CC BY
43
12. Ebrahimi M., Lundqvist L., Wahlin Y.B., Nylander E. Mucosal lichen planus, a systemic disease requiring multidisciplinary care: a cross-sectional clinical review from a multidisciplinary perspective. J. Low. Genit. Tract. Dis. 2012; 16 (4): 377. DOI: 10.1097/LGT.0b013e318247a907.
13. Jacobsen A.A., Tosti A. Trachyonychia and Twenty-Nail Dystrophy: A Comprehensive Review and Discussion of Diagnostic Accuracy. Skin Appendage Disord. 2016; 2 (1-2): 7-13. DOI: 10.1159/000445544
14. Gordon K.A., Vega J.M., Tosti A. Trachyonychia: a comprehensive review. Indian J. Dermatol. Venereol. Leprol. 2011; 77 (6): 640. DOI: 10.4103/0378-6323.86470.
15. Soares V.C., Mulinari-Brenner F., Souza T.E. Lichen planopilaris epidemiology: a retrospective study of 80 cases. An. Bras. Dermatol. 2015. 90 (5): 666. DOI: 10.1590 / abd1806-4841.20153923.
16. Errichetti E., Figini M., Croatto M., Stinco G. Therapeutic management of classic lichen planopilaris: a systematic review. Clin. Cosmet. Investig. Dermatol. 2018; 11: 91-102. DOI: 10.2147 / CCID. S137870.
17. Захур И.И., Кошкин С.В., Бобро В.А. Кольцевидная форма красного плоского лишая. Редкое клиническое наблюдение // РМЖ. Медицинское обозрение. 2020. № 10. С. 642-646. [Zakhur I.I., Koshkin S.V., Bobro V.A.
Ring-shaped form of lichen planus. A rare clinical observation. RMJ. Medical Review. 2020; 10: 642-646 (In Russ.)] DOI: 10.32364/2587-6821-2020-4-10-642-646.
18. Захур И.И., Кошкин С.В., Зайцева Г.А., Гилева О.С., Куклина Е.А. Характер распределения антигенов HLA I класса у пациентов с красным плоским лишаем // Вятский медицинский вестник. 2018. № 4. С. 7-11. [Zakhur I.I., Koshkin S.V., Zaitseva G.A., Gileva O.S., Kuklina E.A. Distribution pattern of HLA class I antigens in patients with lichen planus. Vyatskii meditsinskii vestnik. 2018; 4: 7-11. (In Russ.)]
19. Захур И.И., Кошкин С.В., Зайцева Г.А., Гилева О.С., Куклина Е.А. Характер распределения антигенов HLA II класса у пациентов с красным плоским лишаем // Вятский медицинский вестник. 2019. № 1. С. 38-42. [Zakhur I.I., Koshkin S.V., Zaitseva G.A., Gileva O.S., Kuklina E.A. Distribution pattern of HLA class II antigens in patients with lichen planus. Vyatskii meditsinskii vestnik. 2019; 1: 3842. (In Russ.)]
20. Захур И.И., Кошкин С.В., Зайцева Г.А. Редкий клинический случай красного плоского лишая // Русский медицинский журнал. 2019. № 12. С. 46-48. [Zakhur I.I., Koshkin S.V., Zaitseva G.A. Rare Clinical case of lichen planus. Russian Medical Journal. 2019. № 12. P. 46-48. (In Russ.)]
УДК 576.7+604.4 DOI 10.24412/2220-7880-2021-3-49-53
ЦИТОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ ЭКССУДАТОВ МЫШЕЙ, ПРАЙМИРОВАННЫХ РАЗЛИЧНЫМИ АКТИВАТОРАМИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МАКРОФАГОВ, В ПРАКТИКЕ ГИБРИДОМНОЙ ТЕХНОЛОГИИ
Горшков А.С., Ипатов С.С., Куклина Г.В., Печенкин Д.В., Еремкин А.В.
Филиал ФГБУ «48-й Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации (610000, г. Киров, Октябрьский проспект, 119)
Получение функционально активных макрофагов является важным аспектом в процессе получения гибридом. На сегодня макрофаги продолжают оставаться оптимальным вариантом фидерного слоя клеток, выполняющих работу по очистке культур от клеточного детрита после гибридизации. Макрофаги также являются источником ростовых факторов, крайне необходимых для роста межклеточных гибридов, особенно на ранних сроках селекции токсическими агентами. В работе был оценен состав перитонеальных экссудатов лабораторных мышей линии Balb/c, праймированных различными активаторами, используемыми в практике работы гибридомной лаборатории.
Ключевые слова: гибридомная технология, перитонеальные макрофаги, активаторы, фагоцитоз.
CYTOLOGICAL CHARACTERISTIC OF PERITONEAL EXSSUDATES IN MICE, PRIMED BY VARIOUS ACTIVATORS TO OBTAIN MACROPHAGES IN THE PRACTICE OF A HYBRIDOMA TECHNOLOGY
GorshkovA.S., Ipatov S.S., Kuklina G. V., Pechenkin D. V., Eremkin A. V.
Affiliated Branch of the Federal State Budgetary Institution «48th Central Research Institute» of the Ministry of Defense of the Russian Federation (610000, Kirov, Oktyabrsky Ave., 119)
The obtaining of functionally active macrophages is an important aspect of the hybridoma technology. Currently macrophages are an optimal variant of the cellular layer removing cell detritus after hybridization has been completed. Macrophages are also a source of growth factors that play a great role in the growth of intercellular hybrids, especially in the early stages of selection with toxic agents. The study presents assessment of composition of peritoneal exudates in laboratory mice of the Balb/c line, primed with various activators, used in the practice of the hybridoma laboratory.
Keywords: hybridoma technology, peritoneal macrophages, activators, phagocytosis.
Введение
В настоящее время гибридомная технология обеспечивает не только нужды фундаментальной науки препаратами диагностических антител, но и практическое здравоохранение современными высококачественными лечебными и диагностическими препаратами на основе моноклональных антител. Препараты моноклональных антител также важны как специфический компонент иммуноферментных моноклональных тест-систем и иммунохроматогра-фических наборов реагентов, предназначенных для лабораторной диагностики опасных инфекционных заболеваний различной природы. Поэтому получение моноклональных антител к антигенам различных возбудителей на сегодня является актуальной задачей медицинской микробиологии и иммунологии.
Основным способом получения моноклональных антител является гибридомная технология. Задача гибридомной технологии заключается в том, чтобы из единичной клетки получить линию клеток, синтезирующих гомогенные антитела одинаковой специфичности. Как правило, в ходе селекции и клонирования гибридом плотность клеточного слоя в культуре значительно снижается. При низкой плотности клетки плохо пролиферируют и требуют присутствия в среде различных ростовых и стимулирующих факторов. На сегодня предложены разные вариации методик гибридизации, селекции, клонирования гибридных клеток, созданы коммерческие полужидкие питательные среды, ускоряющие процесс получения межклеточных гибридов, разработаны способы сортировки первичной популяции клеток после слияния, что призвано облегчить в целом трудоемкий процесс получения гибридом.
В этом процессе наиболее оптимальным является подход с использованием клеток питающего слоя, или фидерных клеток. Такие клетки выступают в роли источника факторов, стимулирующих рост гибридом. В этой роли могут быть использованы пери-тонеальные макрофаги, облученные клетки селезенки, тимоциты, диплоидные фибробласты легочной ткани человека [1]. Перитонеальные макрофаги в качестве клеток фидерного слоя наиболее эффективны, поскольку они не только синтетически активны, но и способны «очищать» культуры от детрита, особенно на ранних сроках после внесения в среду токсических агентов селекции (аминоптерин) [2]. Именно поэтому адекватное количество функционально активных макрофагов является залогом оптимально проведенных гибридизаций. Одним из возможных источников получения макрофагов является пери-тонеальный лаваж, но для выделения достаточного количества макрофагов необходимо индуцировать асептический перитонит у лабораторных животных (мыши линии Balb/c). В зависимости от возраста животных, праймирующего агента, длительности индукции воспалительного процесса и иных факторов клеточный состав экссудата, доля в нем макрофагов и их функциональное состояние будут различными [3, 4]. В связи с этим целью работы была оценка цитологического состава перитонеальных экссудатов мышей, праймированных различными активаторами.
Материал и методы
Для получения макрофагов использовали лабораторных мышей линии Ва1Ь/с в возрасте 6 месяцев массой не менее 20 г. За сутки до забора клеток пери-
тонеального экссудата в брюшную полость с соблюдением условий асептики и антисептики вводили по 1 мл праймирующего агента. В день забора биоматериала животных подвергали эвтаназии путем цер-викальной дислокации. После обработки операционного поля 70%-ным этиловым спиртом в брюшную полость каждого животного вводили по 10 мл стерильной питательной среды RPMI-1640 («Биолот», Россия). Жидкость вводили осторожно, стараясь не повредить кишечник, слегка приподнимая брюшную стенку пинцетом. Брюшко массировали в течение 5 минут. Вскрытие передней брюшной стенки производили при помощи пинцета и ножниц с таким расчетом, чтобы разрез раздвигался в краниально-ка-удальном направлении. Лаважную жидкость медленно аспирировали с помощью шприца вместимостью 10 мл («Восток», Россия), полученную жидкость центрифугировали при 800 g в течение 10 минут. Су-пернатант сливали, осадок ресуспендировали в 1 мл среды RPMI-1640, дополненной фетальной телячьей сывороткой Sus-Biol («Биолот», Россия) до 10% по объему и гентамицином до 25 мкг/мл («Биолот», Россия).
В полученном образце лаважа определяли общий цитоз (подсчет клеток в камере Горяева с три-пановым синим). Цитологическое исследование ла-важной жидкости проводили после суправитальной окраски клеток раствором 0,01%-ного кристаллического фиолетового в цитратном буфере по Г. Фримелю [5]. Для микроскопии клеток использовали световой микроскоп «Микмед-2» вар. 11 (ЛОМО, Россия).
Определение показателей фагоцитоза проводили по методике, описанной Г. Фримелем [5]. Для этого клетки перитонеальной жидкости в концентрации 5*105 кл/мл засевали в лунки 24-луночного планшета (ТРР, Швейцария) в объеме 500 мкл на лунку и инкубировали в течение суток при температуре 37 °С в атмосфере 5% СО2. Для удаления примесных элементов (лимфоциты, нейтрофилы, эритроциты, мезо-телий) лунки дважды промывали средой RPMI-1640. После отмывки на монослой макрофагов наносили суспензию инактивированных нагреванием пекарских дрожжей в среде RPMI-1640 в концентрации 1х108 кл/мл и инкубировали 1 час при температуре 37 °С в атмосфере 5% СО2. После инкубации среду сливали, макрофаги дважды промывали средой RPMI-1640, высушивали на воздухе и окрашивали по Май - Грюнвальд - Гимзе. Фагоцитарное число (ФЧ) определяли как среднее количество дрожжевых клеток, захваченное одним фагоцитом. Фагоцитарный показатель (ФП) определяли как долю фагоцитирующих макрофагов от количества проанализированных макрофагов [6].
Результаты и их обсуждение
При окраске кристаллическим фиолетовым все типы клеток перитонеального лаважа были хорошо различимы и имели типичную морфологию. Макрофаги выделялись на фоне остальных клеток крупными размерами, порядка 20 мкм в диаметре. Цитоплазма макрофагов в большинстве случаев содержала мелкие включения и вакуоли, ядро было округлым или бобовидным, хроматин был представлен преимущественно эухроматином (рис. 1 А).
А Б В Г
А - макрофаг; Б - лимфоциты; В - сегментоядерный гранулоцит; Г - тучная клетка Рис. 1. Виды клеток перитонеального лаважа, окраска кристаллическим фиолетовым,
ув. х 1000, водная иммерсия
Особенно четко макрофаги выделялись на фоне лимфоцитов, цитоплазма которых была скудной, а хроматин - гораздо более четко прокрашенным, местами глыбчатым (рис. 1 Б). В части экссудатов присутствовали гранулоциты, легко узнаваемые по сегментированному ядру с коллабированным хроматином (рис. 1 В). В составе лаважа встречались тучные клетки, заполненные гранулами с гистамином метахроматической окраски (рис. 1 Г). Поскольку данные клетки встречались крайне редко и не вносили существенного вклада в морфологическую картину, то их долю от общего числа клеток не рассчитывали. В экссудате практически не встречалось «путевых» эритроцитов, что свидетельствует о надлежащей технике забора материала.
В качестве праймирующих агентов были использованы: нативная фетальная телячья сыворотка (ООО «Биолот», Россия), прогретая (68 °С в течение 15 минут) сыворотка, прогретая замороженная (-20 °С) сыворотка, микробиологическая жидкая питательная среда Лурия - Бертани лабораторного приготовления, тиогликолевая среда, сахароза в концентрации 0,34 М, 1% триптон, 1% дрожжевой экстракт, неполный адъювант Фрейнда. У животных контрольной группы предварительную индукцию праймирующим агентом не проводили. Микрофотографии клеточного состава перитонеального лаважа
представлены на рисунке 2, процентное содержание различных видов клеток и общий цитоз представлены в таблице 1.
Без предварительного праймирования клеточ-ность лаважа была достаточно скудная, клетки ла-важа представлены преимущественно лимфоцитами (рис. 2 А). Введение сыворотки в качестве прайми-рующего агента увеличивает клеточность лаважа по сравнению с контрольными показателями не менее чем в 8-10 раз. Прогревание сыворотки перед ее введением в брюшную полость приводит к частичной денатурации белка и образованию преципитатов, что, по-видимому, дополнительно стимулирует выход макрофагов в лаваж (рис. 2 Б). При этом заморозка прогретой сыворотки с целью хранения несколько снижает выход макрофагов в долевом отношении (рис. 2 В), хотя общий цитоз лаважа при этом остается достаточно высоким.
Введение неполного адъюванта Фрейнда вызывает сильные воспалительные изменения в брюшной полости лабораторных мышей. Общее содержание клеток после праймирования крайне велико и превышает 70 млн на животное, хотя доля макрофагов при этом крайне низка, клетки экссудата представлены преимущественно сегментоядерными гранулоцита-ми с фагоцитированными жировыми микрокаплями (рис. 2 Г).
Д
Е
Ж
З
А - без предварительного праймирования; Б - праймирование прогретой сывороткой; В - праймирование гретой замороженной сывороткой; Г - праймирование неполным адъювантом Фрейнда; Д - праймирование дрожжевым экстрактом; Е - праймирование средой Лурия - Бертани; Ж - праймирование триптоном; З - праймирование сахарозой
Рис. 2. Микрофотографии клеток перитонеального лаважа, окраска кристаллическим фиолетовым, ув. х1000, водная иммерсия
Оптимальные показатели цитоза и доли макрофагов наблюдаются при применении белоксо-держащих стимуляторов - среды Лурия - Бертани, дрожжевого экстракта, триптона и тиогликолевой среды, которая во многих руководствах рекомендуется к применению. Наилучшие показатели из данной группы были характерны для дрожжевого экстракта, праймирование которым приводит к получению пе-ритонеального экссудата с цитозом не менее 17 млн на животное и содержанием макрофагов не менее 39% (рис. 2 Д). Среда Лурия - Бертани также обеспечивает высокий относительный выход макрофагов
при средних цифрах цитоза (рис. 2 Е). Праймирова-ние мышей триптоном ведет к образованию экссудата средней клеточности (общий цитоз порядка 5 млн на животное) и среднего относительного содержания макрофагов (рис. 2 Ж). Сходными характеристиками обладает экссудат, полученный от мышей, праймиро-ванных тиогликолевой средой. Сахароза, использованная в качестве индуктора перитонита, хуже всех использованных активаторов стимулирует выход клеток в перитонеальный экссудат, доля макрофагов в нем составляет порядка 20% (рис. 2 З).
Результаты оценки клеточного состава перитонеального лаважа животных, праймированных различными активаторами
Таблица 1
Праймирующий агент Общий цитоз, х106 кл./ животное Доля различных видов клеток в экссудате, М±т,%
Макрофаги Лимфоциты Гранулоциты
Без праймирования 0,3±0,12 12,4±0,8 78,7±5,6 8,9±2,3
Нативная сыворотка 3,97±0,16 26,7±3,0 65,6±3,6 7,7±1,3
Прогретая сыворотка 3,51±0,05 39,6±3,2 51,6±3,2 8,8±0,6
Прогретая замороженная сыворотка 3,34±0,17 29,4±2,4 64,2±2,8 6,4±1,2
Неполный адъювант Фрейнда 79,0±9,29 16,1±3,1 9,8±3,4 74,1±6,2
Тиогликолевая среда 7,7±1,2 18,3±1,3 66,6±2,6 15,1±4,5
Среда Лурия - Бертани 4,30±0,07 38,4±1,8 55,5±1,3 6,1±1,0
Триптон 4,78±0,52 13,8±1, 1 73,2±1,2 13,0±1,3
Дрожжевой экстракт 17,52±1,3 39,1±3,3 14,4±0,9 46,8±3,4
Сахароза 0,96±0,48 20,4±1,9 76,3±2,2 3,3±0,9
Таким образом, для получения фидерного слоя макрофагов неполный адъювант Фрейнда оказался непригоден, поскольку обеспечивал преимущественный выход нейтрофилов в перитонеальный экссудат, а полученные макрофаги - малоактивными по причине фагоцитирования частиц масляной эмульсии. Также непригодным был лаваж непраймированных и праймированных сахарозой животных по причине малого цитоза. На основании этого макрофаги данных групп для дальнейших исследований не использовались.
Макрофаги, полученные в ходе эксперимента по оценке клеточности лаважа, инкубировали в лунках 24-луночных планшетов для постановки теста фагоцитоза. Результаты оценки фагоцитарной активности (ФП и ФЧ) представлены в таблице 2.
Таблица 2
Фагоцитарная активность макрофагов перитонеального лаважа животных, праймированных различными активаторами
Праймирующий агент ФП ФЧ
Нативная сыворотка 62,6±5,3 2,8 ±0,2
Прогретая сыворотка 82,6±4,2 3,5±0,3
Прогретая замороженная сыворотка 84,3±2,2 2,8±0,2
Среда Лурия - Бертани 64,2±5,2 2,9±0,2
Дрожжевой экстракт 12,5±1,2 1,4±0,1
Тиогликолевая среда 34,8±4,6 2,1±0,2
Триптон 32,6±5,3 1,94±0,2
Как следует из данных таблицы 2, высокоактивными оказались макрофаги после индукции асептического перитонита прогретой сывороткой и средой Лурия - Бертани, на основании чего мы считаем целесообразным их использование в качестве фидер-
ного слоя при получении гибридом на этапе слияния и внесения селекционных агентов. Фагоцитарная активность макрофагов, полученных после прайми-рования мышей тиогликолевой средой и триптоном, оказалась сниженной по отношению к показателям активности макрофагов, полученных после прайми-рования различными вариантами гетерологичной сыворотки.
Макрофаги, полученные от мышей, праймиро-ванных дрожжевым экстрактом, оказались малоактивны и слабо фагоцитировали дрожжевые клетки, поэтому их применение в гибридомной технологии на этапе слияния клеток миеломы и спленоцитов, когда требуется активный фагоцитоз клеточного детрита (после внесения токсического селекционного агента аминоптерина), мы считаем нецелесообразным. Тем не менее индукция перитонита 1%-ным дрожжевым экстрактом обеспечивает хороший выход макрофагов, поэтому применение такого стимулятора возможно, например, для создания фидерного слоя на этапе клонирования первично-позитивных клеточных гибридов или наращивания биомассы гибридом в культуральных флаконах Т25 и Т75 (матрацы) для прививки лабораторным животным.
Выводы
Оптимальными стимуляторами перитонита для получения макрофагов с целью их использования на этапе слияния и селекции гибридом являются прогретая фетальная телячья сыворотка и среда Лурия -Бертани.
Оптимальным стимулятором перитонита для получения макрофагов с целью их использования на этапе клонирования первично-позитивных клеточных гибридов или наращивания биомассы гибридом является дрожжевой экстракт.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Литература/References
1. Greenfield E.A. Preparing Feeder Cell Cultures to Support Hybridoma Growth. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2019. Р. 722-725. DOI: 10.1101/pdb.prot103168.
2. Cassado A.A., Lima M.R., Bortoluci K.R. Revisiting mouse peritoneal macrophages: heterogeneity, development, and function. Frontiers in Immunology. 2015; 6: 1-9. DOI: 10.3389/fimmu.2015.00225.
3. Goncalves R., Mosser D.M. The isolation and characterization of murine macrophages. Current
Protocols in Immunology. 2015. 111: 14.1.1-14.1.16. DOI: 10.1002/0471142735.im1401s111.
4. Ray A., Dittel B.N. Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells. Journal of Visualized Experiments. 2010. Р. 1-3. D0I:10.3791/1488.
5. Фримель Г. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля. Пер. с нем. А.П. Тарасова. М.: Медицина, 1987. 472 с. [Friemel G. Immunologicheskie те^^у. Transl. from the German by A.P. Tarasov. Mоscow: Meditsina, 1987. 472 p. (In Russ.)]
6. Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. 800 с. [Kishkun A.A. Rukovodstvo po laboratornym metodam diagnostiki. Moscow: GEOTAR-Media, 2009. 800 p. (In Russ.)]
УДК 615.099-091.8:34 DOI 10.24412/2220-7880-2021-3-53-58
СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКАЯ ОЦЕНКА СПЕЦИФИЧНОСТИ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЗНАКОВ ОСТРЫХ СМЕРТЕЛЬНЫХ ОТРАВЛЕНИЙ НАРКОТИКАМИ ЛИЦ МОЛОДОГО ВОЗРАСТА
Грехов И.А., Долгова О.Б.
ФГБОУ ВО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России, Екатеринбург, Россия (620014, г. Екатеринбург, ул. Репина, 3), e-mail: nithterit@gmail.com
Цель: оценить специфичность гистоморфологических изменений внутренних органов при острых отравлениях наркотиками у наркопотребителей и возможность дифференциальной диагностики с вне -запной сердечной смертью. Ретроспективно проанализированы 140 случаев смертельных острых отравлений наркотиками и 30 случаев внезапной сердечной смерти. Исследования трупов выполнены на базе ГАУЗ МЗ СО «Бюро судебно-медицинской экспертизы», период 2005-2020 гг. Изучены акты судебно-медицинских исследований трупов, судебно-гистологические и судебно-химические акты исследований, выполнен расчет коэффициента Колмогорова - Смирнова, представлены четырехпольные таблицы и графики, рассчитаны сравнительный критерий х2 Пирсона и корреляционные критерии Крамера, коэффициент сопряженности Пирсона и нормированное значение коэффициента Пирсона. Определены специфические для наркопотребителей молодого возраста гистоморфологические признаки: серозный межуточный гепатит, жировая дистрофия печени, гиперплазия или гипоплазия фолликулов селезенки. При внезапной сердечной смерти установлена микроморфологическая специфичность гипертрофии и дистрофии миокардиоцитов, белковой дистрофии печени, кровоизлияний в селезенку, артерио/артериолосклероза внутренних органов. Оценка силы связи между причинами смерти и па -томорфологическими изменениями внутренних органов позволила выделить специфичные морфологические признаки: гипертрофия кардиомиоцитов на фоне дистрофии миокарда для внезапной сердечной смерти; межуточный серозный гепатит для воздействия нейродепрессантами; общие признаки для острых отравлений наркотиками (гиперплазия/гипоплазия фолликулов селезенки и жировая дистрофия печени). На основании анализа силы связи построена расчетная модель определения наиболее вероятной причины смерти у лиц молодого возраста в представленной выборке.
Ключевые слова: острые отравления наркотиками, внезапная сердечная смерть, морфологические признаки, специфичность.
FORENSIC MEDICAL ASSESSMENT OF PECULIARITY OF MICROMORPHOLOGICAL CHANGES IN ACUTE FATAL DRUG POISONING IN YOUNG PEOPLE
Grekhov I.A., Dolgova O.B.
Ural State Medical University, Ekaterinburg, Russia (620014, Ekaterinburg, Repin St., 3), e-mail: nighterit@gmail.com
The main objective is to assess the specific features of micromorphology of the internal organs in fatal drug poisoning in drug addicts and possibility of differential diagnosis in cases of sudden cardiac death. 140 cases of fatal acute drug poisoning and 30 cases of sudden cardiac death were retrospectively analyzed. Examination of the corpses was carried in the Sverdlovsk Region Medical Examiner's Office in the period from 2005 to 2020. The forensic medical reports, forensic histological and forensic chemical examination reports were analyzed, the Kolmogorov - Smirnov coefficient was calculated, four-field tables and graphs were presented,
