CC BY
16
Материалы III Санкт-Петербургского международного экологического форума
Инфекция и иммунитет
ствии ГОСТ 26669—85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов».
Доказано, что увеличение титра фагов Bm—3 и Bm—8 серии УГСХА в 5 раз произошло при концентрации 103 м.к. бактерий Bacillus mesentericus в 1 г объектов исследований. Данная концентрация бактерий в пищевом сырье и продуктах питания считается пороговой для их отбраковки или вторичной переработки с использованием соответствующих технологий.
Создана схема ускоренной индикации бактерий Bacillus mesentericus методом реакции нарастания титра фага с использованием биопрепарата на основе фагов Bm—3 УГСХА и Bm—8 УГСХА, которая позволяет обнаружить бактерии в концентрации 103 м.к./г пищевого сырья и продуктов питания за 25 часов.
Применение бактериологического метода и реакции нарастания титра фага при проверке эффективности методики позволяет нам сделать вывод о том, что фагоиндикация экономически целесообразна, так как метод менее трудоемок и позволяет обнаружить искомый штамм бактерий без выделения чистой культуры.
Т125 БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИОФАГОВ BACILLUS MYCOIDES
Н.А. Феоктистова1, Д.А. Макеев1, Д.А. Васильев1, А.В. Алешкин2
'ФГБОУ ВПО УГСХА им. П.А. Столыпина, Ульяновск, Россия 2ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, Москва, Россия
Изучения литической активности селекционированных фагов Bacillus mycoides проводили методом агаровых слоев. Экспериментальным путем установлено, что литическая активность фагов колеблется в диапазоне от 106 до 10 12 БОЕ/мл. Для изучения спектра литического действия селекционированных фагов использовали 11 штаммов бактерий Bacillus mycoides, выделенных из проб пищевого сырья и продуктов питания и 1 штамм, полученный из музея НИИЦМиБ ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина». Исследования проводили методом нанесения фага на газон бактериальной культуры методом «стекающая капля». Доказано, что изучаемые бактериофаги имеют различный диапазон действия по отношению к 12 изучаемым штаммам Bacillus mycoides. Опыты демонстрируют, что наиболее широким спектром литического действия обладают штаммы фагов B.myc—3 и B.myc—5 серии УГСХА, совокупный процент лизиса которых составил 91,7 %.
Изучение специфичности 5 выделенных и селекционированных изолятов фагов Bacillus mycoides мы проводили на культурах гомологичного рода: бактериях Bacillus cereus и Bacillus thuringiensis, входящих в группу «Bacillus cereus», используя метод «стекаю -щая капля» Полученные результаты свидетельствуют, что все изучаемые бактериофаги, строго специфичны в пределах вида Bacillus mycoides и могут быть компонентами биопрепарата для индикации и идентификации бактерий Bacillus mycoides.
Для конструирования биопрепарата для фа-гоиндикации и фагоидентификации бактерий Bacillus mycoides нами было выбрано два фага B.myc—3 и B.myc—5 серии УГСХА, которые характеризовались высокими титрами литической активности и максимально широким совокупным спектром ли-
тического действия. Определено, что бактериофаги в течение 12 месяцев снижали показатели литиче-ской активности с 1012 до 107 БОЕ/мл. Известно, изменение литической активности фагов в диапазоне 107-109 не является критическим при конструировании биопрепарата и не отразится на его способности лизировать культуры в пищевом сырье и продуктах питания при проведении исследований по их индикации и идентификации.
Таким образом, нами впервые выделены из проб почвы и изучены по основным биологическим свойствам бактериофаги специфичные в отношении Bacillus mycoides. Созданный на базе производственно-перспективных штаммов бактериофагов Bm—3 УГСХА и Bm—5 УГСХА диагностический биопрепарата обладает высоким титром вирусных частиц, широким спектром литической активности и стабильностью при хранении в течение года.
Т126 СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭФФЕКТИВНОСТИ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА И РЕАКЦИИ НАРАСТАНИЯ ТИТРА ФАГА ДЛЯ ИНДИКАЦИИ BACILLUS MYCOIDES В ОБЪЕКТАХ САНИТАРНОГО НАДЗОРА
Н.А. Феоктистова1, Д.А. Макеев1, Д.А. Васильев1, С.Н. Золотухин1, А.В. Алешкин2
'ФГБОУ ВПО УГСХА им. П.А. Столыпина, Ульяновск, Россия 2ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, Москва, Россия
В результате исследования 537 образцов воды, пищевых продуктов, сельскохозяйственных растений и почвы обнаружен высокий уровень контаминации данных объектов санитарно-эпидемиологического надзора бактериями Bacillus mycoides достигающий 18,6%, требующий постоянного мониторинга со стороны Роспотребнадзора для предотвращения спорадических случаев и вспышек пищевых токсикоин-фекций.
Полученные штаммы по своим фенотипиче-ским характеристикам полностью соответствовали Bacillus mycoides: обладали положительными реакциями на казеин, желатин, каталазу, глюкозу и крахмал, отрицательной на лактозу и преобразовывали нитраты в газообразный азот, культивировались на агаре в анаэробных условиях при температуре 10— 400С и pH среды равном 5.7. Все выделенные штаммы бактерий были палочкообразной формы, образовывали споры, отмирающие при кипячении в течение не более 10 мин при 1000С, не формировали капсул. На МПА бациллы вырастали в виде корневидных колоний серо-белого цвета, напоминающие мицелий гриба. Время исследования по бактериологической схеме составило 107 часов.
В дальнейшем, мы использовали разработанную схему постановки реакции нарастания титра фага с применением фагового биопрепарата для индикации бактерий Bacillus mycoides на образцах пищевого сырья и продуктов питания, максимально подверженных заражению вышеназванными бактериями.
В качестве объектов исследования использовали пробы воды, специй (красный молотый перец, корица) и мяса (говядина и баранина). В результате проведенной серии экспериментов показано, что увеличение титра фагов Bm—3 и Bm—5 серии УГСХА в 10 раз происходило при уровне загрязнения объектов исследований бактериями Bacillus mycoides равном 104 БОЕ/г. Данная концентрация бактерий в пищевом сырье и продуктах питания считается пороговой
