CC BY
28
УДК 619:616.476-022.6-091:615.214.22:636.5.053
ВЛИЯНИЕ ЛИТИЯ КАРБОНАТА НА МОРФОЛОГИЮ
ЛИМФОИДНОГО АППАРАТА ОРГАНОВ ПИЩЕВАРЕНИЯ ЦЫПЛЯТ, ВАКЦИНИРОВАННЫХ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ
Е.А. АЛИСЕЙКО, И.Н. ГРОМОВ УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» г. Витебск, Республика Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 05.01.2011)
Введение. Внимание исследователей разных специальностей привлекают компоненты иммунной системы (красный костный мозг, тимус, миндалины, пейеровы бляшки, одиночные лимфоидные узелки, селезенка и др.). Особого внимания исследователей заслуживают сведения о строении, развитии, становлении органов и систем, обеспечивающих защиту и адаптацию организма при неблагоприятных воздействиях различных факторов эндогенной и экзогенной природы. На современном этапе развития иммунологии важнейшее значение придается органам, участвующим в механизмах возникновения гуморального и клеточного иммунитета, инфекционной иммунологии. Наряду с костным мозгом, тимусом, фабрициевой бурсой, селезенкой значительное место в развитии иммунных реакций занимает лимфоидная ткань, ассоциированная с пищеварительной трубкой [1].
Лимфоидный аппарат желудочно-кишечного тракта птиц включает пищеводную и слепокишечные миндалины, дивертикул Меккеля, пей-еровы бляшки, одиночные лимфоидные узелки и многочисленные скопления диффузной лимфоидной ткани [7, 8]. Здесь под воздействием антигенов, поступающих с кормом, происходит вторичная антиген-зависимая дифференцировка Т- и В-лимфоцитов с появлением имму-нокомпетентных клеток, способных уничтожать чужеродный агент. Таким образом, изучение морфологии различных структур лимфоид-ного аппарата слизистой оболочки пищеварительного тракта птиц позволяет объективно оценить эффективность методов профилактики и лечения незаразных и инфекционных заболеваний.
Цель работы - выяснить влияние лития карбоната на морфологию лимфоидного аппарата органов пищеварения цыплят, вакцинированных против инфекционной бурсальной болезни (ИББ).
Материал и методика исследований. Для изучения органов применяли комплекс общегистологических, морфометрических и имму-номорфологических исследований, совокупность которых позволяет судить о структурных изменениях в лимфоидном аппарате органов пищеварения.
Исследования проведены на 60 цыплятах 5-22-дневного возраста, разделенных на 3 группы по 20 птиц в каждой.
101
Цыплят 1-й и 2-й групп в 8-дневном возрасте перорально иммунизировали против ИББ вирус-вакциной из штамма «КМИЭВ-61» («ТМ», Республика Беларусь).
Птице 1-й группы за 3 дня до и 3 дня после вакцинации применяли лития карбонат в дозе 15 мг/кг массы тела. Дозировку и кратность применения лития карбоната рассчитывали с учетом данных С.Н. Преображенского [6] и Л.А. Муллакаевой [5].
Вакцинированным цыплятам 2-й группы лития карбонат не задавали. Интактная птица 3-й группы служила контролем.
На 3, 7 и 14-й дни после вакцинации по 4-5 птиц из каждой группы убивали для проведения морфологических исследований.
Кусочки органов (тонкий кишечник, дивертикул Меккеля, слепо-кишечные миндалины) фиксировали в жидкости Карнуа, 10%-ном растворе нейтрального формалина.
Зафиксированный материал подвергали уплотнению путем заливки в парафин по общепринятой методике [2]. Обезвоживание и парафи-нирование кусочков органов проводили с помощью автомата для гистологической обработки тканей «MICROM STP 120» (Германия) типа «Карусель». Для заливки кусочков и подготовки парафиновых блоков использовали автоматическую станцию «MICROM EC 350». Гистологические срезы кусочков органов готовили на роторном (маятниковом) микротоме «MICROM HM 340 E».
Для изучения общих структурных изменений срезы окрашивали гематоксилин-эозином [2-4]. Депарафинирование и окрашивание гис-тосрезов проводили с использованием автоматической станции «MICROM HMS 70».
На гистологических срезах тонкого кишечника, дивертикула Мекке-ля и слепокишечных миндалин определяли число и размеры лимфоид-ных узелков. Для объективной оценки характера изменений в органах иммунной системы птиц определяли содержание Т- и В-лимфоцитов, лимфо- и плазмобластов, незрелых и зрелых плазмоцитов, митозов, подсчитывали общее количество клеточных элементов, а также число и размеры лимфоидных узелков. Подсчет клеточных элементов проводили в 50 полях зрения микроскопа (объектив х 90, окуляр х 10, биноку-ляр х 1,5).
Морфометрические исследования проводили с помощью светового микроскопа «МИКМЕД-2». Полученные данные документированы микрофотографированием с использованием цифровой системы считывания и ввода видеоизображения «ДСМ-510», а также программного обеспечения по вводу и предобработке изображения «ScopePhoto».
Цифровые данные обработаны статистически с использованием программы Microsoft Excel 2003.
Результаты исследований и их обсуждение. При исследовании стенки тонкого кишечника цыплят подопытных и контрольной групп во все сроки исследований существенных гистологических изменений со стороны эпителия кишечных ворсинок, общекишечных желез
102
(крипт), структурных компонентов мышечной и серозной оболочек не наблюдалось. В собственном и подслизистом слоях слизистой оболочки тонкого кишечника цыплят выявлялись диффузные скопления плазмобластов, проплазмоцитов и плазмоцитов.
На 7-й день после иммунизации у цыплят 1-й и 2-й групп в стенке тонкого кишечника появлялись единичные лимфоидные узелки. Их число и размеры у птиц подопытных и контрольной групп были примерно одинаковыми. Изучение морфологического состава иммуно-компетентных клеток показало (рис. 1, 2), что количество плазмобла-стов у цыплят 1 -й группы увеличивалось по сравнению с контролем в 2 раза (Р<0,001), а незрелых плазматических клеток - в 1,5 раза (Р<0,05).
Рис. 1. Тонкий кишечник интактного 15-дневного цыпленка. В соединительнотканной основе ворсинок обнаруживаются единичные плазмобласты, проплазмоциты и плазмоциты.
.■*••> " 'V I
5 '¿X*"
» » А! Г*' • 1 ,
Рис. 2 . Тонкий кишечник цыпленка 1-й группы на 7-й день после иммунизации против ИББ. Слизистая оболочка инфильтрирована большим числом лимфо- и плазмобластов, плазмоцитов, микро- и макрофагов.
На 14-й день после вакцинации у подопытных цыплят 1-й группы размеры лимфоидных узелков были в 1,4 раза больше, чем у интакт-ных птиц, однако различия были недостоверными. Применение вакцины без лития карбоната вызывало развитие менее активной бластной реакции в стенке кишечника. У птиц 1-й группы отмечено также достоверное увеличение числа лимфоидных узелков (Р<0,05). Общее количество плазматических клеток у птиц 1-й группы было в 1,9 раза больше, чем в контроле (Р<0,001), а у цыплят 2-й группы - в 1,3 раза (Р<0,05). Таким образом, использование лития карбоната способствует увеличению числа и размеров лимфоидных узелков, а также более активному протеканию плазмоцитарной реакции в стенке тонкого кишечника птиц.
Дивертикул Меккеля цыплят (рудимент желточного мешка) располагался почти посередине тощей кишки в виде полого карманообраз-ного выпячивания. При гистологическом исследовании дивертикула
Меккеля птиц на 3 -й день после вакцинации установлено, что в складках слизистой оболочки дивертикула располагаются скопления диффузной лимфоидной ткани, а также люберкюновы железы. В этот и последующие сроки исследований у цыплят подопытных и контрольной групп существенных изменений со стороны покровного эпителия и люберкюновых желез нами не выявлено. Применение вакцины против ИББ способствовало некоторому повышению количества плазмобластов, проплазмоцитов и плазмоцитов у подопытных птиц по отношению к контролю.
Иммунизация цыплят совместно с лития карбонатом способствовала большему накоплению плазмобластов и проплазмоцитов в слизистой оболочке дивертикула Меккеля.
На 7-й день после иммунизации у цыплят всех групп обнаруживались лимфоидные узелки. Число и размеры последних у птиц 1-й группы были большими, чем у цыплят 2-й и 3-й групп, однако различия были недостоверными.
Содержание плазмобластов и проплазмоцитов у птиц 1-й группы достоверно возрастало по сравнению с контрольными данными соответственно в 2,7, 1,7 и 1,9 раза (рис. 3, 4).
Рис. 3. Слизистая оболочка дивертикула Меккеля 15-дневного цыпленка контрольной группы (в сроки на 7-й день после вакцинации птиц 1 -й и 2-й групп). Умеренная плазмоцитарная реакция.
Рис. 4. Дивертикул Меккеля цыпленка 1-й группы на 7-й день после иммунизации против ИББ. В слизистой оболочке обнаруживаются скопления плазмобластов, незрелых и зрелых плазмоцитов.
На 14-й день после вакцинации размеры лимфоидных узелков в дивертикуле Меккеля у подопытных птиц возрастали до (120,00 ± ±11,24) мкм (против 68,00 ± 5,356 мкм в контроле; Р<0,05). Количество лимфоидных узелков у птиц 1 -й группы было в 2 раза больше по сравнению с контрольными показателями (Р<0,05).
Изучение морфологического состава иммунокомпетентных клеток показало, что у птиц 1-й группы происходило достоверное (Р<0,001) увеличение количества незрелых плазматических клеток в 2 раза по сравнению с контролем.
Итак, иммунизация цыплят против ИББ на фоне использования лития карбоната способствует развитию более активной бласттрансфор-
104
мации и вторичной антигензависимой дифференцировки лимфоцитов в дивертикуле Меккеля по сравнению с применением одной вакцины.
Слепокишечные миндалины цыплят располагались у основания слепых кишок в местах их ветвления в виде парных овальных утолщений. При гистологическом исследовании установлено, что слизистая оболочка миндалин образует множество складок. В них обнаруживаются люберкюновы железы, а также лимфоидная ткань. В цекальных миндалинах цыплят подопытных и контрольной групп во все сроки исследований значимых структурных изменений со стороны покровного и железистого эпителия не наблюдалось.
На 3 -й день после иммунизации лимфоидная ткань была представлена диффузными скоплениями лимфоидных клеток, макро- и микрофагов, а также лимфоидными узелками. Их количество и размеры у птиц 2-й и 3 -й групп были примерно одинаковыми. Иммунизация цыплят совместно с лития карбонатом способствовала увеличению числа и размеров лимфоидных узелков (Р>0,05) по сравнению с контрольной птицей (рис. 5, 6).
Рис. 5. Цекальные миндалины интактного 11 -дневного цыпленка (в сроки на 3-й день после вакцинации птиц 1-й и 2-й групп). Лимфоидная ткань образована диффузными скоплениями клеток, а также единичными лимфоидными узелками.
Рис. 6. Слизистая оболочка слепокишечных миндалин цыпленка 1-й группы на 3-й день после иммунизации против ИББ. Многочисленные лимфоидные узелки крупных размеров.
Достоверных отличий в составе различных типов иммунокомпе-тентных клеток между группами птиц также не выявлено.
К 7-му дню после вакцинации у цыплят 1-й группы число и размеры лимфоидных узелков были в 2,5 - 3,2 раза достоверно большими, чем у птиц 2-й и 3 -й групп. Кроме того, использование лития карбоната способствовало достоверному повышению по сравнению с интакт-ной птицей числа плазмобластов в 1,6 раза, а также плазмоцитов - в 1,7 раза.
На 14-й день после иммунизации у подопытных цыплят обеих групп отмечалось увеличение числа и размеров лимфоидных фолликулов по сравнению с интактной птицей (Р<0,05).
105
Количество плазматических клеток различной степени зрелости у птиц 1-й группы достоверно превышало контрольные показатели в 2,1 раза (рис. 7, 8).
Рис. 7. Слизистая оболочка слепокишечных миндалин 22-дневного
цыпленка контрольной группы (в сроки на 14-й день после вакцинации птиц 1-й и 2-й групп). Между кишечными железами присутствуют единичные макрофаги, лимфоциты, плазмоциты.
Рис. 8. Слепокишечные миндалины цыпленка 1 -й группы на 14-й день после иммунизации против ИББ. Активизация бластной и плазмоцитарной реакций.
Итак, применение лития карбоната способствует увеличению числа и размеров лимфоидных узелков в слепокишечных миндалинах, а также более активному протеканию плазмоцитарной реакции.
Заключение. 1. Пероральная иммунизация цыплят против ИББ вирус-вакциной из штамма «КМИЭВ-61» совместно с лития карбонатом и без него не оказывает существенного влияния на структуру эпителия кишечных ворсинок, общекишечных желез (крипт), мышечной и серозной оболочек в тонком кишечнике, дивертикуле Меккеля и слепо-кишечных миндалинах.
2. Применение сухой живой вирус-вакцины из штамма «КМИЭВ-61» способствует развитию характерных иммуноморфологических реакций в лимфоидной ткани желудочно-кишечного тракта птиц, характеризующихся накоплением плазмобластов и плазматических клеток различной степени зрелости в тонком кишечнике, дивертикуле Меккеля и слепокишечных миндалинах, а также увеличением числа и размеров лимфоидных узелков в цекальных миндалинах.
3. Иммунизация цыплят против ИББ на фоне использования лития карбоната по сравнению с применением одной вакцины способствует более интенсивному развитию узелковой лимфоидной ткани в стенке тонкого кишечника, дивертикуле Меккеля и слепокишечных миндалинах, а также в значительной степени стимулирует накопление плазматических клеток в лимфоидной ткани, ассоциированной с пищеварительной трубкой.
ЛИТЕРАТУРА
1. Конопатов, Ю.В. Основы иммунитета и кормление сельскохозяйственной птицы / Ю.В. Конопатов, Е.Е. Макеева. СПб.: Петролазер, 2000. 120 с.
2. Лилли, Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р. Лилли; под ред. В.В. Португалова; пер. с англ. И.Б. Краснова [и др.]. М.: Мир, 1969. 645 с.
3. Меркулов, Г. А. Курс патологогистологической техники / Г.А. Меркулов. Л.: Медицина, 1969. 432 с.
4. Микроскопическая техника: руководство / Д.С. Саркисов [и др.]; под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Петрова. М.: Медицина, 1996. 544 с.
5. Муллакаева, Л.А. Патоморфология органов и тканей молодняка кур после применения лития карбоната как антистрессового препарата при их пересадке и транспортировке / Л.А. Муллакаева // Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных : сб. науч. тр. по матер. 16-й Всерос. науч.-метод. конф., Ставрополь, 20-22 сентября 2007 г. /гл. ред. А.В. Жаров. Ставрополь: АГРУС, 2007. С. 199-200.
6. Преображенский, С.Н. Стрессоры - причина снижения продуктивности скота / С.Н. Преображенский, О.Н. Преображенский // Ветеринария. 2001. № 11. С. 53-55.
7. Селезнев, С.Б. Структурная характеристика иммунной системы птиц / С.Б. Селезнев // Актуальные вопросы морфологии и хирургии XXI века: материалы междунар. науч. конф. / ОГАУ; под ред. С.А. Соловьева [и др.]. Оренбург, 2001. Т.2: Морфология. С. 250-253.
8. Селезнев, С.Б. Морфологические параллели в топографии и структурной организации иммунной системы птиц и млекопитающих / С.Б. Селезнев // Вестник Рос. унта дружбы народов. Сер. Агрономия и животноводство. 2003. №10. С. 72-76.
УДК 636.5:611.4:612.071.1:615.37
ВЛИЯНИЕ НАТРИЯ ТИОСУЛЬФАТА НА МОРФОЛОГИЧЕСКУЮ И ЭКОНОМИЧЕСКУЮ ЭФФЕКТИВНОСТЬ АССОЦИИРОВАННОЙ ВАКЦИНАЦИИ ПТИЦ ПРОТИВ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
И.Н. ГРОМОВ
УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» г. Витебск, Республика Беларусь, 210026
(Поступила в редакцию 05.01.2011)
Введение. При организации программы специфической профилактики инфекционных болезней на птицефабриках большие трудности создают смешанные инфекции [3, 7]. В результате приходится проводить большое количество вакцинаций. Кроме того, сроки проведения профилактических прививок часто совпадают. В связи с этим усовершенствование специфической профилактики вирусных заболеваний путем разработки методов одновременной (ассоциированной) вакцинации против нескольких инфекционных болезней является актуальной задачей и имеет важное научно-практическое значение. В последние годы при профилактике болезней птиц предпочтение отдают комбинированным вакцинам, так как применение одной дозы препарата против двух или даже нескольких инфекций значительно снижает затраты труда и потери от стрессовых ситуаций у птицы, которые обусловлены вакцинацией.
