CC BY
6
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
69
(24-72 часа), образованные сфероиды имели неправильную форму, низкий уровень компактизации и характеризовались высокой вариабельностью в размерах (50-320 мкм). При этом часть клеток не принимало участия в сферогенезе. Культивирование суспензии клеток в V- образных чашках с низкоадгезионным покрытием приводило к формированию сфероидов 152+/-23 мкм в течение 48 часов. Гистологические исследования показали, что в составе полученных сфероидов клетки имеют упорядоченную организацию с высоким уровнем ком-пактизации в поверхностном слое и более низким в зоне ядра. Иммунофлуоресцентные окрашивания криосрезов эпироидов показали, что клетки сохраняют экспрессию мезотелиальных маркеров ^и, ЕрюапС1п), формируют плотные контакты, образованные на основе белка ZO-1, а также низкий уровень экспрессии гладкомышеч-ного альфа-актина, виментина и коллагена 1 типа, что указывает на сохранение эпителиоподобного статуса большинства клеток эпикарда в составе эпироидов. При стимуляции ТЭРр1 наблюдалось увеличение уровня ком-пактизации эпироидов и накопление белков внеклеточного матрикса (фибронектина, коллагенов 1 и 3 типа).
Таким образом, культивирования эпикардиальных клеток в V-образных чашках с низкоадгезионным покрытием может рассматриваться в качестве оптимального способа для сборки эпироидов в сравнении с другими исследованными подходами. Клетки в составе эпироидов сохраняют свойства клеток эпикардиального мезотелия и способность отвечать на воздействие профиброзного регулятора ТЭРр1, что позволяет рассматривать полученные сфероиды в качестве перспективной модели эпи-кардиального микроокружения.
Финансирование. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ 19-29-04164 «Разработка модели эпикардиального сфероида (эпироида) для изучения влияния воспаления и патологических факторов риска сердечной недостаточности на эпикардиальное микроокружение и механизмы репарации сердца»
СФЕРОИДЫ НА ОСНОВЕ
ЭПИТЕЛИОПОДОБНЫХ КЛЕТОК МЕЗОТЕЛИЯ ЧЕЛОВЕКА (ЭПИРОИДЫ) — МОДЕЛЬ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ МЕЗАНИЗМОВ РАЗВИТИЯ ЭПИ-/ СУБЭПИКАРДИАЛЬНОГО ФИБРОЗА
К.В. Дергилев, З.И. Цоколаева, А^. Гусева, И.Б. Белоглазова, А.В. Андреев, Р.С. Акчурин, Е.В. Парфенова
ФГБУ НМИЦК им. Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: doctorkote@gmail.com
Ключевые слова: сфероид, эпикардиальное микроокружение.
Хроническая сердечная недостаточность с сохраненной фракцией выброса является широко распространенным заболеванием сердца, ассоциированным с про-грессированием кардиального фиброза, и имеющем ограниченные возможности для медикаментозной коррекции. Отсутствие эффективных методов лечения этой патологии в определенной степени связно с отсутствием репрезентативных in vitro моделей, которые могут быть использованы для поиска лекарственных мишеней и разработки фармацевтических препаратов направленного действия. Особый интерес в этом отношении представляет клетки эпикардиального мезотелия, которые
способны формировать пул фибробластов сердца и участвовать в развитии/прогрессировании фиброза.
Цель исследования: разработать 30 модель эпикар-диального микроокружения (эпироид) и исследовать влияние профиброзного индуктора ТЭРЬ1 на ее свойства.
Эпителиоподобные клетки эпикардиального мезоте-лия выделяли из образцов, полученных в ходе операции аорто-коронарного шунтирования от пациентов с ишеми-ческой болезнью сердца. Для сборки эпироидов использовали метод культивирования в и- образных чашках с низкоадгезионным покрытием. Характеристику сфероидов проводили с помощью ПЦР в реальном времени, иммуноблоттинга, методов иммуногисто/иммунофлуо-ресцентного окрашивания.
Показано, что сформированные эпироиды образуются путем компактизации клеток, сохраняющих маркеры эпикардиального мезотелия, формирующих ZO-1+ содержащие плотные контакты и имеющих низкий уровень экспрессии маркеров фибробластов и коллагенового матрикса, что соответствует организации зоны эпикарда в неповрежденном сердце. При воздействии рекомби-нантного ТЭРЬ1 происходит уменьшение размеров сфероидов, в центральной части которого клетки приобретают веретенообразуную форму, усиливают экспрессию генов мезотелиально-мезенхимального перехода, маркеров фибробластов и накапливают белки внеклеточного матрикса (коллаген, фибронектин), что указывает на признаки фиброзной трансформации.
Разработанная модель (эпироид) на основе клеток эпикарда с определенной долей допущения способна воспроизводить некоторые характеристики нативного эпикардиального микроокружения и модулировать клеточный ответ на воздействие профиброзного индуктора ТЭРЬ1. Эта модель может быть использована для дальнейшего изучения механизмов регуляции эпикардиаль-ного микроокружения и его участия в патогенезе развития фиброза сердца.
Финансирование. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ 19-29-04164 «Разработка модели эпикардиального сфероида (эпироида) для изучения влияния воспаления и патологических факторов риска сердечной недостаточности на эпикардиальное микроокружение и механизмы репарации сердца».
ПРЕКОНДИЦИОНИРОВАНИЕ КЛЕТОК КАРДИОСФЕР С ПОМОЩЬЮ ТРАНСФОРМИРУЮЩЕГО ФАКТОРА РОСТА БЕТА 1 ВЫЗЫВАЕТ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ИХ СЕКРЕТОМА
К.В. Дергилев, А^. Гусева, Е.С. Зубкова, А.В. Андреев, М.Ю. Меньшиков, З.И. Цоколаева, И.Б. Белоглазова, Ю.Д. Гольцева, Р.С. Акчурин, Е.В. Парфенова
ФГБУ НМИЦК им. Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: doctorkote@gmail.com
Ключевые слова: кардиосферы, воспаление.
В настоящее время большое внимание уделяется регуляторным эффектам клеток кардиосфер, которые определяются действием биологически активных веществ, содержащихся в их секретоме. Направленная модуляция состава секретома клеток рассматривается как перспективная стратегия для разработки
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
