CC BY
8ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧНИЙ РОЗД1Л
УДК 616.301+576.8+618.24
I. А. Воловик1, аспирант, А. В. Борисенко1, д. мед. н., А. П. Левицький2, д. б1ол. н.
1Ки1вський нацюнальний медичний ушверситет îm. О. О. Богомольця 2 Державна установа «1нститут стоматологiï Нацюнально1 академiï медичних наук Украши»
ВПЛИВ ДЕНТАЛЬНОÏ ПАСТИ З ЦИТОФЛАВ1НОМ НА СТАН ПАРОДОНТУ У ЩУР1В З ЗАЛ1ЗОДЕФ1ЦИТНОЮ АНЕМ1СЮ
За експериментально'1 зал1зодефщитно'1 анемИ' знижуеться у Kpoei число еритроцитiв i, особливо, лейко-цитiв, в яснах розвиваеться запалення, дисбiоз та збтьшуеться стутнь атрофИ юстковог тканини пародон-та. Аплiкацiï пасти, яка метить цитофлавт, здтснюють пародонтопротекторний ефект.
Ключов1 слова: зальзодефщитна анемiя, ясна, кров, ферменти, дисбюз, запалення, цитофлавт.
И. А. Воловик1, А. В. Борисенко1, А. П. Левицкий2
1Киевский национальный медицинский университет им. А. А. Богомольца 2 Государственное учреждение «Институт стоматологии Национальной академии медицинских наук Украины»
ВЛИЯНИЕ ДЕНТАЛЬНОЙ ПАСТЫ НА СОСТОЯНИЕ ПАРОД ОНТА У КРЫС С ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОЙ АНЕМИЕЙ
При экспериментальной железодефицитной анемии снижается в крови число эритроцитов и, особенно, лейкоцитов, в десне развивается воспаление, дисбиоз и повышается степень атрофии костной ткани паро-донта. Аппликации пасты, содержащей цитофлавин, оказывают пародонтопротекторный эффект.
Ключевые слова: железодефицитная анемия, десна, кровь, ферменты, дисбиоз, воспаление, цитофлавин.
I. A. Volovik1, A. V. Borisenko1, A. P. Levitsky2
1 Kiev National Medical University named after А. А. Bogomolets 2 State Establishment «The Institute of Stomatology of the National academy of medical science of Ukraine»
THE INFLUENCE OF DENTAL PASTE UPON THE STATE OF PERIODONTIUM IN RATS WITH ASIDEROTIC ANEMIA
The aim. To determine periodontoprotective effect of the dental paste "Cytoflavin" at the experimental asiderotic anemia (AsAn).
The materials and methods. AsAn was caused in rats by polysynthetic diet, without salts of iron. Dental paste "Cytoflavin" was made of white clay adding cytoflavin (45%), chlorhexidine and metronidazole by 5.5% each. The applications of the paste were carried out dosed at 0.5 g/kg during 21 days. The contents of hemoglobin, erythrocytes, leucocytes and leukogram were estimated in rats' blood. The contents of lactic acid and pyruvic acid, MDA and activity of urease, lysozyme, elastase and catalase were determined in gum homogenate. The degree of atrophy of alveolar appendage was evaluated at maxillo-dental preparation.
The findings. The shortening of erythrocytes in number (by 1/3) in blood was found. The applications of paste increased the number of erythrocytes, normalized the contents of lactic and pyruvic acids in gum. In rats with AsAn activity of urease and the degree of dysbiosis, which decreased considerably under the influence of paste application, grew in gum. In rats with AsAn the level of inflammation markers (MDA, elastase) and degree ofperiodontium atrophy grew, and then got back to the norm after application of the paste.
The conclusion. The paste, containing cytoflavin, displays periodontoprotective effect.
Key words: asiderotic anemia, gum, blood, enzymes, dysbiosis, inflammation, cytoflavin.
© Воловик I. А., Борисенко А. В., Левицький А. П., 2016.
Результатом з^зодефицитно! анеми (ЗДА) е гшоксш, на тлi яко! розвиваються патологiчнi процеси в багатьох тканинах, в тому чи^ i в па-родонтi [1-4]. Для профилактики патологiчних ускладнень гшокси застосовують антигiпоксанти [2-4] та антиоксиданти [5]. Одним iз найбiльш ефективних антигшоксашлв виявився мексакор (сполуки бурштиново! кислоти з похщним шри-дину) [4].
Останшм часом з'явилась нова композищя «Цитофлавш» [6], до складу яко! входять бурш-тинова кислота, шкотинамщ (вiтамiн РР), рибо-флавiн (вггамш В2), рибоксин (iнозин). Такий комплекс забезпечуе високий рiвень тканинного дихання, активуючи окисно-вiдновнi процеси та цикл Кребса.
Мета нашого до^дження. Визначення па-родонтопротекторно! ди циклофлавiну у формi
дентально! пасти в умовах експериментально! залiзодефщитно! анеми.
Матер1али i методи досл1дження. Дослiди було проведено на 21 бшому щурi лшп Вiстар (самицi, 4 мiсяцi, жива маса 198±12 г), яких було подшено на 3 рiвних групи: 1-а - iнтактний контроль, 2-а i 3-я - отримувала залiзодефiцитний комбiкорм, склад якого приведено в таблиц 1, i який повшстю вiдповiдаe рецептурi [7], за винят-ком того, що в мшеральнш сумiшi вiдсутнi солi залiза. Щурiв 3-о! групи з першого дня дослiду пiддавали обробцi дентальною пастою «Цитофлавш» шляхом щоденних аплiкацiй на ясна 0,5 мл пасти такого складу: цитофлавш - 40 г, хлор-гексидин i метронiдазол - по 5 г на основi бшо! глiни (приблизно 40 г). Використовували цитофлавш виробництва ТОВ «НТФФ «Полисан» (РФ, р. № 003135/01 ид 21.12.2008 р.).
Таблиця 1
Наптсинтетична д1ета (зал130деф1цитний ращон)
№№ пп Назва компоненту Вмкт, г
1 Крохмаль кукурудзяний 610
2 Соевий шрот 150
3 Овальбумш 50
4 Цукор 90
5 Олiя соняшникова або «Оливка» 50
6 Мшеральна сумiш (без зал1за) 40
7 Вггамшна сумш 10
Щурi 2-о! групи (контроль) отримували ап-лшаци «пусто!» пасти (без цитофлавшу). Трива-лiсть дослiду 22 дш.
Евтаназiю тварин здiйснювали шд тюпента-ловим наркозом (20 мг/кг) шляхом тотально! кровотечi iз серця. Об'ектами дослщження були: кров, ясна, зубо-щелепна система.
В кровi дослщжували вмiст гемоглобiну, ю-лькiсть еритроципв, лейкоцитiв, визначали лей-коцитарну формулу [8]. В гомогенат ясен (20 мг
тканини на 1 мл 0,05 М трис-НС1 буферi рН 7,5) визначали вмют молочно! i пiровиноградно! кислот ферментативним методом [9], рiвень малонового дiальдегiду (МДА) [10], активнiсть уреази [11], лiзоциму бактерiолiтичним методом [11], актившсть каталази [10], еластази [10].
В препарат зубо-щелепно! системи визначали стушнь атрофi! альвеолярного вiдростка ниж-ньо! щелепи [12].
Таблиця 2
Вплив пасти «Цитофлавш» на показники кров1 щурт з зал1зодефщитною анем1ею (ЗДА) (M±m, n=7)
№№ пп Групи Гемоглобш, г/л Еритроцити Лейкоцити, х109/л
1 Норма (штактш) 160,0±8,5 6,3±0,2 11,3±2,3
2 ЗДА 133,5±14,6 р>0,05 4,5±1,0 р<0,05 2,6±0,3 р<0,01
3 ЗДА + паста «Цитофлавш» 158,5±6,8 р>0,7; р1>0,05 5,2±0,7 р>0,05; р!>0,3 2,6±1,1 р<0,01; р!=1,0
npuMimKa: р - в порiвняннi з гр. 1; р] - в порiвняннi з с гр. 2.
За сшввщношенням вщносних активностей уреази i лiзоцима розраховували ступiнь дисбю-зу за Левицьким [13], а за сшввщношенням акти-вност каталази i вмiсту МДА розраховували ан-тиоксидантно-прооксидантний iндекс АП1 [10].
Результати дослiдiв пiддавали статобробщ стандартними методами [14].
Результати та Их обговорення. В таблищ 2 представлено результати визначення в кровi вмь
сту гемоглобiна, еритроцитiв та лейкоцшгв. Видно, що у щурiв, якi отримували залiзодефщит-ний ращон, знижуеться вмiст гемоглобiну (однак р>0,05), достовiрно знижуеться число еритроци-тiв (на 28,6 %) особливо, кiлькiсть лейкоцитiв (в 4,3 разiв). Застосування пасти «Цитофлавш» нормалiзовало вмiст гемоглобiну, дещо пщви-щило число еритроцитiв (на 15,6 %) i зовсiм не вплинуло на вмют лейкоцитiв.
Таблиця 3
Вплив пасти «Цитофлавш» на лейкоцитарну формулу кровi щурiв з залiзодефiцитною анемieю
(ЗДА) (M±m, п=7)
Гр. 1 Гр. 2 Гр. 3
Показники Норма (штактш) ЗДА ЗДА + паста «Цитофлавш»
Нейтрофши (Н), % 23,3±6,0 12,8±2,4 12,1±3,0
р<0,05 р>0,05; р1>0,5
Лiмфоцити (Л), % 71,8±8,4 83,0±2,9 83,0±3,9
р>0,05 р>0,05; р1=1,0
Моноцити, % 2,5±0,9 1,0±0,2 2,5±0,5
р<0,05 р=1,0; р1<0,05
Еозинофши, % 5,5±1,4 3,3±0,8 2,3±0,9
р>0,05 р<0,05; р1>0,3
Лимфоцитарнш iндекс (Л/Н) 3,1±0,4 6,5±0,8 6,9±0,9
р<0,05 р<0,05; р1>0,3
Примiтка : див. табл. 2.
В таблищ 3 представлено результати визначення лейкоцитарно! формули, з яко! видно, що у щурiв з ЗДА майже вдвiчi знижуеться доля нейт-рофiлiв, в 2,5 рази знижуеться вмют моноцшгв i в 1,7 разiв знижуеться доля еозинофiлiв. Вмют лiмфоцитiв, навпаки, збiльшуеться на 15,6 % (однак р>0,05). Завдяки цьому бшьше, нiж у 2
рази зростае лiмфоцитарний iндекс (сшввщно-шення лiмфоцити/нейтрофiли). Застосування пасти «Цитофлавш» нормалiзовало лише вмiст мо-ноцшгв, але зовсiм не вплинуло на iншi показни-ки лейкоцитарно! формули, за виключенням вм> сту еозинофшв, який знизився в 1,4 разiв.
Таблиця 4
Вплив оральних апл1кац1й пасти «Цитофлавш» на рiвень молочнот i шровиноградно"! кислот в яснах щурiв за умов залiзодефщитнот анемн (ЗДА) (M±m, п=7)
№№ пп Групи Молочна кислота (М), ммоль/кг Провиноградна кислота (П), ммоль/кг М/П
1 1нтактний контроль 15,2±1,9 0,94±0,17 16,2±1,1
2 ЗДА 11,0±0,7 р<0,05 1,40±0,23 р>0,05 7,8±0,9 р<0,01
3 ЗДА + паста «Цитофлавш» 17,8±3,4 р>0,3; р1<0,05 1,06±0,17 р>0,4; р1>0,05 16,8±1,2 р>0,4; р1<0,001
В таблицi 4 показано змши у вмiстi молочно! та шровиноградно! кислот в яснах щурiв, якi отримували залiзодефiцитний рацiон. Видно, що у щурiв з ЗДА знижуеться вмют молочно! кисло-ти (на 27,6 %) i збшьшуеться вмiст шровиногра-дно! (на 48,9 %), що дае зниження бшьше, шж у 2 рази сшввщношення лактат/пiруват. Аплiкацi!'
пасти «Цитофлавiн» нормалiзують вмiст молочно! i шровиноградно! кислот, а також сшввщно-шення лакткт/пiруват, що свiдчить про нормал> зацiю енергетичного обмiну пiд впливом бюлоп-чно активних речовин «Цитофлавiну».
В таблицi 5 представлено результати визначення в яснах активносп уреази, яка е маркером
мшробного обаменшня. У щурiв з ЗДА на 51,9 % зростае активнiсть уреази, що свiдчить про суттеве збiльшення числа мiкробiв в яснах. Апл> кацп пасти знижують активнiсть уреази в 2,5 ра-зiв (навiть в 1,7 разiв нижче нiж у штактних тва-
рин). Однак активнють лiзоциму в яснах змшю-еться мало.
Розрахована стутнь дисбiозу в яснах щурiв з ЗДА дещо збiльшуеться, а пiд впливом аплшацш пасти «Цитофлавш» знижуеться в 2,2 разiв.
Таблиця 5
Вплив оральних аплiкацiй пасти «Цитофлавш» на активнють уреази, лiзоцима та ступiнь дисбюзу в яснах щурiв за умов залiзодефщитноí анемп (ЗДА) (М±т, п=7)
№№ пп Групи Уреаза, мк-кат/кг Л1зоцим, од/кг Ступшь дисбюзу
1 1нтактний контроль 5,2±0,3 191±23 1,00±0,16
2 ЗДА 7,9±1,3 р<0,05 194±16 р>0,6 1,49±0,20 р>0,05
3 ЗДА + паста «Цитофлавш» 3,1±0,4 р<0,01; р1<0,01 173±17 р>0,3; р1>0,3 0,67±0,18 р>0,05; р1<0,05
Пр им i тка : див. табл. 2.
Таблиця 6
Вплив оральних аплшацш пасти «Цитофлавш» на р1вень маркер1в запалення _в яснах щур1в за умов зал1зодефщитно1 анемií (ЗДА) (М±т, п=7)_
№№ пп Групи МДА, ммоль/кг Еластаза, мк-кат/кг
1 1нтактний контроль 18,0±2,0 33,2±2,1
2 ЗДА 16,8±0,5 р>0,3 42,5±2,6 р<0,05
3 ЗДА + паста «Цитофлавш» 13,4±0,5 р<0,05; р1<0,05 40,3±1,4 р<0,05; р!>0,3
Таблиця 7
Вплив оральних аплжацш пасти «Цитофлавш» на актившсть каталази i iндекс АП1 в яснах щурiв за умов залiзодефщитнот анемп (ЗДА) (М±т, п=7)
№№ пп Групи Каталаза, мкат/кг АП1
1 1нтактний контроль 7,0±0,1 3,9±0,2
2 ЗДА 6,2±0,5 р<0,05 3,7±0,1 р>0,3
3 ЗДА + паста «Цитофлавш» 6,7±0,2 р>0,05; р1>0,05 5,0±0,3 р<0,05; р1<0,05
П р и м i тка : див. табл. 2. 28 -
26
24
22
20
*
Рис. Вплив пасти «Цитофлафш» на ступшь атрофп альвеолярного вщростка нижньо1 щелепи щур1в з затзодефщитною анем1ею (*- р<0,05 в пор1внянт з гр. 1; **- р< 0,05 в пор1внянш з гр. 2)
1 гр.- контроль
2 гр.- ЗДА
3 гр.- ЗДА+паста
групи
В таблиц 6 представлено результати визна-чення в яснах рiвня маркерiв запалення - МДА i еластази. Видно, що рiвень МДА мало змшюеть-ся при ЗДА, однак суттево знижуеться шсля ап-лiкацiй пасти. Активнiсть еластази достовiрно збiльшуеться у щурiв в умовах ЗДА i майже не змшюеться пiсля аплiкацiй пасти.
В таблищ 7 показана актившсть каталази та iндекс АП1. Видно, що у щурiв в умовах ЗДА знижуеться актившсть каталази, а застосування пасти «Цитофлавш» нормалiзуе рiвень каталази i значно (на 35 %) збшьшуе iндекс АП1.
На рисунку показано, що аплшаци на ясна пасти «Цитофлавш» значно знижуе стушнь ат-рофи альвеолярного вiдростка нижньо! щелепи, що свiдчить про пародонтопротекторну ефекти-внiсть дано1 пасти.
Таким чином, проведенш дослiдження показали, що стан гшокси, який виникае при утри-маннi тварин на залiзодефiцитному рацiонi, ви-кликае серйозш змiни в показниках кровi i паро-донта, якi свiдчать про розвиток дисбюзу, запалення i атрофи пародонта. Оральнi аплшаци пасти «Цитофлавш» хоча i мало впливають на стан кровi, однак практично нормалiзують стан пародонта. Це е тдставою для широкого застосування «Цитофлавiну» в стоматологи.
Список лтератури
1. Лукьянова Л. Д. Современные проблемы адаптации к гипоксии / Л. Д. Лукьянова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2011. - № 1. - С. 3-19.
2. Влияние антиоксидантов на морфологическую структуру внутренних органов крыс при острой гипоксии / Т. Т. Накусов, Т. Х. Шортанова, И. Я. Конь [и др.] // Вопросы питания. - 2005. - т. 74, № 5. - С. 22-23.
3. Стан [ способи фармаколопчно! корекцп киснеза-лежних процес1в у тканинах пародонта при тривалому 1м-мобЫзацшному стреа / Г. В. Опанасенко, Л. В. Братусь, Б.
Л. Гавенаускас [та ш.] // Ф1зюлопчний журнал. - 2013. - т. 59, № 1. - С. 17-24.
4. Нжолшин А. К. Застосування антигшоксанга у комплекснш терапи генерал1зованого пародонтиту у пащен-тав з1 стабшьною стенокард1ею напруги / А. К. Нжолшин, О. М. Бойченко // Актуальш проблеми сучасно1 медицини: Вюник Укра1нсько1 медично1 стоматолог1чно1 академи. -2014. - т. 14, № 1. - С. 18-21.
5. Эритроциты и лейкоциты в реализации связи между перекисным окислением липидов и гемостазом / А. Ш. Бышевский, С. Л. Галян, И. В. Ральченко [и др.] // Биомедицинская химия. - 2006. - т. 52, № 4. - С. 370-377.
6. Цитофлавин (Су1оАаут). Инструкция по применению препарата. Регистрационный номер: Р №003135/01 от 21.11.2008 / ООО «НТФФ Полисан», РФ, С.-Петербург.
7. Эггум Б. Методы оценки использования белка животными / Б. Эггум. - М.: Колос, 1977. - 189 с.
8. Базарнова М. А. Клиническое исследование крови / М. А. Базарнова, Т. Л. Сакун. - В кн.: Руководство по клинической лабораторной диагностике. - Ч. 2. - К.: Вища школа, 1982. - С. 35-52.
9. Камышников В. С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. Справочник / В. С. Камышников. -Минск: Интерпрессервис, 2002. - С. 102-105.
10. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: методические рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.] - Одесса: КП ОГТ, 2010. - 16 с.
11. Ферментативный метод определения дисбиоза полости рта для скрининга про- и пребиотиков: метод. рекомендации / А. П. Левицкий, О. А. Макаренко, И. А. Сели-ванская [и др.]. - К.: ГФЦ МЗУ, 2007. - 22 с.
12. Николаева А. В. Экспериментальные дистрофии тканей пародонта / А. В. Николаева, Е. С. Розовская // БЭ-БИМ. - 1965. - т. 60, № 7. - С. 46-49.
13. Патент на корисну модель, Украша 43140, МПК (2009) 00 Ш 33/48. Споиб оцшки ступеня дисбюзу (дисбак-терюзу) оргашв [ тканин / Левицький А.П., Деньга О. В., Сел1ванська 1.О. [та ш.]. - Опубл. 10.08.2009, Бюл. № 15.
14. Трухачева Н, В. Математическая статистика в медико-биологических исследованиях с применением пакета В1аЙ8Йса // Н. В. Трухачева. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. -379 с.
Надшшла 20.05.16
