CC BY
73
Материалы III Санкт-Петербургского международного экологического форума
Инфекция и иммунитет
личного свойства: факт проведения тестирования означает публичное признание своего рискованного поведения [Гиренко П.В., и др., 2013]. Отмечено, что, несмотря на меры, предпринимаемые в последние годы для улучшения медико-социальной помощи ВИЧ-позитивным женщинам, удовлетворенность ею остается недостаточно высокой, особенно социальной помощью, причём по мере увеличения длительности заболевания этот показатель значительно ухудшается [Чернявская О.А., Иоанниди Е.А., 2013]. Тем не менее, несмотря на проводимые профилактические мероприятия, отмечено следующее: в связи с тем, что у женщин в случае незащищенного контакта риск заражения примерно в три раза выше, чем у мужчин, вероятно, доля новых случаев заболевания среди женщин будет расти, и именно они будут связующим звеном при распространении заболевания из группы наркопотребителей в общую популяцию [Балашова Т.Н., и др., 2013].
Т120 ГЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗОЛЯТОВ MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS, ВЫДЕЛЕННЫХ В РАЗНЫХ КОГОРТАХ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ НА УРАЛЕ
Т.В. Умпелева, Н.И. Еремеева, М.А. Кравченко
ФГБУ«УНИИФ», Екатеринбург, Россия
Проведено MIRU-VNTR-генотипирование (15 ло-кусов) 178 и 78 изолятов M. tuberculosis, полученных от впервые выявленных (ВВ) и ранее леченых (РЛ) больных туберкулезом соответственно. Принадлежность изолятов к генетическим линиям определяли с использованием онлайн базы данных «MIRU-VNTRplus». Установлено доминирование изолятов возбудителя туберкулеза генотипа Beijing, доля которых в группе РЛ больных (80,8%) существенно превышала таковую (55,1%) в группе ВВ больных (р = 0,0002). Уровень кластеризации изолятов Beijing составил 65,3% в группе ВВ больных и 84,1% в группе РЛ больных, что свидетельствует об активной трансмиссии штаммов M. tuberculosis данного генотипа. Группа non-Beijing была представлена изолятами следующих генотипов: LAM (12,9% - ВВ и 8,9% - РЛ), URAL (11,8% - ВВ и 5,1% - РЛ), Haarlem (7,9% - ВВ и 2,6% - РЛ). Определить принадлежность к генетической линии изолятов от 11,2% ВВ больных и 2,6% РЛ больных не удалось (Unknown). Уровень кластеризации изолятов non-Beijing, полученных от ВВ больных, составил 35%, что достоверно меньше чем в изолятов генотипа Beijing (p = 0,02). Генетические профили изолятов non-Beijing, полученные от РЛ больных не повторялись.
Лекарственную устойчивость изолятов к противотуберкулезным препаратам оценивали методом абсолютных концентраций. Доля изолятов M. tuberculosis, обладающих множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ), в группе РЛ больных (78,2%) более чем в два раза превышала этот показатель в группе ВВ больных (34,3%). Среди изолятов с МЛУ 75,4% в группе ВВ больных и 86,9% в группе РЛ больных принадлежали к генотипу Beijing.
Заключение. Эпидемиологическая значимость МЛУ штаммов M. tuberculosis генотипа Beijing неоднократно подчеркивалась в работах, посвященных изучению структуры российских популяций возбудителя туберкулеза. Данное исследование еще раз подчеркивает необходимость модернизации системы ТБ контроля, которая должна опираться на данные молекулярно-генетических исследований.
Т121 ИДЕНТИФИКАЦИЯ ФИТОПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ - ХОЗЯЕВ БАКТЕРИОФАГОВ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ БИОЗАЩИТЫ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ
У.В. Фальковская1, А.Н. Калинина2, С.П. Синеокий2, А.В. Сидоренко1, Г.И. Новик1
'Институт микробиологии НАН Беларуси, Минск, Республика Беларусь
2ФГУП «ГосНИИгенетика», Москва, Россия
Использование бактериофагов для защиты растений от бактериозов имеет большое практическое значение для сокращения использования химических веществ в сельском хозяйстве. К настоящему времени большое количество бактериофагов обнаружено и охарактеризовано у представителей фито-патогенных бактерий Erwinia amylovora. Кроме того, недавно началось интенсивное исследование фагов бактерий Pectobacterium carotovorum. Определенный интерес вызывают также фаговые системы бактерий Pantoea agglomerans, которые, как эпифиты, тесно ассоциированы со многими растениями.
В Институте микробиологии НАН Беларуси проводится научно-исследовательская работа по созданию препарата на основе бактериофагов для защиты сельскохозяйственных растений от фитопатогенных бактерий. Необходимо отметить, что для разработки эффективных мер по защите сельскохозяйственных культур от болезней методом фаговой терапии необходимо знание биологической природы фитопато-генных возбудителей - хозяев бактериофагов.
Цель данного исследования - фенотипическая и молекулярно-генетическая идентификация фито-патогенных бактерий - хозяев бактериофагов, выделенных из растений с признаками бактериоза на территории Беларуси.
Выполнена фенотипическая и молекулярно-ге-нетическая идентификация на основании анализа нуклеотидной последовательности гена 16S рРНК для 16 штаммов фитопатогенных бактерий, выделенных на территории Беларуси и депонированных в Белорусской коллекции непатогенных микроорганизмов. В результате выполненных исследований шесть штаммов отнесены к виду Pectobacterium wasabiae: БИМ В-88, БИМ В-89, БИМ В-90, БИМ В-630, БИМ В-561 БИМ В-771; четыре штамма - к виду Pecto-bacterium carotovorum: БИМ В-560, БИМ В-631, БИМ В-632, БИМ В-633, три штамма отнесены к виду Pantoea agglomerans: БИМ В-242, БИМ В-281, БИМ В-562; два штамма к виду Pantoea vagans: БИМ В-345, БИМ В-97, один штамм - к виду Pantoea sp.
Совокупность использованных методов идентификации способствует успешному подбору бактериофагов для создания препаратов для биозащиты сельскохозяйственных культур.
Т122 БАКТЕРИОФАГИ РОДА BACILLUS И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
Н.А. Феоктистова1, Д.А. Васильев1, С.Н. Золотухин1, А.В. Алешкин2
'ФГБОУ ВПО УГСХА им. П.А. Столыпина, Ульяновск, Россия 2ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, Москва, Россия
Многочисленными научными работами доказано, что всестороннее изучение бактерий рода Bacillus не должно ограничиваться только Bacillus anthracis. Контаминация пищевого сырья и продуктов пи-
2014. Специальный выпуск
Материалы III Санкт-Петербургского международного экологического форума
тания бактериями Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacillus pumilus, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides всех на этапах технологического процесса — это серьезная проблема пищевых производств. Пищевые токсикоинфекции, вызванные вышеназванными бактериями, характеризуются острым течением болезни и могут вызвать летальный исход.
С помощью специфичных фагов можно выявлять в пищевых продуктах вышеназванные бактерии. Доказано, что выделенные нами классическим методом бактерии Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacilluspumilus, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides можно идентифицировать за 4 суток, используя схему выделения и дифференциации бацилл первой морфологической группы, применение методик фагоиндикации сокращает время исследования до 25 часов. Так, реакция нарастания титра фага позволяет менее чем за сутки обнаружить вышеназванные бактерии в объектах санитарного надзора жидкой и плотной консистенции в концентрации 100 и 1000 м.к. /г., соответственно.
Применение созданных нами фаговых бациллярных биопрепаратов позволит контролировать микробиологическую чистоту сырья растительного и животного происхождения при приемке на перерабатывающее предприятие, осуществлять контроль параметров технологического процесса производства продуктов питания, применяя фаговые биопрепараты в различных методиках (реакция нарастания титра фага, реакция адсорбции фагов, фаготетра-золовый метод, пробирочный метод, метод стекающей капли), анализировать качественный и количественный состав выделенных бацилл, являющихся причиной не только порчи продуктов питания, но и возбудителями пищевых токсикоинфекций, и разрабатывать контрольные меры для исключения рисков или уменьшения их возможности до приемлемого уровня (дополнительная тепловая обработка, установление гигиенического барьера и т.п.).
Т123 ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ СХЕМЫ ФАГОТИПИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ BACILLUS CEREUS
Н.А. Феоктистова1, А.И. Калдыркаев1, Д.А. Васильев1, С.Н. Золотухин1, А.В. Алешкин2
1ФГБОУ ВПО УГСХА им. П.А. Столыпина, Ульяновск, Россия 2ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, Москва, Россия
Бактерии Bacillus cereus относятся к грамполо-жительным факультативно-анаэробным, подвижным, спорообразующим, палочковидным бактериям, широко распространенным в окружающей среде (почве, пресной и морской воде, кишечнике беспозвоночных, на растениях и т.д.) и имеющим фенотипические и генетические (16S рРНК) признаки, сходные с рядом других видов бактерий рода Bacillus: B. mycoides, B. pseudomycoides, B. thuringiensis и B. anthracis.
Селекционированные нами 57 фагов были разделены на 18 групп, на основе которых разработана схема фаготипирования, позволяющая типировать бактерии B. cereus на 18 фаговаров. Лизируемые культуры сравниваются со схемой фаготипирования и тестируемому штамму бацилл присваивается название группы фага, которой он лизируется (например, фаговар 1-Тип Вс — № штамма).
С учетом строгой родовой специфичности бактериофагов, была разработана схема ускоренной идентификации B. cereus в пробах пищевых продук-
тов с использованием набора специфичных фаговых биопрепаратов. Для оценки эффективности ускоренного диагностического алгоритма в процессе производственных испытаний, параллельно с ними осуществляли идентификацию B. cereus, используя традиционную схему по ГОСТ 1044.8-88 «Продукты пищевые. Методы определения Bacillus cereus».
Процедуру ускоренной идентификации проводили следующим образом: на поверхность МПА в чашках Петри пастеровской пипеткой наносили 18—24 часовую бульонную культуру исследуемых микроорганизмов. Чашки термостатировали в течение 15-20 минут для подсушивания, а затем, предварительно поделив на 7 секторов, на поверхность засеянной среды пастеровской пипеткой в размеченные сектора вносили поочередно 18 биопрепаратов с 1-Фаг ВсУГСХА по 18-Фаг ВсУГСХА. Для исследования 1 бактериальной культуры в опыте использовали 3 чашки Петри с МПА.
По результатам производственных испытаний было установлено, что новый диагностический метод позволяет идентифицировать бактерии B. cereus за 52 часа, в то время как по традиционной бактериологической схеме идентификации проводится в течение 96—120 часов. Таким образом, разработанный алгоритм диагностики бактерий B. cereus с помощью набора специфичных биопрепаратов бактериофагов, не только существенно сокращает время проведения процедуры идентификации, но и предполагает дополнительное типирование данного вида бацилл на фаговары.
Т124 АНАЛИЗ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ BACILLUS SUBTILIS В ОБЪЕКТАХ САНИТАРНОГО НАДЗОРА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИМ МЕТОДОМ И РЕАКЦИЕЙ НАРАСТАНИЯ ТИТРА ФАГА
Н.А. Феоктистова1, М.А. Лыдина1, Д.А. Васильев1, С.Н. Золотухин1, А.В. Алешкин 2
ФГБОУ ВПО УГСХА им. П.А. Столыпина, Ульяновск, Россия 2ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, Москва, Россия
В период с 2010 по 2014 гг. было исследовано на наличие бактерий Bacillus mesentericus 25 проб хлеба из муки пшеничной высшего и первого сортов, 30 проб муки пшеничной высшего и первого сортов, 55 проб специй, приобретенных в Ульяновской и Самарской областях, 65 проб почвы различного хозяйственного значения. Выделение бактерий вида Bacillus mesentericus проводили по классической схеме выделения и идентификации бацилл первой морфологической группы, которую дополнили тестами на определение ферментативной активности выделенных бактерий по Сидорову (1995). Время исследования 107 часов. Обнаружено 55 культур бактерий вида Bacillus mesentericus при исследовании 175 проб объектов санитарного надзора. Уровень контаминации исследуемых пищевых продуктов бактериям Bacillus mesentericus составил 31%.
Для ускоренной индикации бактерий вида Bacillus mesentericus в пищевом сырье и продуктах питания без выделения чистой культуры, нами была разработана модель постановки реакции нарастания титра фага на пищевом сырье и продуктах питания, максимально подверженных контаминации вышеназванными бактериями. Использовали муку пшеничную высшего и первого сортов, персики, перец черный молотый, мясо — свинину.
Подготовку и посев проб пищевых продуктов, подлежащих исследованию, проводили в соответ-
