Научная статья на тему 'Биосенсорная детекция бактерий рода Bacillus в молоке и молочных продуктах для предупреждения их порчи'

Биосенсорная детекция бактерий рода Bacillus в молоке и молочных продуктах для предупреждения их порчи Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

CC BY
1310
197
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
BACILLUS MESENTERICUS (PUMILUS) / BACILLUS COAGULANS БАКТЕРИОФАГИ / ДЕТЕКЦИЯ / БИОСЕНСОРЫ / ИНДИКАЦИЯ / ИДЕНТИФИКАЦИЯ / МОЛОКО / МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ / ПОРЧА / BACILLUS CEREUS / BACILLUS MYCOIDES / BACULLIS SUBTILIS / BACILLUS MEGATERIUM / BACILLUS COAGULANS BACTERIOPHAGE / DETECTION / BIOSENSORS / DISPLAY / IDENTIFICATION / MILK / DAIRY PRODUCTS / DAMAGE

Аннотация научной статьи по ветеринарным наукам, автор научной работы — Васильев Дмитрий Аркадьевич, Золотухин Сергей Николаевич, Феоктистова Наталья Александровна, Алешкин Андрей Владимирович

Исследования, проводимые нами в последние годы, позволили установить, что споровые факультативно анаэробные микроорганизмы (Bacillus cereus, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus)) являются значимыми микроорганизмами порчи для молочных продуктов и пищевых отравлений. Были проведены исследования проб молока, искусственно контаминированных штаммами бактерий изучаемых видов рода Bacillus в концентрации 103 КОЕ/мл, бактериологическим методом и методом РНФ с помощью сконструированных экспериментальных биопрепаратов на основе бациллярных бактериофагов. Результаты экспериментов по детекции бактерий Bacillus cereus, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus) в искусственно контаминированных пробах молока (концентрация бактерий 103 КОЕ/мл бракеражная для молока) свидетельствуют о том, что постановка РНФ при обнаружении данных бактерий показала значительную экономию времени (26 часов) в сравнении с бактериологическим методом исследования (96 часов), чувствительность которого не позволила обнаружить указанные бактерии в вышеназванной концентрации. Анализ литературных данных свидетельствует, что альтернативы предлагаемому нами методу биосенсорной детекции бактерий Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus) с помощью гомологичных внутри рода видовых фагов, выделенных сотрудниками кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» и разработанной там же методике применения их для контроля выявления уровня контаминации молочного сырья и молочных продуктов бациллами-микроорганизмами порчи, в настоящее время не существует.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по ветеринарным наукам , автор научной работы — Васильев Дмитрий Аркадьевич, Золотухин Сергей Николаевич, Феоктистова Наталья Александровна, Алешкин Андрей Владимирович

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

BIOSENSORY DETECTION OF BACTERIA OF THE GENUS BACILLUS IN MILK AND MILK PRODUCTS TO PREVENT THEIR DAMAGE

Researches conducted in recent years have allowed to establish, that spore facultative anaerobic microorganisms (Bacillus cereus, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus electrophysiological techinque (pumilus)) are important spoilage microorganisms for dairy products and food poisoning. Studies have been conducted with milk samples artificially contaminated by strains of bacteria of studied species of the genus Bacillus in the concentration of 103 CFU/ml, by bacteriological method and by method of RGP using constructed experimental biopreparations based on bacillar bacteriophages. The results of experiments on detection of bacteria Bacillus cereus, Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus electrophysiological techinque (pumilus) in artificially contaminated samples of milk (concentration of bacteria 103 CFU/ ml quality-control for milk) show that RGP upon detection of data of bacteria showed significant saving of time (26 hours) in comparison with bacteriological methods of research (96 hours), whose sensitivity has not allowed to detect the determined bacteria in the above-mentioned concentration. The analysis of literary data points out that the alternatives to the proposed by us method of biosensor for detection of bacteria Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus electrophysiological techinque (pumilus) using homologous species within the genus phages, selected by the employees of Department of Microbiology, Virology, epizootology and veterinary-sanitary examination of FSBEI HPE «Ulyanovsk state agricultural academy named after P.A. Stolypin» and developed methods of their application for the control of revealing the level of contamination of raw milk and dairy products by bacilli-spoilage microorganisms, does not currently exist.

Текст научной работы на тему «Биосенсорная детекция бактерий рода Bacillus в молоке и молочных продуктах для предупреждения их порчи»

УДК 602.3:579.8

БИОСЕНСОРНАЯ ДЕТЕКЦИЯ БАКТЕРИЙ РОДА BACILLUS В МОЛОКЕ И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ ДЛЯ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ИХ ПОРЧИ

Васильев Дмитрий Аркадьевич, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ВСЭ»*

Золотухин Сергей Николаевич, доктор биологических наук, профессор кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ВСЭ»*

Феоктистова Наталья Александровна, кандидат биологических наук, доцент кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ВСЭ»*

Алешкин Андрей Владимирович, доктор биологических наук** ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина»* ФГУН МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора** [email protected]

432017, г. Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1; тел.: 8(422)559547х [email protected]

Ключевые слова: Bacillus cereus, Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus megaterium, Bacillus coagulans бактериофаги, детекция, биосенсоры, индикация, идентификация, молоко, молочные продукты, порча.

Научные исследования проводятся при финансовой поддержке государства в лице Министерства образования и науки Российской Федерации в рамках реализации федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (соглашение от №8267 от 10.08.2012).

В статье представлены результаты исследований проб молока, искусственно кон-таминированных штаммами бактерий Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus megaterium в концентрации 103 КОЕ/мл, бактериологическим методом и методом РНФ с помощью сконструированных экспериментальных биопрепаратов на основе бациллярных бактериофагов. Установлено, что постановка РНФ при обнаружении данных бактерий показала значительную экономию времени (26 часов) в сравнении с бактериологическим методом исследования (96 часов), чувствительность которого не позволила обнаружить указанные бактерии в вышеназванной концентрации.

Введение

Одним из основных требований, предъявляемых к пищевым продуктам, является их безопасность для потребителя и стабильность состава. Основной причиной порчи продуктов и развития пищевых от-

равлений людей являются микроорганизмы. Особенно остро эта проблема касается портящихся продуктов - свежих фруктов, овощей, мясных и хлебобулочных изделий, соков, молочных продуктов [1,2].

Спорообразующие бактерии рода Bacillus (Bacillus cereus, Bacillus mycoides, Bac-ullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus megaterium, Bacillus coagulans) являются одним из этиологических факторов биологического разрушения продуктов питания, в том числе молока. Наличие у бацилл спор препятствует инактивации этих микроорганизмов после кратковременного термического воздействия, а выраженная их протеолитическая активность приводит к различным порокам.

Результаты исследований, полученные ВНИИМС, показали, что бактерии рода Bacullis активно развиваются при различных температурах хранения, изменяя орга-нолептические характеристики продукта. При размножении в диапазоне температур 28-370С бациллярные факультативные анаэробы придают молоку и молочным продуктам специфический вяжущий вкус, запах порченых фруктов, дрожжевой привкус, полынную и хинную горечь и изменяют цвет. Установлено, что в условиях холодильного хранения процессы порчи идут аналогично, но значительно медленнее [3,4]

Анализ нормативно-технической документации (ГОСТов и СанПиНов) свидетельствует о том, что в настоящее время для молочных продуктов споровые факультативно-анаэробные микроорганизмы, которыми являются бациллы, не являются санитарно-показательными, поэтому их наличие не нормируется и не подлежит обязательному контролю в условиях производственных лабораторий. Однако при появлении ряда характерных пороков вкуса и внешнего вида у молочных продуктов для бактериологического контроля рекомендуется делать посевы 2-4-кратно разведенного продукта на наличие указанной неспецифической микрофлоры [5,6].

Основным источником контаминации молока являются объекты окружающей среды, корма и воздуха. Доказано, что пастеризация не снижает уровень контаминации, а анаэробные условия и низкие температуры хранения задерживают, но не предотвращают развитие бактерий рода Bacillus [7].

При производстве ряда продуктов, в

технологическом процессе которых заложено концентрирование сухих веществ молока (сыры, сгущенные и сухие молочные продукты), происходит увеличение количества бактериальных клеток изучаемых споровых микроорганизмов за счет их концентрации. Для плавленых сыров и молокосодержащих продуктов, в рецептуре которых используются разнообразные молочные и немолочные компоненты и высокотемпературная обработка сырья (пастеризация или плавление), споровая микрофлора становится подавляющей. Так, в плавленых сырах ее количество может превышать 70% от общего количества микроорганизмов в продукте [8].

Своевременное качественное и количественное обнаружение этих микроорганизмов поможет предотвратить негативные процессы. Поэтому разработка методов детекции бактерий рода Bacillus в молоке и молочных продуктах является той практической задачей, которую необходимо решать в пищевой и перерабатывающей промышленности.

Использование для этих целей тест-систем ПЦР ограничено по нескольким причинам: отсутствие коммерческих прай-меров на многие виды рода Bacillus, дорогостоящие оборудование и расходные материалы, отсутствие квалифицированных специалистов [9]. Применение бактериологического метода исследований для этих целей затруднено в связи с отсутствием соответствующей современной нормативно-технической документации, позволяющей проводить идентификацию бацилл [10].

Цель и задачи исследования

Разработать метод биосенсорной детекции бактерий Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus megaterium с использованием фаговых биопрепаратов, который позволит в течение 25-26 часов определить бракеражную концентрацию вышеназванных бактерий (10 3 КОЕ/мл) в молоке-сырье [3].

Для достижения поставленной цели необходимо

- сконструировать экспериментальные биопрепараты на основе выделенных и се-

лекционированных специфических бактериофагов Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus megaterium;

- определить оптимальные параметры постановки реакции нарастания титра фага с экспериментальными биопрепаратами;

- разработать схему по постановки реакции нарастания титра фага с пробами молока с целью обнаружения разных видов бацилл.

Объекты и методы исследования

Штаммы бактерий Bacillus megaterium 182 и Bacillus megaterium 4, Bacillus mesentericus 66 и Bacillus mesentericus 2; Bacillus subtilis 26 и Bacillus subtilis 4, Bacillus mycoides 537 и Bacillus mycoides Н были полученные из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветери-нарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина». Штаммы бактериофагов: Phagum Bacillus megaterium Bm - 10 УГСХА-Деп и Phagum Bacillus megaterium Bm - 1 УГСХА-Деп; Phagum Bacillus subtilis Bs - 13 УГСХА-Деп и Phagum Bacillus subtilis Bs - 16 УГСХА-Деп; Phagum Bacillus mycoides B. myc - 3 УГСХА-Деп и Phagum Bacillus mycoides B.myc-5 УГСХА-Деп; Phagum Bacillus mesentericus (pumilus) Bm - 3 УГСХА-Деп и Phagum Bacillus mesentericus (pumilus) Bm - 8 УГСХА-Деп, выделены и изучены нами.

Объекты исследования - пробы молока.

Метод биосенсорной детекции бактерий Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus megaterium с использованием фагового биопрепарата разрабатывали на основе методики реакции нарастания титра фага [11, 12]. Выделение и идентификацию бактерий Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus megaterium проводили по методике Gordon [13, 14]. Статистическую обработку результатов исследований проводили с применением пакета прикладных программ Statistica 6.0. (for Windows; «Stat Soft Ins.», США), Microsoft Exsel 2003 (for Windows XP).

Результаты исследований

Первым этапом конструирования био-

1!

£ & ES SS »1

Si

р Ü ш Sä Hi H ■ i

са s!

препаратов для биосенсорной детекции бактерий рода Bacillus нами был осуществлен подбор фагов, специфичных в пределах каждого вида (для Bacillus mycoides -Phagum Bacillus mycoides B.myc. серии УГСХА; для Bacullis subtilis - Phagum Bacullis subtilis B.s. серии УГСХА; для Bacillus mesentericus (pumilus) - Phagum Bacillus mesentericus (pumilus) Bm. серии УГСХА); для Bacillus megaterium - Phagum Bacillus megaterium B.meg. серии УГСХА. Отобранные фаги характеризовались высокими показателями литической активности и максимально широким совместным спектром литического действия в пределах гомологичного вида [15, 16,17,18].

Экспериментальные биопрепараты готовили на основе коммерческого питательного бульона при температуре 37°C.

В результате проведенных исследований нами было определено оптимальное соотношение бактериофага и индикаторной культуры - 1:1, т.е. 0,2 мл фага и 0,2 мл индикаторной культуры (для фагов Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus megaterium), 1:5 (для фагов Bacillus mycoides), время пассажа составило 6-7 часов.

Очистку готовых фаговых препаратов от бактериальных клеток производили методом фильтрации с использованием мембранных фильтров фирмы Millipore (filter type: 0,22 |am GV). Разлитый во флаконы фаг подвергали контролю на чистоту, стерильность и литическую активность. Биопрепараты на основе фагов Bacillus представляют собой флаконы с прозрачной жидкостью желтого цвета (цвет засеянной среды) без посторонних примесей и наличия осадка. Литическая активность на плотных питательных средах составила 109 БОЕ/мл. Дата изготовления серии бактериофагов исчисляется со дня закупорки флаконов. Экспериментальным путем установлено, что срок годности биопрепаратов на основе бациллярных фагов при температуре 2-4 °С составляет 12 месяцев (срок наблюдения).

На втором этапе были проведены исследования по постановке реакции нарастания титра фага с МПБ, искусственно кон-

Таблица 1

Концентрация бактерий, определяемая в пробе молока при постановке РНФ на бактериофагах рода Bacillus серии УГСХА

Объект исследования - контамини-рованное бактериями рода Bacillus молоко в дозе (КОЕ, мл) Контроль индикаторного фага Контроль свободного фага Опыт Увеличение (раз)

Количество негативных колоний фага

Bacillus megaterium

103 39 ± 2 - 273 ± 14 7

102 39 ± 2 - 195± 8 5

101 39 ± 2 - 41 ± 6 1

Bacillus subtilis

103 24 ± 3,2 - 144 ± 12 6

102 24 ± 3,2 - 72 ± 5 3

101 24 ± 3,2 - 24 ± 9 1

Bacillus mycoides

103 56 ± 3,7 - 280 ± 11 5

102 56 ± 3,7 - 168 ± 6 3

101 56 ± 3,7 - 56 ± 7 1

Bacillus mesentericus (pumilus)

103 38 ± 4,4 - 228 ± 5 6

102 38 ± 4,4 - 152 ± 6 4

101 38 ± 4,4 - 76 ± 3 2

таминированными 18 часовыми индикаторными культурами бацилл каждого вида в концентрации 103 КОЕ/мл. В качестве контроля применяли стерильный МПБ. Для каждого бациллярного бактериофага в эксперименте использовали по три комплекта из 3 пробирок. В пробирки № 1 и № 2 вносили исследуемый материал (в данном случае это МПБ, контаминированный 18-часовой индикаторной культурой) объемом 9 мл. В пробирку № 3 вносили 9 мл стерильного МПБ. Затем в пробирки № 1 и № 3 добавляли по 1 мл бактериофага в концентрации 104 БОЕ/мл, в пробирку № 2 вносили 1 мл стерильного МПБ и помещали в термостат (37 0С) на 7 часов. После подращивания исследуемого материала вместе с бактериофагом из каждой пробирки брали по 0,25 мл и вносили в пробирки с 4,5 мл МПБ. Содержимое всех пробирок фильтровали и подвергали дальнейшему исследованию методом агаровых слоев по Грациа.

В результате опытов нами установлено, что при положительной реакции количество бляшкообразующих единиц в опыте превышало более чем в 5 раз количество

бляшкообразующих единиц в контроле [19].

Время, затраченное на детекцию бацилл с помощью изготовленных фаговых препаратов, составило 26 часов (0,5 часа -подготовка реакции + 7 часов - время экспозиции субстрата с фагом + 0,5 часа - время, затрачиваемое на постановку эксперимента + 18 часов - время термостатирования посевов).

Третьим этапом наших исследований стала разработка схемы постановки РНФ для биосенсорной детекции выше перечисленных бацилл с использованием фаговых биопрепаратов в молоке-сырье. Для постановки эксперимента было исследовано 3 пробы молока.

Первая проба молока была использована для определения концентрации бактерий рода Bacillus, которую возможно определить в молоке, используя РНФ с применением гомологичных бактериофагов. Пробу молока в объеме 10 мл вносили в колбу со МПБ (соотношение 1:10) и искусственно контаминировали 18-часовым штаммом Bacillus каждого вида в концентрации 103 КОЕ/мл. Схема проведения эксперимента

Таблица 2

Результаты использования РНФ для детекции бацилл в пробах молока, искусственно контаминированного бактериями Bacillus разных видов в концентрации 103 КОЕ/мл

Количе- Количе- Результат

№ № фага ство не- ство не- Увеличе- Результат РНФ бактериологических

про бы гативных колоний в контроле гативных колоний в опыте ние титра фага, раз (время исследования 26 часов) исследований (время исследования 96 часов)

Bacillus megaterium

1 B.meg - 10 39 ± 2 280 ± 13 7,2 Положительный Отрицательный

B.meg - 1 43 ± 4 296 ± 9 6,9 Положительный при выявлении

2 B.meg - 10 39 ± 2 273 ± 11 7,0 Положительный концентрации 103

B.meg - 1 43 ± 4 233 ± 8 7,3 Положительный КОЕ/мл молока при

3 B.meg - 10 39 ± 2 288 ± 12 7,4 Положительный использовании схе-

B.meg - 1 43 ± 4 305 ± 6 7,1 Положительный мы Gordon (1973

Bacillus subtilis

1 Bs-13 Bs-16 24 ± 3,2 38 ± 4,4 166 ± 14 266 ± 9 6,9 7,0 Положительный Отрицательный при выявлении

2 Bs-13 Bs-16 24 ± 3,2 38 ± 4,4 151 ± 8 274 ± 11 6,3 7,2 Положительный концентрации 103 КОЕ/мл молока при

3 Bs-13 Bs-16 24 ± 3,2 38 ± 4,4 158 ± 6 277 ± 12 6,6 7,3 Положительный использовании схемы Gordon (1973

Bacillus mycoides

1 B.myc-3 56 ± 3,7 364 ± 12 6,5 Положительный Отрицательный

B.myc-5 39 ± 4,6 199 ±5 5,1 Положительный при выявлении

2 B.myc-3 56 ± 3,7 347 ± 11 6,2 Положительный концентрации 103

B.myc-5 39 ± 4,6 218 ± 9 5,6 Положительный КОЕ/мл молока при

3 B.myc-3 56 ± 3,7 367 ± 6 6,6 Положительный использовании схе-

B.myc-5 39 ± 4,6 230 ± 10 5,9 Положительный мы Gordon (1973

Bacillus mesentericus (pumilus)

1 Bm-3 36±1,4 245 ± 13 6,8 Положительный Отрицательный

Bm-8 22±2,3 156 ± 6 7,1 Положительный при выявлении

2 Bm-3 36±1,4 209 ± 11 5,8 Положительный концентрации 103

Bm-8 22±2,3 150 ± 9 6,8 Положительный КОЕ/мл молока при

3 Bm-3 36±1,4 241 ± 14 6,7 Положительный использовании схе-

Bm-8 22±2,3 141 ± 6 6,4 Положительный мы Gordon (1973

гов (I) в сравнении со схемой выделения и дифференциации бацилл первой морфологической группы, изложенной в «Определителе бактерий Берджи» (1993) (II) [20].

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Результаты проведенных исследований по детекции бактерий рода Bacillus в искусственно контаминированных пробах молока свидетельствуют о том, что постановка РНФ для обнаружения данных бактерий показала значительную экономию времени (26 часов)

отражена на рис. 1. Результаты исследований представлены в табл. 1.

В табл. 2 приведены сравнительные результаты индикации бактерий рода Bacillus с применением специфических бактериофагов при применении бактериологического метода и метода РНФ.

На рис. 2 отражена схема ускоренной идентификации на примере бактерий Bacillus subtilis и Bacillus cereus с помощью селекционированных нами бактериофа-

Рис. 1 - Схема постановки реакции нарастания титра фага с использованием экспериментального биопрепарата на основе бактериофагов изучаемых видов бактерий рода Bacillus

в сравнении с бактериологическим методом исследования (96 часов), чувствительность которого не позволяет обнаружить бациллы всех

вышеперечисленных видов. Выводы

Исходя из выше изложенного и учиты-

1! Sä

es

»1

р ll

и Л

■ ■ 1 8|

■■■ äl

BS SS

I

II

Исследуемый материал

п=1= Прогревание в

течение 45 мин.

при 70°С

Подращивание в условиях термостата в течение 6 часов

при 37°С ♦

Посев на чашки с МПА газоном

Исследуемый материал

5

Среда Гаузе№2 Среда Громыко

Фагоидентификация бактерий при помощи бактериофагов Bs-13 и Bs-16; Вс-4 и

Вс-8 серии УГСХА /\

Выделение чистой культуры по методу Дригальского

I

Пересев на МПБ

J

ш о и га т

СО

}

го о го 3"

Среда Кларка, 1% глюкозный агар, картофельный агар, МПБ с мочевиной, мясо-пептонный желатин, МПБ с яичным желтком, МПБ с нитратами в анаэростате

m о о га

положительным бактерии вида Bacillus subtilis Bacillus cereus

/\

отрицательный

положительный бактерии вида Bacillus subtilis, Bacillus cereus

Итого: 25 часов Итого: 96 часов (4 суток)

Рис. 2 - Схема ускоренной идентификации бактерий Bacillus subtilis и Bacillus cereus с помощью селекционированных нами бактериофагов (I) в сравнении со схемой выделения и дифференциации бацилл первой морфологической группы, изложенной в «Определителе бактерий Берджи» (II)

вая результаты исследовании, полученных нами ранее, разработанный метод биосенсорной детекции Bacillus megaterium, Bacillus mycoides, Bacullis subtilis, Bacillus mesentericus (pumilus) с применением выделенных и селекционированных специфических в пределах вида бактериофагов, может быть с успехом использован на этапе приемочного контроля качества молока-сырья.

Библиографический список

1. Джей, Дж.М. Современная пищевая

микробиология / Дж. М. Джей, М. Дж. Лесснер, Д.А. Гольден. - М.: БИНОМ Лаборатория знаний, 2011. - 887 с.

2. Васильев, Д.А. Бактериофаги микроорганизмов, значимых для животных, растений и человека / Д.А. Васильев, Н.А. Феоктистова, А.И. Калдыркаев. - Ульяновск: УГСХА ООО «Колор-Принт», 2013. -226 с.

3. Свириденко, Г., Комарова Т. Споровые аэробы рода Bacillus -значимые микроорганизмы порчи для молочных продуктов // Продовольственный торгово-промышленный портал - режим доступа - URL: http://www.produkt.by/ Journal.

4. Rasko, DA. Genomics of the Bacillus cereus group of organisms / D.A. Rasko, M.R. Altherr, C.S. Han, J. Ravel // FEMS Microbiol Rev. - 2005. - № 29. - Р.303-329.

5. Техэксперт (электронный фонд правовой и нормативно-технической документации) - режим доступа - URL: http:// docs.cntd.ru/document.

6.Законы России: справочник по законодательству - режим доступа - URL: http:// zakonrus.ru/gost.

7. Васильев, Д.А. Бактериофаги рода Bacillus / Д.А. Васильев, Н.А. Феоктистова, С.Н. Золотухин, А.В. Алешкин. - Ульяновск: УГСХА, 2013. - 78 с.

8. Портал Foodinnovation.ru - режим доступа - URL: http://foodinnovation.ru/ news/prom_news/3621.html.

9. Феоктистова, Н.А. Роль Bacillus subtilis в обсеменении пищевых продуктов

отрицательный

и

SEIS es »1

Si

р Ü ш SS Hi н ■ i

00 s!

/ Н.А. Феоктистова, А.И. Мустафин, Д.А. Васильев // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Вклад молодых ученых в отраслевую науку с учетом современных тенденций развития АПК». -Москва, 2009. - Т.2. - С. 70-72.

10. Калдыркаев, А.И. Разработка системы фаговаров бактерий Bacillus cereus для идентификации и мониторинга данного микроорганизма: автореф. дис. ...канд. биол. наук / Калдыркаев Андрей Иванович.

- Саратов, 2013. - С. 17.

11. Каттер, Э. Бактериофаги. Биология и практическое применение / Э. Каттер, А. Сулаквелидзе. - М.: Научный мир, 2012. -636 с.

12. Юдина, М.А. Разработка параметров постановки реакции нарастания титра фага для индикации бактерий Bacillus mesentericus в объектах санитарного надзора / М.А. Юдина, Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии.

- 2012. - № 3 (19). - С.69-73.

13. Васильев, Д.А. Идентификация бактерий Bacillus cereus на основе их фенотипи-ческой характеристики / Д.А. Васильев, Н.А. Феоктистова, А.И. Калдыркаев. - Ульяновск, ООО «Колор-Принт», 2013. - 48 с.

14. Васильев, Д.А. Методы частной бактериологии / Д.А. Васильев, А.А. Щербаков, С.Н. Золотухин . - Ульяновск: УГСХА, 2004. - 234 с.

15. Феоктистова, Н.А. Диагностика картофельной болезни хлеба, вызываемой бактериями видов Bacillus subtilis и Bacillus

mesentericus / Н.А. Феоктистова, А.И. Мустафин, Д.А. Васильев // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2011. - № 3 (15). - С.61-68.

16. Феоктистова, Н.А. Биоиндикация бактерий Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора / Н.А. Феоктистова, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 3 (23). - С.43-49.

17. Феоктистова, Н.А. Методика выделения фагов бактерий видов Bacillus cereus и Bacillus subtilis, перспективы их применения / Н.А. Феоктистова, А.И. Мустафин, Д.А. Васильев // Естественные и технические науки. - 2011. - №2 (52). - С. 83-86.

18. Феоктистова, Н.А. Разработка схемы исследования материала с целью выделения и ускоренной идентификации бактерий видов Bacillus cereus и Bacillus subtilis / Н.А. Феоктистова, А.И. Мустафин, А.И. Калдыркаев // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. -2011. - № 4(32). - С. 288-291.

19. Золотухин, С.Н. Создание и разработка схем применения диагностических биопрепаратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энтеробактерий: автореф. дис. ...докт. биол. наук: / Золотухин Сергей Николаевич. - Ульяновск, 2007. - С.32.

20. Bergey's manual of determinative bacteriology. - Baltimore: Williams and Wilkins Co, - 1993. - 9th ed. - P.1258.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.