CC BY
27
Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ»
вания промотора гена TP53 в опухолевой ткани диффузной B-крупноклеточной лимфомы (ДВККЛ).
Материалы и методы. Были исследованы образцы ДНК пациентов с ДВККЛ (n = 74) : 35 мужчин и 39 женщин, средний возраст составил 52,8 ± 14,3 года. Подавляющее большинство больных имели III-IV стадии заболевания (91 %), две трети больных — неблагоприятный прогноз, согласно Международному прогностическому индексу (МПИ) [35]. Все пациенты получили 6-8 циклов R-CHOP и подобных протоколов лечения. Геномная ДНК была выделена из парафиновых блоков опухолевых лимфатических узлов и экстранодальных очагов поражения методом фенольно-хлороформной экстракции с применением гуанидина. Анализ кодирующей последовательности гена TP53 выполнялся методом прямого секвенирования по Сангеру. Оценка биологической значимости выявленных миссенс мутаций проводилась с применением программ SIFT, Mut_ass и PolyPhen-2, а интронных мутаций — с применением программы NetGene2. Статус метилирования промотора TP53 изучали с применением метил-специфической ПЦР.
Результаты. Среди миссенс мутаций преобладали (95 %) замены в областях гена, кодирующих ДНК-связывающий домен. В анализируемой выборке пациентов кодоны 275, 155, 272 и 212 были «горячими точками» мутаций
Санкт-Петербург 30-31 мая 2019 г.
в TP53. Функционально значимыми были следующие типы мутаций: р. Я213Х, р. A189Pfs, р. L130F, р. Т1551, р. Я1960, р. G244S, р. V272E и р. А276У. Среди интронных мутаций также были обнаружены две функционально значимые замены (IVS6-36G >С и + 43G > Т). Метилирование промотора гена ТР53 наблюдалось лишь в нескольких проанализированных образцах (6,7 % случаев). Группа исследования была разделена на две подгруппы: с наличием (ГЯ53ти1) и отсутствием (TP53wt) функционально значимых мутаций в гене ТР53. Было показано, что TP53mut статус коррелировал с В-симптомами (р = 0,016), спленомегалией (р = 0,044), опухолевым поражением костного мозга (р = 0,028), а также неблагоприятными группами прогноза по МПИ >2 (р = 0,018). Пациенты с TP53wt чаще постигали ремиссии (р = 0,066) и имели лучшие показатели общей выживаемости (р = 0,026) в сравнении с пациентами с TP53mut (69,4 % против 41,7 %, соответственно). Анализ методом регрессии Кокса показал, что наличие экстранодальных очагов поражения опухолью, МПИ >2 и TP53mut являются независимыми предкторами общей выживаемости больных ДВККЛ группы исследования.
Выводы. В ходе исследования было показано, что мутационный статус гена ТР53 может быть ценным прогностическим биомаркером при ДВККЛ.
А. Х. Габдулхакова, В. А. Овсепян, Е. В. Трегубова, Е. Л. Назарова
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», г. Киров
ВЗАИМОСВЯЗЬ МУТАЦИОННОГО СТАТУСА ГЕНОВ JAK2, CALR И MPL С ФЕНОТИПИЧЕСКИМИ ОСОБЕННОСТЯМИ ЭССЕНЦИАЛЬНОЙ ТРОМБОЦИТЕМИИ
Введение. Эссенциальная тромбоцитемия (ЭТ) — миелопролиферативное заболевание, характеризующееся повышенной продукцией мегакариоцитов в костном мозге и тромбо-цитозом в периферической крови. Ключевым звеном патогенеза ЭТ является неконтролируемая активация клеточного сигнального пути |АК^ТАТ, в основе которой лежат соматические точечные мутации генов, кодирующих тирозин-киназу (JAK2) и белок кальретикулин (CALR), а также гена рецептора тромбопоэтина (MPL). В последние годы установлена молекулярная картина ЭТ, что предопределило необходимость
дальнейшего изучения влияния указанных мутаций на течение, риск развития осложнений и прогноз заболевания.
Цель исследования. Оценить распространенность драйверных соматических мутаций у пациентов с ЭТ и определить их взаимосвязь с временем дебюта заболевания и некоторыми клинико-лабораторными показателями.
Материалы и методы. Проведен анализ историй болезни 193 пациентов с ЭТ, наблюдавшихся в ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России с 1995 по 2019 гг. Возраст обследованных в дебюте заболевания колебался от 18 до 90 лет (меди-
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 3, 2019
ана 57 лет), из них 65 (33,7 %) мужчин и 128 (66,3 %) женщин, сопоставимых по возрасту. Мутации генов JAK2, CALR и MPL определяли с помощью праймеров ЗАО «Евроген» (г. Москва) и компании «Синтол» (г. Москва), используя геномную ДНК путем полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией продуктов реакции в полиакриламидном геле. Статистическая значимость различий в случае нормального распределения количественных показателей оценивалась с помощью критерия Стьюдента, при отсутствии нормального распределения — критерия Манна-Уитни. Статистически значимыми считали отличия при р < 0,05.
Результаты. Мутация V617F гена JAK2 обнаружена у 130 (67,4 %) человек, мутации гена CALR — у 35 (18,1 %) пациентов, в 1 (0,5 %) случае выявлена мутация W515L гена MPL (MPL+). У 26 (13,5 %) пациентов не обнаружено ни одной драйверной мутации. Они отнесены к обследованным с так называемым тройным негативным статусом (TN+). Мутационный статус гена CALR складывался из like мутаций p. L367fs*46 (делеция в 52 п.о.—тип 1) и p. K385fs*47 (инсерция в 5 п.о.—тип 2). Мутации типов 1/like и 2/like обнаружены у 18 (51,4 %) и 17 (48,6 %) пациентов соответственно. При сравнительном анализе полученных данных установлено, что в дебюте ЭТ пациенты с мутацией в гене JAK2 были значительно старше больных с мутациями гена CALR типа 2/like (медианы возраста 58 (24-81) и 39 (31-78) лет соответственно, р = 0,008) и пациентов с TN+ (медианы возраста 58 (24-81) и 48 (18-90) лет соответственно, р = 0,002). У больных с мутацией гена JAK2 уровень гемоглобина (Hb) превышал аналогичный показатель пациентов с мутациями CALR типа 1/like (медианы уровня Hb 147 (102-219) и 131 (117-161) г/л соответственно, р = 0,007) и с TN+ (медианы уровня Hb 147 (102-219) и 136 (93-176) г/л соответственно, р = 0,004). Содержание тромбоцитов у носи-
телей мутации в гене]АК2 было значимо ниже, чем у пациентов с мутациями CALR типа 2/Ике (медианы количества тромбоцитов 729 х 109/л (448-2074) и 1197 х 109/л (676-3766) соответственно, р = 0,000006). Межгрупповые различия по возрасту в дебюте заболевания и содержанию тромбоцитов обнаружены и при разных типах мутаций гена CALR. Те, у кого обнаружили мутации гена CALR типа 1/Нке, характеризовались более старшим возрастом в дебюте заболевания по сравнению с носителями мутаций типа 2/Нке (медианы возраста 63,5 (31-88) г. и 39 (31-78) лет соответственно, р = 0,008) и более низким содержанием тромбоцитов в периферической крови (медианы количества тромбоцитов 819 х 109/л (623-1727) и 1197 х 109/л (676-3766) соответственно, р = 0,01). Больные с тройным негативным статусом отличались от пациентов с мутациями гена САЬЯ типа 1/Нке более ранним дебютом заболевания (медианы возраста 48 (18-90) лет и 63,5 (31-88) г. соответственно, р = 0,005), а от носителей мутаций типа 2/Ике более низким уровнем тромбоцитов (медианы количества тромбоцитов 838 х 109/л (457-1657) и 1197 х 109/л (676-3766) соответственно, р = 0,002).
Выводы. Частота выявления драйверных мутаций у больных ЭТ согласуется с результатами общемировых и российских исследований. Подтверждена ассоциация мутации V617F гена ]АК2 с дебютом заболевания в пожилом возрасте и более высоким уровнем гемоглобина, чем у носителей других драйверных мутаций. Пациенты с мутациями в гене САЬЯ типа 2/Ике в сравнении со всеми исследуемыми группами имели наибольшее количество тромбоцитов. Установлено статистически значимое отличие больных по возрасту дебюта заболевания и содержания тромбоцитов в зависимости от типа выявленной мутации гена САЬЯ.
