ДЕФИЦИТ РЕЦЕПТОРА АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНОГО ТИПА ВЕДЕТ К НАРУШЕНИЮ АНГИОГЕННЫХ СВОЙСТВ ВАСКУЛОГЕННЫХ КЛЕТОК-ПРЕДШЕСТВЕННИЦ, РАЗВИТИЮ ВАСКУЛОПАТИИ И ФИБРОЗА В СЕРДЦЕ МЫШИ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

70

МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

инновационных лекарственных препаратов для лечения заболеваний сердца.

Цель исследования: исследовать воздействие реком-бинантного трансформирующего фактора роста бета 1 (ТЭРЬ1) на клетки кардиосфер с целью противовоспалительного профилирования их секретома.

Для получения кардиальных сфероидов (кардиосфер) использованы образцы ушка правого предсердия, полученных от пациентов с ИБС в ходе операции аорто-коронарного шунтирования. Кардиосферообразующие клетки получали методом эксплантной культуры, сборку сфероидов проводили на чашках с низкоадгезионным покрытием (ро1у-НЕМА). Характеристику клеток проводили с помощью проточной цитофлуориметрии, иммуно-блоттинга, ПЦР в реальном времени. Стимуляцию клеток сфероидов проводили с помощью ТЭРЬ1 (20 нг/мл) в течение 24 часов. Анализ секретома выполняли с помощью мультиплексного иммуноанализа Мадр1х.

Показано, что добавление в среду культивирования ТЭРЬ1 способствовало ускорению сборки и 3-кратному повышению числа сфероидов, имеющих размер 100-150 мкм. Обнаружено, что клетки кардиосфер наряду с классическими маркерами прогениторных клеток сердца, экспрессируют ТЭРЬ1, ТЭРЬ2, ТЭРЬ3 рецепторы. В кондиционированной среде клеток кардиосфер после стимуляции ТЭРЬ1 наблюдалось снижение содержания провоспалительных (Т1\1Ра (60,9+/-2,8 уэ 0,7+/-0,4 пг/мл), 11_1а (57,9+/-2,8 уэ 7,1+/-2,6 пг/мл), М1Р1а (57,9+/-2,8 уэ 1,8+/-0,5 пг/мл), М1Р1Ь (58,9+/-2,8 уэ 0,7+/-0,1 пг/мл), 1_7 (53,9+/-2,8 уэ 4,3+/-0,9 пг/мл), 1Р10 (СХС_10) (55,9+/-2,8 уэ 22+/-4,8 пг/мл), 1_1Ь (47,9+/-2,8 уэ 1,5+/-0,4 пг/мл), 1_15 (41,9+/-2,8 уэ 2,4+/-0,4 пг/мл), !Р1\1д (32+/-2,8 уэ 2,8+/-0,7 пг/мл), СС_5 (59,9+/-2,8 уэ 12,1+/-7,5 пг/мл)) и повышение противовоспалительных факторов (!_4 (50,9+/-2,8 уэ 193,6+/-70,8 пг/мл), ЭСЭР (26,9+/-2,8 уэ 44,5+/-11,9 пг/мл).

Таким образом, ТЭРЬ1 может способствовать противовоспалительному профилирования секретома клеток кардиосфер. Прекондиционирование клеток кардиосфер с помощью ТЭРЬ1 может служить основой для создания подходов для разработки препаратов с противовоспалительными свойствами направленного действия (на основе компонентов секретома) для лечения заболеваний различной этиологии. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ 19-15-00384 «Исследование механизмов активации эпикарда при повреждении сердца и возможности стимулировать репаративный ангиоге-нез и репарацию миокарда после ишемического повреждения путем активирующих воздействий на эпикард».

ДЕФИЦИТ РЕЦЕПТОРА АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНОГО ТИПА ВЕДЕТ К НАРУШЕНИЮ АНГИОГЕННЫХ СВОЙСТВ ВАСКУЛОГЕННЫХ КЛЕТОК-ПРЕДШЕСТВЕННИЦ, РАЗВИТИЮ ВАСКУЛОПАТИИ И ФИБРОЗА В СЕРДЦЕ МЫШИ

К.В. Дергилев, И.Б. Белоглазова, З.И. Цоколаева, Ю.Д. Гольцева, Е.В. Парфенова

ФГБУ НМИЦК им. Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия

e-mail: doctorkote@gmail.com

Ключевые слова: урокиназный рецептор, васкулопатия, фиброз

Активатор плазминогена урокиназного типа и его рецептор (uPAR) образуют интегрированный на клеточной мембране мультимолекулярный комплекс, который выполняет как протеолитическую, так регуляторные функции, необходимые для поддержания тканевого гомеостаза.

Цель: исследовать участие uPAR в реализации ангио-генных свойств васкулогенных клеток-предшественниц (ВКП) и развитии кардиального фиброза.

В работе использованы ВКП, полученные из сердец uPAR-/- и мышей дикого типа, и охарактеризованные с помощью методов проточной цитофлуориметрии, ПЦР в реальном времени, иммуноблоттинга, иммуноцитохи-мии, микроэррей анализа, подходов для оценки ангио-генных свойств (tube assay, трансплантация клеток в составе матригеля). Исследование уровня васкуляризации миокарда и фиброза выполнялось с помощью иммуно-гистохимических и гистологических методов с последующем анализом в программе Image J. Диастолическая функция сердца оценивалась с помощью ЭХОКГ.

Сравнительное исследования показало, что в сердце uPAR-/- животных наблюдается снижение числа капилляров и артериол в сравнении с животными дикого типа. Мы также обнаружили, что у uPAR-/- мышей наблюдается снижение числа васкулогенных клеток-предшественниц (ВКП). Мы показали, что uPAR-/- ВКП имеют признаки сниженной жизнеспособности, более легко способны вступать в апоптоз, имеют сниженную секрецию проан-гиогенных факторов роста (VEGF, ангиогенинов и анги-опоэтинов) и подавленную способность к ангиогенезу in vitro и in vivo. Кроме того, у uPAR-/- мышей снижение ангиогенного поведения клеток сочеталось с признаками интерстициального фиброза в сочетании с развитием диастолической дисфункции, чего не наблюдалось у животных дикого типа.

Таким образом, дефицит uPAR ведет к нарушению ангиогенного поведения ВКП и васкулопатии, что может лежать в основе развития интерстициального фиброза в сердце. uPAR-/- мыши могут рассматриваться в качестве модели для изучения молекулярных механизмов развития кардиального фиброза и недостаточности с сохраненной фракцией выброса. Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ 21-15-00327 «Изучение механизмов формирования профиброзного микроокружения сердца на модели кардиосфер: роль урокиназного рецептора».

РЕЦЕПТОР АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНОГО ТИПА НА ПЕРЕПУТЬЕ МЕЖДУ РЕПАРАЦИЕЙ И ПАТОЛОГИЕЙ СЕРДЦА

К.В. Дергилев, Е.В. Парфенова

ФГБУ НМИЦК им. Е.И. Чазова Минздрава России, Москва, Россия

e-mail: doctorkote@gmail.com

Ключевые слова: урокиназный рецептор, фиброз.

В последнее десятилетие новым перспективным направлением биомедицинских исследований стала клеточная терапия. В ее основе лежит использование различных видов стволовых/прогениторных клеток, которые как сами могут быть трансплантированы и использованы для реконструирования тканей, так и служить инструментов для переноса факторов, активирующих эндогенные механизмы репарации. Между тем, механизмы

Гены & Клетки XVII, №3, 2022