CC BY
10
Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием 134 «Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний» (21-22 июня 2021 г.)
СРАВНЕНИЕ СПОСОБОВ ПОЛУЧЕНИЯ ЭПИРОИДОВ - МОДЕЛИ
ЭПИКАРДИАЛЬНОГО КЛЕТОЧНОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ СЕРДЦА
Дергилев К.В.1, Цоколаева З.И.1, 3, Василец Ю.Д.1, 2, Копейкина А.С.1, 4, Парфенова Е.В.1, 2
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Российская Федерация; 2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова», Москва, Российская Федерация;3 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Федеральный научно-клинический центр реаниматологии и реабилитологии», Москва, Российская Федерация; 4 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова"Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Российская Федерация
Введение. Фундаментальные исследования последних лет позволили переосмыслить роль эпикарда в молекулярных и клеточных механизмах онтогенеза сердца и его репарации после повреждения. Показано, что эпикард может служить источником паракринных сигналов и формировать пул проге-ниторных клеток разных типов посредством вступления в мезотелиально-мезенхимальный переход. Однако его изучение крайне затруднено в связи с отсутствием релевантных моделей, моделирующих эпикардиальной микроокружение.
Цель. Сравнить способы получения эпикарди-альных сфероидов (эпироидов) и охарактеризовать их свойства.
Материалы и методы. В работе использованы клетки эпикардиального мезотелия, полученные из эмбрионального сердца мыши. Для сборки эпироидов использовано несколько подходов: 1) культивирование на чашках с поли-Д-лизином в адаптированной среде нейросфер; 2) культивирование в низкоадгезионных условиях; 3) культивирование методом «висячей капли»; 4) культивирование в V-образных чашках с низкоадгезионным покрытием. Характеристику сфероидов проводили с помощью иммуногистохимических и иммунофлуоресцент-ных методов окрашивания.
Результаты. Показано, что использование первых двух подходов не является оптимальным для сборки сфероидов. Часть клеток в этих условиях не способны к сферогенезу, а уровень их компак-тизации не достигает оптимального значения. При использовании метода «висячей капли» возрастает вероятность получения сфероидов неправильной
формы или множественных мелких эпироидов в одной лунке. Оптимальным подходом для сборки эпироидов является культивирование клеток в V-образных чашках с низкоадгезионным покрытием. Гистологические исследования показали, что в составе полученных сфероидов клетки имеют упорядоченную организацию с высоким уровнем компактизации в поверхностном слое и более низким в ядре. Иммунофлуоресцентные окрашивания криосрезов эпироидов показали, что клетки сохраняют экспрессию мезотелиальных маркеров (Wt1, ЕрюаМт), формируют плотные контакты, образованные на основе белка 20-1, а также низкий уровень экспрессии гладкомышечного альфа-актина, виментина и коллагена 1 типа, что указывает на сохранение эпителиоподобного статуса большинства клеток эпикарда в составе эпироидов. При стимуляции TGFpl наблюдалось увеличение уровня ком-пактизации эпироидов и накопление белков внеклеточного матрикса (фибронектина, коллагенов 1 и 3 типа).
Заключение. Метод культивирования эпикар-диальных клеток в V-образных чашках с низкоадгезионным покрытием признан оптимальных для сборки эпироидов в сравнении с другими исследованными подходами. Клетки в составе эпироидов сохраняют свойства клеток эпикардиального мезо-телия и способность отвечать на воздействие про-фиброзного регулятора TGFpl.
Финансирование. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ 19-29-04164 мк.
