CC BY
3
В. В. РОТЕНБЕРГ, Р. К. РУТМАН (Днепропетровск)
Ускоренный метод определения coli-титра молока и молочных продуктов с помощью индольной пробы1
Из Днепропетровской центральной 'санитарно-гигиенической лаборатории
Проба на индол для определения кишечной палочки разрабатывалась многими авторами. Еще в 1894 г. Шардингер предложил использовать индольную пробу для определения coli-титра, являющегося показателем фекального загрязнения.
Определение coli-титра по индольной пробе основывается на том, что все бактерии используют триптофан (аминокислота! аланин) как источник азота, разложение же триптофана бактериями происходит постепенно, сначала образуется индолуксусная кислота, а затем она разлагается на индол и уксусную кислоту. Бактерии, не дающие положительную реакцию на индол, разлагают триптофан до индол-уксусной кислоты, а индолдающие бактерии — до индола и уксусной кислоты. Типичная В. coli образует индол на средах, содержащих триптофан, при различных температурах, как 37°, так и 46°.
Последующие исследования, разработка и оценка методов определения индольного титра кишечной пашочки в воде показали, что во взглядах авторов на значение ее для определения фекального загрязнения воды существуют разногласия. Идея диагносцировать В. col: по индольному титру не только в воде, айв пищевых продуктах, если бы это оказалось возможным, является очень заманчивой, так как это упростило бы методику и вместе с тем ускорило бы само определение, что чрезвычайно важно для практической работы.
С этой точки зрения представляет значительный интерес работа французского автора Lerner о применении индол-пробы для определения coli-титра в молочных продуктах.
По мнению Lerner, кишечная палочка в воде как среде, мало подходящей для ее развития, теряет некоторые свойства, в частности, индолобразование. В молоке же, по его мнению, этого не происходит.
Метод Lerner заключается в следующем. Смешивается 1,0 см3 молока и 9,0 см3 пептонного раствора (10,0 пептона Витте, 10,0 хлористого натрия и 250 мг углекислого натрия на 1 л дестиллированной воды). Из этой смеси берется 1,0 см3 и переносится в следующие 9,0 см3 пептонного раствора и т. д. Таким образом, разведение доводится до 0,00001.
Пробирки с посевом выдерживаются при температуре 37° 24 часа, после чего ставится проба на индол с реактивом Эрлиха. Lerner устанавливает желательные нормы В. coli для рыночного молока—отсутствие индола должно быть при разведении 0,0001, для образцового и пастеризованного молока —■ 0,01. Кроме того, автор рекомендует пользоваться этим методом при исследовании и других молочных продуктов.
Днепропетровская санитарно-гигиеническая лаборатория, повседневно занимаясь исследованием молочных продуктов, заинтересовалась работой Lerner, так как этот метод ускоряет исследование на 2—3 суток, что, конечно, чрезвычайно ценно для пищевой бактериологии.
В начале мы проделали ряд посевов на среде Кесслера, обычно употребляемой для молочных продуктов, и на бульоне Хоттингера вместо пептонного раствора Lerner, который мы применить в предварительных опытах не могли по независящим от нас обстоятельствам. Посевы ставили при температуре 37° с последующим высевом
1 Доложено на научной конференции санитарных и лабораторных работни-
ков Днепропетровска 27.1.1937 г.
па чашку Эндо и идентификацией выделенной культуры. На бульоне Хоттингера определялся индол с реактивом Легаль-Вейля через 24 часа и 48 часов. Эти предварительные опыты в количестве 50 проб показали совпадение результатов на среде Кесслера и бульоне Хоттингера в 80%.
В последующем работа проводилась на трех средах: Кесслера, Хоттингера и пептонном растворе. Всю работу мы разделили на две части. Первая часть проводилась на искусственно зараженном молоке, а вторая — на обычном лабораторном материале.
Методика работы первой части была такова. Молоко 3 дня стерилизовалось в аппарате Коха, затем .после проверки .на стерильность заражалось типичной и идо л обр азу ю щей культурой В. coli (штамм нашей лаборатории № 11033), культура на косом агаре смывалась физиологическим раствором <и концентрация бактериальной взвеси устанавливалась по стандарту Института имени Мечникова, равному 500 млн.
Из этой смеси 0,1 см3 заражалась 1000 см3 молока, а затем молоко засевалось на три среды: Кесслера, бульон Хоттингера и пептомный раствор Лернера с разведениями до 0,000000001 для того, чтобы найти то предельное разведение, в котором не обнаруживался бы В. coli и отсутствовала бы реакция на индол. Кроме того, интересно было установить, будут ли совпадать максимальные разведения для всех трех сред или какая-нибудь из них окажется более чувствительной.
Таких опытов мы поставили 12. Разведения, давшие рост и положительную пробу на индол, высевались через 24 часа на чашку Эндо с последующим выделением и идентификацией культуры.
Из этих опытов мы убедились в одинаковой чувствительности бульона Хоттингера, пептонной среды Lerner и среды Кесслера и после этого перешли ко второй части нашей работы на лабораторном материале.
Вторая часть работы, т. е. обычный лабораторный контроль рыночных молочных продуктов, производилась ¡путем посева на тех же трех средах в разведениях от 1,0 до 0,0001. Реакция на индол проверялась чере|з 24 часа и 48 часов. Для культур на бульоне Хоттингера пользовались реактивом Легаль-Вейля (нитропрусид натрия 5 капель 5°/о водного раствора, 5 капель 40°/о NaOH и 10 капель 80%> уксусной кислоты) -— положительная реакция — посинение или позеленение среды.
На пептонном растворе соответственно методике Lerner пользовались реактивом Эрлиха (1,0 парадиметиламидоазобензоальдегид, 95,0 абсолютного алкоголя и 20,0 сбляной кислоты — удельный вес 1, 19, 2, и надсернокислый калий насыщенный раствор).
Нами было исследовано 165 проб молока и сметаны.
Мы установили, что чувствительность сред Кесслера и бульона Хоттингера во всех разведениях почти совпадает, тогда как пептонный раствор Lerner отстает.
Сопоставляя положительные реакции на индол через 24 часа и 48 часов на бульоне Хоттингера и пептонном растворе Lerner, мы получили положительную реакцию на индол на бульоне Хоттингера через 24 часа в 85,4%, в то время как на пептонном растворе лишь в 66,7% 1.
Выводы
1. Индольная проба на бульоне Хоттингера совпадает с данными обычного определения coli-титра на среде Кесслера и может ее заменить, сокращая время анализа на 2—3 суток.
2. Положительная индоловая проба получается на бульоне Хоттингера через 24 часа в 85,4%, на пептонном растворе Lerner — в 66,7%.
3. Бульон Хоттингера вполне заменяет пептонную среду Lerner, требующую для своего приготовления применения заграничного пептона Витте.
1 По техническим условиям таблицы опущены. — Ред.
4. Реактив Легаль-Вейля для индольной пробы на бульоне Хот-тингера является более чувствительным, дешевым и доступным, чем дорогой реактив Эрлиха.
5. Ускоренный метод определения соН-титра молочных продуктов с помощью индольной пробы на бульоне Хоттингера можно рекомендовать для предварительного испытания всем лабораториям, в особенности молочным, где необходимо быстрое заключение о степени бактериального загрязнения молока.
Доц. В. И, ЕФИМЕНКО (Саратов)
Химическая дегазация хлорпикрина в железнодорожных вагонах после дезинсекции
Из Всесоюзного .научно-исследовательского института Союза обществ Красного креста и Красного полумесяца в Саратове (дир. С. А. Динес)
Железнодорожные вагоны после их дезинсекции хлорпикрином летом обыкновенно проветриваются в течение 3—4 суток (жесткие) и 4—5 суток (Мягкие). Осенью и зимой жесткие вагоны проветриваются 4—5 суток, а мягкие вагоны — 6—10 суток. Из практики известно много случаев, когда даже после длительного проветривания (10 и более суток) у пассажиров, едущих в обработанных хлорпикрином вагонах, было слезотечение. Объясняется это тем, что хлорпикрин, глубоко проникающий в поры и щели, прочно адсорбируется в них.
Хлорпикрин —■ химически устойчивое соединение; пары его при дезинсекции не портят тканей и металлических предметов. Случаи порчи тканей и металлических предметов, иногда наблюдающиеся, объясняются или применением неочищенного хлорпикрина (содержащего главным образом свободную азотную кислоту), или влажностью обрабатываемых предметов.
Химическая устойчивость хлорпикрина сильно затрудняла отыскивание химического дегазатора. Ф. Ф. Семикоз и другие авторы считают, что газообразного поглотителя и дегазатора для хлорпикрина не существует.
Нами была разработана методика химической дегазации хлорпикрина в различной одежде Опыты по дегазации хлорпикрина в одежде, проверяемые свыше года в практических условиях (в камере Красного креста при городской дезстанции), вполне оправдались. На следующем этапе работы была изучена дегазация хлорпикринизи-роваиных помещений. При изучении этого вопроса была исследована адсорбция хлорпикрина различными строительными материалами при различных метеорологических условиях. Во время опытов применялась обычная концентрация хлорпикрина, т. е. 25 см3 или 42,5 г на 1 м3 емкости помещения при экспозиции в 24 часа.
После длительного испытания различных средств мы убедились в том, что лучшие результаты по дегазации хлорпикрина, адсорбированного в строительных материалах, дает применение сернистого ангидрида совместно с парами денатурированного спирта. При выборе этих средств мы руководствовались способностью хлорпикрина
1 См. научные труды Института Союза обществ Красного креста и Красного
полумесяца. Т. I. 1935 г. Саратов.
