CC BY
24
УДК 616.411-006.444
РАЗЛИЧИЯ В ПРОГНОСТИЧЕСКОМ ЗНАЧЕНИИ ^1625895 У МУЖЧИН И ЖЕНЩИН, БОЛЬНЫХ ДИФФУЗНОЙ В-КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМОЙ
Елена Николаевна ВОРОПАЕВА1, Татьяна Ивановна ПОСПЕЛОВА2, Михаил Иванович ВОЕВОДА1, Владимир Николаевич МАКСИМОВ1, Ольга Валерьевна БЕРЕЗИНА2, Виктор Сергеевич ОВЧИННИКОВ2, Лилия Валерьевна ЩЕРБАКОВА1, Татьяна Николаевна БАБАЕВА2
1 ФГБУ НИИ терапии и профилактической медицины СО РАМН, 630089, г. Новосибирск, ул. Бориса Богаткова, 175/1
2 ГБОУ ВПО Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России, 630091, г. Новосибирск, Красный просп., 52
Ранее получены данные, свидетельствующие о прогностическом значении при отдельных гемобластозах rs1625895 гена TP53, которые согласовывались с результатами исследований на солидных опухолях. Цель исследования - изучить ассоциацию между rs1625895 гена TP53 и эффективностью терапии R-CHOP больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой. Материал и методы. Группу обследования составили 106 пациентов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой, верифицированных в 2004-2010 гг. и получивших 6-8 курсов R-CHOP. Результаты и обсуждение. На выборке пациентов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой получено подтверждение прогностического значения rs1625895 при агрессивных неходжкинских лимфомах. Показано, что возраст не являлся независимым предиктором выживаемости больных ДВККЛ вне зависимости от пола (р > 0,05). Индекс IPI, разработанный до применения ритуксимаба, сохраняет свое прогностическое значение при иммунохимиотерапии у пациентов как мужского (р = 0,036), так и женского (р = 0,018) пола. Вместе с тем установлено, что только у женщин, больных ДВККЛ, генотип G/G rs1625895 гена ТР53 ассоциирован со статистически значимо меньшей частотой достижения ремиссии, значимым снижением показателей 5-летней выживаемости. Методом регрессии Кокса показано, что у женщин генотип rs1625895 может являться независимым предиктором как общей (р = 0,005), так и безрецидивной (р = 0,003) выживаемости лишь у женщин.
Ключевые слова: диффузная В-крупноклеточная лимфома, прогностические факторы, иммунохимиотера-пия, ген ТР53, ритуксимаб, rs1625895.
Ген ТР53 имеет весьма вариабельную структуру ввиду наличия множества полиморфизмов. Согласно базе dbSNP, в гене ТР53 известно около 750 полиморфизмов, 50 из которых цитируются в базе PubMed. Большинство из них редко встречается в популяции, около двух десятков одно-нуклеотидных полиморфизмов имеют частоту встречаемости редкого аллеля в популяции более
5 %, а три - ге1042522, ге17878362 и ге1625895 -наиболее хорошо изучены в плане функциональных характеристик, распространенности в популяции и ассоциации с риском опухолей.
ге1625895 (IVS6 +62А^) расположен в 6 ин-троне гена ТР53. Хотя интронные полиморфизмы и не приводят к аминокислотным заменам в структуре кодируемого белка, хорошо известно,
Воропаева Е.Н. - к.м.н., научный сотрудник лаборатории молекулярно-генетических методов исследования терапевтических заболеваний, е-mail: vena.81@mail.ru
Поспелова Т.И. - д.м.н., проф., зав. кафедрой терапии, гематологии и трансфузиологии, е-mail: postatgem@mail.ru
Воевода М.И. - д.м.н., проф., чл.-кор. РАН, директор, е-mail: mvoevoda@ya.ru
Максимов В.Н. - д.м.н., проф., зав. лабораторией молекулярно-генетических методов исследования терапевтических заболеваний, е-mail: medik11@mail.ru
Березина О.В. - к.м.н., ассистент кафедры терапии, гематологии и трансфузиологии, е-mail: ovberezina@mail.ru
ОвчинниковВ.С. - аспирант кафедры терапии, гематологии и трансфузиологии, е-mail: black_wizard@mail.ru Щербакова Л.В.- старший научный сотрудник лаборатории клинико-популяционных и профилактических исследований терапевтических и эндокринных заболеваний, е-mail: 9584792@mail.ru
Бабаева Т.Н. - аспирант кафедры терапии, гематологии и трансфузиологии, е-mail: babaeva_tatyana@inbox.ru
что они могут содержать регуляторные участки. К настоящему времени в некодирующих интрон-ных последовательностях найдено значительное количество связанных с фенотипическими проявлениями полиморфизмов [11]. На данный момент нет сведений о том, что rs1625895 влияет на сплайсинг или связывание факторов транскрипции, а также служит мишенью для регуля-торных микроРНК, в то же время сообщается о его влиянии на уровень экспрессии белка р53 [8]. Согласно данным литературы вариант с аллелем G в сравнении с вариантом с аллелем А обусловливает большую способность ТР53 индуцировать репарацию ДНК и апоптоз, а следовательно, и поддерживать стабильность генома [12].
D. Mavridou et al. отметили образование вторичной структуры одноцепочечной нити ДНК в виде шпильки во время секвенирования у лиц с гомозиготным генотипом G/G, которая отсутствовала в случае замены гуанина на аденин. Авторы предположили, что возможным механизмом влияния rs1625895 на функцию р53 может быть изменение вторичной структуры пре-мРНК [6].
Ранее нами [1] получены данные, свидетельствующие о прогностическом значении при агрессивных неходжкинских лимфомах (НХЛ) rs1625895 гена TP53, которые согласовались с результатами исследований, проведенных в отношении хронического лимфолейкоза [5], рака легкого [7], желудка [4], а также опухолей головы и шеи [9]. Учитывая небольшую выборку пациентов с НХЛ и разнообразием гистологических вариантов в опубликованном ранее исследовании, представляется актуальным дальнейшее изучение ассоциации rs1625895 с эффективностью
терапии на большей группе больных с отдельными типами НХЛ.
Цель исследования - изучение ассоциации полиморфизма ге1625895 гена ТР53 с эффективностью терапии по протоколу R-CHOP у больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой (ДВККЛ).
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Группу обследования составили 106 пациентов с ДВККЛ, верифицированных в Городском гематологическом центре г. Новосибирска в 2004-2010 гг. Все пациенты получили 6-8 курсов R-CHOP. Из них 60 мужчин и 46 женщин. Средний возраст больных составил 52,5 ± 11,8 года. У подавляющего большинства пациентов (82 %) были продвинутые стадии заболевания. Две трети больных имели неблагоприятный прогноз согласно международному прогностическому индексу 1Р1 (табл. 1).
Для генотипирования ге1625895 применялся метод ПЦР с анализом полиморфизма длин ре-стрикционных фрагментов [2].
Эффект противоопухолевой терапии оценивали по критериям: частота ремиссий, 5-летняя общая (ОВ) и безрецидивная выживаемость (БРВ). При расчете ОВ началом мониторинга считался момент постановки диагноза, событием - смерть от любой причины, при расчете БРВ - соответственно момент постановки диагноза и рецидив. Пятилетнюю выживаемость пациентов исследовали с помощью анализа цензурированных данных с использованием функции вероятности выживания Каплана - Майера, кривые выживае-
Таблица 1
Клиническая характеристика обследованных больных ДВККЛ
Характеристика Мужчины Женщины Всего
Возраст, лет 50,8 ± 14,8 54,2 ± 17,7 52,7 ± 15,6
Стадия
I 2 2 0
II 6 18 2
III 14 19 5
IV 38 67 29
Индекс И, баллы
0-1 9 13 4
2 11 20 9
3 18 29 11
4-5 22 44 22
Экстранодальные поражения 31 28 59
Симптомы опухолевой интоксикации 34 37* 71
Размер опухолевого очага более 5 см 36 24 60
Примечание. * - отличие от величины соответствующего показателя у мужчин статистически значимо прир < 0,01.
мости сравнивали с помощью непараметрического логрангового критерия. Для прогнозирования риска наступления события для пациентов с не-ходжкинскими злокачественными лимфомами и оценки влияния независимых предикторов на этот риск применялась модель пропорциональных рисков регрессии Кокса. Различия между сравниваемыми параметрами считали статистически значимыми прир < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В табл. 2 приведены результаты генотипиро-вания пациентов. Частота ремиссий в обследованной группе больных ДВККЛ составила 56 %, 5-летняя ОВ - 48 %, БРВ - 44 %. Анализ эффективности терапии пациентов в зависимости от генотипа изучаемого полиморфизма гена TP53 показал, что частота ремиссии в группе больных ДВККЛ, имеющих гомозиготный генотип G/G, статистически значимо ниже, чем в объединенной группе больных с генотипами, имеющими редкий аллель А (G/A и A/A генотипы) (соответственно 50 и 73 %, р = 0,039).
Таблица 2
Результаты генотипирования rs1625895 у больных ДВККЛ
G/G 80 (75,5 %)
Генотип G/A 24 (22,6 %)
A/A 2 (1,9 %)
Аллель G 184 (86,8 %)
A 28 (13,2 %)
а
Генотипы G/A и А/А
р=0,014
69%
ч-1—н
ч
■Ц
38%
23 мес.
1-Г^-1-1-1-г
30 40 Месяцы
50
60
Пятилетняя ОВ больных с генотипом G/G была в 1,8 раза ниже, чем у пациентов с ДВККЛ с гетерозиготным генотипом G/А и гомозиготным генотипом А/А (рис. 1, а). Показатели 5-летней БРВ в группе больных ДВККЛ в зависимости от генотипа не достигали значимых различий (рис. 1, б). Кривые 5-летней ОВ и БРВ пациентов с ДВККЛ у мужчин и женщин были практически идентичными (р = 0,601 и р = 0,722 соответственно). Но, в отличие от мужчин, у женщин значимо различались кривые выживаемости в зависимости от генотипа rs1625895. ОВ у женщин при генотипе G/G была в 2 раза выше, чем при наличии аллеля А (рис. 2, а), а БРВ - в 2,3 раза (рис. 2, б). У мужчин ОВ составила 38 % в обеих подгруппах.
Методом регрессии Кокса проведен анализ значения для выживаемости пациентов таких факторов, как возраст до 50 и старше 50 лет, генотип rs1625895 и группа прогноза, согласно индексу IPI, отдельно в подгруппах мужчин и женщин (табл. 3 и 4). Показано, что возраст не являлся независимыми предиктором выживаемости больных ДВККЛ вне зависимости от пола (р > 0,05). Индекс IPI, разработанный до применения ри-туксимаба, сохраняет свое прогностическое значение при иммунохимиотерапии у пациентов как мужского (р = 0,036) так и женского (р = 0,018) пола. Вместе с тем генотип rs1625895 являлся независимым предиктором как ОВ (р = 0,005), так и БРВ (р = 0,003) лишь у женщин.
M. Pfreundschuh et al. описали гендерные различия фармакокинетики ритуксимаба, которые могли бы влиять на прогноз пациентов с
30 40 Месяцы
Рис. 1. Общая (а) и безрецидивная (б) выживаемость в группе больных ДВККЛ в зависимости от генотипа ^1625895
Рис. 2. Общая (а) и безрецидивная (б) выживаемость в группе женщин, больных ДВККЛ, в зависимости от генотипа п'1625895
Таблица 3
Анализ предикторов общей выживаемости больных ДВККЛ методом регрессии Кокса
Характеристика Мужчины Женщины
Значение р Отношение рисков 95 % ДИ Значение р Отношение рисков 95 % ДИ
Унивариантный анализ
Возраст 0,944 1,024 0,522-2,011 0,293 1,630 0,636-4,182
IPI 0,030 1,477 1,039-2,098 0,040 1,705 1,025-2,835
Генотип G/G rs1625895 0,504 1,328 0,577-3,054 0,021 5,688 1,297-24,953
Мультивариантный анализ
Возраст 0,703 0,870 0,383-1,597 0,326 1,642 0,607-4,401
IPI 0,036 1,507 1,041-2,265 0,018 1,992 1,128-3,532
Генотип G/G rs1625895 0,995 0,997 0,425-2,435 0,005 9,271 1,949-44,624
Таблица 4 Анализ предикторов безрецидивной выживаемости больных ДВККЛ методом регрессии Кокса
Характеристика Мужчины Женщины
Значение р Отношение рисков 95 % ДИ Значение р Отношение рисков 95 % ДИ
Унивариантный анализ
Возраст 0,729 0,891 0,464-1,711 0,106 2,620 0,975-7,045
IPI 0,138 1,284 0,923-1,785 0,011 1,960 1,166-3,293
Генотип G/G rs1625895 0,588 1,242 0,567-2,723 0,024 4,065 1,207-13,698
Мультивариантный анализ
Возраст 0,495 0,792 0,348-1,484 0,103 2,248 0,983-8,063
IPI 0,136 1,315 0,923-1,908 0,007 2,176 1,212-3,853
Генотип G/G rs1625895 0,934 1,036 0,463-2,474 0,003 7,096 2,109-27,072
НХЛ [10]. В частности, показано, что у женщин в пожилом возрасте клиренс ритуксимаба в 1,5 раза ниже, чем у мужчин. Объясняется это тем, что у женщин меньше сердечный выброс и скорость печеночного кровотока, а также активность ферментов печени по сравнению с мужчинами. Ритуксимаб, как известно, метаболизируется в печени, а продукты его распада выводятся с мочой. Однако ни увеличение дозы, ни сокращение интервалов между введениями препарата не приводят к увеличению эффективности терапии, что свидетельствует о наличии дополнительных факторов, определяющих ответ пациентов на имму-нохимиотерапию, преодолеть которые не удается путем интенсификации терапии. Одним из таких факторов могут быть индивидуальные генетические особенности пациентов.
В проведенной работе не выявлено прогностического значения при ДВККЛ как пола пациента, так и его возраста самих по себе. Вместе с тем показано, что генотип G/G rs1625895 гена TP53 имеет неблагоприятное прогностическое значение у лиц женского пола. Сама по себе ассоциация rs1625895 гена TP53 с прогнозом при новообразованиях была описана ранее [4, 5, 7, 11] и может быть объяснена выполнением белком р53 широкого спектра функций, предотвращающих и/или ингибирующих опухолевый рост [4].
Большой интерес вызывают различия в прогностическом значении rs1625895 у мужчин и женщин, больных диффузной В-крупноклеточ-ной лимфомой. В этой связи представляется интересным следующий факт. Метаанализ 10 эпидемиологических исследований GWAS показал, что rs1625895 гена ТР53 ассоциирован с уровнем глобулина, переносящего половые гормоны SHBG, а эффект его на данный показатель имеет различия в зависимости от пола [3].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, в настоящей работе на выборке пациентов с ДВККЛ получено подтверждение выявленного ранее прогностического значения rs1625895 при агрессивных НХЛ. За счет расширения группы исследования дифференцированно проанализированы результаты терапии R-CHOP у мужчин и женщин, больных ДВККЛ. Установлено, что только у женщин, больных ДВККЛ, генотип G/G rs1625895 гена ТР53 ассоциирован со статистически значимо меньшей частотой достижения ремиссии, значимым снижением показателей 5-летней общей и безрецидивной выживаемости. Методом регрессии Кокса показано, что генотип rs1625895 может являться независимым предиктором выживаемости женщин, больных ДВККЛ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Воропаева Е.Н., Воевода М.И., Поспелова Т.И. и др. Молекулярно-генетический подход к прогнозированию эффективности терапии больных агрессивными неходжкинскими лимфомами // Бюл. СО РАМН. 2014. 34. (2). 39-43.
2. Воропаева Е.Н., Воевода М.И., Поспелова Т.И., Максимов В.Н. Интронные полиморфизмы антионкогена ТР53 у пациентов старшей возрастной группы с индолентными вариантами неход-жкинских злокачественных лимфом // Успехи геронтологии. 2013. 26. (2). 258-262.
3. Coviello A.D., Haring R., Wellons M. et al. A genome-wide association meta-analysis of circulating sex hormone-binding globulin reveals multiple Loci implicated in sex steroid hormone regulation // PLoS Genet. 2012. 8. (7). e1002805.
4. De Feo E., Persiani R., La Greca A. et al. A case-control study on the effect of p53 and p73 polymorphisms on gastric cancer risk and progression // Mutat. Res. 2009. 675. (1-2). 60-65.
5. Kochethu G., Delgado J., Pepper C., Starczyns-ki J. Two germ line polymorphisms of the tumour suppressor gene p53 may influence the biology of chronic lymphocytic leukaemia // Leuk. Res. 2006. 30. (9). 1113-1118.
6. Mavridou D., Gornall R., Campbell I.G. TP53 intron 6 polymorphism and the risk of ovarian and breast cancer // Br. J. Cancer. 1998. 77. (4). 676-678.
7. Mechanic L.E., Bowman E.D., Welsh J.A. Common genetic variation in TP53 is associated with lung cancer risk and prognosis in African Americans and somatic mutations in lung tumors // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2007. 16. 214-222.
8. Pangilinan F., Geiler K., Dolle J. Construction of a high resolution linkage disequilibrium map to evaluate common genetic variation in TP53 and neural tube defect risk in an Irish population // Am J. Med. Genet. A. 2008. 146A. (20). 2617-2625.
9. Paola Galli Р. A case-control study on the combined effects of p53 and p73 polymorphisms on head and neck cancer risk in an Italian population // BMC Cancer 2009. 9. 137.
10. Pfreundschuh M., Muller C., Zeynalova S. et al. Suboptimal dosing of rituximab in male and female patients with DLBCL // Blood. 2014. 123. (5). 640-646.
11. Sribudiani Y., Metzger M., Osinga J. Variants in RET associated with Hirschsprung's disease affect binding of transcription factors and gene expression // Gastroenterology. 2011. 20. (2). 572-582.
12. Wu X., Zhao H., Amos C.I. et al. P53 genotypes and haplotypes associated with lung cancer susceptibility and ethnicity // J. Nat Cancer Inst. 2002. 94.681-690.
DIFFERENCES BETWEEN PROGNOSTIC VALUE OF rs1625895 IN MALE AND FEMALE PATIENTS WITH DIFFUSE LARGE B-CELL LYMPHOMA
Elena Nikolaevna VOROPAEVA1, Tatyana Ivanovna POSPELOVA2, Mikhail Ivanovich VOEVODA1, Vladimir Nikolaevich MAKSIMOV1, Olga Valerevna BEREZINA2, Victor Sergeevich OVCHINNIKOV2, Liliya Valerevna SHCHERBAKOVA1, Tatyana Nikolaevna BABAEVA2
1 Institute of Internal and Preventive Medicine of SB RAMS 630089, Novosibirsk, Borisa Bogatkova str., 175/1
2 Novosibirsk State Medical University of Minzdrav of Russia 630091, Novosibirsk, Krasny av., 52
Data showing the prognostic value of rs1625895 polymorphism in the TP53 gene in hematological malignancies were obtained previously. This data are consistent with the results of studies of the solid tumors. The objective of this study was to clarify the association between rs1625895 and the efficiency of R-CHOP therapy in DLBCL patients. Material and methods. 106 DLBCL patients diagnosed in the 2004-2010 were enrolled into the study. All patients received 6-8 courses of R-CHOP therapy as a first-line treatment. Results and discussion. The prognostic value of rs1625895 in aggressive non-Hodgkin's lymphoma was confirmed in the group of patients with diffuse large B-cell lymphoma. It is shown that the age is not independent predictor of survival in patients DLBCL (p > 0.05) regardless of gender. Index IPI elaborated before retuximab use retains its prognostic value in patients received immunochemotherapy (both for male p = 0.036 and female p = 0.018). However, the G/G genotype of rs1625895 polymorphism in the TP53 gene was shown to be associated with a high probability of R-CHOP therapy failure in DLBCL patients according to the probability of remission as well as 5-year overall (p = 0.005) and relapse-free (p = 0.003) survivals in female patients.
Key words: DLBCL, prognostic factors, immunochemotherapy, gene TP53, rituximab, rs1625895.
Voropaeva E.N. - candidate of medical sciences, researcher of the laboratory of molecular-genetic methods of study of the therapeutic diseases, e-mail: vena.81@mail.ru
Pospelova T.I. - doctor of medical sciences,, professor, head of the chair for therapy, hematology and transfusiology, e-mail: postatgem@mail.ru
Voevoda M.I. - corresponding member of the RAS, doctor of medical sciences,, professor, director, e-mail: mvoevoda@ya.ru
Maksimov V.N. - doctor of medical sciences, professor, head of the laboratory of molecular-genetic methods of study of the therapeutic diseases, e-mail: medik11@mail.ru
Berezina O.V. - candidate of medical sciences, assistant professor of the chair for therapy, hematology and transfusiology, e-mail: ovberezina@mail.ru
Ovchinnikov KS. - postgraduate student of the chair for therapy, hematology and transfusiology, e-mail: black_wizard@mail.ru
Shcherbakova L.V. - senior researcher of the laboratory of clinical population and preventive studies of therapeutic and endocrine diseases, e-mail: 9584792@mail.ru
Babaeva T.N. - postgraduate student of the chair for therapy, hematology and transfusiology, e-mail: babaeva_tatyana@inbox.ru
