CC BY
14ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧШ ПИТАННЯ БЮЛОГП ТА МЕДИЦИНИ
УДК 616.153:588.152:616.633:612.31|UUH DOI http://dx.doi.org/10.5281/zenodo.1307442
Ю. З. Лабуш1, А. В. Марков1, В. М. Зубачик1, А. П. Левицький2
МУКОЗОПРОТЕКТОРНА Д1Я Л1ЗОЦИМА-ФОРТЕ У ЩУР1В, ЯК1 ОТРИМУВАЛИ ПЕРОКСИДНУ СОНЯШНИКОВУ ОЛ1Ю
1 Львiвський нацiональний медичний унiверситет iM. Данила Галицького, м. Львiв 2 Державна установа «1нститут стоматологи та щелепно-лицево! xipyprii' Нацюнально! академи медичних наук Украши», м. Одеса
Summary. Labush Iu. Z., Markov A. V., Zubachik V. М., Levitsky A. P. MUCOSOPROTECTIVE EFFECT OF LYSOZYME-FORTE IN RATS THAT RECEIVED SUPER-OXIDIZED SUNFLOWER OIL - Lviv National Medical University named after Danylo Galytskij; State Establishment «The Institute of Stomatology and Maxillo-Facial Surgery of the National Academy of Medical Science of Ukraine»; e-mail: flavan.ua@gmail.com. The objective: To determine the therapeutic and prophylactic effect of the new complex antidysbiotic drug Lysozyme -forte with the introduction of the body super-oxidized of sunflower oil (SOSO). Materials and methods: As a drug of comparison, the flavans-containing Quertulin was used, which, like Lysozyme -forte, was administered with food at a dose of 300 mg/kg daily, starting from the 31st day of the experiment. SOSO was administered with feed at a dose of 1 ml/rat for 2,5 month. The activity of elastase, urease, lysozyme, catalase and malonic dialdehyde (MDA) were determined in the homogenate of the cheek mucosa. The ratio of catalase and MDA activity was used to calculate the API index, and the ratio of relative urease and lysozyme activity was used to calculate the degree of dysbiosis. Results: In rats received for a long time SOSO, develop in oral mucosa dysbiosis phenomenon, inflammation and decreased activity of the antioxidant system. Lysozyme-forte all restored, surpassing in these indicators Quertulin. Conclusion: Lysozyme-forte has mucosoprotective effect when consumed super-oxidized oil.
Key words: super-oxidized oil, the mucous membrane of the mouth, dysbiosis, inflammation, Lysozyme, antioxidant protective.
Реферат. Лабуш Ю. З., Марков А. В., Зубачик В. М., Левицкий А. П. МУКОЗОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЛИЗОЦИМА-ФОРТЕ У КРЫС, КОТОРЫЕ ПОЛУЧАЛИ ПЕРЕОКИСЛЕННОЕ ПОДСОЛНЕЧНОЕ МАСЛО. У крыс, которые длительное время получали с кормом переокисленное подсолнечное масло, развивается стоматит, дисбиоз и снижается уровень антиоксидантной защиты и неспецифического иммунитета. Дополнительное введение с кормом антидисбиотического средства лизоцим-форте оказывает мукозопротекторное действие, причем по антидисбиотической и противовоспалительной активности он превышает действие препарата сравнения квертулина.
Ключевые слова: переокисленное масло, слизистая оболочка полости рта, дисбиоз, воспаление, лизоцим, антиоксидантная защита.
Реферат. Лабуш Ю. З., Марков А. В., Зубачик В. М., Левицький А. П. МУКОЗОПРОТЕКТОРНА Д1Я Л1ЗОЦИМА-ФОРТЕ У ЩУР1В, ЯК1 ОТРИМУВАЛИ ПЕРОКСИДНУ СОНЯШНИКОВУ ОЛ1Ю. У щypiв, як тривалий час отримували з кормом пероксидну соняшникову олш, розвиваеться стоматит, дисбюз i знижуеться piвень антиоксидантного захисту i неспецифiчного iмyнiтетy. Додаткове введення з кормом антидисбютичного засобу лiзоцим-фоpте здшснюе мукозопротекторну дш, причому за
© Лабуш Ю. З., Марков А. В., Зубачик В. М., Левицький А. П.
антидисбютичною i антизапальною активнiстю вiн перевищуе дiю препарату порiвняння квертулiну.
Ключовi слова: пероксидна олiя, слизова оболонка порожнини рота, дисбiоз, запалення, лiзоцим, антиоксидантний захист.
Вступ. В наших попередшх роботах [1, 2] було показано, що споживання пероксидно! соняшниково! оли (ПСО) викликае у щурiв розвиток стоматиту i дисбiозу, яш можна попередити флаванвмiсними гепатопротекторами, зокрема квертулшом [3].
Нами був запропанований комплексний антидисбiотичний засiб лiзоцим-форте, який мiстить яечний лiзоцим, кверцетин, желатин, шулш i цитрат кальцiя [4]. Такий комплекс дозволяе шдсилити i пролонгувати терапевтичну дш лiзоцима. На лiзоцим-форте розроблена нормативна документащя i отримано дозвiл МОЗУ на застосування з профiлактичною метою.
Метою дано! роботи стало дослщження мукозопротекторно! до на слизову оболонку порожнини рота (СОПР) щурiв, як1 отримували ПСО, лiзоцима-форте в порiвняннi з вщомим флаванвмiсним засобом квертулiном [5].
Матерiали i методи досл^ження
Характеристика використаних засобiв представлена в таблицi 1. Обидва препарати виробництва НВА «Одеська бютехнолопя» (Укра!на). Переокиснену соняшникову олш (ПСО) отримували шляхом нагрiвання оли при температурi 110-115 °С на протязi двох годин в присутносп йонiв мiдi [1].
Таблиця 1
Склад i нормативна документацiя на антидисбiотичнi засоби (АДЗ)_
АДЗ Склад ТУ У Гiгiенiчний висновок МОЗУ
1. Препарат порiвняння Квертулiн Лецитин, ^лш, кверцетин, цитрат кальцш 10.8-13903778040:2012 № 05.03.02-06/44464 вад 17.05.2012 р.
2. Новий препарат Лiзоцим-форте лiзоцим, кверцетин, желатин, iнулiн, цитрат кальцш 10.8-37420386004:2016 № 602-123-20-2/5734 вад 12.12.2016 р.
В дослщ було використано 27 бiлих щурiв лши Вiстар (самцi, 7 мiсяцiв, початкова жива маса 238-253 г), яких було подшено на 4 групи: 1-а - контроль (5 щурiв) iнтактнi, 2-а, 3-я i 4-а групи отримували з кормом по 1 мл ПСО щоденно на протязi 2,5 мiсяцiв. Щурi 3-о! групи, починаючи з 31-го дня дослвду, додатково отримували з кормом по 300 мг/кг квертулiну (препарат порiвняння), а щурi 4-о! групи отримували по 300 мг/кг лiзоцим-форте. Щурiв пiддавали евтаназп на 76-й день дослщу пiд тюпенталовим наркозом (20 мг/кг) шляхом тотально! кровотечi iз серця. Вiдсiкали слизову оболонку щоки, в гомогенатi яко! визначали рiвень бiохiмiчних маркерiв запалення [6]: актившсть еластази [7] та вмют малонового дiальдегiду (МДА) [8], актившсть уреази (показник бактерiального обаменшня) [9], лiзоцима (iндикатор стану неспецифiчного iмунiтету) [10], антиоксидантного фермента каталази [11]. За сшввщношенням активностi каталази i вмiсту МДА розраховували антиоксидантно-прооксидантний iндекс АП1 [6], а за сшввщношенням вiдносних активностей уреази i лiзоцима розраховували ступiнь дисбiоза за А. П. Левицьким [12].
Результати дослщв пiддавали стандартнiй статобробцi [13].
Результати та ¡х обговорення
В таблиц 2 представлено результати визначення рiвня маркерiв запалення в СОПР щурiв, як1 отримуавли ПСО i вищезазначенi препарати. З цих даних видно, що споживання пероксидно! соняшниково! оли викликае розвиток стоматиту, про що сввдчить достовiрне шдвищення рiвня еластази i МДА, причому лiзоцим-форте виявився бiльш ефективним за таким показником як еластаза, а квертулш виявився б№ш ефективним за вмютом МДА.
В таблицi 3 представлено результати визначення в СОПР активносп уреази i лiзоцима. З цих даних видно, що у щурiв, яш отримували ПСО, достовiрно зростае актившсть уреази, що сввдчить про зб№шення бактерiального обсiменiння, однак
актившсть лiзоцима достовiрно знижуеться, що сввдчить про зниження рiвня неспецифiчного iмунiтету. Лiзоцим-форте значно знижуе активнiсть уреази (на 43 %), тодi як квертулш суттево не вплинув на стан уреази. Обидва препарати щдвищують активнiсть лiзоцима (в бiльшiй мiрi, лiзоцим-форте).
Таблиця 2
Вплив лiзоцима-форте на рiвень маркерiв запалення в СОПР щурiв, як1 отримували
пероксидну соняшникову олiю (ПСО)
№№ Групи Еластаза, мк-кат/кг МДА, ммоль/кг
1 Контроль 47,2±2,0 35,1±0,7
2 ПСО 60,0±2,0 48,0±1,9
р<0,01 р<0,01
3 ПСО + квертулш 49,9±2,1 36,3±1,6
р>0,3; р1<0,05 р>0,3; р1<0,01
4 ПСО + лiзоцим-форте 43,2±1,2 41,1±1,1
р>0,05; р1<0,01; р2<0,05 р<0,05; р1<0,05; р2<0,05
Примiтки: р - в порiвняннi з гр. 1; р1 - в порiвняннi з гр. 2; р2 - в порiвняннi з гр. 3.
Таблиця 3
Вплив лiзоцима-форте на актившсть уреази i лiзоцима в СОПР щурiв, як1 отримували _пероксидну соняшникову олто (ПСО)_
№№ Групи Уреаза, мк-кат/кг Лiзоцим, од/кг
1 Контроль 0,55±0,05 172±12
2 ПСО 0,70±0,05 125±10
р<0,05 р<0,05
3 ПСО + квертулш 0,66±0,02 140±9
р<0,05; р1>0,3 р<0,05; р:>0,2
4 ПСО + лiзоцим-форте 0,40±0,04 147±8
р<0,05; р1<0,01; р2<0,01 р>0,05; р:>0,05; р2>0,3
Приштки: див. табл. 2.
Розрахована за цими показниками ступiнь дисбюзу СОПР представлена на рисунку, з якого видно, що лiзоцим-форте достовiрно знижуе ступiнь дисбiозу, тодi як квертулш проявив себе в значно меншш мiрi.
2 1
1,5
0,5
групи
*
1
0
1
2
3
4
Рис. Вплив лiзоцима-форте на стутнь дисбiоза в СОПР щурiв, як1 отримували ПСО (1 - контроль, 2 - ПСО, 3 - ПСО + квертулш, 4 - ПСО + лiзоцим-форте) * - р<0,05 в порiвняннi з гр. 1; ** - р<0,05 в порiвняннi з гр. 2
В таблиц 4 представлено результати визначення в СОПР активностi каталази та шдекса АП1. Видно, що у щурiв, як1 отримували ПСО, достовiрно знижуеться активнiсть каталази i майже втричi iндекс АП1. Обидва препарати шдвищують активнiсть каталази та шдекс АП1, однак за цими показниками бiльш ефективним виявився квертулiн.
Таблиця 4
Вплив лiзоцима-форте на активнiсть каталази та шдекс АП1 в СОПР щурiв, як1 _отримували пероксидну соняшникову олто (ПСО)_
№№ Групи Каталаза, мкат/кг АП1, од.
1 Контроль 9,55±0,58 2,72±0,15
2 ПСО 6,88±0,39 1,43±0,16
р<0,05 р<0,01
3 ПСО + квертулш 8,60±0,23 2,37±0,13
р>0,05; р:<0,05 р>0,05; р:<0,01
4 ПСО + лiзоцим-форте 8,01±0,33 1,95±0,14
р<0,05; р:>0,05; р2>0,05 р<0,05; р:<0,05; р2<0,05
Примiтки: див. табл. 2.
Таким чином, на пiдставi отриманих даних можна стверджувати, що лiзоцим-форте володiе антидисбiотичною i протизапальною дiею, перевищуючи за цими показниками препарат порiвняння квертулiн. В той же час лiзоцим-форте поступаеться квертулiну за антиоксидантною дiею.
Враховуючi цi даннi, можна рекомендувати застосування лiзоцима-форте сумiсно з квертулiном для профшактики стоматиту i дисбiозу, як виникають внаслвдок споживання пероксидно! олл.
Висновки
1. Споживання ПСО викликае розвиток стоматиту, дисбiозу та зниження рiвня антиоксидантного захисту.
2. Лiзоцим-форте здiйснюе антидисбiотичну i протизапальну дш на СОПР, однак за антиоксидантною дiею поступаеться квертулiну.
Лiтература:
1. Перекисная модель стоматита / А. П. Левицкий, О. А. Макаренко, В. Н. Почтарь [и др.] // Вюник стоматологi!. - 2005. - № 4. - С. 7-10.
2. Лабуш Ю. З. Розвиток стоматиту у щурiв, яш вживали переокиснену соняшникову олiю / Ю. З. Лабуш // Вюник стоматологi!. - 2018. - № 2. - С. 15-19.
3. Л^вально-профшактична д1я флаванвмiсних антидисбiотичних засобiв на слизову оболонку порожнини рота щурiв, як1 отримували пероксидну соняшникову олш / А. В. Марков, Ю. З. Лабуш, В. М. Зубачик [та ш.] // Фгготерашя. Часопис. - 2018. - № 2. - С. 6569.
4. Профшактика стоматиту i гiнгiвiту з використанням лiзоцима-форте / М. О. Остафшчук, Г. З. Борис, А. I. Фурдичко [та iн.] // Вюник стоматологи. - 2017. - № 2(100). -С. 6-11.
5. Квертулин: витамин Р, пребиотик, гепатопротектор / А. П. Левицкий, О. А. Макаренко, И. А. Селиванская [и др.]. - Одесса: КП ОГТ, 2012. - 20 с.
6. Биохимические маркеры воспаления тканей ротовой полости: методические рекомендации / А. П. Левицкий, О. В. Деньга, О. А. Макаренко [и др.]. - Одесса, 2010. - 16 с.
7. Левицкий А. П. Методы определения активности эластазы и ее ингибиторов / А. П. Левицкий, А. В. Стефанов. - К.: ГфЦ, 2002. - 15 с.
8. Стальная И. Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии (под редакцией Орехович В. Н.). - М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.
9. Гаврикова Л. М. Уреазная активность ротовой жидкости у больных с острой и одонтической инфекцией челюстно-лицевой области / Л. М. Гаврикова, И. Т. Сегень // Стоматология. - 1996. - Спецвыпуск. - С. 49-50.
10. Левицкий А. П. Лизоцим вместо антибиотиков / А. П. Левицкий. - Одесса: КП ОГТ, 2005. - 74 с.
11. Гирин С. В. Модификация метода определения активности каталазы в биологических субстратах / С. В. Гирин // Лабораторная диагностика. - 1999. - № 4. - С. 4546.
12. Патент на корисну модель № 43140. МПК 2009 Патент на корисну модель № 43140. МПК 2009 33/48. Споаб оцшки ступеня дисбюзу (дисбактерюзу) / А. П. Левицький, О. В. Деньга, I. О. Селiвaнськa [та ш.]. - № u 200815092 вщ 26.12.2009; Опубл. 10.08.2009. Бюл. № 15.
13. Трухачева Н. В. Математическая статистика в медико-биологических исследованиях с применением пакета Statistica / Н. В. Трухачева. - М.: ГЭОТАР, 2012. - 379 с.
References
1. Levitsky A.P., Makarenko O.A., Pochtar' V.N. [et al.]. The peroxide model of stomatitis. Visnyk stomatologic. 2005; 4: 7-10.
2. Labush Iu. Z. The development of stomatitis in rats that consumed peroxidе sunflower oil. Visnyk stomatologic. 2018; 2: 15-19.
3. Markov A. V., Labush Iu. Z., Zubachik V. М. [et al.]. Therapeutic and preventive action flavan-containing antidisbiotic means on a mucose membrane of the oral cavity of the rats, received peroxide sunflower oil. Fitoterapija. Chasopys. 2018; 2: 65-69.
4. Ostafiychuk M. A., Boris G. Z., Furdychko A. I. [et al.]. Prophylaxis of stomatitis and gingivitis by use of the lysozyme-forte. Visnyk stomatologic. 2017; 3(100): 6-11.
5. Levitsky A. P., Makarenko O. A., Selivanskaya I. A. [et al.]. Kvertulin. Vitamin P, prebiotik, gepatoprotektor ["Querthulin", Vitamin P, prebiotic, hepatoprotector].Оdеssa, KP OGT, 2012: 20.
6. Levitsky A. P., Denga O. V., Makarenko O. A. [et al.]. Biokhimicheskie markery vospaleniya tkaney rotovoy polosti: metodicheskie rekomendatsii [Biochemical markers of inflammation of oral cavity tissue: method guidelines]. Оdеssa, KP OGT, 2010: 16.
7. Levitsky A. P., Stefanov A. V. Metody opredeleniya aktivnosti elastazy i eye ingibitorov: metodicheskie rekomendatsii [The methods of the determination of the activity of elastase and its inhibitors: method guidelines]. Kiev, GFK, 2002:15.
8. Stalnaya I. D., Garishvili T. G. Metod opredeleniya malonovogo dialdegida s pomoshchyu tiobarbiturovoy kisloty [The method of revelation of malonic dialdehyde with thiobarbituric acid]. Moskva, Meditsina, 1977: 66-68.
9. Gavrikova L. M., Segen I. T. Urease activity of oral liquid in patients with acute odontogenic infection of maxillo-facial part. Stomatologiya. 1996; The extra issue: 49-50.
10. Levitsky A. P. Lizotsym vmesto antibiotikov [Lysozyme instead of antibiotics]. Оdеssa, KP OGT, 2005: 74.
11. Girin S. V. The modification of the method of the determination of catalase activity in biological substrates. Laboratornaya diagnostika. 1999; 4: 45-46.
12. Levitsky A. P., Denga O. V., Selivanskaya I. A. [et al.]. The method of estimation of the degree of dysbiosis (dysbacteriosis) of organs and tissues. Patent of Ukraine 43140. IPC (2009) G01N 33/48. Application number u 200815092. Date of filling: 26.12.2008. Publ.: 10.08.2009. Bul. № 15.
13. Truhacheva N. V. Matematicheskaja statistika v mediko-biologicheskih issledovanijah s primeneniem paketa Statistica [Mathematical Statistics in biomedical research using application package Statistica]. Moskva, GJeOTAR-Media, 2012: 379.
Робота надшшла в редакщю 21.04.2018 року.
Рекомендована до друку на заадант редакцшно! колегй тсля рецензування
