Вивчення імуногістохімічних характеристик шкіри хворих на псоріаз та корекція виявлених порушень за допомогою Глутоксиму Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

УДК:616.517-092:612-017.1]-08

Вивчення iMyHoricTOXiMiHHHx характеристик шюри хворих на ncopia3 та корекщя виявлених порушень за допомогою Глутоксиму

Ольховська Ю.О.

Дорожня клШчна лжарня, Хартв

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК КОЖИ БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ И КОРРЕКЦИЯ ВЫЯВЛЕННЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ ПОМОЩИ ГЛУТОКСИ-МА

Ольховская Ю.А.

Обсуждаются результаты изучения иммуногисто-химических характеристик гиперпролиферативных процессов на уровне ингибиторов клеточного цикла у больных псориазом и оценки патогенетических механизмов современных методов терапии. Выявлено повышение экспрессии белков р16, р19, р21, р53 в коже больныхпсориазом. Разработаныновые иммуногисто-химические тесты для выбора терапии и оценки прогноза течения псориаза. Если в процессе проведенной комплексной терапии экспрессия белков р16, р19, р21, р53 не снижается, то это свидетельствует о неэффективности проведенной терапии, а также говорит о неблагоприятном течении псориатическо-го процесса. Если в межрецидивный период до появления новых высыпаний на коже наблюдается повышенная экспрессия белков р16, р19, р21, р53, это свидетельствует о начале рецидива и требует назначения противорецидивного курса терапии. Для этого использовался глутоксим - по 1,0 г внутримышечно, ежедневно, 10 дней.

STUDY OF IMMUNE AND HYSTOCHEMI-CAL CHARACTERISTICS OF SKIN OF PATIENTS WITH PSORIASIS AND CORRECTION OF THE REVEALED INFRINGEMENTS BY GLUTOKSIM Olhovska Ju.O.

The purpose of the research is determination of role of inhibitors of cellular cycle in pathogenesis of psoriasis and efficacy evaluation for pathogenetic mechanisms of therapy. For the purposes of study of cytological characteristic of hyperprolipherative processes at the inhibitors of cellular cycle level in skin of diseased patients with psoriasis at steady state and progressive state a biopsy of the plaque skin was performed. On the basis of this research evaluation of pathogenetic mechanisms during psoriasis at the inhibitors of cellular cycle level was realized, proteins (p16, p19, p21, p53) expression in psoriatic patient's skin before and after therapy was evaluated. The administration of Glutoksim - in standard schemes of treatment was grounded; that medicine normalizes metabolic processes in cells, accelerates reverse evolution of psoriasis and reduces terms of hospital treatment.

За сучасним уявленням, псорiаз - це мультифакторiальний дерматоз, в основi патогенезу якого лежить багато теорш; тому у цей час велика увага придшяеться вивченню патогенетичних механiзмiв розвитку псорiазу [1, 4, 12]. Найбшьшу увагу дослщники останшм часом придшяли вивченню лшщного обмiну при псорiазi [4]. Було виявлено, що псорiаз призводить до збшьшення вмюту в кровi малонового дiальдегiду, дieнових кон'югапв. Бшьшють дослщниюв вважають, що надмiрне накопиченняпродукпвпероксидацпетоксичним для нормальних тканин, фагоцитуючих та

iмунокомпетентних кттин. Т.П. Коржова вва-жае, що при псорiазi вщбуваеться збшьшення вщновленого та окисленого глютатюну. Анатз результата дослщжень свщчить, що порушення штенсивност перекисного окислення лшдав i активностi антиоксидантно! системи е важливою ланкою патогенезу псорiазу [4].

У той же час псорiаз характеризуемся, як системний аутоiмунний процес [12], при якому наявш змши в iмунному статусi:

- пригшчуеться лiзоцимна та фагоцитарна активнiсть нейтрофшьних реакцiй;

- пiдвищуеться комплемент i вмiст лактофе-

рону в кровц

- знижусться кшьюсть Т^мфоципв;

- змшюеться титр Т-тмфоцит1в, сшввщно-шення Т- i 5^мфоцит1в та iмунорегуляторного шдексу за рахунок зменшення Т-хелперiв;

- збшьшуеться кiлькiсть «нульових» лiмфо-ципв.

При цьому вiдмiчаeться також зниження рiв-ня IgG, пiдвищення кшькосп Ц1К. Усi цi пору-шення найбiльш вираженi i при ускладнених формах захворювання, часто рецидивуючому процесi, особливо - у пащенпв з супутньою па-тологieю.

Вщомо, що в основi формування псорiатич-но! бляшки лежить порушення диференщю-вання епiдермiсу. Диференцiювання ешдерм> су - складний комплексний i високо регульова-ний бiохiмiчний процес, що характеризусться морфологiчними змiнами в ушх структурних компонентах епiтелiоцитiв [15]. Загальноприй-нятою е точка зору, що процеси клiтинного вщ-новлення вщграють провiдну роль у морфоге-незi псорiатичноl бляшки, в основi формування яко! лежить гiперпролiферацiя епiдермiсу, до яко! приводять порушення регуляци клггинного циклу. У процесi пiдготовки кттини до подiлу й утворення з не! двох нових нянин спостер> гаеться кiлька фаз - G1, G2, Б, G0. «Мотором» клнинного циклу е активацiя послiдовностей циклш-залежних кiназ (ЦЗК).

Бiлки р16, р19, р21, р53 iнгiбують або акти-вують рiзнi комплекси ЦЗК, яю вiдповiдальнi за нормальний перебiг ушх фаз клiтинного циклу. При псорiазi вiдбуваеться внутрiшньоклiтиннi патологiчнi процеси, як призводять до порушення нормального клнинного циклу; при цьому збшьшуються комплекси ЦЗК, та експрешя бiлкiв р16, р19, р21, р53, якi !х активують. Одним з центральних компонента системи, яка забезпечуе видалення з оргашзму патолопчних клiтин, е ген р53; р53 вiдомий, як пухлинний супресор, активатор апоптозу.

Активацiя бшка р53 викликаеться при уш-кодженш клiтин сигнальними шляхами, якi вщ-слiдковують стан клiтин. Бiлок р53 координуе процес репарацп, або шдукуе самогубство кт-тин. Втрата гену р53 приводить до безконтроль-ного нагромадження генетичних ушкоджень, що приводять до втрати контролю з боку оргашзму, патолопчному росту клнин i смертi. Продукт гену р53 - бшок, що складаеться з 393 амшо-кислот, мае електрофоретичну рухливють 53 кД (що й дало назву гену й бшку). Бшки р16, р19,

р21 е членами шмейства ЦЗК, представникiв негативних регуляторiв клiтинного циклу, якi вiдповiдають за нормальний перебн клiтинного циклу в фазi G1, беруть участь у системi контролю клiтинного циклу, зупиняють розмножен-ня патологiчних клнин. Пiдвищена активнiсть бiлкiв р16, р19, р 21 обумовлюе блокування входу в Б-фазу клiтин та передчасне !х старiння.

Вивченню онкомаркерiв при псорiазi при-свячена невелика кшьюсть робот [7, 12, 14, 17]. Визначалися онкомаркери Ьс1-2, к 67, р21, р53. У прогресуючш стадп псорiазу виявлена висо-ка експрешя к 67, Ьс1-2, а також низький рiвень р21 i р53. Достовiрне збiльшення експресн р53 в епiдермiсi в стацiонарнiй стадп побiчно свщ-чить про посилення процешв апоптозу в шарi ешдермюу [11]. Поява експресп р21 i р53 в суп-рабазальних вщдшах епiдермiсу дае пiдставу говорити про раннш початок зроговiння клнин-них мембран, якi в результатi не можуть фор-мувати нормальний роговий шар й, iмовiрно, можуть сприяти розвитку паракератозу [9].

Псорiаз, незважаючи на появу в останнi роки велико1 кiлькостi робiт, присвячених як вивченню його патогенезу, так i розробщ нових методiв л^вання, до цих пiр залишаеться важливою проблемою дерматологи.

Мета дослiдження - встановлення ролi ш-гiбiторiв клггинного циклу у патогенезi псорiазу й оцшка ефективностi патогенетичних мехашз-мiв терапи.

Одним з перспективних препарапв, на нашу думку, е Глутоксим. Глутоксим представляе но-вий клас лшарських речовин - тiопоетинiв, мае ушкальш бiологiчнi ефекти, завдяки впливу яких дiе на внутрiшньоклiтинному рiвнi тюло-вого обмiну й вщпрае важливу роль у регуляци метаболiчних процесiв у клiтинах i тканинах. Щд впливом Глутоксиму вiдбуваеться стиму-ляцiя пролiферацil й диференцiювання нор-мальних клiтин й активацiя процешв генетично запрограмовано1 клнинно1 загибелi (апоптоз) трансформованих клiтин. Дiя препарату реал> зуеться через збiльшення напiвперiоду життя бiлка р53 i за допомогою впливу на каскад фос-фопротешкшаз Лаз-сигнального шляху. Таким чином, Глутоксим нормалiзуе метаболiзм кт-тини й мае цитопротекторну дда. Саме iз цих причин вiн привернув нашу увагу при вивченш терапи хворих на псорiаз. Позитивний ефект по-лягае в пiдвищеннi ефективностi л^вання хворих на псорiаз, обумовлений тим, що Глутоксим

1-2 (11)' 2008

додатково шдвищуе реактившсть оргашзму [10,

14].

Матерiали й методи. У дослщження було включено 126 хворих на псорiаз, розподiленi на двi групи:

- в основну групу ввiйшли 100 пащенпв, серед яких:

1) у 53 хворих була стацюнарна стадiя

псорiазу;

2) у 47 - прогресуюча ставдя захворюван-

ня;

- у контрольнш групi були пацiенти з такими ж дiагнозами.

Клiнiчна картина тяжкост захворювання оцiнювалася по iндексу площi й тяжкостi плину псорiатичного процесу (РЛБГ), який у середньо-му коливався вщ 15 до 20 одиниць.

У хворих на псорiаз основно! (24 хворих) та контрольно! груп (15 хворих) було проведено пстолопчне дослщження шкiри до й шсля комплексного лiкування. Бюпия проводилася пiд мiсцевою анестезiею 0,5-вщсотковим розчином новока!ну. Матерiал фiксувався у забуференому 10-вщсотковому водяному розчинi нейтрального формал^ й рiдинi Карнуа, тддавався цело!-дин-парафiновiй проводцi. Готувалися серiйнi зрiзи товщиною 5-6 мк. У вшх спостереженнях використовувалося фарбування гематоксил> ном-еозином за Ван-Гiзоном.

При морфолопчному дослiдженнi тдрахо-вували об'емну щшьшсть iнфiльтрату на 1 мм2 й оцшювали ступiнь акантозу на пiдставi вiзу-ально-аналогово! шкали:

- 1-й - слабкий стутнь акантозу розцшюеть-ся, як незначне стовщення епiдермiсу; акан-толiтичнi тяжi поширюються вглиб дерми про-тягом до 2/3 поля зору (х 210, сумарна площа зору - 0,4 мм2);

- 2-й - помiрний стутнь акантозу характеризуемся подовженням акантолiтичних тяжiв i поширенням !х у дерму; але до краю поля зору при вищевказаному збшьшенш;

- 3-й - виражений стутнь акантозу проявляемся збшьшенням числа й поширенням акантолгтичних тяж1в за поле зору й крайшм стоншенням надсосочкових шарiв епiдермису.

Для вивчення iмуногiстохiмiчних харак-теристикгiперпролiферативнихпроцесiвнарiвнi iнгiбiторiв кттинного циклу в шкiрi у хворих зi стацiонарною й прогресуючою стадiею псорiазу до й пiсля лшування була проведена бiопсiя шкiри псорiатичних бляшок. Iмуногiстохiмiчне дослiдження проводилося на парафшових

1-2 (11)' 2008

3pi3ax товщиною 5мкм, яю депарафiнiровали за стандартною методикою. Зрiзи iнкубували з моноклональними антитшами p-53 Protein DO-7, Cyclin Dependent Kinase Inhibitor (p19 ink4d), p16 Protein ("Novocastra", UK), р21 (клон 2G12) (BDPharMingen). Для iмунного фарбування використали авiдин-бiотиновий пероксидазний метод (АВС-метод) (Novostain Universal Quik Kit (ncl-RTu-Qu), UK). У Bcix випадках проводили дофарбовування ядер гематоксилшом.

До лiкування у хворих PASI в середньому рiвнявся:

- при стащонарнш стади псорiазу - 15,2;

- при прогресуючш стади псорiазу - 18,3.

Iмуногiстохiмiчне дослщження бiоптатiв

шкiри було проведене у 30 пащенпв до й шсля лшування. При гiстологiчному вивченi псорiатичних елементiв до лiкування вщ-мiчаeмся виражений у рiзному ступенi гшер-кератоз, осередковий паракератоз з вщсутшстю зернистого шару пiд ним, акантоз, папшоматоз. Подекуди у роговому шарi епiдермiсу зустрiчались мiкроабсцеси Мунро. При псорiазi найбiльш вираженi гiстоморфологiчнi й мета-болiчнi змiни, якi вщбуваються в сполучнiй тканинi сосочкового шару й верхньо! третини сiтчастого шару дерми, у якш визначаються:

- рiзкий набряк;

- розпушення, розволокнення;

- осередкова фрагментащя;

- лiзис колагенових волокон;

- муко!дне й фiбриноiдне набрякання;

- некроз i склероз.

У 30 пацieнтiв до лшування iмуногiстохiмiчно була визначена висока експрешя бiлкiв р16, р19, р21, р53. У хворих на псорiаз у стацiонарнiй стади експресiя бшюв була трохи нижче, нiж при прогресуючш стади. Проведет дослщження дозволяють стверджувати, що при псорiазi збшьшуеться експресiя iнгiбiторiв клiтинного циклу, що ми й врахували при проведенш комплексно! терапii пацieнтам основно! групи.

Пащенти групи контролю (26 хворих) одержували стандартну терапiю, що включае:

- внутрiшньом'язовi iн'екцii 10-вiдсоткового розчину глюконату кальцiю;

- антигiстамiннi препарати;

- вггамши В6, В12, - внутршньом'язово через день, N 20;

- зовтшньо - 2-вiдсоткову салщилову мазь на шкiру.

Основна група пацiентiв (100 хворих) на rai стандартно! терапii (див. вище) одержувала

препарат Глутоксим у виглядi внутршньо-м'язових ш'екцш 1-вiдсоткового розчину по 1 мл, N 10.

Результати. Ощнка темпiв зворотного роз-витку захворювання проводилася за такими по-казниками:

- iнфiльтрацiя;

- еритема;

- набряклють;

- лущення;

- сверблячка;

- екскорiацiï.

У Bcix пащеннв основноï групи на тлi лшу-вання значно зменшилася сверблячка, у хворих вiдзначалося зниження еритеми й шфшьтраци шкiри у вогнищах ураження вже на п'ятий день терапи, а на п'ятнадцятий день комплексноï те-рапiï iнфiльтрацiя й еритема майже повнiстю регресували. По закiнченнi терапи у вогнищах залишалась вторинна шгментащя. 1ндекс площi й тяжкостi плину псорiатичного процесу (PAST) пiсля л^вання становив:

- у хворих зi стацiонарною стадieю псор> азу - 2,4;

- при прогресуючш стади - 4,8.

Пстолопчне дослщження показало:

- слабко виражений роговий шар, мюцями - з помiрним гшеркератозом; дшянки паракератозу й мiкроабсцеси Мунро не визначались;

- зернистий шар був безперервним i скла-дався з 1-2 рядiв горизонтально розташованих клiток з бiльшою кiлькiстю кератогiалiну в ци-топлазмi;

- мiжсосочковi дiлянки мальпiгieвого шару були представлен 8-12 рядами клiток, надсо-сочковi дiлянки - 5-6 рядами;

- шипоподiбний шар був значно тонше, у порiвняннi iз препаратами до лшування; вiн складався з 5-10 рядiв клiтин з базофiльною цитоплазмою, у якш мюцями визначалась еози-нофшьна зернистiсть i вакуолiзацiя (1-2 стутнь

Висновки

1. У хворих на псорiаз тсля проведеного комплексного лшування Глутоксимом вiдмiча-лась вщсутнють експресiï в шиповатому i ба-зальному шарi бiлкiв р16 тар19, а експресiя р21 та р53 була слабкою (3-5 %), що свщчить про пiдвищення апоптично1' активностi клiтин еш-дермiсу й зниження пролiферацiï.

2. При гютолопчному дослiдженнi спостер> галися:

- переважно слабко виражений роговий шар, мiсцями - з помiрним гiперкератозом;

акантозу);

- базальний шар епiдермiсу складався з одного ряду цилшдричних клiтин, серед яких зус-трiчались меланоцити;

- базальна мембрана епiдермо-дермального з'еднання тсля л^вання - безперервна, рiвно-мiрно! товщини;

- повнiстю зникли або значно зменшились явища набряку, розпушення й розволокнення стiнок дрiбних сосущв i базальних мембран ка-пiлярiв сосочкового шару.

Iмуногiстохiмiчнi показники хворих на псорiаз пiсля лiкування:

- у стащонарнш стади у хворих на псорiаз експреая бiлкiв р16, р19, р21, р53 повiльно зни-жувалась з 27-32 до12 %, що свщчить про змiну темтв апоптозу в шкiрi у хворих з стащонар-ною стадiею псорiазу;

- у прогресуючiй стадi! псорiазу iмуноiс-тохiмiчно визначалась слабка й помiрна екс-пресiя бiлкiв р16, р19, р21, р53 вiд 7 до 27 % у кликах базального й шипуватого шару.

Ц показники говорять о прискореннi про-цесiв пролiферацi! клiток (акантоз, паракератоз, гшеркератоз), а збiльшення змiсту клпок, що д> ляться, пiдтверджуе зниження темшв апоптозу;

У регресуючiй стади тсля проведеного лшу-вання iз застосуванням Глутоксима спостерпа-лося зменшення акантозу, гiпо- i гiперкератозу (1-2 стади). Вщзначалася дуже слабка експреая бiлка р16, р21 та помiрна - р19 (до 28 %) i зниження експресi! бшка р53, що свiдчить про по-силення апоптично! активностi кератиноцитiв i зниження пролiферативной активностi в еш-дермiсi.

Перебування в стацiонарi склало:

- контрольно! групи пащенпв - 25 ± 0,2 лiж-ко-дшв;

- основно! групи пацiентiв, у курс лшування яких був включений Глутоксим, - 20 ± 0,2 лiж-ко-днiв.

- позитивна динамша в станi iнших шарiв ешдермюу та мiкроциркуляторного русла дерми;

- прискорення регресу псорiатичних виси-пань;

- скорочення тривалостi перебування хворих у стащонарг

3. Використання Глутоксиму, у зв'язку з лег-кiстю його застосування та високою ефектив-шстю при лiкуваннi будь-яких форм псорiазу, може бути рекомендоване як в стащонар^ так i в амбулаторних умовах.

Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология

1-2 (11)' 2008

Л1ТЕРАТУРА

1. Дащук A.M. Псориаз как коллагеновая болезнь (клинико-морфологические исследования). - Харьков: Изд-во Харьковск. ун-та, 1993. - 166 с.

2. Димант Л. Э. Терапия больных псориазом с учетом иммуноморфологических маркеров воспаления и пролиферативной активности кератиноцитов кожи: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - 2001. - 32 с.

3. Довжанский С.И. Псориаз или псориатичес-кая болезнь. - В 2-х ч. - Саратов: Изд-во Са-ратовск. ун-та, 1992. - Т. 1. - 260 с.

4. Коржова Т.П. Тератя псорiазу з урахуван-ням особливостей ктшчного перебпу дерматозу, процесiв лшопероксидацн та при наявносп ентеровiрусноl шфекцл в оргашзму Автореф. дис. ... канд. мед. наук: 14.01.20 / Укр. нац. мед. ун-т iм. О.О. Богомольця. -К., 2002. - 20 с.

5. Короткий Н.Г. Перший досвщ застосування анти-Фно-а (ремикейд) при важкому переб> гу псорiазу // Вюник дерматологи й венерологи. - 2001. - № 4. - С. 36-36.

6. Короткий Н.Г., Уджуху В.Ю., Абдуллаева А.Э. и др. Комплексная иммуномодулирую-щая терапия больных псориазом // Рос. журнал кожных и венерических болезней. - 2001. - № 1. - С. 14-16.

7. Лифшиц Е.Г., Федотов В.П. Иммунопато-морфологические аспекты псориатической болезни // Дерматовенерология. Косметология. Сексопатология. - 2005. - № 1-2 (8). -С. 148-154.

8. Новиков А.И., Кононов А.В., Охлопков В.А., Правдина О.В., Братухина Г.Д., Городилов Р.В. Иммунохимические исследования при псориазе // Вестник дерматологии и венерологии. - 2003.- № 3. - С. 26-28.

9. Новиков А.И., Кононов А.В., Охлопков В.А., Правдина О.В., Братухина Г.Д., Городилов Р.В., Чермошенцев А.А. Эффективность глу-токсима в комплексной терапии больных

каплевидной формой псориаза // Российский журнал кожных и венерических болезней. -2003. - № 1. - С. 38-41.

10.Суханова Н.М., Самсонов В.А., Смольян-никова В.А. Дайвонекс (кальципотриол) в комплексной терапии больных псориазом с учетом иммуногистохимических показателей кожи // Вестник дерматологии и венерологии. - 2003. - № 4. - С. 26-29.

11. Batinac T., Zamolo G., Jonjic N., Gruber F., Petrovecki M. p53 protein expression and cell proliferation in non-neoplastic and neoplastic proliferative skin diseases // Tumori. - 2004. -Vol. 90, No l. - P. 120-127.

12.Bos J.D., De Rie M.A. The pathogenesis of psoriasis: immunological facts and speculations // Immunol. Today. - 1999. - Vol. 1. - Р. 40-45.

13.Chaturvedi V., Cesnjaj M., Bacon P., Panella J., Choubey D., DiazM.O., Nickoloff B.J. Role of INK4a/Arf locus-encoded senescent checkpoints activated in normal and psoriatic kera-tynocytes // Am. J. Pathol. - 2003. - Vol. 162, No 1. - P. 161-170.

14.&ueger G. Clinical response to alefacept: results of a phase 3 study of intravenous administration of alefacept in patients with chronic placjue psoriasis // JEADV. - 2003. - Vol. 17.

- Suppl. 2. - P. 17-24.

15.Laporte M., GalandP., Fokan D. et al. Apopto-sis in Established and Healing Psoriasis // Der-matol.-2000. - Vol. 200.- Suppl. 4. - Р. 314-316.

16.Lee E., Jeon S.H., Yi J.I. et al. Calci potriol inhibits autocrine phosphorylation of EGF receptor in a calcium-dependent manner, a possible mechanism for its inhibition of cell proliferation and stimulation of cell differentiation // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2001. -Vol. 284. - Suppl. 2. - Р. 419-425.

17.Mease P.J., Goffe B.S., Metz J. et al. Etanercept in treatment of psoriatic arthritis and psoriasis: a randomized trial // Lancet. - 2000. - Vol. 356.

- Р. 383-390.