CC BY
205
ТОМ 4
НОМЕР 2
201 1
КЛИНИЧЕСКАЯ
OI і і s s—ч БИОЛОГИЯ ГЕМОБЛАСТОЗОВ
НКОгематология
Cytogenetic and molecular genetics of infant acute leukemias
G.A. Tsaur1-2, E.W. Fleishman3, A.M. Popov1-2-4,
O.l. Sokova3, O.V. Aleinikova5, E.G. Boychenko6,
A.V. Volochnik5, A.S. Ivanova12, O.V. Kalennik7,
N.P. Kirsanova5, K.L. Kondtratchik8, A.M. Kustanovich5, E.S. Lapotentova5, D.V. Litvinov9, I.S. Martynkevich10,
N.V. Myakova9, T.V. Nasedkina7, V.A. Ovsepyan11,
Yu.V. Olshanskaya9, O.M. Plehanova1, A.V. Popa3,
T.O. Riger1-2, L.l. Savelyev1-2-4, O.V. Streneva1-2,
M.V. Strigaleva, E.V. Shorikov1-2, L.G. Fechina1-2
SUMMARY
155 cases of acute leukemia in infants without Down syndrom were included in the current study. Median age in the observed group was 6.5 months (range 1 day — 12 months). Among them there were 117 acute lymphoblastic leukemia (ALL) cases, 31 acute myeloid leukemia (AML) cases and 7 patients with other types of acute leukemia, including acute undifferentiated leukemia (3), acute biphenotypic leukemia (2), acute bilineage leukemia (2). The translocations 11q23/MLL rearrangements were the most common genetic abnormalities, both in ALL (63.2 %) and AML (48.4 %) patients. Pattern of 11q23/MLL rearrangements were different in these types of acute leukemia. In ALL the most prevalent chromosomal change was t(4;11) (q21;q23)/MLL-AF4, detected in 47 patients (40.2 %).
Among AML patients the most frequent was t(10;11) (p12;q23)/MLL-MLLT70, found in 10 patients (19.4 %).
The translocation t(1;22)(p13;q13) was revealed in 5 AML M7 cases. Complex karyotype, with 11q23 rearrangements and absence of favorable-risk features, was found in 4 AML patients. In 6 patients with normal karyotype application of RT-PCR and FISH allowed to detect cryptic 11q23 translocations, including t(4;11)(q21;q23)/MLL-AF4, t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLT70, t(9;11)(p22;q23)/MLL-MLLT3 (2 cases each). Cytogenetic and molecular genetic abnormalities that have significant impact in acute leukemia of older children were rarely found in infants. We detected only 1 case of t(9;22)(q34;q11)/BCR-ABL, 1 case of t(1;19) (q23;p13)/TCF3-PBX, 2 cases of inv(16)(p13;q22), 2 cases of high hyperdiploidy, 1 case of hypodiploidy. Additionally, in 1 of 3 T-ALL cases SCL-TAL1 fusion gene was found.
Keywords: acute leukemia, infants, 11q23/MLL rearrangements, cytogenetics, RT-PCR, FISH.
1 Regional Children’s Hospital No. 1, Yekaterinburg
2 Research Institute of Medical Cell Technologies, Yekaterinburg
3 N.N. Blokhin Cancer Research Center RAMS, Moscow
4 Ural State Medical Academy, Yekaterinburg
5 Belarusian Research Center for Pediatric Oncology and Hematology, Minsk
6 Children’s Municipal Hospital No. 1, St. Petersburg
7 Engelgardt Institute of Molecular Biology RAS, Moscow
8 Morozov Pediatric Municipal Clinical Hospital, Moscow
9 Federal Research Institute of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow
10 Russian Research Institute of Hematology and Transfusiology, St. Petersburg
11 Kirov Research Institute of Hematology and Transfusiology, Kirov
Контакты: [email protected] Принято в печать: 11 июня 2011 г.
Цитогенетическая и молекулярно-генетическая характеристики острых лейкозов у детей первого года жизни
Г.А. Цаур1-2, Е.В. Флейшман1 2 3, А.М. Попов1-2-4, О.И. Сокова3, О.В. Алейникова5,
Э.Г. Бойченко6, Е.В. Волочник5, А.С. Иванова1,2, О.В Каленник7, Н.П. Кирсанова5, К.Л. Кондратчик8, А.М. Кустанович5, Е.С. Лапотентова5, Д.В. Литвинов9,
И.С. Мартынкевич10, Н.В. Мякова9, Т.В. Наседкина7, В.А. Овсепян11,
Ю.В. Ольшанская9, О.М. Плеханова1, А.В. Попа3, Т.О. Ригер1,2, Л.И. Савельев1-2-4, О.В. Стренева1-2, М.В. Стригалева1, Е.В. Шориков1-2, Л.Г.Фечина1-2
РЕФЕРАТ
В исследуемую группу вошло 155 детей в возрасте от 1 дня до 12 мес. (медиана 6,5 мес.), включая 117 пациентов с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ), 31 — с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) и 7 — с другими вариантами острого лейкоза. Среди выявленных генетических изменений наиболее часто обнаруживались транслокации с участием района 11q23/MLL. Они доминировали как при ОЛЛ (63,2 %), так и при ОМЛ (48,4 %). Частота отдельных специфических транслокаций 11q23/MLL различалась при ОЛЛ и ОМЛ. Самой частой у пациентов с ОЛЛ была транслокация t(4;11)(q21;q23)/MLL-AF4, которая выявлена у 47 (40,2 %) пациентов. Самой частой перестройкой при ОМЛ была t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLLT10, которая идентифицирована у 6 (19,4 %) больных. У 1 пациента с Т-ОЛЛ был выявлен химерный ген SCL-TAL1. В 5 случаях ОМЛ М7 была обнаружена t(1;22)(p13;q13). Сложный кариотип, включавший три или более числовых и/или структурных аномалии, в т. ч. перестройки 11q23 с отсутствием маркеров благоприятного прогноза, выявлен у 4 больных ОМЛ. У 6 пациентов с нормальным кариотипом (4 случая ОЛЛ и 2 — ОМЛ) использование ОТ-ПЦР и FISH помогло установить наличие криптических вариантов транслокаций района 11q23, включая 2 случая t(4;11)(q21;q23)/MLL-AF4, 2 случая t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLT10, 2 случая t(9;11)(p22;q23)/ MLL-MLLT3. Цитогенетические и молекулярно-генетические изменения, прогностически важные при острых лейкозах у детей более старших возрастных групп, у детей первого года жизни наблюдались чрезвычайно редко: выявлено по 1 случаю t(9;22)(q34;q11)/BCR-ABL и t(1;19)(q23;p13)/TCF3-PBX, 2 случая inv(16)(p13;q22), 2 случая высокой гипердиплоидии и 1 случай гиподиплоидии.
Ключевые слова
острые лейкозы, педиатрия, дети первого года жизни, транслокации района 11q23/MLL, цитогенетика, ПЦР, флюоресцентная гибридизация in situ.
1 ГУЗ «Областная детская клиническая больница № 1», Екатеринбург
2 ГУЗ СО «Институт медицинских клеточных технологий», Екатеринбург
3 РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
4 ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия», Екатеринбург
5 ГУ «Республиканский научно-практический центр детской онкологии и гематологии», Минск
6 ГУЗ «Детская городская больница № 1», Санкт-Петербург
7 Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва
8 Морозовская детская городская клиническая больница, Москва
9 ФГУ «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии Минз-дравсоцразвития России», Москва
10 ФГУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург
11 ФГУ «Кировский НИИ гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического
агентства», Киров
134
Генетическая характеристика острых лейкозов у детей
ВВЕДЕНИЕ
Исследования последних лет показали, что острые лейкозы (ОЛ) у детей первого года жизни имеют ряд характерных особенностей [1, 2]. В этой группе так же, как при ОЛ у пациентов другого возраста, обнаруживаются клоны клеток с различными неслучайными генетическими нарушениями. Однако в отличие от более старших пациентов у детей первого года жизни редко выявляются клоны клеток с маркерами благоприятного прогноза: высокой гипердиплоиди-ей (51—65 хромосом), транслокацией t( 12;21) при остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ) и транслокациями t(8;21), t( 15; 17) при остром миелоидном лейкозе (ОМЛ) [3—8]. Главным отличием ОЛ в этой возрастной группе служит чрезвычайно высокая частота перестроек гена MLL, расположенного на длинном плече хромосомы 11 (район 11q23) [1,2]. На сегодня на молекулярном уровне охарактеризовано 64 различных гена-партнера MLL [9], и это число постоянно растет. Изучение генов-партнеров MLL представляет большой практический и теоретический интерес, поскольку клинические особенности лейкоза и чувствительность к терапии зависят не только от гена MLL, но и от его партнера по перестройке [1,2, 10].
Исследования профиля экспрессии генов в клетках MLL-позитивных ОЛ показали, что это совершенно особый тип лейкоза, отличный как от ОЛЛ, так и ОМЛ [11, 12]. В то же время этот тип ОЛ несет отдельные генетические характеристики и ОЛЛ, и ОМЛ, что позволило сделать предположение о единой природе возникновения MLL-позитивных ОЛ [12]. Кроме того, профили экспрессии генов при ОЛЛ у детей первого года жизни независимо от изменений гена MLL имеют больше сходства между собой, чем с профилями экспрессии генов у детей с ОЛЛ старше 1 года [13]. Все это позволило нам в одной статье представить результаты цитогенетического и молекулярно-генетического исследований у пациентов первого года жизни с ОЛЛ и ОМЛ.
ОЛ у детей первого года жизни встречаются относительно редко [14, 15], поэтому работа по их изучению идет сравнительно медленно. В нашу серию наблюдений, собранных в детских онкогематологических отделениях Российской Федерации и Республики Беларусь, включены 155 пациентов в возрасте от 1 до 365 дней с различными типами ОЛ. По представительности эта выборка вполне сравнима с опубликованными данными зарубежных авторов и в совокупности с ними позволяет более детально охарактеризовать цитогенетические и молекулярно-генетические особенности ОЛЛ и ОМЛ у детей первого года жизни.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Проанализированы данные, полученные у 158 пациентов с ОЛ в возрасте менее 365 дней. Из этого числа были исключены 3 девочки с синдромом Дауна, у 2 из которых был поставлен диагноз ОМЛ и у 1 — ОЛЛ. Таким образом, в ко-
нечный анализ было включено 155 пациентов с различными типами ОЛ в возрасте от 1 до 365 дней (медиана 194 дня). Распределение больных по возрасту и полу представлено в табл. 1.
Диагноз ОЛЛ или ОМЛ устанавливался на основании стандартных морфологических показателей [16], дополненных данными иммунофенотипирования согласно критериям группы EGIL [17]. Все пациенты получали терапию по одному из следующих химиотерапевтических протоколов: MLL-Baby, ALL-BFM 90, ALL-MB 91, ALL-MB-2002, ALL-MB-2008, CoALL, AML-BFM 98, ОМЛ-ММ 2000, ОМЛ-ММ 2003, ОМЛ-ММ 2006, НИИ ДОГ ОМЛ 2007 — в клиниках Российской Федерации и Республики Беларусь. Информированное согласие на проведение диагностических и лечебных процедур было получено во всех случаях.
Для цитогенетического анализа использовали клетки костного мозга и периферической крови, которые брали до начала терапии и культивировали 1 ч («прямые препараты») и/или 24—48 ч. Препараты окрашивали на G-полосы с предварительной обработкой трипсином. В большинстве случаев анализировали не менее 20 метафазных пластинок. Кариотипирование проводили в соответствии с международной номенклатурой хромосом человека [18]. В отдельных случаях дополнительно проводили исследование методом флюоресцентной гибридизации in situ (FISH) с локус -специфическими зондами LSI MLL Dual Color Break Apart Rearrangement Probe и LSI TEL/AML1 ES Dual Color Translocation Probe (оба Abbott, США) согласно инструкции производителя.
Спектр исследованных химерных транскриптов определялся как типом ОЛ, так и линейной принадлежностью бластных клеток. У пациентов с ОЛЛ из В-линейных предшественников проводили исследование следующих химерных транскриптов: BCR-ABL, ETV6-RUNX1, TCF3-PBX, а также определяли перестройки гена MLL, включая MLL-AF4, MLL-MLLT1, MLL-MLLT3, MLL-MLLT4, MLL-MLLT10, MLL-ELL. При Т-линейных ОЛЛ исследовали наличие химерных транскриптов BCR-ABL, SCL-TAL1 и всех указанных выше перестроек гена MLL. У пациентов с ОМЛ определяли наличие BCR-ABL, RUNX1-RUNXT1, CBFB-MYH11, PML-RARa, а также отмеченных выше перестроек гена MLL. У 11 пациентов дополнительно определяли экспрессию MLL-SEPT9, MLL-MLLT11, MLL-EPS15. В случаях острого недифференцированного, бифенотипического или билинейного ОЛ использовали комбинацию всех указанных маркеров.
Выявление химерных транскриптов проводили методом гнездной обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) в двух модификациях. В первом случае РНК выделяли сорбционным методом с помощью наборов RNeasy (Qiagen, Германия), а перестройки гена MLL выявляли в ходе мультиплексной двухстадийной ПЦР и последующей гибридизации с помощью наборов «ЛК-Биочип» («Биочип-ИМБ», Москва) по ранее описанному протоколу
Таблица 1. Сравнение демографических показателей при остром лейкозе у детей первого года жизни без синдрома Дауна
ОЛЛ ОМЛ р* ОЛ недифференцированный ОЛ билинейный ОЛ бифенотипический
Всего пациентов 117 31 ** 3 2 2
Возраст
< 6 мес. 50 14 0,969 1 1 1
> 6 мес. 67 17 2 1 1
Пол
Мужской 43 15 0,331 3 1 1
Женский 74 16 0 1 1
* p рассчитано между пациентами с ОЛЛ и ОМЛ.
** Вычисление различий не требуется.
www.medprint.ru 135
Г.А. Цаур и др.
[19]. Второй метод включал выделение РНК по Chomzynsky с использованием коммерческих трехкомпонентных реагентов TRIreagent (Sigma-Aldrich, США) или TRIzol (Invitrogen, Германия) с последующей ОТ-ПЦР и детекцией методом горизонтального электрофореза в 2% агарозном геле по ранее описанным протоколам [20—24]. В ходе сравнения двух методов, проведенного в 10 образцах пациентов с перестройками гена MLL, дискордантных результатов получено не было.
При сравнении групп пациентов по качественным признакам применяли критерийх2 с поправкой Йетса. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05. Анализ результатов проводили с помощью программ для статистической обработки данных STATISTICA for Windows 6.0.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Стандартный цитогенетический анализ проведен у 108 пациентов. При этом как единственный метод исследования он был выполнен в 31 случае. ОТ-ПЦР проведена у 124 пациентов, FISH — у 36. Результаты цитогенетических и молекулярно-генетических исследований представлены в табл. 2.
Острый лимфобластный лейкоз
В группе пациентов с ОЛЛ подавляющее большинство обнаруженных генетических аномалий было представлено транслокациями с вовлечением района 11q23 или перестройками гена MLL. Суммарно эти изменения встретились в 74 (63,2 %) из 117 случаев. Самой частой была транслокация t(4;11)(q21;q23)/MLL-AF4, которая выявлена у 47 (40,2 %) пациентов. Другие транслокации наблюдались значительно реже. Так, t(11;19Xq23;p13)/MLL-MLL77 была обнаружена у 14 (12 %) пациентов, t(1;11)(p32;q23)/MLL-EPS15 — у 5 (4,3 %), t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLL710 — у 5 (4,3 %) и t(9;11)(p22;q23)/MLL-MLL73 — у 2 (1,7 %) пациентов.
Стандартный цитогенетический анализ показал, что у большинства пациентов с наличием перестройки района 11q23 (38 из 44 исследованных случаев), она была единственной аномалией кариотипа в клетках лейкозного клона. В 6 случаях отмечены сочетания t(1;11), t(4;11) или t( 11; 19) c различными неповторяющимися хромосомными
Таблица 2. Результаты цитогенетических и молекулярно-генетических исследований
ОЛЛ ОМЛ Другие варианты ОЛ*
Всего пациентов 117 31 7
Количество молекулярно-генетических исследований 102 15 5
Количество цитогенетических исследований 73 27 6
Количество исследований методом FISH 30 4 2
Нормальный кариотип 23 (4)** 3 (2)** 3
Транслокации 1^23/перестройки гена MLL 74 15 4
Гипердиплоидия (51-65 хромосом) 2 0 0
Гиподиплоидия 1 0 0
SCL-TAL1 1 0 0
t(9;22)(q34;q11)/BCR-ABL 1*** 0 0
t(1;19)(q23;p13)/TCF3-PBX1 1 0 0
inv(16)(p13;q22) 0 2 0
t(1;22)(p13;q13) 0 5 0
t(7;12)(q36;p12) 0 0 1
Другие изменения кариотипа (см. табл. 4) 7 6 0
* Недифференцированный, бифенотипический или билинейный вариант ОЛ.
** В ряде случаев с нормальным кариотипом с помощью FISH или ПЦР обнаружены молекулярно-генетические маркеры (количество таких случаев указано в скобках). *** Кариотип не исследован.
изменениями (табл. 3). У 23 пациентов (см. табл. 2) при цитогенетическом исследовании были обнаружены только клетки с нормальным кариотипом, а методами ПЦР и FISH у 4 из них выявлены перестройки гена MLL и в 1 случае (Т-ОЛЛ) — химерный ген SCL-7AL1. Только в 7 случаях измененный кариотип лейкозных клеток не содержал перестроек района 11q23, причем в одном из них с помощью ПЦР и FISH удалось выявить изменения гена MLL (№ 3 в табл. 4). У 2 из этих 7 пациентов обнаружены клоны с высокой ги-пердиплоидией (№ 6 и 7 в табл. 4). Кариотипы лейкозных клеток всех 7 больных ОЛЛ представлены в табл. 4.
Необходимо отметить тенденцию к снижению частоты транслокаций района 11q23/MLL на протяжении первого года жизни. В возрасте до 6 мес. аномалии района 11q23/ MLL были выявлены статистически значимо чаще (42 из 50 случаев) по сравнению с пациентами в возрасте 6—12 мес. (32 из 67 случаев) (р < 0,001).
Клон гиподиплоидных клеток обнаружен у одного ребенка (№ 1 в табл. 4) — мальчика с B-II ОЛЛ. В этом случае моносомии 6 и 9 сочетались с транслокацией t(7;10) (p22;p 12). Других нарушений, включая перестройки гена MLL, у данного пациента не было.
Характерные для ОЛЛ t( 1; 19)(q23;p 13) и химерный транскрипт 7CF3-PBX (E2A-PBX) выявлены только у 1 пациента с B-II ОЛЛ (№ 2 в табл. 4). Еще у одного больного с B-II ОЛЛ обнаружен химерный транскрипт BCR-ABL, цитогенетическое исследование в этом случае не проводилось.
Только у 3 из 112 детей с ОЛЛ был диагностирован Т-линейный лейкоз. Из них у 2 пациентов выявлен нормальный кариотип, а у одного обнаружен химерный ген SCL-7AL1 (SIL-7AL).
Трисомия 8 была выявлена у 1 пациента с B-I ОЛЛ в сочетании с транслокацией t(1;11)(p32;q23) (№ 6 в табл. 3).
Клоны клеток с тремя и более хромосомными аномалиями (сложный кариотип) наблюдались у 4 (5,3 %) из 75 больных ОЛЛ, у которых удалось провести детальное цитогенетическое исследование. В 3 случаях (№ 1,3 и 5 в табл. 3) в число изменений кариотипа входили транслокации с вовлечением района 11q23. У 4-го пациента (№ 6 в табл. 4) кроме трисомий в клетках с высокой гипердиплоидией обнаружена структурная перестройка в хромосоме 8.
Острый миелоидный лейкоз
Так же как и при ОЛЛ, у больных ОМЛ самыми частыми генетическими нарушениями были перестройки района 11q23/MLL. Они обнаружены у 15 (48,4 %) из 31 пациента. Транслокация t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLL710 была обнаружена у 6 (19,4 %) пациентов. Кроме того, выявлено 3 (9,7 %) случая с t(9;11 )(p22;q23)/MLL-MLL73 и по одному случаю с t(4; 11)(q21;q23)/MLL-AF4, t(2; 11 )(p21 ;q23), t(6; 11 )(q27;q23), t(11; 17)(q23;q25), t(11; 19)(q23;p 13)
и del(11)(q23).
Цитогенетический анализ был проведен у 27 больных ОМЛ. В 3 случаях были обнаружены только метафазы с нормальным кариотипом, причем в 2 из них при использовании ОТ-ПЦР выявлен химерный транскрипт MLL-MLL10 (см. табл. 2).
Среди 24 пациентов с клональными аномалиями хромосом перестройки 11q23 наблюдались у 11, причем в 8 случаях как единственная аномалия. Сведения о сочетании изменений района 11q23 с другими неповторяющимися хромосомными маркерами (3 случая) представлены в табл. 3 (№ 7, 8 и 9). У 2 из этих пациентов кариотип лейкозных клеток содержал три аномалии и более.
Не выявлено ни одного случая со специфическими транслокациями t(8;21 )(q22;q22) и t( 15; 17)(q22;q 11),
136
Клиническая онкогематология
Генетическая характеристика острых лейкозов у детей
Таблица 3. Сочетание перестроек района 11q23 с другими аномалиями
№ Пол Возраст, мес. Иммунофенотип и FAB-вариант Стандартный хромосомный анализ ОТ-ПЦР FISH
Острый лимфобластный лейкоз
1 Ж 1,6 B-III ОЛЛ 46,XX,inv(14)(q11;q32),t(11;19)(q23;p13) [17]/46,XX,inv(3)(p12.1;p21),t(11;19) (q23;p13),inv(14)(q11;q32)[3] MLL-MLLT1 Исследование не проведено
2 Ж 2,9 B-I ОЛЛ 46,ХХ,t(4;11)(q21;q23),der(5)[2]/46,XX,t(4;11) (q21;q23),der(9)[9]/46,XX,der(5),add(7p)[1] MLL-AF4 Исследование не проведено
3 Ж 3,3 B-I ОЛЛ 46,XX,del(1)(p31),der(2),t(4;11)(q21;q23), -9,+mar[3]/47,XX,idem,+der(2)[3] MLL-AF4 nuc ish (MLLx2)(5,MLLsep3'MLLx1)[65]/(5'MLLx2) (3,MLLx3)(5'MLLsep3'MLLx1)[22]/(MLLx2)[13]
4 М 9,7 B-I ОЛЛ 46,XY,t(4;17)(q25;q11),ins(11;4)(q23;q21;q25) [9]/46,XY[1] MLL-AF4 nuc ish (MLLx2)(5 ' MLLsep3 ' MLLx 1)
5 Ж 2,8 B-I ОЛЛ 47,XX,del(2)(q33),t(4;11) (q21;q23),+22[19]/46,XX[1] MLL-AF4 nuc ish (MLLx2)(5 ' MLLsep3 ' MLLx 1)[90]/(MLLx2)[10]
6 М 7,0 B-I ОЛЛ 47,XY,t(1;11)(p32;q23),+8[11] Исследование не проведено Исследование не проведено
Острый миелоидный лейкоз
7 Ж 9,2 ОМЛ М5а 46,XX,t(7;10)(q11;q11)del(11)(q23) Исследование не проведено Исследование не проведено
8* М 10,5 ОМЛ М5 46—48,XY,t(9;11)(p21;q23),-12,+iso(12q), -13,1-3r[21] MLL-MLLT3 nuc ish (MLLx2)(5 ' MLLsep3 ' MLLx1)[83]/(MLLx2)[17]
9* Ж 2,1 ОМЛ М5 50,XX,+8,+8,—10,+t(10;11)(p12;q13),+t(10;11;12) (p12;q13;q23;q15),—11,+del(12)(q15),+16[14] Исследование не проведено Исследование не проведено
* Эти пациенты также представлены в табл. 5 под № 4 и 1 соответственно.
В квадратных скобках указано количество проанализированных метафаз (то же относится к табл. 4-6).
которые считаются маркерами благоприятного прогноза. Инверсия inv(16)(p13q22), тоже относящаяся к аномалиям благоприятного прогноза, наблюдалась у 2 девочек с ОМЛ вариантов М4 и М5 соответственно. В первом случае inv(16) представлена как единственная аномалия, во втором — она сочеталась с трисомией хромосом 19 и 22 и маркером del(12p).
У 5 пациентов с мегакариобластным ОЛ была обнаружена транслокация t( 1 ;22)(p 13;q 13), специфичная для варианта М7 и встречающаяся в основном у детей первого года жизни. Во всех случаях t(1;22) была единственной аномалией кариотипа.
В 6 случаях (№ 8—13 в табл. 4) лейкозные клетки содержали другие хромосомные нарушения, среди которых были как редкие аномалии, так и характерные для ОМЛ, такие как del(3)(q26), add(5q), add(7q), del(7q), del(20q), +21.
Сложный кариотип (три хромосомные аномалии и более) наблюдался у 4 (13,8 %) из 29 больных ОМЛ, у которых был проведен цитогенетический анализ. В 2 случаях (№ 1 и 4 в табл. 5) в число изменений кариотипа входили транслокации с вовлечением района 11q23. В 1 случае (№ 2 в табл. 5) наряду с конституциональной inv(5)(p13q13) присутствовали 4 маркерных хромосомы, одной из которых, скорее всего, была add(7p), а остальные идентифицировать не удалось. 4-й случай (№ 3 в табл. 5) по особенностям хромосомных изменений соответствует определению типичного сложного кариотипа, характерного для ОМЛ у взрослых больных.
Другие варианты острого лейкоза
Обследовано 7 больных (см. табл. 1 и 2): 3 — с недифференцированным вариантом ОЛ, 2 — с бифенотипическим и 2 — с билинейным. У 6 пациентов проведен хромосом-
Таблица 4. Клоновые изменения кариотипа, не включавшие перестройки района 11q23
№ Пол Возраст, мес. Иммунофенотип и FAB-вариант Стандартный хромосомный анализ ОТ-ПЦР FISH
Острый лимфобластный лейкоз
1 М 9,9 B-II ОЛЛ 44,XY,—6,t(7;10)(p22;p12),—9 НО nuc ish (MLLx2)[100]
2 М 10,1 B-III ОЛЛ 46,XY,der(19)t(1;19)(q23;p13)[8]/46,XY[7] TCF3-PBX —
3 Ж 10,1 B-II ОЛЛ 46,XX,der(9)t(9;?)(p21;?)[2]/46,XX[12] MLL-MLLT3 nuc ish (MLLx2)(5 ' MLLsep3' MLLx1)[10](MLLx2)[15]
4 Ж 11,4 B-III ОЛЛ 46,XX,add(7)(q22)[6]/46,XX,dic(1;10)(p11;q26) [3]/46,XX,add(10)(q24)[3]/46,XX[4] НО nuc ish (MLLx2)[30]
5 М 0,1 B-III ОЛЛ 47,XY,del(5)(p13),+mar Исследование не проведено Исследование не проведено
6 Ж 10,0 B-II ОЛЛ 54,XX,+3,+4,+der(8),+10,+14,+17 или +18,+19,+21,+21[8] НО Исследование не проведено
7 М 11,8 B-II ОЛЛ 46,XY[8]/>55,XXY[3] НО Исследование не проведено
Острый миелоидный лейкоз
8 М 2,7 ОМЛ M7 46,XY,t(7;11)(p12;p15) НО Исследование не проведено
9* Ж 10,0 ОМЛ М0 46,XX,del(3)(q26),add(7)(p22),add(7)(q32),t(8;11) (q22;q12),del(14),t(22;?)(q;?)[13]/46,XX[2] Исследование не проведено Исследование не проведено
10 Ж 3,2 ОМЛ M0 47,XX,del(7)(q32),+17 НО nuc ish (MLLx2)[100]
11 Ж 8,0 ОМЛ М4 47,XX,t(5;7)(q12;p22),+21 НО Исследование не проведено
12 Ж 9,9 ОМЛ 46,XX,t(10;11)(p11;15(?);q13),del(20)(q11) [5]/46,XX[10] НО Исследование не проведено
13* М 6,3 ОМЛ М7 42—49,XY,—4,inv(5)(p13;q13),add(7p),+4mar[9]/46, XY,inv(5)(p13q13)[2] НО Исследование не проведено
* Эти пациенты также представлены в табл. 5 под № 3 и 2 соответственно.
НО — не обнаружено. Спектр исследованных химерных транскриптов определялся как типом ОЛ, так и линейной принадлежностью бластых клеток (подробнее см. разд. «Материалы и методы»).
www.medprint.ru
137
Г.А. Цаур и др.
Таблица 5. Сложный кариотип у пациентов с острым миелоидным лейкозом
№ Пол Возраст, мес. FAB-вариант Кариотип аномальных клеток Количество хромосомных аномалий
1 Ж 2,1 ОМЛ М5 50,XX,+8,+8,-10,+t(10;11)(p12;q13),+t(10;11;12)(p12;q13;q23;q15), -11,+del(12)(q15),+16[14] 8
2 М 6,3 ОМЛ М7 42-49,XY,-4,inv(5)(p13;q13),add(7p),+4mar[9]/46,XY,inv(5)(p13;q13)[2] 6
3 Ж 10,0 ОМЛ М0 46,XX,del(3)(q26),add(7)(p22),add(7)(q32),t(8;11)(q22;q12), del(14),t(22;?)(q;?)[13]/46,XX[2] 6
4 М 10,5 ОМЛ М5 46-48,XY,t(9;11)(p21;q23),-12,+iso(12q),-13,1-3r[21] 5
ный анализ, в 5 случаях — ПЦР и в 2 — FISH. У 3 пациентов при хромосомном исследовании найдены только клетки с нормальным кариотипом. Методом ОТ-ПЦР у одного из них обнаружен химерный транскрипт MLL-MLLT3. Кроме того, транслокации с участием 11q23 наблюдались еще у 3 пациентов: t( 10; 11 )(p 12;q23), t(4; 11 )(q21 ;q23) и t( 11; 15) (q23;q22). В 2 случаях цитогенетические данные были подтверждены молекулярно-генетическими исследованиями.
Лейкозные клетки одной пациентки с бифенотипическим ОЛ содержали неслучайную транслокацию t(7; 12) (q21 ;p 12) — вариант известной транслокации t(7; 12) (q36;p12), которую считают характерной для ОМЛ у детей первого года жизни, но изредка находят и при ОЛЛ в этой возрастной группе [25—30].
Расхождения результатов хромосомного анализа с данными ПЦР и FISH
У 29 больных при цитогенетическом исследовании обнаружены только клетки с нормальным кариотипом (см. табл. 2). Из них в 6 случаях ПЦР и/или FISH позволили выявить различные перестройки гена MLL. Кроме того, в клетках у 1 больного ОЛЛ был определен дериват хромосомы 9 — der(9)t(9;?)(p21;?). Дополнительное использование FISH помогло выявить наличие перестройки гена MLL, а в ходе ПЦР был обнаружен химерный транскрипт MLL-MLLT3, образующийся в результате транслокации t(9;11)(p21;q23) (№ 2 в табл. 6).
Еще в одном случае у пациента с нормальным кариотипом был обнаружен химерный ген SCL-TAL1, образующийся в результате микроделеции на коротком плече хромосомы 1, которая служит субмикроскопической перестройкой, неразличимой при стандартном хромосомном анализе. Такие ситуации нельзя отнести к истинному расхождению результатов.
Контаминация в ПЦР как причина получения ложноположительного результата была исключена во всех этих случаях. При проведении исследования соблюдались все необходимые аналитические предосторожности: выделение РНК, приготовление реакционных смесей, обратная транскрипция и ПЦР проводились в отдельных помещениях лаборатории. Повторное тестирование данных образцов с другими праймерами позволило выявить эти же химерные транскрипты; в то же время ни в одном из образцов у других пациентов, тестировавшихся параллельно с указанными выше образцами MLL( + ), аналогичных химерных транс-криптов не отмечено. Более того, в ходе последующего
молекулярно-генетического мониторинга выявленные типы транскриптов продолжали обнаруживаться и в последующих образцах этих пациентов в ходе проводимой терапии.
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
Изучение ОЛ, развивающихся у детей первого года жизни, позволило получить ряд новых фактов, важных не только для клиники, но и для расшифровки событий, играющих ключевую роль в возникновении лейкозов и их прогрессии [31 — 33].
Сегодня абсолютно ясно, что ОЛ детей первого года жизни — гетерогенная группа злокачественных новообразований, а для характеристики входящих в нее вариантов необходима большая работа по накоплению данных о пациентах, обследованных с помощью современных лабораторных методов.
В настоящей работе представлен анализ молекулярногенетических и цитогенетических особенностей злокачественных клеток из костного мозга и /или периферической крови 155 больных ОЛ в возрасте до 1 года. Так же, как и авторы работ, опубликованных ранее, мы полагаем, что главной особенностью ОЛ у детей первого года жизни служит значительное преобладание случаев с транслокациями, в которых участвует ген MLL (хромосомный район 11q23). Это характерно для всех исследованных вариантов заболевания.
При изучении ОЛЛ мы получили результаты, сходные с ранее опубликованными данными [10, 31], однако обнаруженная нами общая частота перестроек гена MLL (63,2 %) оказалась несколько ниже показателя (79,3 %), приводимого в крупнейшем из опубликованных на сегодня исследований [10]. Важно отметить, что частота выявления перестроек гена MLL зависит от арсенала методов, примененных для обследования пациентов. Мы использовали в большинстве случаев сочетание стандартного хромосомного анализа и ОТ-ПЦР с выявлением наиболее частых партнеров гена MLL, значительно реже — FISH. Наши результаты хорошо согласуются с выводами тех авторов, которые применяли аналогичные методы исследования. В их публикациях частота обнаружения транслокаций с участием района 11q23/MLL составляет 58—66 % [4, 34, 35], т. е. ниже, чем в работах, где применялся более широкий набор молекулярных методик.
По нашим данным, при ОЛЛ среди перестроек 11q23/ MLL самой частой была транслокация t(4;11)(q21;q23)/ MLL-AF4, которая выявлена почти в половине случаев.
Таблица 6. Расхождение результатов цитогенетического и молекулярно-генетических анализов
№ Пол Возраст, мес. Тип ОЛ Иммунофенотип и FAB-вариант Кариотип FISH ОТ-ПЦР
1 М 5,9 ОЛЛ B-I ОЛЛ 46,XY[20] Исследование не проведено MLL-AF4
2 Ж 7,6 ОЛЛ B-I ОЛЛ 46,XX[8] Исследование не проведено MLL-AF4
3 М 10,1 ОЛЛ B-II ОЛЛ 46,XX,t(9;?)(p21;?)[2]/46,XX[12] nuc ish (MLLx2)(5'MLLsep3'MLLx1) [10](MLLx2)[15] MLL-MLLT3
4 Ж 11,6 ОЛЛ B-II ОЛЛ 46,XX[20] nuc ish 11q23(5' MLLx2)(3' MLLx1)(5' MLLsep3' MLLx0) MLL-MLLT3
5 Ж 9,2 ОМЛ ОМЛ М5 46,XX[15] Исследование не проведено MLL-MLLT10
6 М 11,8 ОМЛ ОМЛ М0 46,XY[11] nuc ish 11q23(5' MLLx3)(3' MLLx1)(5 ' MLLsep3' MLL x0) [83]/(MLLx2)[17] MLL-MLLT10
138
Клиническая онкогематология
Генетическая характеристика острых лейкозов у детей
Другие транслокации, а именно t( 11; 19)(q23;p13)/MLL-MLLT1, t(10;11)(p12;q23)/MLL-MLLT10, t(1;11)(p32;q23)/ MLL-EPS15, t(9; 11 )(p22;q23)/MLL-MLLT3, наблюдались значительно реже.
Мы, так же как и другие авторы [4, 34], отметили тенденцию к снижению частоты перестроек 11q23/MLL по мере увеличения возраста детей.
Для В-клеточных ОЛЛ у детей старше одного года характерны такие генетические нарушения, как высокая гипердиплоидия и криптическая транслокация t(12;21) (p 13;q22) с образованием химерного гена ETV6-RUNX1. Реже выявляются перестройки, связанные с неблагоприятным прогнозом, такие как транслокации района 11q23/MLL и t(9;22)(q34;q11)/BCR-ABL, внутрихромосомная амплификация 21 (iAMP21), гиподиплоидия или окологаплоидия, а также утраты 13q и перестройки 17p [7, 36]. Среди обследованных нами 113 детей с В-клеточным ОЛЛ в возрасте до 1 года выявлено лишь 2 случая с высокой гипердиплоидией и по 1 случаю с транслокациями t(1;19)(q23;p13)/TCF3-PBX и t(9;22)(q34;q11)/BCR-ABL. Транслокации с участием 12p13, вовлекающие ген ETV6 (TEL), не были обнаружены ни цитогенетически, ни при использовании ОТ-ПЦР и FISH. Литературные данные о частоте выявления ETV6-RUNX1 у детей первого года жизни противоречивы: в работе M. Emerenciano и соавт. [4] он был обнаружен у 4 из 29 обследованных пациентов, в то время как J. Chessels и соавт. [34] не выявили ETV6-RUNX1 ни у одного из 118 детей в возрасте менее 365 дней.
При ОМЛ перестройки гена MLL выявлены нами у 15 (48,4 %) из 31 обследованного пациента. Этот показатель сопоставим с данными из ранее опубликованных работ — 35— 40 % [32, 34, 37]. Среди перестроек 11q23/MLL у больных ОМЛ первое место по частоте занимает t( 10; 11 )(p 12;q23)/ MLL-MLLT10. Транслокация t(4;11)(q21;q23)/MLL-AF4, преобладавшая в группе больных ОЛЛ, обнаружена лишь у одного ребенка с ОМЛ.
Приведенные данные показывают, что частота отдельных специфических транслокаций с участием 11q23/MLL различается при ОЛЛ и ОМЛ.
Несколько обособленно от транслокаций района 11q23/MLL находятся делеции 11q23. Данное изменение было выявлено только у одного из обследованных больных ОМЛ, у которого стандартный цитогенетический анализ был единственным методом исследования. У пациентов с другими типами ОЛ del(11)(q23) не обнаружено. Известно, что выявляемые цитогенетически del(11)(q23) могут происходить как внутри гена MLL, так и за его пределами [38, 39]. Участники Европейской рабочей группы по изучению перестроек 11q23 собрали информацию о 27 больных ОЛЛ и 16 больных ОМЛ с наличием del(11)(q23). Из них молекулярно-генетические исследования (ОТ-ПЦР, FISH, гибридизация по Саузерну) были проведены у 14 пациентов, и только в 10 случаях было подтверждено наличие перестроек гена MLL. Причем в 1 случае делеция 11q23 маскировала криптическую транслокацию t(4; 11) с образованием химерного гена MLL-AF4 [38]. Несколько противоположные данные были получены S. Raimondi и соавт. [39], которые при обследовании методом гибридизация по Саузерну 11 пациентов c ОЛЛ и del(11)(q23) не обнаружили ни одного случая с перестройками гена MLL.
Все вышесказанное подчеркивает необходимость совместного использования цитогенетического и молекулярногенетических методов у пациентов первого года жизни с ОЛ.
Известно, что самая частая специфическая аномалия кариотипа при ОМЛ у старших детей и молодых взрослых пациентов — транслокация t(8;21)(q22;q22) [6, 7]. Среди
наших пациентов в возрасте до 12 мес. выявить t(8;21) не удалось, так же как и другую специфическую транслокацию, связанную с благоприятным прогнозом, — t( 15; 17) (q22;q21). Эти результаты совпадают с данными литературы о характерных изменениях кариотипа при ОМЛ у детей первого года жизни [37, 40, 41], однако есть работы, в которых сообщается о том, что изредка при ОМЛ у детей до года находят транслокации t(8;21) и t(15;17) [33].
Третий маркер благоприятного прогноза при ОМЛ — inv16(p13q22) — обнаружен нами у 2 пациентов. Они оба живы и находятся в полной продолжающейся ремиссии, длительность которой составляет 63 и 129 мес. соответственно.
Транслокация t( 1 ;22)(p 13;q 13), характерная для ме-гакариобластного ОЛ у детей первого года жизни и редко выявляемая у пациентов другого возраста [6, 42], обнаружена в 5 случаях ОМЛ М7. Эта хромосомная аномалия ранее считалась маркером неблагоприятного прогноза [43]. Позднее появились данные о хороших результатах лечения ОМЛ с t(1;22) [3]. У 2 из 3 наших пациентов, судьбу которых удалось проследить, терапия тоже была эффективной: они живы и продолжают находиться в полной продолжающейся ремиссии длительностью 22 и 39 мес. соответственно.
Публикации последних лет отражают определенные противоречия в вопросе о сложном (комплексном) кариотипе при ОМЛ, который у взрослых больных имеет крайне неблагоприятное прогностическое значение [44]. Прежде всего, нет единого определения сложного кариотипа: неясно, сколько аномалий и какие должны содержать клетки анеу-плоидного клона, чтобы кариотип подходил под это определение. По результатам исследования у взрослых больных ОМЛ было предложено выделять два варианта сложного кариотипа: типичный и атипичный [45, 46]. Первый содержит три аномалии и более без t(8;21), t(15;17) и inv(16). Обычно в его состав входят маркеры плохого прогноза (один или более), такие как моносомия 5 и делеция длинного плеча этой хромосомы, моносомия 7 и делеция длинного плеча хромосомы 7, перестройки короткого плеча хромосомы 17, а также мутации гена p53. Случаи сложного кариотипа без этих аномалий относят к атипичным. В работе C. von Neuhoff и соавт. [8], изучавших кариотип у больных ОМЛ моложе 18 лет, обязательными критериями сложного кариотипа были наличие не менее трех хромосомных нарушений и отсутствие как прогностически благоприятных транслокаций, так и перестроек гена MLL. С использованием этих критериев сложный кариотип выявлен у 35 (7,7 %) из 454 детей с ОМЛ, которым было проведено цитогенетическое исследование.
Мы считали кариотип сложным, если он включал три и более числовых и/или структурных аномалии, в т. ч. перестройки района 11q23, но не содержал маркеры благоприятного прогноза. Клоны клеток со сложным кариотипом обнаружены нами в 4 (12,9 %) из 31 случая ОМЛ. Эти цифры ниже показателей, полученных у более старших детей (24,8 %) [7]. Типичный сложный кариотип [45] обнаружен лишь у одного из наших пациентов с ОМЛ. Вероятно, он гораздо реже наблюдается при ОМЛ у детей, чем у взрослых [47].
Небольшая группа пациентов со сложным кариотипом (всего 4 случая) не позволяет оценить его прогностическое значение. В литературе отсутствует единое мнение по вопросу об эффективности лечения ОМЛ у детей со сложным кариотипом. С одной стороны, группа UK MRC не выявила определенного влияния сложного кариотипа на прогноз ОМЛ [7]. Этому противоречат данные о пациентах, лечившихся по протоколу AML-BFM 98: бессобытийная выживаемость у детей с ОМЛ, имевших сложный кариотип, была статистически значимо ниже, чем во всей исследованной
www.medprint.ru
139
Г.А. Цаур и др.
группе (33 ± 8 и 48 ± 2 % соответственно; р = 0,031, логранговый критерий).
Перестройки 11q23/MLL обнаружены у 4 из 7 больных c недифференцированным, бифенотипическим и билинейным вариантами ОЛ. Лейкозные клетки у 1 пациентки с бифенотипическим ОЛ содержали неслучайную транслокацию t(7; 12), выявляемую при ОМЛ у детей раннего возраста с частотой не менее 20 % [6]. Изредка эту аномалию находят и при ОЛЛ у детей первого года жизни [25—30]. Среди детей с ОМЛ, обследованных нами с помощью стандартного хромосомного анализа, такая транслокация не обнаружена. Следует отметить, что эту перестройку трудно выявить при стандартном хромосомном исследовании. Иногда ее принимают за делецию длинного плеча хромосомы 7. Прояснить ситуацию позволяет применение FISH c зондами к генам HLXB9 (7q36) и ETV6 (12p13).
Расхождения между данными цитогенетики и ОТ-ПЦР зафиксированы у 6 пациентов, у которых генетические изменения удалось обнаружить с помощью ПЦР и/или FISH, но они остались незамеченными при хромосомном анализе: по 2 случая с MLL-AF4, MLL-MLLT3 и MLL-MLLT10. Нельзя исключить, что в этих случаях имели место инсерции субмикроскопических фрагментов из какой-либо одной партнерской хромосомы в другую, как это уже было описано в литературе [39, 48, 49]. Другие механизмы образования криптических транслокаций в литературе не приводятся.
Однако необходимо учитывать еще один важный момент. Возможность выявления аномального клона клеток при стандартном цитогенетическом анализе существенно повышается при увеличении количества кариотипированных метафазных пластинок, а также при исследовании клеточных популяций не при одном сроке культивирования, а при двух-трех. В отдельных наших наблюдениях, в которых хромосомный анализ оказался недостаточно чувствительным, к сожалению, удалось исследовать не более 8—12 метафаз. Нельзя исключить, что в этих случаях были не субмикроскопические перестройки, а транслокации, которые можно было бы увидеть, если бы удалось провести полноценный хромосомный анализ.
Полученные нами данные свидетельствуют о том, что для выявления и характеристики генетических аномалий, имеющих диагностическое и научное значение, необходимо использовать комплексный методический подход, включающий цитогенетические и молекулярно-генетические методики.
ВЫВОДЫ
1. Наиболее частыми нарушениями при острых лейкозах у детей первого года жизни служат перестройки 11q23/MLL. Они составляют 63,2 % в группе пациентов с ОЛЛ и 48,4 % — с ОМЛ.
2. У больных ОЛЛ в возрасте до 6 мес. транслокации района 11q23/MLL были выявлены статистически значимо чаще по сравнению с пациентами в возрасте 6—12 мес.
3. Самая частая при ОЛЛ транслокация t(4;11)(q21;q23)/ MLL-AF4, а при ОМЛ — t( 10; 11 )(p 12;q23)/MLL-MLLT10.
4. Аномалии кариотипа, характерные для острых лейкозов у детей старших возрастных групп, редко встречаются у детей первого года жизни.
БЛАГОДАРНОСТИ
Авторы выражают глубокую благодарность врачам-гематологам, детским онкологам, предоставившим данные о пациентах первого года жизни с острыми лейкозами.
ЛИТЕРАТУРА
1. Biondi A., Cimino G., Pieters R., Pui C.H. Biological and therapeutic aspects of infant leukemia. Blood. 2000; 96: 24-33.
2. Pui C.-H., Chessells J., Camitta B. et aI. Clinical heterogeneity in childhood acute lymphoblastic leukemia with 11q23 rearrangements. Leukemia 2003; 17: 700-6.
3. Chessells J., Harrison C., Watson S. et al. Treatment of infants with lymphoblastic leukaemia: results of the UK Infant Protocols 1987-1999. Br. J. Haematol. 2002; 117: 306-14.
4. Emerenciano M., Agudelo-Arias D., Coser V. et al. Molecular cytogenetic findings of acute leukemia included in the Brazilian collaborative study group of infant acute leukemia. Pediatr. Blood Cancer 2006; 47: 549-54.
5. Rowley J. Chromosomal translocations: revisited yet again. Blood 2008; 112: 2183-9.
6. Manola K. Cytogenetics of pediatric acute myeloid leukemia. Eur. J. Haematol. 2009; 83: 391-405.
7. Harrison C., Hills R., Moorman A. et al. Cytogenetics of childhood acute myeloid leukemia: United Kingdom Medical Research Council Treatment trials AML 10 and 12. J. Clin. Oncol. 2010; 28(16): 2674-81.
8. Neuhoff von C., Reinhardt D., Sander A. et al. Prognostic impact of specific chromosomal aberrations in a large group of pediatric patients with acute myeloid leukemia treated uniformly according to trial AML-BFM 98. J. Clin. Oncol. 2010; 28(16): 2682-9.
9. Marschalek R. Mixed lineage leukemia: roles in human malignancies and potential therapy. FEBS J. 2010; 277: 1822-31.
10. Pieters R., Schrappe M., De Lorenzo P. et al. A treatment protocol for infants younger than 1 year with acute lymphoblastic leukaemia (Interfant-99): an observational study and a multicentre randomised trial. Lancet 2007; 370(9583): 240-50.
11. Armstrong SA., Staunton J.E., Silverman L.B. et al. MLL translocations specify a distinct gene expression profile that distinguishes a unique leukemia. Nature Genet. 2002; 30(1): 41-7.
12. Zangrando A, Campo Dell’orto M., Kronnie G.T., Basso G. MLL rearrangements in pediatric acute lymphoblastic and myeloblastic leukemias: MLL specific and lineage specific signatures. BMC Med. Genom. 2009; 2(1): 36.
13. Stam R., Schneider P., Hagelstein J. et al. Gene expression profiling-based dissection of MLL translocated and MLL germline acute lymphoblastic leukemia in infants. Blood 2010; 115(14): 2835-44.
14. Felix C., Lange B. Leukemia in Infants. Oncologist 1999; 4: 225-40.
15. Hjalgrim L.H., Rostgaard K., SchmiegelowK. et al. Age- and sex-specific incidence of childhood leukemia by immunophenotype in the Nordic countries. J. National Cancer Inst. 2003; 95(20): 1539-44.
16. Bennett J., Catovsky D., Daniel M. et al. Proposals for the classification of the acute leukaemias. French-American-British (FAB) co-operative group. Br. J. Haematol. 1976; 33: 451-8.
17. Bene M., Castoldi G., Knapp W. et al. Proposals for the immunological classification of acute leukemias. European Group for the Immunological Characterization of Leukemias (EGIL). Leukemia 1995; 9(10): 1783-6.
18. Shaffer L.G., Tommerup N. (eds.) ISCN: An International System Human Cytogenetic Nomenclature (2005). Basel: Karger, 2005.
19. Цаур Г.А, Наседкина Т.В., Попов А.М. и др. Время достижения молекулярной ремиссии как фактор прогноза у детей первого года жизни острым лимфобластным лейкозом. Онкогематология 2010; 2: 46-54.
20. Borkhardt A, Repp R., Haupt E. et al. Molecular analysis of MLL/AF4 recombination in infant acute lymphoblastic leukemia. Leukemia 1994; 8: 549-53.
21. Schliben S., Borkhardt A, Reinisch J. et al. Incidence and clinical outcome of children with BCR/ABL-positive acute lymphoblastic leukemia (ALL). A prospective RT-PCR study based on 673 patients enrolled in the German pediatric multicenter therapy trials ALL-BFM-90 and CoALL-05-92. Leukemia 1996; 10: 957-63.
22. Harbott J., Viehmann S., Borkhardt A. et al. Incidence of TEL/AML1 fusion gene analyzed consecutively in children with acute lymphoblastic leukemia in relapse. Blood 1997; 90: 4933-7.
23. Pallisgaard N., Hokland P., RiishojD. et al. Multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction for simultaneous screening of 29 translocations and chromosomal aberrations in acute leukemia. Blood 1998; 92: 574-88.
24. Dongen van J., Macintyre E., Gabert J. et al. Standardized RT-PCR analysis of fusion gene transcripts from chromosome aberrations in acute leukemia for detection of minimal residual disease. Leukemia 1999; 13: 1901-18.
25. Tosi S., Harbott J., Teigler-Schlegel A. et al. t(7;12)(q36;p13), a new recurrent translocation involving ETV6 in infant leukemia. Genes Chromosomes Cancer 2000; 29: 325-32.
26. Beverloo H., Panagopoulos I., Isaksson M. et al. Fusion of the homeobox gene HLXB9 and the ETV6 gene in infant acute myeloid leukemias with the t(7;12)(q36;p13). Cancer Res. 2001; 61: 5374-7.
27. Slater R., Drunen von E, Kroes W et al. t(7;12)(q36;p13) and t(7; 12) (q32;p13)-translocations involving ETV6 in children 18 months of age or younger with myeloid disorders. Leukemia 2001; 15: 915-20.
28. Simmons H., Oseth L., Nguyen P. et al. Cytogenetic and molecular heterogeneity of 7q36/12p13 rearrangements in childhood AML. Leukemia 2002; 16: 2408-16.
140
Клиническая онкогематология
Генетическая характеристика острых лейкозов у детей
29. Tosi S, Hughes J., Scherer S. et al. Heterogeneity of the 7q36 breakpoints in the t(7;12) involving ETV6 in infant leukemia. Genes Chromosomes Cancer 2003; 38: 191-200.
30. Bergh von A, Drunen van E., Wering van E. et al. High incidence of t(7;12) (q36;p13) in infant AML but not in infant ALL, with a dismal outcome and ectopic expression of HLXB9. Genes Chromosomes Cancer 2006; 45: 731-9.
31. GreavesM. Cancer causation: the Darwinian downside of past success? Lancet Oncol. 2002; 3: 244-51.
32. Emerenciano M., Koifman S., Pombo-de-Oliveira M. Acute leukemia in early childhood. Braz. J. Med. Biol. Res. 2007; 40: 749-60.
33. Schafer E., Irizarry R., Negi S. et al. Promoter hypermethylation in MLL-r infant acute lymphoblastic leukemia: biology and therapeutic targeting. Blood 2010; 115: 4798-809.
34. Chessells J., Harrison C., Kempski H. et al. Clinical features, cytogenetics and outcome in acute lymphoblastic and myeloid leukaemia of infancy: report from the MRC Childhood Leukaemia working party. Leukemia 2002; 16: 776-84.
35. Borkhardt A, Wuchter C., Viehmann S. et al. Infant acute lymphoblastic leukemia — combined cytogenetic, immunophenotypical and molecular analysis of 77 cases. Leukemia 2002; 16: 1685-90.
36. Moorman A, Ensor H., Richards S. et al. Prognostic effect of chromosomal abnormalities in childhood B-cell precursor acute lymphoblastic leukaemia: results from the UK Medical Research Council ALL97/99 randomised trial. Lancet Oncol. 2010; 11(5): 429-38.
37. Pui C.-H., Raimondi S., Srivastava D. et al. Prognostic factors in infants with acute myeloid leukemia. Leukemia 2000; 14: 684-7.
38. Raimondi S., Frestedt J., Pui C.H. et al. Acute lymphoblastic leukemias with deletion of 11q23 or a novel inversion (11)(p13q23) lack MLL gene rearrangements and have favorable clinical features. Blood 1995; 86: 1881-6.
39. Harbott J., Mancini M., Verellen-Dumoulin Ch. et al. Hematological malignancies with a deletion of 11q23: cytogenetic and clinical aspects. Leukemia 1998; 12: 823-7.
40. Webb D., Harrison G., Stevens R. et al. Relationships between age at diagnosis, clinical features, and outcome of therapy in children treated in the medical Research Council AML 10 and 12 trials for acute myeloid leukemia. Blood 2001; 98: 1714-20.
41. Флейшман Е.В., Сокова О.И., Попа А.В. и др. Возрастные особенности цитогенетических изменений при острых миелоидных лейкозах. Онкогематология 2007; 4: 12-6.
42. Bernstein J., Dastugue N., Haas O. et al. Nineteen cases of the t(1;22) (p13;q13) acute megakaryblastic leukaemia of infants/children and a review of 39 cases: report from a t(1;22) study group. Leukemia 2000; 14: 216-8.
43. Martinez-Climent J.A., Garcia-Conde J. Chromosomal rearrangements in childhood acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndromes. J. Pediatr. Hematol. Oncol. 1999; 21: 91-102.
44. Schoch C, Haferlach T., Haase D. et al. Patients with de novo acute myeloid leukemia and complex karyotype aberrations show a poor prognosis despite intensive treatment: a study of 90 patients. Br. J. Haematol. 2001; 112: 118-26.
45. Schoch C., Kern W., Kohlmann A. et al. Acute myeloid leukemia with a complex aberrant karyotype is a distinct biological entity characterized by genomic imbalances and a specific gene expression profile. Genes Chromosomes Cancer 2005; 43: 227-38.
46. Haferlach C., Dicker F., Herholz H. et al. Mutations of the TP53 gene in acute myeloid leukemia are strongly associated with a complex aberrant karyotype. Leukemia 2008; 22: 1539-41.
47. Флейшман Е.В., Сокова О.И, Кириченко О.П. Сложные аномалии кариотипа при остром миелоидном лейкозе детей. Вестн. РАМН. 2008; 5: 3-7.
48. Tirado C., Meloni-EhrigA, Edwards T. et al. Cryptic ins(4;11)(q21;q23q23) detected by fluorescence in situ hybridization: a variant of t(4;11)(q21;q23) in an infant with a precursor B-cell acute lymphoblastic leukemia report of a second case. Cancer Genet. Cytogenet. 2007; 174(2): 166-9.
49. Stasevich I., Utskevich R., Kustanovich A. et al. Translocation (10; 11) (p12;q23) in childhood acute myeloid leukemia: incidence and complex mechanism. Cancer Genet. Cytogenet. 2006; 169: 114-120.
www.medprint.ru
141
