CC BY
11
2014. Специальный выпуск
Материалы III Санкт-Петербургского международного экологического форума
для их отбраковки или вторичной переработки с использованием соответствующих технологий. Время исследования 25 часов.
Разработана схема идентификации бактерий Bacillus mycoides с помощью сконструированного биопрепарата, позволяющая идентифицировать ми-крооганизмы за 32 часа, что более чем в три раза сокращает срок бактериологического исследования по традиционной схеме выделения и дифференциации бацилл первой морфологической группы.
Т127 РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ФАГОИНДИКАЦИИ BACILLUS MEGATERIUM В МЯСНЫХ И РЫБНЫХ ТОВАРАХ
Н.А. Феоктистова1, Н.А. Петрукова1, Д.А. Васильев1, С.Н. Золотухин1, А.В. Алешкин2
ФГБОУ ВПО УГСХА им. П.А. Столыпина, Ульяновск, Россия 2ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, Москва, Россия
В Российской Федерации на сегодняшний день отсутствуют данные о созданных фаговых биопрепаратов, в том числе диагностических, специфичных в отношении бактерий Bacillus megaterium. Разработка бактериофаговой тест-системы позволит не только ускорить процедуру по идентификации вышеназванных бактерий в продуктах питания и клинических образцах, но и даст возможность дифференцировать бациллы фаговары и фаготипы
Метод фагоиндикации бактерий Bacillus mega-terium с использованием фагового биопрепарата разрабатывался на основе методики реакции нарастания титра фага. Первоначально, для конструирования биопрепаратов для биосенсорной детекции бактерий Bacillus megaterium было отобрано два фага E.meg — 1 и E.meg — 10 серии УГСХА, которые характеризовались высокими показателями лити-ческой активности и максимально широким совместным спектром литического действия. Очистка фагов от бактериальных клеток осуществлялась методом фильтрации с использованием мембранных фильтров фирмы Millipore (filter type: 0,22 ^m GV). Были проведены эксперименты постановки реакции нарастания титра фага на мясо-пептон-ном бульоне (МПБ), контаминированном 18-часовой индикаторной культурой (Bacillus megaterium 4, Bacillus megaterium 182) в концентрации 103 КОЕ/мл.
Учет результатов проводили согласно оценке, предложенной В.Я. Ганюшкиным (1988). Если увеличение количества корпускул бактериофага Bacillus megaterium в опытной пробе по отношению к количеству корпускул бактериофага в контроле составляло менее 5 раз, то реакция считалась положительной, если менее, то сомнительной. Экспериментальным путем нами установлено, что количество бляшкоо-бразующих единиц в опыте, более чем в 5 раз превышает количество бляшкообразующих единиц в контроле.
Результаты эксперимента свидетельствуют, что 26 часов — это оптимальный временной параметр постановки (РНФ): 0,5 часа — подготовка реакции + 7 часов — время экспозиции субстрата с фагом + 0,5 часа — время, затрачиваемое на постановку эксперимента + 18 часов — время термостатирования посевов).
По результатам проведенной серии опытов установлено, что увеличение титра фагов в 5 раз произошло при концентрации 103 м.к. бактерий Bacillus megaterium — в 1 г говядины и баранины, скумбрии и сельди.
Доказана возможность применения РНФ с целью обнаружения бактерий Bacillus megaterium в объектах санитарного надзора, позволяющая сократить время исследования, уменьшить расход питательных сред и лабораторной посуды, повысить эффективность обнаружения картофельной палочки.
Т128 СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ УСТОЙЧИВЫХ К РИФАМПИЦИНУ, ИЗОНИАЗИДУ И ПИРАЗИНАМИДУ ИЗОЛЯТОВ MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS
М.Л. Филипенко1, М.А. Дымова1
'Институт Химической Биологии и Фундаментальной Медицины СО РАН
Антибиотикоустойчивость у микобактерий туберкулезного комплекса — достаточно хорошо изученное явление с точки зрения молекулярно-генетических механизмов. В данной работе предлагается способ выявления устойчивых к рифампицину, изониазиду и пиразинамиду изолятов M.tuberculosis, путем определения мутаций в гене rpoB, katG, pncA, ассоциированных с формированием устойчивости к рифампи-цину, изониазиду и пиразинамиду, соответственно. В частности, используется ПЦР в режиме «реального времени» с последующим HRM-анализом. В процессе амплификации формируются «искусственные» ге-теродуплексы за счет одновременной коамплифика-ции ДНК дикого типа и тестируемой ДНК, что может увеличить надежность анализа. HRM-анализ выполняют с помощью «Precision Melt AnalysisTM Software» («Bio-Rad», США). Специфичность реакции амплификации подтверждают по отсутствию дополнительных пиков на кривой плавления, и дополнительных бэндов на электрофореграмме. Разработанный способ выявления мутаций в указанных генах обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Стоит отметить, что разработанный подход к анализу точковых мутаций может подходить и для анализа других нуклеотидных замен, представляющих научный и практический интерес.
Т129 ПИТАНИЕ И ИНТЕЛЛЕКТ, ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ ПРОБИОТИКОВ
А.В. Шабров1, Ю.П. Успенский2
'ФГБУ«НИИ экспериментальной медицины» СЗО РАМН, Санкт-Петербург, Россия
2ГБОУВПО «ПСПбГМУим. И.П. Павлова», Санкт-Петербург, Россия
Принято считать, что интеллект на 70% является биологически обусловленным и на 30% определяется влиянием факторов окружающей среды. Существуют биологические основы наследственной функции интеллекта, к которым относятся дефектность передачи информации на синаптическом уровне, нарушения в строении миелиновых оболочек нейронов и др.
Известно, что умственный процесс является энергоемким, подтверждением чего служит увеличение потребления глюкозы с 12 до 59%. Мозг человека отличается по потребностям в аминокислотах, многие из которых являются предшественниками медиаторов ЦНС, активно участвуя не только в обусловленности синаптической активности клеток ЦНС, но и способствуя обеспечению оптимальных условий роста нейрона за счет формирования микроокружения. По мнению разработчика доктрины интеллекта Г.Ю. Айзенка попытки повлиять на
