detectârii anticorpilor, dezvoltârii si evaluârii vaccinurilor, oferind informatii despre recunoasterea receptorilor, câile de inhibare a virusului si mecanis-mele de tropism celular.
Recent au fost fâcute mai multe încercâri de a genera un sistem de pseudovirus fiabil pentru virusul SARS-CoV-2 [16, 24].
Testele de neutralizare a virusului-surogat
O altá cale prin care se poate de studiat prezenta anticorpilor neutralizanti este utilizarea virusurilor-surogat. Un virus-surogat va imita (adicá va prezenta comportamente similare) virusul tintá (nativ), dar fárá nicio capacitate virulentá.
Exemple de virusuri-surogat pot fi: a) virusurile neinfectioase (inactivate sau atenuate); b) entitátile chimice care imitá virusul.
Testul de neutralizare a virusului-surogat cuan-tificá capacitatea anticorpilor de neutralizare de a preveni legarea virusului de receptorul-tintá [25]. ín acest test, anticorpii de neutralizare anti-SARS-CoV-2 blocheazá proteina HRP conjugatá la domeniul de legare la receptor (RBD) de a se lega la enzima de conversie a angiotensinei 2 (ACE2) umane pre-aco-perite pe o placá ELISA. Avantajul acestei metode este faptul cá nu sunt necesare culturile celulare si nici particulele virale. Másurarea conexiunii dome-niului de legare a receptorului la ACE2 se face prin utilizarea unei proteine-semnal (figura2) cu ajutorul testului colorimetric ELISA [25].
Figura 2. Principiul testului de neutralizare a virusului-surogat SARS-CoV-2 [25]
Douá studii comparative publicate recent, unul care a avut loc În Singapore si altul În China, au cer-cetat corelatia dintre reactia de neutralizare În care se utilizeazá virusul viu si reactia de neutralizare În care se foloseste virusul-surogat. În aceste studii a fost utilizat un panel de seruri COVID-19 cu diferite concentratii de anticorpi anti-SARS-CoV-2 (figura 3a). Rezultatele demonstreazá o corelatie generalá Între cele douá analize (figura 3a). Testul de neutralizare a virusului-surogat este mai sensibil decât cel de neutralizare a virusului viu. La un cutoff de inhibitie de 50%, care poate fi luat În considerare, toate serurile de la pacientii cu COVID-19 au arátat neutralizarea la 1:20 sau un titru de neutralizare egal sau mai mare decât 640 [25]. Pentru a valida performanta testului de neutralizare a virusului-surogat SARS-CoV-2, au
Discutii
În prezent nu sunt bine definite corelatiile imunologice ale imunitátii Împotriva infectiei cu SARS-CoV-2. Studiile În curs includ: evaluarea nive-lului de anticorpi necesari pentru protectia Împotriva reinfectiei, durata acestei protectii si factorii asociati cu dezvoltarea ráspunsului imun protector (formarea anticorpilor neutralizanti).
Problemele care necesitá solutionare sunt: cinetica ráspunsului la anticorpi, longevitatea anticorpilor, capacitatea acestora de a ne proteja de infectiile repetate, titrul de protectie al anticorpului de neutralizare si corelarea titrelor de anticorpi de legare la capacitatea de neutralizare. Rezolvarea acestor probleme ne va ajuta sá Întelegem cu o anu-mitá certitudine prezenta sau absenta unei infectii anterioare cu SARS-CoV-2 si, cel mai important, sá Întelegem când pot oferi imunitate anticorpii formati. În absenta datelor suplimentare, prezenta
fost testate douá cohorte diferite de seruri pozitive si negative. Testul a fost efectuat În douá tári - Singapore si China, pe douá grupuri independente pentru a asigura În continuare fiabilitatea si reproductibilita-tea. Pentru prima cohortá, au fost testate 77 de seruri de la pacientii cu COVID-19 confirmati prin PCR, din Singapore, si 75 de seruri de control de la pacientii sánátosi (figura 3b). Pentru cea de-a doua cohortá, au fost testate câte 50 de seruri din fiecare categorie din Nanjing, China (figura 3c). Aceste teste prazintá 100% specificitate, 95-100% sensibilitate si nicio reactie mcrucisatá cu alte coronavirusuri cunoscute. Spre deosebire de standardul de aur sau de testele de neutralizare a pseudovirusului, acest test poate fi finalizat În una-douá ore, iar celelalte necesitá incubarea peste noapte [25].
anticorpilor nu poate fi echivalatá cu imunitatea unei persoane fatá de infectia cu SARS-CoV-2.
Astfel, rezultatele testelor serologice nu indicá cu certitudine prezenta sau absenta infectiei curente sau anterioare cu SARS-CoV-2.
Sunt foarte multe discutii În ceea ce priveste testarea prezentei anticorpilor pentru a asigura reve-nirea În sigurantá Înapoi la muncá sau deplasarea În sigurantá. Prezenta unui ráspuns umoral nu Înseam-ná obligatoriu protectia fatá de reinfectia cu virusul SARS- CoV- 2 si nici fatá de dezvoltarea bolii.
Concluzii
Cu toate cá În comert existá multe tipuri de teste disponibile ce indicá prezenta anticorpilor anti-SARS-CoV-2, teste ce se efectueazá În laborator sau care pot fi efectuate la punctul de Îngrijire a pacientului, niciunul nu este capabil sá másoare anticorpii neutralizanti. Testele de neutralizare a virusului viu,
Figura 3. Corelatia dintre testul de neutralizare a virusului-surogat si testul de neutralizare a virusului viu si evaluarea testului de neutralizare al virusului-surogat pe doua cohorte de pacienti COVID-19 din doua natiuni diferite [25]
a pseudovirusului sau a virusului-surogat rämän singura platforma pentru detectarea anticorpilor neutralizanti. Primele doua necesita virus viu si culturi celulare, operatori cu calificare inalta, sunt mai putin sensibile in general si necesita zile pentru obtinerea rezultatelor. Astfel, testele de neutralizare a virusului viu si a pseudovirusului nu sunt adecvate pentru productia si testarea in masa, chiar si in cele mai dezvoltate tari.
Datele obtinute in acest studiu au demonstrat ca testul de neutralizare a virusului-surogat este la fel de specific si chiar mai sensibil decät standardul de aur. Avantajul major al acestui test este ca poate fi realizat rapid in majoritatea laboratoarelor de cercetare sau clinice, fara a fi nevoie de utilizarea materialelor biologice vii si de conditii de biosecu-ritate de nivelul 3.
Testele de neutralizare pot acoperi multe aspecte ale investigatiei COVID-19 - de la urmarirea contactilor, efectuarea studiilor de seroprevalenta, urmarirea rezervorului/intermediarului animalelor päna la evaluarea imunitatii efective, a longevitatii imunitatii protectoare si a eficacitatii diferitor vaccinuri.
Bibliografie
1. Kermali M., et al. The role of biomarkers in diagnosis of COVID-19 - A systematic review. In. Life Sciences. 2020, vol. 254, p. 117788. Disponibil pe: doi:10.1016/j. lfs.2020.117788
2. Yuan M., et al. A highly conserved cryptic epitope in the receptor binding domains of SARS-CoV-2 and SARS-CoV. In. Science. 2020. vol. 368, nr. 6491, pp. 630-633. Disponibil pe: doi:10.1126/science. abb7269
3. Zhu N., et al. A novel coronavirus from patients with pneumonia in China. In. New England Journal of Medicine. 2020, vol. 382, nr. 8, pp. 727-733. Disponibil pe: doi:10.1056/NEJMoa2001017
4. Zhang L., Liu Y. Potential interventions for novel coronavirus in China: A systematic review. In. Journal of Medical Virology. 2020, vol. 92, nr. 5, pp. 479-490. Disponibil pe: doi:10.1002/jmv.25707
5. Latest-evidence on immune-responses. [citat 1.06.2020]. Disponibil pe: https://www.ecdc.europa.eu/en/covid-19/latest-evidence/immune-responses.
6. Kumar S., et al. Host Immune Response and Immuno-biology of Human SARS-CoV-2 Infection. In. Saxena S. (eds). Coronavirus Disease2019 (COVID-19). Medical Virology: From Pathogenesis to Disease Control. Springer, Singapore. 2020, pp. 43-53. Disponibil pe: doi:10.1007/978-981-15-4814-7_5
7. Prompetchara E. Ketloy, Palaga T. Immune responses in COVID-19 and potential vaccines: Lessons learned from SARS and MERS epidemic. In. Asian Pacific Journal of Allergy and Immunology. 2020, vol. 38, nr. 1, pp. 1-9. Disponibil pe: doi:10.12932/AP-200220-0772
8. Walls A.C., et al. Structure, Function, and Antigenicity of the SARS-CoV-2 Spike Glycoprotein. In. Cell. 2020, vol. 181, nr. 2, pp. 281-292. Disponibil pe: doi:10.1016/j.cell.2020.02.058
9. Serology-based-tests-for-COVID-19. [citat 29.05.2020]. Disponibil pe: https://www.centerforhealthsecurity. org/resources/COVID19/serology/Serology-based-tests-for-COVID-19.html
10. Khan F.A. The role of selectivity of the SARS-CoV-2 virus for human genetic profiles in susceptibility
and resistance to COVID-19. In. New Microbes New Infections. 2020, vol. 36, p. 100697. Disponibil pe: doi:10.1016/j.nmni.2020.100697
11. Rabi F.A., et al. Sars-cov-2 and coronavirus disease 2019: What we know so far. In. Pathogens. 2020, vol. 9, nr. 3, pp. 1-14. Disponibil pe: doi:10.3390/patho-gens9030231
12. Okba N., et al. SARS-CoV-2 specific antibody responses in COVID-19 patients. In. Emerging Infectious Diseases. 2020, pp. 1-18. Disponibil pe: doi:10.1101/2020.03.18.20038059
13. Zhao J., et al. Antibody responses to SARS-CoV-2 in patients of novel coronavirus disease 2019. In. Clinical Infectious Diseases. 2020. Disponibil pe: doi:10.1093/ cid/ciaa344
14. Cao Y., et al. Potent Neutralizing Antibodies against SARS-CoV-2 Identified by High-Throughput Single-Cell Sequencing of Convalescent Patients' B Cells. In. Cell. 2020, pp. 73-84. Disponibil pe: doi:10.1016/j. cell.2020.05.025
15. Zhou P., et al. A pneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin. In. Nature. 2020, vol. 579, nr. 7798, pp. 270-273. Disponibil pe: doi:10.1038/s41586-020-2012-7
16. Nie J., et al. Establishment and validation of a pseudovirus neutralization assay for SARS-CoV-2. In. Emerging Microbes and Infections. 2020, vol. 9, nr. 1, pp. 680-686. Disponibil pe: doi:10.1080/22221751.2 020.1743767
17. Kellam P., Barclay W. The dynamics of humoral immune responses following SARS-CoV-2 infection and the potential for reinfection. In. Journal of General Virology. 2020. Disponibil pe: doi:10.1099/jgv.0.001439
18. Tian X., et al. Potent binding of 2019 novel coronavirus spike protein by a SARS coronavirus-specific human monoclonal antibody. In. Emerging Microbes and Infections. 2020, vol. 9, nr. 1, pp. 382-385. Disponibil pe: doi:10.1080/22221751.2020.1729069
19. Wang C., et al. A human monoclonal antibody blocking SARS-CoV-2 infection. In. Nature Communi-catins. 2020, vol. 11, nr. 1, pp. 1-6. Disponibil pe: doi:10.1038/s41467-020-16256-y
20. Ju B., et al. Human neutralizing antibodies elicited by SARS-CoV-2 infection. In. Nature. 2020. Disponibil pe: doi:10.1038/s41586-020-2380-z
21. Shi R., et al. A human neutralizing antibody targets the receptor binding site of SARS-CoV-2. In. Nature. 2020. Disponibil pe: doi:10.1038/s41586-020-2381-y
22. Protocol for recombinant RBD-based SARS vaccines protein preparation [citat 27.05.2020]. Disponibil pe: https://www.jove.com/v/2444/protocol-for-recombinant-rbd-based-sars-vaccines-protein-preparation
23. Li Q., et al. Current status on the development of pseu-doviruses for enveloped viruses. In. Reviews in Medical Virology. 2018, vol. 28, nr. 1, pp. 1-10. Disponibil pe: doi:10.1002/rmv.1963
24. Huang S.W., et al. Assessing the application of a pseudovirus system for emerging SARS-CoV-2 and re-emerging avian influenza virus H5 subtypes in vaccine development. In. Biomedical Journal. 2020. Disponibil pe: doi:10.1016/j.bj.2020.06.003
25. Tan C.W., et al. A SARS-CoV-2 surrogate virus neutralization test (sVNT) based on antibody-mediated blockage of ACE2-spike (RBD) protein-protein interaction. In. Nature Research. 2020. Disponibil pe: doi:10.21203/rs.3.rs-24574/v1
Mariana Ulinici,
asistent universitar,
Catedra de microbiologie si imunologie,
IP USMF Nicolae Testemitanu,
tel.: 069973591, e-mail: [email protected]
