CC BY
46
О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015 УДК 616-006.441-085.277.3]:575.08
ЗНАЧЕНИЕ КАНДИДАТНЫХ МАРКЕРОВ ГЕНОВ ФНО-а, ИЛ-10, ИЛ-6 ПРИ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ДИФФУЗНОЙ В-КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМОЙ
Воропаева Е.Н.1, Поспелова Т.И.2, Воевода М.И.1, Чердынцева Н.В.3,4, Максимов В.Н.1
1 ФГБНУ НИИ терапии и профилактической медицины, 630089, Новосибирск; 2 ГБОУ ВПО Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России, 630089, Новосибирск; 3 ФГБНУ Томский научно-исследовательский институт онкологии, 634050, Томск; 4 ФГАО УВО Национальный исследовательский Томский государственный университет, 634050, Томск
Резюме. В литературе описаны работы, в которых изучалось предиктивное значение полиморфизма генов при иммунохимиотерапии неходжкинских лимфом. Вместе с тем небольшое число воспроизведений исследований каждого из маркеров и противоречивость данных свидетельствуют о необходимости валидации получаемых результатов на различных этнических выборках и вариантах лимфом. Целью исследования было: оценить предиктивное значение кандидатных маркеров генов rs1800872 гена ИЛ-10, rs673 гена ФНО-а, rs1800795 гена ИЛ-6 на выборке больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой (В-ККЛ) г. Новосибирска, получающих терапию R-CHOP. Получены данные о возможном пре-диктивном значении rs1800872 гена ИЛ-10, а также rs1800795 гена ИЛ-6, подтвержденные анализом кривых выживаемости пациентов методом Каплана-Майера. Методом регрессии Кокса показано, что генотип rs1800872 может являться независимым предиктором как общей, так и безрецидивной выживаемости больных диффузной В-ККЛ. Гипотеза об ассоциации rs673 гена ФНО-а с эффективностью терапии R-CHOP при диффузной В-ККЛ подтверждения не получила.
Ключевые слова: генетический полиморфизм; rs1800872; rs673; rs1800795; ритуксимаб; диффузная В-крупноклеточная лимфома; прогноз.
Для цитирования: Воропаева Е.Н., Поспелова Т.И., Воевода М.И., Чердынцева Н.В., Максимов В.Н. Значение кандидатных маркеров генов ФНО-а, ИЛ-10, ИЛ-6 при терапии больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой. Гематология и трансфузиология. 2015; 60(3): 22-28.
SIGNIFICANCE OF TNF-a, IL-10, IL-6 CANDIDATE GENE MARKERS IN R-CHOP THERAPY OF PATIENTS WITH
DIFFUSE LARGE B-CELL LYMPHOMA
Voropaeva E.N.1, Pospewlova T.I.2, Voevoda M.I.1, Cherdyntseva N.V.3,4, Maksimov V.N.1
1Institute of Therapy and Preventive Medicine, 630089, Novosibirsk, Russia; 2Novosibirsk State Medical University, 630089, Novosibirsk, Russia; 3Tomsk Institute of Oncology, 634050, Tomsk, Russia; 4Tomsk State University, 634050, Tomsk, Russia
Summa ry. The predictive value of gene polymorphisms in immunochemotherapy for NHL is described not once. However, few reproductions of studies of each marker and the inconsistency of the data indicates the need to validate the results described in the literature on different ethnic populations and NHL entities. The aim of this study was to assess the predictive value of candidate gene markers IL-10 rs1800872, TNF-a rs673, IL-6 rs1800795 in patients with diffuse large B-cell lymphomas (DLBCL) receiving therapy with R-CHOP. The data indicated a probable predictive value of IL-10 rs1800872 and IL-6 rs1800795, which was confirmed by Kaplan-Meier's analysis of the survival curves. Cox regression showed that rs1800872 genotype could serve as an independent predictor for both overall and event-free survival of patients with DLBCL. The hypothesis on TNF-а rs673 association with the efficiency of R-CHOP in DLBCL was not confirmed.
Key words: genetic polymorphism; rs1800872; rs673; rs1800795; rituximab; diffuse large B-cell lymphoma; prognosis.
Citation: Gematologiya i transfuziologiya. 2015; 60(3): 22-28. (in Russian)
Диффузная В-крупноклеточная лимфома (В-ККЛ) является одним из наиболее распространенных вариантов неходжкинских лимфом (НХЛ) у взрослых, характеризуется гетерогенностью морфологических вариантов и иммунофенотипических характеристик, разнообразием клинических проявлений, агрессивным течением [1]. Введение ритуксимаба в программы терапии больных диффузной В-ККЛ значительно
Для корреспонденции:
Воропаева Елена Николаевна, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории молекулярно-генетических исследований терапевтических заболеваний ФГБНУ НИИ терапии и профилактической медицины.
Адрес: 630089, Новосибирск, ул. Бориса Богаткова, д. 175/1. Телефон: +7(383) 2642516. E-mail: vena.81@mail.ru.
Corresponding author:
Voropaeva Elena, PhD (vena.81@mail.ru)
улучшило исход заболевания [2, 3]. Однако остается часть пациентов с резистентным течением опухоли и ранними рецидивами [4]. По этой причине идентификация предиктивных маркеров для выделения подгруппы диффузной В-ККЛ высокого риска является основополагающей при разработке направленной терапии.
На протяжении многих лет для прогноза ответа на лечение больных диффузной В-ККЛ используется стратификация на прогностические группы, согласно Международному прогностическому индексу (МПИ) [5]. Описан ряд имеющих прогностическую значимость при данном варианте НХЛ цитогенети-ческих изменений, затрагивающих BCL-2, BCL-6, с-MYC [6]. Также на основании исследования профиля экспрессии генов выделены прогностически значимые подтипы опухоли - из В-клеток зародышевого центра (germinal center B-cells, GCB) и ак-
тивированных В-клеток (activated B cells, ABC) [7]. Проекты с использованием секвенирования нового поколения, изучавшие материал как опухолевой, так и здоровой тканей пациентов с диффузной В-ККЛ, предоставили информацию о целых геномах, экзо-мах и транскриптомах при данной патологии [8-10], однако имеющиеся в настоящий момент данные по-прежнему не дают точного понимания патогенеза заболевания и прогноза для пациентов.
Помимо клинических и молекулярных характеристик опухоли, в качестве дополнительного прогностического маркера при диффузной В-ККЛ обсуждается значение врожденного полиморфизма генов [11]. В частности, активно изучается ассоциация с эффективностью терапии ритуксимабом НХЛ полиморфизма генов рецепторов (CD20, FCGR3A и FCGR2A, RIPK1, VEGFR2), ростовых факторов (VEGFA), цитокинов (ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-а, LTA), систем апоптоза (MDM2, ТР53, BCL-2), детоксика-ции (GSTM1, GSTT1, GSTP1), комплемента (CqA1) и др. Описан ряд маркеров генов иммунной системы,
ассоциированных как с риском развития [12, 13], так и с безрецидивной и общей выживаемостью больных диффузной В-ККЛ [14, 15].
Поскольку результаты отдельных исследований, описанных в литературе, противоречивы [16-18], часть из них получены до включения ритуксимаба в программы терапии диффузной В-ККЛ, а эффект изучаемых маркеров может меняться в зависимости от этнической принадлежности изучаемой популяции, необходима валидация описанных в литературе ассоциаций [19]. Для окончательного решения вопроса о роли полиморфизма генов иммунной системы в прогнозе диффузной В-ККЛ требуется дальнейшее накопление научной информации с последующим мета-анализом имеющихся работ.
Цель настоящего исследования - оценить пре-диктивное значение описанных ранее кандидатных маркеров ге1800872 гена интерлейкина-10 (ИЛ-10), ге673 гена фактора некроза опухоли а (ФНО-а), ге1800795 гена интерлейкина-6 (ИЛ-6) при терапии R-CHOP (циклофосфан, доксорубицин, винкристин,
Таблица 1
Сравнительная клиническая характеристика группы обследованных больных диффузной В-ККЛ
Генотип
Показатель rs1800872 гена ИЛ-10 (n = 91) rs1800795 гена ИЛ-6 (n = 91)
DU CIV уп 1 WU ) А/А+А/С C/C G/G G/C+C/C
абс. % абс. % абс. % абс. % абс. %
Число больных 106 100 83 91,2 8 8,8 21 23,3 69 76,7
Пол:
м 60 56,6 46 55,4 5 62,5 14 66,7 38 55,1
ж 46 43,4 37 44,6 3 37,5 7 33,3 31 44,9
Возраст, годы 52,7 ± 15,6 52,1 ± 18,3 54,9 ± 11,8 50,3 ± 16,7 51,9 ± 12,7
Экстранодальные поражения 57 53,8 47 56,6 3 37,5 11 52,4 38 55,1
не менее 2
В-симптомы 71 67 53 63,9 6 75 13 61,9 45 65,2
Размер опухолевого очага более 5 см 34 32,1 24 28,9 2 25 5 23,8 19 27,5
Статус по ECOG 2 и более 49 46,2 35 42,2 4 50 7 33,3 32 46,4
Поражение костного мозга 43 40,6 30 36,1 4 50 6/ 28,6 29 42
Повышение концентрации 76 71,7 59 71,1 4 50 5 23,8* 52 75,4*
ЛДГ в сыворотке крови
Стадия по Ann Arbor:
I—II 20 18,9 20 24,1 1 12,5 8 38,1 12 17,4
III-IV 86 81,1 63 75,9 7 87,5 13 61,9 57 82,6
Баллы по МПИ:
0-1 13 12,3 11 13,3 1 12,7 5 23,8 7 10,1
2 20 18,9 18 21,7 3 37,5 4 19 17 24,6
3 29 27,4 22 26,6 2 25 6 28,6 18 26,1
4-5 44 41,4 32 38,4 2 25 6 28,6 27 39,1
Морфологический вариант:
центробластнная 53 50 43 62,9 4 50 10 47,6 35 50,8
иммунобластная 36 34 28 22,7 4 50 6 28,6 25 36,2
анапластическая 12 11,3 9 10,8 - 3 14,3 8 11,6
богатая Т-лимфоцитами 5 4,7 3 3,6 - 2 9,5 1 1,4
и гистиоцитами
Примечание. * -р < 0,0001 - статистическая значимость различий в группах пациентов с генотипами G/G против G/С + C/C rs1800795 гена ИЛ-6.
Таблица 2
Последовательности праймеров и рестриктазы, использованные в работе
Маркер Последовательность праймеров Длина продукта, п.н. Температура отжига праймеров, оС Рестриктаза
ФНО-а rs673 F5'/-aggcaataggttttgagggccat-3'/ R5'/-tcctccctgctccgattccg-3'/ 107 60 Bsp19I
ИЛ-10 rs1800872 F5'/-gaacacatcctgtgaccccgcgagt-3'/ R5/-aacagctgttctgtgcgcagaggcc-3'/ 314 63 Hinf I
ИЛ-6 rs1800795 F5'/-agcctgttaatctggtcactgaaaa-3'/ R5/-tgtgcaatgtgacgtcctttagaat-3'/ 267 57 Hinf I
преднизолон и ритуксимаб) на выборке больных диффузной В-ККЛ г. Новосибирска.
Материал и методы
Группу исследования составили 106 больных диффузной В-ККЛ (60 мужчин и 46 женщин), госпитализированных в Городской гематологический центр г. Новосибирска за период 2004-2012 гг., в возрасте от 19 до 68 лет (средний возраст 52,7 ± 14,6 года). Клиническая характеристика пациентов представлена в табл. 1, из которой следует, что большая часть обследованных имели продвинутые (III и IV) стадии заболевания и 2/3 - неблагоприятный прогноз по МПИ. Все больные получили 6-8 курсов R-CHOR
Исследование было одобрено локальным этическим комитетом. Все пациенты подписали информированное согласие до включения в исследование.
Эффект противоопухолевой терапии оценивали по общепринятым критериям: частота ремиссии (ЧР), 5-летней общей выживаемости (ОВ) и безрецидивной выживаемости (БРВ). При расчете ОВ началом мониторинга считали момент постановки диагноза, событием - смерть от любой причины. При расчете БРВ началом мониторинга считали момент постановки диагноза, событием - рецидив. 5-Летнюю выживаемость больных исследовали с помощью анализа цензурированных данных с использованием функции вероятности выживания Каплана-Майера. Для сравнения кривых выживаемости использовали непараметрический Log-rank-критерий. Для прогнозирования риска наступления события и оценки влияния независимых предикторов на этот риск применялась модель пропорциональных рисков регрессии Кокса с расчетом 95% доверительного интервала (ДИ). Сравнение частот признаков между группами проводили с использованием статистических методов /2-критерия Пирсона или точного критерия Фишера. Различия между сравниваемыми пара-
Таблица 3
Результаты генотипирования в группе больных диффузной В-ККЛ
Ген
Полиморфизм
Частота генотипов
ФНО-а rs673 (n = 91)
ИЛ-10 rs1800872 (n = 91)
ИЛ-6 rs1800795 (n = 90)
Генотип абс. %
A/A 72 79,1
A/G 18 19,8
G/G 1 1,1
A/A 53 58,2
A/C 30 33
C/C 8 8,8
G/G 21 23,3
C/G 50 55,6
С/С 19 21,1
метрами считали статистически значимыми прир < 0,05.
Для генотипирования rs673, rs1800872 и rs1800795 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) был разработан собственный дизайн праймеров (табл. 2).
Результаты
В табл. 3 приведены результаты генотипирования выборки больных по изучаемым маркерам генов ФНО-а, ИЛ-10, ИЛ-6. Поскольку ассоциация с эффективностью терапии больных диффузной В-ККЛ, которая будет описана далее, выявлена только для rs1800872 гена ИЛ-10 и rs1800795 гена ИЛ-6, в табл. 1 представлена сравнительная характеристика лиц с различными генотипами по этим маркерам (данные для rs673 гена ФНО-а не представлены). Больные подгрупп сопоставимы по основным клиническим характеристикам, за исключением концентрации лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в сыворотке крови для rs1800795 гена ИЛ-6.
ЧР в обследованной выборке больных диффузной В-ККЛ составила 56%. Анализ частоты достижения ремиссии в подгруппах пациентов в зависимости от генотипа тестируемых маркеров не показал различий по rs673 гена ФНО-а и rs1800795 гена ИЛ-6. Вместе с тем в объединенной группе больных диффузной В-ККЛ (табл. 4), имеющих генотипы А/А и А/С rs1800872 гена ИЛ-10, ЧР составила 49 (59%) из 83 больных, что было выше, чем в группе лиц с генотипом С/С - 2 (25%) из 8, хотя различия и не достигали уровня значимости (р = 0,064).
5-Летняя ОВ в основной группе составила 48%. При анализе кривых выживаемости методом Каплана-Майера (табл. 5) были получены данные о значимом ухудшении показателей 5-летней ОВ в объединенной группе больных, имеющих генотипы G/С и С/С в сравнении с пациентами, имеющими гомозиготный частый генотип G/G rs1800795 гена ИЛ-6 (р = 0,038) (см. рисунок). Также получены дан-
Таблица 4
Частота ремиссии в основной группе больных диффузной
В-ККЛ в зависимости от генотипа тестируемых маркеров
Примечание. n - число исследований в группе.
Ген/ полиморфизм Генотип Частота ремиссии
абс. % Р
ФНО-а / rs673 А/А У 44 из 72 61,1 > 0,5
G/A У 9 из 18 50
ИЛ-10 / rs1800872 A/A + A/C У 49 из 83 59 0,064
C/C У 2 из 8 25
ИЛ-6 / rs1800795 G/G У 8 из 21 38,1 > 0,5
G/C + С/С У 17 из 69 24,6
ные о наличии тенденции к снижению показателей 5-летней ОВ в подгруппе больных диффузной В-ККЛ с генотипом С/С rs1800872 гена ИЛ-10 (р = 0,081). Кривые 5-летней ОВ пациентов с различными генотипами rs673 гена ФНО-а не различались.
Для анализа значимости различных показателей в качестве независимых предикторов ОВ больных в унивариантной и мультивариантной моделях оценивали такие клинико-лабораторные характеристики, как пол, возраст, прогностическая группа по МПИ, наличие В-симптоматики, а также генотип rs1800872 гена ИЛ-10 и rs1800795 гена ИЛ-6 (табл. 6). Экстранодальные поражения, размер опухолевого очага, статус по ECOG, поражение костного мозга, концентрация ЛДГ в сыворотке крови, а также стадия лимфомы были включены только в унива-риантный анализ, поскольку МПИ является их ин-тегративным показателем. Унивариантный анализ прогностического значения различных клинико-ла-бораторных характеристик в отношении 5-летней ОВ в основной группе больных выявил роль таких факторов, как: группа высокого и промежуточного высокого риска по МПИ (р = 0,002), общесоматический статус по ECOG не менее 2 (р = 0,01), генерализованные стадии (III-IV) заболевания по классификации Ann Arbor (p = 0,01). Согласно данным мультивариантного анализа, наряду с группами высокого и промежуточного высокого риска по МПИ (р = 0,001) генотип С/С rs1800872 гена ИЛ-10 (р = 0,02) может быть независимым предиктором ухудшения 5-летней ОВ больных диффузной В-ККЛ, получающих терапию R-CHOP. В отношении rs1800795 гена ИЛ-6 отмечена тенденция влияния на прогноз ОВ пациентов (р = 0,07).
Показатель 5-летней БРВ в основной группе больных диффузной В-ККЛ составил 44%. Кривые 5-летней БРВ больных с разными генотипами rs673 гена ФНО-а не различались.
При анализе выживаемости методом Каплана-Майера, отмечено значимое снижение показателей БРВ в группе больных, имеющих генотип С/С в сравнении с больными, имеющими частый аллель А rs1800872 гена ИЛ-10 (р = 0,034) (см. табл. 5 и рисунок). Тенденцию к ухудшению показателей БРВ имели также больные объединенной группы с генотипами G/С и C/C rs1800795 ИЛ-6 (р = 0,067) (см. табл. 5).
Унивариантный анализ предикторов 5-летней БРВ в основной группе больных выявил прогностическую роль следующих факторов: группа высокого и промежуточного высокого риска по МПИ (р = 0,001), общесоматический статус по ECOG не менее 2 (р = 0,001), генерализованные стадии (III-IV) заболевания по классификации Ann Arbor (p = 0,007), а также наличие двух экстранодальных поражений и более (р = 0,01). По данным мульти-вариантного анализа наряду с группами высокого и промежуточного высокого риска по МПИ (р = 0,002), генотип С/С rs1800872 гена ИЛ-10 (р = 0,01) может быть независимым предиктором ухудшения 5-летней БРВ больных диффузной В-ККЛ, получающих терапию R-CHOP (см. табл. 6).
Таблица 5
Статистическая значимость различий выживаемости больных диффузной В-ККЛ в зависимости от генотипа тестируемого маркера
Ген Полиморфизм р (по критерию Log-rank)
5-летняя ОВ 5-летняя БРВ
ФНО-а rs673 0,145 0,161
ИЛ-10 rs1800872 А/А+А/С против C/C 0,081 0,034
ИЛ-6 rs1800795 G/G против G/C+ C/C 0,038 0,067
Обсуждение
В последние годы большое значение придается роли цитокинов в патогенезе гемобластозов. Повышение концентрации ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-а и других цитокинов в сыворотке крови больных лимфомами свидетельствует о роли иммунной стимуляции в опухолевой прогрессии лимфом [20, 21]. Разрабатываются вопросы связи дисбаланса в системе цитокинов с опухолевой прогрессией и прогнозом НХЛ. Содержание ИЛ-6, ИЛ-10, ФНО-а периферической крови больных - активно изучаемые при химиотерапии прогностические маркеры диффузной В-ККЛ
1,0
0,8
л
Б
о г
<D Я
m s S л
m
0,6-
0,4
0,2-
Генотип С/С
Log rank p=0,034
Генотипы A/A и А/С
'"'""-гН-п
L->H+-l-n
L|----h
47,6%
12,5%
10
20 60 60 Месяцы
60 60
1,0
0,8
§ 0,6
аз л
0
1 0,4 л
m
0,2
Генотип G/G
4-И—-
U—,
4-4---j
66,7% i
Генотипы G/С и С/С
Log rank p=0,038
10
20 60 60 60 60 Месяцы
Выживаемость в группе больных диффузной В-ККЛ.
а - безрецидивная выживаемость в зависимости от генотипа
ге1800872 гена ИЛ-10; б - общая выживаемость в зависимости от генотипа ге1800795 гена
ИЛ-6.
Таблица 6
Анализ предикторов общей и безрецидивной выживаемости больных диффузной В-ККЛ методом регрессии Кокса
Предиктор Общая выживаемость Безрецидивная выживаемость
Р отношение рисков 95% ДИ Р отношение рисков 95% ДИ
Унивариантный анализ:
Пол 0,64 0,89 0,52-1,51 0,85 0,95 0,57-1,58
Возраст 0,75 1,08 0,64-1,9 0,33 1,29 0,77-2,14
МПИ > 3 0,002 1,55 1,18-2,05 0,001 1,56 1,20-1,04
В-симптомы 0,89 0,96 0,55-1,67 0,82 1,06 0,62-1,83
Генотип C/C rs1800872 0,12 1,07 0,98-1,16 0,05 1,08 1,02-1,16
Генотипы G/C+ C/C rs1800795 0,99 1,00 0,93-1,07 0,64 1,01 0,95-1,08
Экстранодальные поражения не менее 2 0,06 1,69 0,97-2,95 0,01 1,96 1,14-3,36
Размер опухолевого очага более 5 см 0,34 1,71 0,57-5,08 0,96 1,02 0,43-2,43
Статус по ECOG 2 и более 0,01 2,61 1,45-4,67 0,001 2,73 1,53-2,19
Поражение костного мозга 0,44 2,61 1,46-4,67 0,30 1,31 0,78-2,19
Стадия по Ann Arbor III-IV 0,01 2,95 1,26-6,89 0,007 3,17 1,36-7,39
Повышение концентрации ЛДГ в сыворотке крови 0,25 1,52 0,75-3,09 0,33 1,39 0,72-2,64
Мультивариантный анализ:
Пол 0,78 0,91 0,46- 1,78 0,75 0,91 0,48 1,71
Возраст 0,40 0,74 0,38- 1,48 0,76 0,91 0,47 1,73
МПИ 3 и более 0,001 1,94 1,33- 2,86 0,002 1,76 1,23 2,51
В-симптомы 0,20 0,65 0,34- 1,26 0,52 0,81 0,43 1,53
Генотип C/C rs1800872 0,02 1,11 1,01- -1,22 0,01 1,01 1,01 -1,21
Генотипы 0,07 1,01 0,92- -1,07 0,12 1,84 0,94 2,08
G/С + С/С ге1800795_
Примечание. Подчеркиванием выделены результаты, имеющие статистическую значимость.
[22, 23]. Известно также, что продукция данных ци-токинов находится под влиянием генетического полиморфизма [24].
т^1800872 гена ИЛ-10 и эффективность Я-СИОР терапии диффузной В-ККЛ
В литературе обсуждается потенциальное прогностическое значение концентрации ИЛ-10 в сыворотке крови у больных диффузной В-ККЛ. Предыдущие исследования показали, что высокая концентрация ИЛ-10 в сыворотке крови больных коррелировала с более агрессивным течением заболевания, продвинутыми стадиями заболевания, неблагоприятным прогнозом по индексу МПИ, повышением концентрации ЛДГ и Р2-микроглобулина в сыворотке крови больных [20, 21]. Поскольку ИЛ-10 регулирует экспрессию В^-2 в лимфомных клетках, считается, что ингиби-рование выработки ИЛ-10 под действием ритуксима-ба может негативно влиять на экспрессию В^-2 и способствовать большему эффекту лечения [25, 26].
Известны однонуклеотидные полиморфизмы в промоторе гена ИЛ-10, в том числе ге!800872, кото-
рые могут влиять на уровень продукции ИЛ-10 [27, 28]. Аллель А rs1800872 гена ИЛ-10 ассоциирован со сниженным содержанием цитокина в сыворотке крови обследованных.
E. Lech-Maranda и соавт. [15] показали выраженную корреляцию rs1800872 гена ИЛ-10 с беспрогрессивной и ОВ больных диффузной В-ККЛ, получавших лечение по протоколу CHOP. Вместе с тем значение данного полиморфизма при R-CHOP-терапии лимфом практически не изучено.
В проведенном нами исследовании получены данные о возможном предиктивном значении при R-CHOP-терапии диффузной В-ККЛ полиморфизма rs1800872 гена ИЛ-10, подтвержденные анализом как частоты ремиссии, так и выживаемости больных диффузной В-ККЛ. В частности, в мультивари-антном анализе методом регрессии Кокса генотип rs1800872 гена ИЛ-10 наряду с МПИ являлся независимым предиктором как ОВ, так и БРВ больных диффузной В-ККЛ, получающих терапию R-CHOP (см. табл. 6).
rs673 гена ФНО-а и эффективность R-CHOP-терапии диффузной В-ККЛ
O. Tarabar и соавт. [29] на относительно небольшой выборке из 64 больных получили данные о большей чувствительности к терапии R-CHOP носителей генотипа G/G rs673 гена ФНО-a, чем у больных, имеющих генотип A/G или A/A. Аллель А полиморфизма rs673 гена ФНО-а ассоциирован с более высокими концентрациями и индуцированной экспрессией ФНО-а. Вместе с тем показано, что высокая концентрация ФНО-а в опухолевой ткани и плазме крови больных лимфомами может снижать чувствительность клеток к химиопрепаратам и приводить к формированию фенотипа лекарственной резистентности опухоли [30]. В связи с этими данными, мы выполнили генотипирование rs673 гена ФНО-а в основной группе.
В проведенном исследовании данных о преди-ктивном значении rs673 гена ФНО-а при терапии R-CHOP больных диффузной В-ККЛ не получено (см. табл. 4 и 5). Следует отметить большую мощность данного исследования (106 пациентов), чем у O. Tarabar и соавт. (64 больных) [29]. Кроме того, полученные результаты согласуются с данными O. Yri и соавт. [31], которые изучали ассоциацию эффективности терапии больных диффузной В-ККЛ с полиморфизмом rs1800629 гена ФНО-а, находящегося в одной группе сцепления с rs673. Было показано, что данный маркер значим при терапии по протоколу СНОР. Однако в случае, если больной получил хотя бы одну дозу ритуксимаба, исход заболевания не зависел от генотипа больного по данному маркеру.
rs1800795 гена ИЛ-6 и эффективность R-CHOP-терапии диффузной В-ККЛ
Доказано, что высокие концентрации ИЛ-6 необходимы для выживания опухолевых лимфоцитов [32]. В работе M. Giachelia и соавт. [33] высокая концентрация ИЛ-6 в плазме крови больных диффузной В-ККЛ коррелировала с неблагоприятными группами прогноза, согласно МПИ, а также являлась независимым предиктором ухудшения беспрогрес-
сивной (р = 0,007) и общей выживаемости (р = 0,02) пациентов.
Недавно были опубликованы [34] результаты исследования одного из маркеров (rs1800796) гена ИЛ-6, свидетельствующие о наличии выраженной ассоциации его с риском смерти, рецидива и возникновением вторых опухолей у больных НХЛ (HR = 0,39; 95%CI 0,22-0,71).
Основываясь на этих данных, мы сделали анализ возможного предиктивного значения rs1800795 гена ИЛ-6 при R-CHOP-терапии диффузной В-ККЛ. Фе-нотипическим проявлением данного полиморфизма является повышение концентрации ИЛ-6 в крови у носителей редкого аллеля С.
Значимых различий в ЧР и БРВ у больных диффузной В-ККЛ, получающих терапию по протоколу R-CHOP и имеющих различные генотипы rs1800795 гена ИЛ-6, не найдено (см. табл. 4 и 5). Вместе с тем получены данные о значимом ухудшении ОВ больных с генотипами G/С и C/C (43,5%) в сравнении с больными имеющими генотип G/G (66,7%; р = 0,038).
Таким образом, эффект полиморфизмов на фенотип может меняться в зависимости от типа ткани, этнической принадлежности популяции, варианта терапевтического воздействия [35]. В представленной работе на выборке больных диффузной В-ККЛ г. Новосибирска проведена валидация ассоциации с эффективностью терапии R-CHOP трех описанных ранее функционально значимых кандидатных маркеров: rs1800872 гена ИЛ-10, rs673 гена ФНО-а, rs1800795 гена ИЛ-6. Получены данные о возможном предиктивном значении rs1800872 гена ИЛ-10, а также rs1800795 гена ИЛ-6, подтвержденные анализом кривых выживаемости пациентов методом Каплана-Майера. Методом регрессии Кокса показано, что генотип rs1800872 может являться независимым предиктором как ОВ, так и БРВ больных диффузной В-ККЛ. Гипотеза об ассоциации rs673 гена ФНО-а с эффективностью R-CHOP при диффузной В-ККЛ в данном исследовании подтверждения не получила.
ЛИТЕРАТУРА
1. Sabattini E., Bacci F., Sagramoso C., Pileri S.A. WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues in 2008: an overview. Pathologica. 2010; 102(3): 83-7.
2. Sehn L.H., Gascoyne R.D. Diffuse large B-cell lymphoma: optimizing outc(ome in the context of clinical and biologic heterogeneity. Blood. 2015; 125(1): 22-32.
3. Coiffier B., Thieblemont C., Van Den Neste E., Lepeu G., Plantier I., Castaigne S., et al. Long-term outcome of patients in the LNH-98.5 trial, the first randomized study comparing rituximab-CHOP to standard CHOP chemotherapy in DLBCL patients: a study by the Grouped'Etudes des Lymphomes de l'Adulte. Blood. 2010; 116(12): 2040-5.
4. Gisselbrecht C., Glass B., Mounier N., Singh Gill D., Linch
D.C., Trneny M., et al. Salvage regimens with autologous transplantation for relapsed large B-cell lymphoma in the ritux-imab era. J. Clin. Oncol. 2010; 28(27): 4184-90. doi: 10.1200/ JC0.2010.28.1618.
5. Campo E., Swerdlow S.H., Harris N.L., Pileri S., Stein H., Jaffe
E.S. The 2008 WHO classification of lymphoid neoplasms and beyond: evolving concepts and practical applications. Blood.
2011; 117(19): 5019-32.
6. Wang W., Hu S., Lu X., Young K.H., Medeiros L.J. Triple-hit B-cell lymphoma with MYC, BCL-2 and BCL-6 translocations / rearrangements: clinicopathologic features of 11 cases. Am. J. Surg. Pathol. 2015; 39(8): 1132-9. doi: 10.1097/ PAS.0000000000000434.
7. Wright G., Tan B., Rosenwald A., Hurt E.H., WiestnerA., Staudt L.M. A gene expression-based method to diagnose clinically distinct subgroups of diffuse large B cell lymphoma. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003; 100(17): 9991-6.
8. Lohr J.G., Stojanov P., Lawrence M.S., Auclair D., Chapuy B.,Sougnez C., et al. Discovery and prioritization of somatic mutations in diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) by whole-exome sequencing. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2012; 109(10): 3879-84.
9. Li Y., Gordon M.W., Xu-Monette Z.Y., Visco C., Tzankov A., Zou D., et al. Single nucleotide variation in the TP53 39 untranslated region in diffuse large B-cell lymphoma treated with ritux-imab-CHOP: a report from the International DLBCL Rituximab-CHOP Consortium Program. Blood. 2013; 121(22): 4529-40.
10. Pasqualucci L., Trifonov V., Fabbri G., Ma J., Rossi D., Chiaren-za A., et al. Analysis of the coding genome of diffuse largeB-cell lymphoma. Nat. Genet. 2011; 43(9): 830-7.
11. Voropaeva E.N., Voevoda M.I., Pospelova T.I., Maksimov V.N. Prognostic impact of the TP53 rs1625895 polymorphism in DLBCL patients. Br. J. Haematol. 2015; 169(1): 32-5.
12. Rothman N., Skibola C.F., Wang S.S., Morgan G., Lan Q., Smith M.T., et al. Genetic variation in TNF and IL-10 and risk of non-Hodgkin lymphoma: a report from the InterLymph Consortium. Lancet Oncol. 2006; 7(1): 27-38.
13. Wang S.S., Cerhan J.R., Hartge P., Davis S., Cozen W., Severson R.K., et al. Common genetic variants in proinflammatory and other immunoregulatory genes and risk for non-Hodgkin lymphoma. Cancer Res. 2006; 66(19): 9771-80.
14. Juszczynski P., Kalinka E., Bienvenu J., Woszczek G., Borowiec M., Robak T., et al. Human leukocyte antigens class II and tumor necrosis factor genetic polymorphisms are independent predictors of non-Hodgkin lymphoma outcome. Blood. 2002; 100(8): 3037-40.
15. Lech-Maranda E., Baseggio L., Bienvenu J., Charlot C., Berger F., Rigal D., et al. Interleukin-10 gene promoter polymorphisms influence the clinical outcome of diffuse large B-cell lymphoma. Blood. 2004; 103(9): 3529-34.
16. Prochazka V., Papajik T., Gazdova J., Divoka M., Rozmanova S., Faber E., et al. FcyRIIIA receptor genotype does not influence an outcome in patients with follicular lymphoma treated with risk-adapted immunochemotherapy. Neoplasma. 2011; 58(3): 263-70.
17. Prochazka V, Gazdova J., Papajik T. Fc gamma receptor 3a genotype in follicular lymphoma: the end of the story? Reply to "Fc gamma receptor 3a genotype predicts overall survival in follicular lymphoma patients treated on SWOG trials with combined monoclonal antibody plus chemotherapy but not chemotherapy alone". Haematologica 2012; 97(6): 937-942. Haematologica. 2012; 97(11): e45.
18. Persky D.O., Dornan D., Goldman B.H., Braziel R.M., Fisher R.I., LeBlanc M., et al. Fc gamma receptor 3a genotype predicts overall survival in follicular lymphoma patients treated on SWOG trials with combined monoclonal antibody plus chemotherapy but not chemotherapy alone. Haematologica. 2012; 97(6): 937-42.
19. Liu F., Ding H., Jin X., Ding N., Deng L., He Y, et al. FCGR3A 158V/F polymorphism and response to frontline R-CHOP therapy in diffuse large B-cell lymphoma. DNA Cell Biol. 2014; 33(9): 616-23.
20. el-Far M., Fouda M., Yahya R., el-Baz H. Serum IL-10 and IL-6 levels at diagnosis as independent predictors of outcome in non-Hodgkin's lymphoma. J. Physiol. Biochem. 2004; 60(4): 253-8.
21. Aydin F., Yilmaz M., Ozdemir F., Kavgaci H., Yavuz M.N., Ya-vuz A.A. Correlation of serum IL-2, IL-6 and IL-10 levels with international prognostic index in patients with aggressive non-Hodgkin's lymphoma. Am. J. Clin. Oncol. 2002; 25(6): 570-2.
22. Lech-Maranda E., Bienvenu J., Broussais-Guillaumot F., Warzo-cha K., Michallet A.S., Robak T., et al. Plasma TNF-alpha and IL-10 level-based prognostic model predicts outcome of patients with diffuse large B-Cell lymphoma in different risk groups defined by the International Prognostic Index. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 2010; 58(2): 131-41.
23. Giachelia M., Voso M.T., Tisi M.C., Martini M., Bozzoli V., Massini G., et al. Interleukin-6 plasma levels are modulated by a polymorphism in the NF-kB1 gene and are associated with outcome following rituximab-combined chemotherapy in diffuse large B-cell non-Hodgkin lymphoma. Leuk. Lymphoma. 2012; 53(3): 411-6.
24. Bidwell J., Keen L., Gallagher G., Kimberly R., Huizinga T., Mc-Dermott M.F., et al. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases, supplement 1. Genes Immun. 2001; 2(2): 61-70.
25. Alas S., Emmanouilides C., Bonavida B. Inhibition of interleukin 10 by rituximab results in down-regulation of bcl-2 and sensitization of B-cell non-Hodgkin's lymphoma to apoptosis. Clin. Cancer Res. 2001; 7(3): 709-23.
26. Alas S., Bonavida B. Rituximab inactivates signal transducer and activation of transcription 3 (STAT3) activity in B-non-Hodgkin's lymphoma through inhibition of the interleukin 10 autocrine/paracrine loop and results in down-regulation of Bcl-2 and sensitization to cytotoxic drugs. Cancer Res. 2001; 61(13): 5137-44.
27. Ying B., Shi Y., Pan X., Song X., Huang Z., Niu Q., et al. Association of polymorphisms in the human IL-10 and IL-18 genes with rheumatoid arthritis. Mol. Biol. Rep. 2011; 38(1): 379-85.
28. Kube D., Hua T.D., von Bonin F.,Schoof N., Zeynalova S., Kloss M., et al. Effect of interleukin-10 gene polymorphisms on clinical outcome of patients with aggressive non-Hodgkin's lymphoma: an exploratory study. Clin. Cancer Res. 2008; 14: 3777-84.
29. Tarabar O., Cikota-Aleksic B., Tukic L., Milanovic N., Aleksic A., Magic Z. Association of interleukin-10, tumor necrosis factor-a and transforming growth factor-P gene polymorphisms with the outcome of diffuse large B-cell lymphomas. Int. J. Clin. Oncol. 2014; 19(1): 186-92.
О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015
УДК 616.15:614.2]:612.6.05.017.1.08
30. Wang S., Fang Z., Huang Y., Lin Z., Su R. Clinical implications of tumor necrosis factor-а in lymphomas. Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi. 2014; 35(12): 1107-10.
31. Yri O.E., Ekstram P.O., Hilden V., Gaudernack G., Liest0l K., Smeland E.B., et al. Influence of polymorphisms in genes encoding immunoregulatory proteins and metabolizing enzymes on susceptibility and outcome in patients with diffuse large B-cell lymphoma treated with rituximab. Leuk. Lymphoma. 2013; 54(10): 2205-14.
32. Relander T., Johnson N.A., Farinha P., Connors J.M., Sehn L.H., Gascoyne R.D. Prognostic factors in follicular lymphoma. J. Clin. Oncol. 2010; 28(17): 2902-13.
33. Giachelia M., Voso M.T., Tisi M.C., Martini M., Bozzoli V, Massini G. et al. Interleukin-6 plasma levels are modulated by a polymorphism in the NF-kB1 gene and are associated with outcome following rituximab-combined chemotherapy in diffuse large B-cell non-Hodgkin lymphoma. Leuk. Lymphoma. 2012; 53(3): 411-6.
34. Aschebrook-Kilfoy B., Zheng T., Foss F., Ma S., Han X., Lan Q., et al. Polymorphisms in immune function genes and non-Hodg-kin lymphoma survival. J. Cancer Surviv. 2012; 6(1): 102-14. doi: 10.1007/s11764-010-0164-4.
35. Sagne C., Marcel V., Amadou A., Hainaut P., Olivier M., Hall J. A meta-analysis of cancer risk associated with the TP53 intron 3 duplication polymorphism (rs17878362): geographic and tumor-specific effects. Cell Death Dis. 2013; 4: e492. doi: 10.1038/cd-dis.2013.24
Поступила 05.03.15 Received 05.03.15
ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ (HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1) ПОПУЛЯЦИИ РУССКИХ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ
Суслова Т.А.12, Вавилов М.Н.2, Сташкевич Д.С.1, Беляева С.В.12, Хромова Е.Б.12, Евдокимов А.В.1 ,
Горелова А.К.1, Бурмистрова А.Л.1
1ФГБОУ ВПО Челябинский государственный университет, 454021, г. Челябинск; 2ГБУЗ Челябинская областная
станция переливания крови, 454076, г. Челябинск
Резюме. Проведено иммуногенетическое типирование 591 донора ГБУЗ Челябинская областная станция переливания крови, идентифицирующих себя русскими, по 5 генам HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1 на базовом разрешении. Был использован метод полимеразной цепной реакции с сиквенс-специфическими праймерами (SSP-PCR) со стандартными наборами ("Protrans", Германия). С помощью стандартной иммуногенетической программы Арлекин рассчитаны частоты генов (GF), частоты двух- и пятилокусных гаплотипов HLA (HF), величины неравновесного сцепления (D') двух-локусных гаплотипов. Показаны наиболее характерные для русских Челябинской области аллельные семейства генов (А*01,*02,*03; В*07, В*44, В*35; С*03,*04,*07,*12; DRB1*01, DRB1*15, DRB1*13, DRB1*07; DQB1*02,*03,*05,*06) и гаплотипов A*01-B*08-C*07-DRB1*03-DQB1*02 (HF 4,06), A*03-B*07-C*07-DRB1*15-DQB1*06 (HF 3,3), A*03-B*35-C*04-DRB1 *01 -DQB1 *05 (HF 2,88), A*02-B*13-C*06-DRB1*07-DQB1*02 (HF 1,61). Показаны наиболее сцепленные двухлокусные гаплотипы аллельных семейств генов В*-С* и DRB1*-DRQ1*. На основе расчета генетических расстояний (по Нею) по локусам HLA-A, HLA-B, HLA-DRB1, с использованием многомерного шкалирования, представлено расположение 56 популяций, включая данные по популяциям Челябинской области. Полученные закономерности могут быть использованы в практической работе для создания регистра доноров стволовых клеток России. Данные могут быть использованы как контрольная группа для проведения работ «ассоциация HLA с заболеваниями», использованы специалистами по этногенезу народов.
Ключевые слова: популяционная иммуногенетика; HLA; русская популяция; региональный регистр доноров костного мозга.
Для цитирования: Суслова Т.А., Вавилов М.Н., Сташкевич Д.С., Беляева С.В., Хромова Е.Б., Евдокимов А.В., Горелова А.К., Бурмистрова А.Л. Иммуногенетический профиль (HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1) популяции русских Челябинской области. Гематология и трансфузиология. 2015; 60(3): 28-35.
IMMUNOGENETIC PROFILE (HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DRB1, HLA-DQB1) OF THE RUSSIAN POPULATION
IN CHELYABINSK REGION
Suslova T.A.12, VavilovM.N.2, Stashkevich O.S.', BelyaevaS.V.'2, Khromova E.B.'2, EvdokimovA.V.', Gorelova A.K.1,
Burmistrova A.L.'
'Chelyabinsk State University, 454021 Chelyabinsk, Russia;2Chelyabinsk Regional Blood Transfusion Center, 454076
Chelyabinsk, Russia
