CC BY
28
УДК 616-006.441
DOI: 10.15372/SSMJ20190107
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МУТАЦИОННОГО СТАТУСА ГЕНА ТР53 ПРИ ДИФФУЗНОЙ В-КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМЕ
Елена Николаевна ВОРОПАЕВА1, Татьяна Ивановна ПОСПЕЛОВА2, Михаил Иванович ВОЕВОДА1, Владимир Николаевич МАКСИМОВ1
1 НИИ терапии и профилактической медицины - филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН
630089, г. Новосибирск, ул. Бориса Богаткова, 175/1
2 Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России 630091, г. Новосибирск, Красный просп., 52
Цель исследования - выявить клиническое значение мутационного статуса гена ТР53 в группе больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой (ДВККЛ) г. Новосибирска, получающих терапию с включением ритук-симаба. Материал и методы. Обследовано 74 пациента с ДВККЛ, госпитализировавшихся в Городской гематологический центр г. Новосибирска за период 2012-2015 гг. и получавших терапию с включением ритуксимаба. Методом прямого капиллярного секвенирования по Сэнгеру определена нуклеотидная последовательность кодирующей области гена ТР53 (экзоны 5-10) и примыкающих участков интронов. Проведен функциональный анализ выявленных мутаций, оценены непосредственные и отдаленные результаты терапии больных. Результаты и их обсуждение. В ходе работы впервые на российской выборке пациентов с ДВККЛ продемонстрировано, что мутационный статус ТР53 ассоциирован как с большей частотой выявления симптомов опухолевой интоксикации, спленомегалии, лейкемизации лимфомы, так и с неблагоприятными прогностическими группами согласно Международному прогностическому индексу лимфом. Выявлена тенденция к большей частоте достижения в ходе терапии полной клинико-гематологической ремиссии в подгруппе пациентов с ДВККЛ, имеющих каноническую последовательность гена или мутации в ТР53 с недоказанным онкогенным потенциалом. Больные с функционально значимыми мутациями ТР53 имели более низкие показатели общей выживаемости. Заключение. Следует надеяться, что терапевтические подходы, направленные на инактивированный путь ТР53, могут дополнительно улучшить клинические исходы при ДВККЛ.
Ключевые слова: ген ТР53, мутации, диффузная В-крупноклеточная лимфома, ритуксимаб, прогноз, тар-гетная терапия.
Среди широкого многообразия вариантов неходжкинских лимфом около трети случаев заболевания у взрослых составляет диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВККЛ), до 25-30 % в развитых и 30-40 % в развивающихся странах, что делает этот вариант одним из самых частых [16]. ДВККЛ относится к агрессивным вариантам лимфом со средней продолжительностью жизни пациентов без лечения менее 1 года, но является потенциально курабельным при применении антрациклин-содержащей химиотерапии заболеванием [7]. Добавление ритуксимаба к программе СНОР (циклофосфан, доксорубицин,
винкристин, преднизолон) привело к значительному увеличению прироста выживаемости пациентов и сделало протокол R-СНОР современным «золотым стандартом» терапии ДВККЛ первой линии [2]. Однако в настоящее время, при условии применения комбинированной химиоимму-нотерапии, могут быть излечены лишь чуть более 60 % больных ДВККЛ [17]. В этой связи несомненный научный и практический интерес вызывает вопрос прогноза течения заболевания.
Ген ТР53 (ОМ1М N0. 191117), расположенный на хромосоме 17р13.1, является одним из наиболее изученных генов-супрессоров опухо-
Воропаева Е.Н.- д.м.н., старший научный сотрудник лаборатории молекулярно-генетических исследований
терапевтических заболеваний, е-mail: vena.81@mail.ru, http://orcid.org/0000-0001-7542-7285
Поспелова Т.И. - д.м.н., проф., зав. кафедрой терапии, гематологии и трансфузиологии ФПК и ППВ,
е-mail: post_gem@mail.ru, http://orcid.org/0000-0002-1261-5470
Воевода М.И. - д.м.н., проф., академик РАН, директор, е-mail: office@iimed.ru,
http://orcid.org/0000-0001-9425-413X
Максимов В.Н. - д.м.н., проф., зав. лабораторией молекулярно-генетических методов исследования терапевтических заболеваний, е-mail: medik11@mail.ru, https://orcid.org/0000-0002-7165-4496
левого роста. Он играет ключевую роль в контроле клеточного цикла, репарации ДНК, запуска апоптоза, механизмов старения и аутофагии [20]. Частота инактивации TP53 посредством соматических мутаций при лимфомах ниже, чем при солидных новообразованиях. Вместе с тем исследования показали сильную корреляцию между мутантным статусом TP53 и ухудшением выживаемости пациентов, большей скоростью прогрессирования и устойчивостью лимфом к химиотерапии [8], при этом предшествующая неэффективная терапия лимфом строго ассоциирована с наличием мутаций ТР53 и ответственна за развитие резистентности к терапии второй линии [15]. Частота аномалий TP53 при ДВККЛ выше, чем при неходжкинских лимфомах низкой степени злокачественности, и достигает 20-25 % [19]. Согласно данным ретроспективных клинических исследований, мутации в гене TP53 являются независимым прогностическим фактором плохой выживаемости больных ДВККЛ, получавших терапию по протоколам, не включающим ритук-симаб [10].
После добавления к терапии ДВККЛ ритук-симаба и значительного улучшения выживаемости пациентов с данным заболеванием требовалась переоценка влияния мутационного статуса гена ТР53 на клинический исход заболевания. В относительно небольшом числе исследований показано, что существующие программы лечения ДВККЛ, включая таргетную терапию с применением моноклональных антител, не в состоянии преодолеть негативное прогностическое значение мутаций в гене ТР53 [14, 16]. В частности, в наиболее крупном исследовании International DLBCL Rituximab-CHOP Consortium Program Study выявлено доминирующее негативное влияние мутаций ТР53 на общую и бессобытийную выживаемость пациентов [9].
Открытия в области изучения ДВККЛ происходят быстрыми темпами, что дает надежду на улучшение подходов к стратификации пациентов с ДВККЛ на прогностические группы с использованием молекулярных предикторов и разработку новых рациональных методов таргетной терапии [8]. В современной онкогематологии существуют примеры того, как детальное понимание генетических изменений, возникающих в конкретном типе опухоли, могут повлиять на разработку точечной терапии заболевания.
Путь патогенеза ДВККЛ, завязанный на ТР53, может иметь большой потенциал в разработке новых методов лечения этого одного из самых частых и агрессивных вариантов неходжкинских лимфом, основанных на реактивации р53 или
шунтирующих механизмов программированной клеточной смерти [11]. В настоящее время в онкологии уже применяется ряд инновационных стратегий целенаправленной терапии с использованием мутантного ТР53 в качестве мишени, которые имеют потенциальную терапевтическую ценность при ДВККЛ [4].
Целью данного исследования было выявить клиническое значение мутационного статуса гена ТР53 в группе больных ДВККЛ г. Новосибирска, получающих терапию с включением ритуксимаба.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В группу исследования вошли 74 пациента (35 мужчин и 39 женщин) в возрасте от 21 до 78 лет (средний возраст 52,8 ± 14,3 года), госпитализированных в Городской гематологический центр г. Новосибирска за период с 2012 по 2015 г. Клиническая характеристика больных представлена в табл. 1. Все пациенты получили 6-8 курсов полихимиотерапии по протоколам с включением ритуксимаба. Проведение исследования одобрено локальным этическим комитетом. Все больные подписали информированное согласие на включение в исследование.
Геномную ДНК выделяли из парафиновых блоков биоптатов опухолевых лимфоузлов и экс-транодальных очагов поражения методом феноль-но-хлороформной экстракции с применением гу-анидина. Использовали срезы ткани, содержащие не менее 80-90 % опухолевых клеток. Методом прямого капиллярного секвенирования по Сэнге-ру определена нуклеотидная последовательность кодирующей области гена ТР53 (экзоны 5-10) и примыкающих участков интронов, согласно протоколу IARC. Результаты секвенирования и выравнивание фрагментов анализировали с помощью программ Chromas, SeqScape v.2.7, Sequence Scanner. В качестве референсной использовали последовательность гена ТР53 NG_017013.
Анализировали частоту встречаемости выявленных мутаций в специализированных базах данных IARC TP53 mutation Database, The UMD TP53 mutation database, Human Gene Mutation Database, dbSNP и Human Gene Mutation Database (HGMD). Теоретическое прогнозирование возможных последствий обнаруженных мутаций проводилось с применением программ PolyPhen2, SIFT, Mut_ass и NetGene2.
При сравнении наблюдаемых и ожидаемых частот использовали точный критерий Фишера. Для оценки ассоциации между изучаемыми генетическими маркерами и риском развития события рассчитывали отношение шансов (ОШ) с 95%-м доверительным интервалом (ДИ). Эффект
Таблица 1
Клиническая характеристика больных ДВККЛ
Параметр Вся группа (n = 74) TP53mut (n = 12) TP53wt (n = 62) p
Средний возраст, лет 52,8 ± 14,3 50,3 ± 10,6 58,6 ± 18,5 0,347
Пол: 0,403
мужской 35 7 28
женский 39 5 34
Симптомы опухолевой интоксикации: 0,016
нет 36 2 34
есть 38 10 28
Общесоматический статус ECOG: 0,352
0-1 57 8 49
2-3 17 4 13
Стадия: 0,264
1-11 7 0 7
Ш-ГУ 67 12 55
Экстранодальные поражения: 0,074
нет 42 4 38
есть 32 8 24
Спленомегалия: 0,044
нет 59 7 52
есть 15 5 10
Поражение костного мозга: 0,028
нет 51 4 47
есть 23 8 15
Уровень ЛДГ: 0,296
норма 41 5 36
повышен 33 7 26
МПИ: 0,018
0-2 21 0 21
3-5 53 12 41
Полная ремиссия 58 7 51 0,066
Примечание. p - вероятность различия между подгруппами TP53mut и TP53wt, ЛДГ - лактатдегидрогеназа.
противоопухолевой терапии оценивали по критериям «частота ремиссий» и «5-летняя общая выживаемость» (ОВ). Выполняли анализ цензу-рированных данных с использованием функции вероятности выживания Каплана - Майера. Дополнительно определяли медиану выживаемости. Для сравнения кривых выживаемости и скорости ответа использовали непараметрический логран-говый критерий. Для прогнозирования риска наступления события и оценки влияния независимых предикторов на этот риск применяли модель пропорциональных рисков регрессии Кокса с определением 95%-го ДИ. Различия между сравниваемыми параметрами считали статистически значимыми при р < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
В опухолевом материале от 74 больных ДВККЛ в гене ТР53 выявлены 33 мутации: 21 -в кодирующей области и 12 - в интронных участках. К нарушению сплайсинга мРНК и к сдвигу рамки считывания приводили по одной мутации (3 %), 11 (33 %) были интронными мутациями, 12 (37 %) - миссенс-мутациями, шесть (18 %) -синонимичными, две (6 %) - нонсенс-мутациями. У четырех больных (6,8 %) обнаружены множественные мутации (табл. 2). Подробная характеристика мутаций описана нами в предыдущих публикациях [1, 18]. Согласно данным анализа, функционально значимыми мутациями ТР53,
Таблица 2
Выявленные мутации в гене ТР53
Номер случая Мутация Характеристика
1 p.L130F ФЗ
p.R156C НФ
2 p.W146R НФ
3 p.W146R НФ
4 p.T155I ФЗ
p.A189Pfs ФЗ
IVS5+43G>T ФЗ
IVS4-30T>C НД
5 p.T155I ФЗ
6 p.A307A ФЗ
P.V157V НД
IVS4-30T>C НД
IVS8+20A>G НД
7 p.H179H НД
8 p.R196Q ФЗ
9 p.R213X ФЗ
10 p.R213X ФЗ
11 p.G244S ФЗ
12 p.L252L НД
IVS6-36G>C ФЗ
13 p.V272E ФЗ
14 p.V272E ФЗ
15 p.V272V НД
16 p.A276V ФЗ
17 p.G293R НФ
18 p.G302G НД
IVS8+10C>A НД
19 IVS5-17T>C НД
IVS7+31G>C НД
20 IVS8+37A>G НД
21 IVS9+12T>C НД
22 IVS9+12T>C НД
23 IVS8+10C>A НД
24 IVS7+31G>C НД
1,0-1
0,8-
« о.б Н
Р 0,4-
I
k 0,2
0
-1-1-1-1-1-1
10 20 30 40 50 60 70
Время, мес. + цензурированные случаи -ТР53Ш
ZPJJmut
Примечание. ФЗ - мутации с доказанным патогенным эффектом; НФ - мутации, не приводящие к потере функции белка р53; НД - мутации, функциональный эффект которых в настоящее время невозможно оценить.
выявленными в группе обследования, являются следующие: р.К213Х и p.A189Pfs, приводящие к синтезу укороченного варианта белка р53; IVS6-36G>C, IVS5+43G>T и р.А307А, приводящие к нарушению сплайсинга; мутации p.L130F, р.Т1551, p.R196Q, p.G244S, р^272Е и р.Л27бу
Рис. Общая выживаемость больных ДВККЛ с наличием и отсутствием функционально значимых мутаций в гене ТР53
характеризующиеся утратой р53 антионкогенных свойств (см. табл. 2). В данной статье мы остановимся на анализе клинической значимости именно этих изменений.
Группа обследования была разделена на две подгруппы: с наличием функционально значимых мутаций в гене ТР53 и без них (соответственно ТР53ти и ТР53^). Подгруппу ТР53ти составили 12 пациентов (см. табл. 2). Наличие функционально значимых мутаций коррелировало с большей частотой регистрации симптомов опухолевой интоксикации, спленомегалии, вовлечения в опухолевый процесс костного мозга, а также высоким (>2) Международным прогностическим индексом лимфом (МПИ) (см. табл. 1). Анализ непосредственных результатов терапии выявил, что пациенты подгруппы ТР53ти имели тенденцию к меньшей частоте достижения полной ремиссии, чем больные без функционально значимых мутаций в гене ТР53 (соответственно 58,3 и 79,7 %; р = 0,066); пятилетняя ОВ составила соответственно 41,7 % с медианой выживаемости 20 месяцев и 69,4 % (медиана выживаемости не достигнута), р = 0,026 (рисунок).
Однофакторный анализ показал, что наличие экстранодальных очагов поражения, МПИ > 2 и выявление функционально значимых мутаций в гене ТР53 в опухолевой ткани ДВККЛ являются предикторами ухудшения ОВ пациентов (табл. 3). В ходе многофакторного анализа установлено, что только МПИ независимо от других факторов предсказывал ухудшение ОВ пациентов с ДВККЛ, получающих терапию по протоколам с включением ритуксимаба. Так, больные с МПИ > 2 имели в 3 раза больший риск не дожить до 5-летнего рубежа ОВ (р = 0,005), чем пациенты с МПИ < 2 (см. табл. 3).
Таблица 3
Однофакторный и многофакторный анализ предикторов общей выживаемости больных с ДВККЛ
Параметр ОШ 95%-й ДИ Р
Однофакторный анализ
Наличие симптомов опухолевой интоксикации 2,401 0,530-0,876 0,256
Общесоматический статус ECOG 2-3 1,938 0,905-4,149 0,088
Стадии Ш-ГУ 2,025 0,576-7,116 0,271
Наличие экстранодальных поражений 3,233 1,140-9,951 0,029
Поражение костного мозга 1,539 0,501-4,722 0,451
Повышение уровня ЛДГ 1,073 0,900-9,438 0,068
МПИ > 2 2,844 1,384-5,842 0,004
Наличие функционально значимых мутаций в гене ТР53 2,707 1,077-6,800 0,034
Многофакторный анализ
МПИ > 2 2,994 1,405-6,381 0,005
Наличие функционально значимых мутаций в гене ТР53 2,128 0,627-7,217 0,226
Наличие экстранодальных поражений 2,405 0,787-7,369 0,125
ОБСУЖДЕНИЕ
Мутации в ТР53 фиксируются примерно в половине всех случаев злокачественных новообразований [9]. Подавляющее большинство работ, изучающих изменения в нуклеотидной последовательности ТР53, были сосредоточены на анализе 5-8 экзонов гена, кодирующих ДНК-связывающий домен р53 [5]. Некодирую-щие последовательности, которые потенциально могут влиять не только на сплайсинг м-РНК, но и на экспрессию гена, нарушая авторегуляцию процессинга, нормальное прохождение посттранскрипционных модификаций м-РНК и посттрансляционных изменений белка, оставались за пределами внимания исследователей [5, 6].
В рамках данной работы в опухолевом материале от 74 больных ДВККЛ в гене ТР53 выявлены 33 мутации: 21 - в кодирующей области и 12 - в интронных участках. Поскольку часть из данных мутаций являются причинными для развития и прогрессии ДВККЛ и могут быть обозначены как «драйверные», а часть не оказывают влияния на возникновение и рост опухоли, т.е. являются «мутациями-пассажирами» [5, 6], требовался анализ функциональной значимости каждой из выявленных в группе обследования аберрации.
На сегодняшний день описано около 20 000 типов мутаций в кодирующей последовательности 5-8 экзонов ТР53, которые обеспечивают ту или иную степень подавления его функции и подвергаются селекции в клетках опухолей [3]. Объединение функционального биоинформационного анализа с определением частоты каждой мутации в базах данных приводит к поразительному выводу о четкой обратной корреляции между частотой
конкретной мутации ТР53 и активностью ее белкового продукта: частые мутанты ТР53 всегда неактивны, тогда как продукты мутаций с единичной регистрацией в базе имеют активность более 50 % по сравнению с белком р53 дикого типа [13].
Подробно результаты такого комплексного анализа мутаций ТР53, выявленных в группе исследования, описаны нами в предыдущих публикациях [1, 18]. В целом показано, что из выявленных аберраций функционально значимы 11 типов мутаций: р.Я213Х и p.A189Pfs, приводящие к синтезу укороченного варианта белка р53; ^6-360>С, ^5+430>Т и р.А307А, приводящие к нарушению сплайсинга; p.L130F, р.Т1551, p.R196Q, p.G244S, р^272Б и р.А276^ характеризующиеся утратой р53 антионкогенных свойств. Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о необходимости анализа всех выявленных в ходе секвенирования изменений, поскольку на этапах опухолевой прогрессии ДВККЛ может происходить функциональная селекция изменений не только в 5-8 экзонах, но и в интронах гена ТР53.
Целью данного исследования было выявить клиническое значение мутационного статуса гена ТР53 в группе больных ДВККЛ г. Новосибирска, получающих терапию с включением ритукси-маба. В ходе работы впервые на российской выборке пациентов с ДВККЛ продемонстрировано, что мутационный статус ТР53 ассоциирован как с большей частотой выявления В-симптомов, спленомегалии, лейкемизации лимфомы, так и с неблагоприятными прогностическими группами согласно МПИ. Более того, обнаружена тенденция к большей частоте достижения в ходе терапии полной клинико-гематологической ремиссии
в подгруппе пациентов с ДВККЛ, имеющих каноническую последовательность гена или мутации в ТР53 с недоказанным онкогенным потенциалом (р = 0,066). Полученные результаты свидетельствуют о более агрессивном течении заболевания и большем объеме опухолевого поражения у больных ДВККЛ с функционально значимыми мутациями ТР53, чем у пациентов без данных мо-лекулярно-генетических аберраций.
На следующем этапе работ выполнялся анализ отдаленных результатов лечения больных лимфо-мой. Известно, что, несмотря на присоединение к стандартным протоколам терапии ДВККЛ ри-туксимаба, таргетного препарата моноклональ-ного антитела к CD20, мутации ТР53 являются независимым прогностическим фактором выживаемости больных [21]. Согласно полученным нами данным, пациенты подгруппы ТР53^; также имели значимо лучше общую выживаемость (р = 0,026) в сравнении с больными подгруппы ТР53тШ;, что согласуется с опубликованным ранее исследованием [19].
Однофакторный анализ методом регрессии Кокса показал, что наряду с наличием экс-транодальных очагов опухолевого поражения и МПИ > 2 мутантный статус ТР53 является независимым предиктором ухудшения общей выживаемости больных ДВККЛ в условиях терапии схемами, содержащими ритуксимаб. Однако в многофакторной модели значимое влияние на показатели общей выживаемости оказывал только МПИ > 2, что может быть связано с относительно небольшой группой исследования и малым числом наблюдений в анализируемой нами выборке функционально значимых мутаций ТР53.
Важность изучения конкретных механизмов инактивации гена ТР53 при ДВККЛ, ставших объектом данного исследования, трудно переоценить. Представляется, что знания о конкретных типах мутаций в каждом отдельном случае заболевания имеют прямой выход в персонализированную терапию ДВККЛ. Функциональная значимость мутаций в гене ТР53, выявленных в рамках данного исследования в опухолевой ткани больных ДВККЛ, делает их потенциальной терапевтической мишенью, тем более что в настоящее время уже разработан ряд инновационных стратегий, которые имеют потенциальную терапевтическую ценность при лимфопролифератив-ных новообразованиях [4]. Так, мутация p.R213Х, выявленная в анализируемой выборке больных ДВККЛ, является наиболее распространенной нонсенс-мутацией в гене ТР53 и встречается чаще, чем любые другие миссенс-мутации при опухолях человека. Интересно, что аминоглико-зиды, например гентамицин и G418, индуциру-
ют сквозное «чтение» в точке мутации p.R213X и приводят к экспрессии полноразмерного белка p53 [22]. Также существует несколько экспериментальных молекул, нацеленных на широкий спектр мутантов р53 (PRIMA-1, RITA, ScFv), и соединений, которые специально направлены на восстановление структуры р53 дикого типа при конкретной миссенс-мутации (например, молекула Phikan059, нацеленная на рЯ220С) [12]. Созданы белки, специфически взаимодействующие с несколькими типами мутантного р53 и блокирующие приобретенные им проонкогенные транс-активационные свойства.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, в настоящем исследовании мы определили спектр функционально значимых мутаций TP53 в российской когорте пациентов с ДВККЛ, которые получали лечение с включением ритуксимаба, и подтвердили, что мутационный статус TP53 является ценным прогностическим биомаркером. Полученные данные являются еще одним подтверждением критически важной роли нарушений функций p53 в опухолевой прогрессии и чувствительности к терапии опухолей, в том числе ДВККЛ. По этой причине следует надеяться, что терапевтические подходы, направленные на инактивированный путь ТР53, могут дополнительно улучшить клинические исходы при ДВККЛ.
БЛАГОДАРНОСТИ
Работа выполнена в рамках бюджетной темы по Государственному заданию № 0324-2018-0002.
КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ
Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Воропаева Е.Н., Поспелова Т.И., Воевода М.И., Максимов В.Н. Сравнительный анализ мутаций в гене ТР53 у больных ДВККЛ г. Новосибирска с данными, представленными в IARC TP53 mutation database // Мед. генетика. 2016. 15. (4). 17-20.
2. Поддубная И.В. Российские клинические рекомендации по диагностике и лечению лимфопро-лиферативных заболеваний. М.: Медиа Медика, 2013. 104 с.
3. Caminsky N., Mucaki E.J., Rogan P.K. Interpretation of mRNA splicing mutations in genetic disease: review of the literature and guidelines for information-theoretical analysis // F1000Res. 2014. 3. 282.
4. Cheung K.-J.J., Horsman D.E., Gascoyne R.D. The significance of TP53 in lymphoid malignancies: mutation prevalence, regulation, prognostic impact and potential as a therapeutic target // Br. J. Haematol. 2009. 146.257-269.
5. Diederichs S., Bartsch L., Berkmann J.C., Frose K., Heitmann J., Hoppe C. The dark matter of the cancer genome: aberrations in regulatory elements, untranslated regions, splice sites, non-coding RNA and synonymous mutations // EMBO Mol. Med. 2016. 8. (5). 442-457.
6. Enomoto Y., Kitaura J., Hatakeyama K., Wata-nuki J., Akasaka T., Kato N. Emu/miR-125b transgenic mice develop lethal B-cell malignancies // Leukemia. 2011. 25. (12). 1849-1856.
7. Flowers C.R., Sinha R., Vose J.M. Improving outcomes for patients with diffuse large B-cell lymphoma // Cancer J. Clin. 2010. 60. 393-408.
8. Krug U., Ganser A., Koeffler H.P. Tumour suppressor genes in normal and malignant hematopoie-sis // Oncogene. 2002. 21. 3475-3495.
9. Leroy B., Fournier J.L., Ishioka C., Monti P., Inga A., Fronza G. The TP53 website: an integrative resource centre for the TP53 mutation database and TP53 mutant analysis // Nucl. Acids Res. 2013. 41. D962-D969.
10. Liu Y.Y. PTEN tumor suppressor plays less prognostic role than p53 tumor suppressor in diffuse large B-cell lymphoma // Leuk. Lymph. 2010. 51. (9). 1692-1698.
11. Miyazaki K. Diffuse large B-cell lymphoma: therapeutic development based on clinical and biological heterogeneity // Rinsho Ketsueki. 2015. 56. (10). 2047-2055.
12. Olivier M., Hollstein M., Hainaut P. TP53 mutations in human cancers: origins, consequences, and clinical use // Spring Harb. Perspect. Biol. 2010. 2. a001008.
13. Soussi T., Kato S., Levy P.P., Ishioka C. Reassessment of the TP53 mutation database in human disease by data mining with a library of TP53 missense mutation // Hum. Mutat. 2005. 25. 6-17.
14. Stefancikova L. Prognostic impact of p53 aberrations for R-CHOP-treated patients with diffuse large B-cell lymphoma // Int. J. Oncol. 2011. 39. 1413-1420.
15. Sturm I. Mutation of p53 and consecutive selective drug resistance in B-CLL occurs as a consequence of prior DNA-damaging chemotherapy // Cell Death Differ. 2003. 10. (4). 477-484.
16. Tamimi Y. The p53 mutation/deletion profile in a small cohort of the Omani population with diffuse large B-cell lymphoma // Sultan Qaboos Univ. Med. J. 2014. 14. (1). 50-58.
17. Van de Schans S.A. Improving relative survival, but large remaining differences in survival for non-Hodgkin's lymphoma across Europe and the United States from 1990 to 2004 // J. Clin. Oncol. 2011. 29. (2). 192-199.
18. Voropaeva E.N., Pospelova T.I., Voevoda M.I., Maksimov V.N. Frequency, spectrum, and functional significance of TP53 mutations in patients with diffuse large B-cell lymphoma // Mol. Biol. (Mosc.). 2017. 51. (1). 53-60.
19. Xu-Monette Z.Y. Mutational profile and prognostic significance of TP53 in diffuse large B-cell lymphoma patients treated with R-CHOP: report from an International DLBCL Rituximab-CHOP Consortium Program Study // Blood. 2012. 120. 3986-3996.
20. Xu-Monette Z.Y., Medeiros L.J., Li Y., Orlow-ski R.Z., Andreeff M., Bueso-Ramos C.E. Dysfunction of the TP53 tumor suppressor gene in lymphoid malignancies // Blood. 2012. 119. (16). 3668-3683.
21. Young K.H., Leroy K., M0ller M.B., Col-leoni G.W., Sánchez-Beato M., Kerbauy F.R., Haioun C. Structural profiles of TP53 gene mutations predict clinical outcome in diffuse large B-cell lymphoma: an international collaborative study // Blood. 2008. 112. (8). 3088-98.
22. Zhang M., Heldin A., Palomar-Siles M., OhlinS., Bykov V.J.N., WimanK.G. Synergistic rescue of nonsense mutant tumor suppressor p53 by combination treatment with aminoglycosides and Mdm2 inhibitors // Front. Oncol. 2018. 7. 323.
CLINICAL SIGNIFICANCE OF THE TP53 MUTATION STATUS IN DIFFUSE LARGE B-CELL LYMPHOMA
Elena Nikolaevna VOROPAEVA1, Tatyana Ivanovna POSPELOVA2, Mikhail Ivanovich VOEVODA1, Vladimir Nikolaevich MAKSIMOV1
1 Research Institute of Internal and Preventive Medicine -
Branch of Federal Research Center Institute of Cytology and Genetics of SB RAS 630089, Novosibirsk, Boris Bogatkov str., 175/1
2 State Medical University of Minzdrav of Russia 630091, Novosibirsk, Krasny av., 52
Objective: to reveal the clinical significance of the mutation status of the TP53 gene in the group of receiving rituximab therapy patients with diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) in Novosibirsk. Material and methods. A total of 74 patients with DLBCL, who have been hospitalized at the City Hematology Center in Novosibirsk for the period 20122015, were examined. All patients received therapy with rituximab. The nucleotide sequence of the coding region of the TP53 gene (exons 5-10) and adjacent regions of introns was analyzed by the Sanger direct capillary sequencing. Functional analysis of the revealed mutations was carried out. The results of the patients' therapy were evaluated. Results and discussion. For the first time, it has been revealed in the course of the study of Russian patients with DLBCL setting that TP53 mutation status is associated with the greater incidence of B-symptoms, splenomegaly, leukemia of the lymphoma, and poor prognostic groups according to the International Prognostic Index. A tendency toward a greater frequency of achieving complete clinical and hematologic remission during the therapy was revealed in the subgroup of patients with DLBCL having a canonical sequence of a gene or a mutation in TP53 with an unproven oncogenic potential. Patients with functionally significant TP53 mutations had a lower overall survival rates. Conclusion. For this reason, hopefully therapeutic approaches aimed at the inactivated pathway of TP53 can further improve clinical outcomes in DLBCL.
Key words: gene TP53, mutations, diffuse large B-cell lymphoma, rituximab, prognosis, target therapy.
Voropaeva E.N. - doctor of medical sciences, senior researcher of laboratory of molecular genetic studies of therapeutic diseases, e-mail: vena.81@mail.ru.
Pospelova T.I. - doctor of medical sciences, professor, vice rector on scientific work, head of the department of therapy, hematology and transfusiology, e-mail: post_gem@mail.ru
Voevoda M.I. - doctor of medical sciences, professor, academician of RAS, director, e-mail: ojfice@iimed.ru Maksimov V.N. - doctor of medical sciences, professor, head of laboratory of molecular genetic studies of therapeutic diseases, e-mail: medik11@mail.ru
