УЧАСТИЕ ДЕАЦЕТИЛАЗ ГИСТОНОВ В РЕГУЛЯЦИИ АКТИВНОСТИ БЕЛКА Р53 В ОСТРЫЙ И РАННИЙ ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫЙ ПЕРИОДЫ ПОСЛЕ ИНСУЛЬТА Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

68

материалы v национального конгресса по регенеративной медицине

здорового донора набухали на 24 ч в среднем в 1,48 раз (p=0,0175) и 3,29 раз (p<0,0001) относительного исходного значения, соответственно. БО и ЛО из чИПСК донора с муковисцидозом демонстрировали отсутствие набухания на 24 ч относительного 0 ч.

Результаты работы демонстрируют клеточный состав бронхиальных и легочных органоидов, а также возможность их применения в качестве модели, для персонализированной оценки проводимости канала CFTR и, в дальнейшем, в качестве модели, для разработки новых методов лечения.

Литература:

1. Kondrateva E, Adilgereeva E, Amelina E et al. Stem Cell Res. 2020. V. 48. P. 101933.

2. Salikhova DI, Leonov GE, Bukharova TB et al. Genes and Cells. 2019. V. 14. P. 46-53.

3. McCauley KB, Hawkins F, Kotton DN Curr Protoc Stem Cell Biol. 2018. V. 45. P. e51.

4. Leibel SL, McVicar RN, Winquist AM et al. Curr Protoc Stem Cell Biol. 2020. V. 54. P. e118.

УЧАСТИЕ ДЕАЦЕТИЛАЗ ГИСТОНОВ В РЕГУЛЯЦИИ АКТИВНОСТИ БЕЛКА Р53 В ОСТРЫЙ И РАННИЙ ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫЙ ПЕРИОДЫ ПОСЛЕ ИНСУЛЬТА

С.В. Демьяненко, В.В. Гузенко, С.А. Батальщикова

Лаборатория «Молекулярная нейробиология», Южный федеральный университет, Ростов-на-Дону, Россия

e-mail: demYanenkosvetlana@gmail.com

Ключевые слова: деацетилазы гистонов, р53, апоптоз, фо-тотромботический инсульт

Пост-трансляционное ацетилирование остатков лизина гистоновых и негистоновых белков регулирует важнейшие функции клеток [1]. Гистонацетилтрансферазы (НАТ) переносят ацетильные группы от ацетил-коэнзима А на в-аминогруппу остатков лизина, а гистондеацетилазы (HDAC) катализируют удаление ацетильных групп. На клеточных и животных моделях ишемии было показано, что ингибиторы HDAC (iHDAC) защищают нервные клетки и способствуют восстановлению после инсульта [2]. Однако использование неселективных iHDAC имеет ряд побочных эффектов [2]. Поэтому поиск изоформ hAt/ HDAC, участвующих в пост-трансляционной модификации сигнальных белков и факторов транскрипции необходим для выяснения причин цитотоксичности iHDAC и разработки новых модуляторов HAT/HDAC для терапии инсульта.

Все исследования проведены на модели фототром-ботического инсульта (ФТИ). Протеомные исследования позволили определить глобальные регуляторы апоптоза клеток мозга после ФТИ — факторы транскрипции р53, E2F1 и c-Myc, а также изоформы HAT (HAT1, PCAF) и HDAC (HDAC1, HDAC2, HDAC6), участвующие в повреждении и репарации после ФТИ [3]. Исследования показали, что наиболее значительные изменения экспрессии р53 наблюдались через 24 часа после ФТИ причем как в ядрах, так и в цитоплазме клеток ишемической пенумбры, а в нейронах уровень белка оставался высоким и через 7 суток после ФТИ. С помощью базы данных UniProt (http:www.uniprot.org/) и программы GPS-PAIL 2.0 (http:pail.biocuckoo.org/online.php) удалось идентифицировать возможные сайты ацетилирования р53.

In vivo было показано, что ФТИ вызывает рост ацетили-рования р53 по К373 и К320 через 2A часа после ФТИ, ацетилирование р53 по К320 сохраняется и в период репарации. Эксперименты с активатором р53 WR1G65 показали, что ацетилирование р53 по К373 повышает стабильность белка, способствует транслокации р53 в ядра нейронов и росту апоптоза нейронов после ФТИ. Методами Duolink PLA (метод близкого лигирова-ния) и ко-иммунопреципитации было установлено, что р53 непосредственно взаимодействует с ацетилтранс-феразой PCAF и деацетилазами HDAC2 и HDAC6. Однако использование ингибиторов HDAC2 (MI192) и HDAC6 (HPOB, тубастатин А) показало, что модуляция активности р53 путем его ацетилирования по К373 не отвечает за нейропротекцию, опосредованную селективными ингибиторами HDAC2 и HDAC6, их противоапоптотическое действие было связано с сохранением уровня ацетили-рования р53 по К320.

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда № 21-15-00188.

Литература:

1. Spange S, Wagner T, Heinzel T, Krämer OH. Cell Biol. 2GG9. V.

Aim. P. 185-98.

2. Demyanenko S, Dzreyan V, Sharifulina S. Biomedicines. 2G21.

V. 9(10). P. 1AA5.

3. Demyanenko S, Uzdensky A. Mol Neurobiol. 2G17. V. SA^). P.

6839-6856.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ СПОСОБОВ

СБОРКИ КАРДИАЛЬНЫХ МЕЗОТЕЛИАЛЬНЫХ

СФЕРОИДОВ

К.В. Дергилев, З.И. Цоколаева, И.Б. Белоглазова,

А^. Гусева, Е.В. Парфенова

ФГБУ НМИЦК им. Е.И. Чазова Минздрава России,

Москва, Россия

e-mail: doctorkote@gmail.com

Ключевые слова: сфероид, эпикардиальное микроокружение.

Фундаментальные исследования последних лет позволили переосмыслить роль эпикарда в молекулярных и клеточных механизмах онтогенеза сердца и его репарации после повреждения. Однако его изучение крайне затруднено в связи с отсутствием релевантных моделей, моделирующих эпикардиальной микроокружение.

Цель исследования. Сравнить способы сборки эпи-кардиальных сфероидов (эпироидов) и охарактеризовать их свойства.

В работе использованы клетки эпикардиального ме-зотелия, полученные из эмбрионального сердца мыши методом эксплантной культуры. Для сборки эпироидов протестировано несколько подходов культивирования клеток: 1) на чашках с поли-Д-лизином; 2) методом «висячей капли»; 3) в V- образных чашках с низкоадгезионным покрытием. Характеристику сфероидов проводили с помощью иммуногистохимических и иммунофлуорес-центных методов окрашивания, световой и конфокальной микроскопии и анализа изображений с помощью пакета программ MetaMorph®

Показано, что культивирование клеток эпикардиального мезотелия на чашках с поли-Д-лизином и методом «висячей капли» не являются оптимальными подходами для сборки сфероидов. Культивирование в вышеуказанных условиях сопровождалось более длительным периодом формирования первичных клеточных скоплений

Гены & Клетки XVII, №3, 2022