CC BY
14DOI:10.24412/1999-6780-2020-3-29-35 УДК 582.281.21
СВЕТООПТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СТРОЕНИЯ ШТАММОВ МИКРО-МИЦЕТОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ МОДЕЛИРОВАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО МУКОРМИКОЗА
Рябинин И.А. (м.н.с., ассистент кафедры)*, Васильева Н.В. (директор НИИ, зав. кафедрой), Чилина Г.А. (зав. лаб.)
Северо-западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова: НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина, кафедра медицинской микробиологии, Санкт-Петербург, Россия
В сообщении представлены морфологические свойства двух модельных мукоромицетов - Rhizopus oryzae РКПГ F-1537 и Lichtheimia corymbifera РКПГ F-1601, которые применяют в опытах по воспроизведению мукор-микоза на лабораторных животных. Оба штамма прошли процедуру экспертной видовой идентификации методом таргетного ДНК-секвенирования по региону внутреннего транскрибируемого спейсера (ITS) и D1/D2-домену рибо-сомальной РНК большой субъединицы. Результаты исследования включают описания макро- и микроморфологического строения культур избранных штаммов, где особое внимание уделено наблюдению интактных посевов в проходящем свете, в том числе с помощью стереомикроско-па. У L. corymbifera более подробно, нежели это отражено в современных атласах и руководствах, определили варианты строения субстратного мицелия, видоизменения ризоидов, а также формы ветвления спорангиеносцев. Наблюдаемый штамм R. oryzae проявил морфологические свойства, характерные для вида. В статье также представлены краткие сведения об истории изучения морфологии и идентификации этих двух видов и группы мукоро-мицетов в целом.
Ключевые слова: морфология, мукормикоз, мукоро-мицеты, световая микроскопия, Lichtheimia corymbifera, Rhizopus oryzae
LIGHT-OPTICAL STUDY ON THE STRUCTURE OF MICROMYCETES STRAINS USED FOR MODELING EXPERIMENTAL MUCORMYCOSIS
Riabinin I.A. (junior scientific collaborator, assistant of the department), Vasilyeva N.V. (director of the institute, head of the department), Chilina G.A. (head of the laboratory)
North-Western State Medical University named after I.I. Mech-nikov (Kashkin Research Institute of Medical Mycology, Department of Medical Microbiology), St. Petersburg, Russia
* Контактное лицо: Рябинин Игорь Андреевич, e-mail: [email protected]
In the present communication the authors described the morphological properties of two model mucoromycetes - Rhizopus oryzae RCPF F-1537 and Lichtheimia corymbifera RCPF F-1601, which are used in experiments for the reproduction of mucormycosis in laboratory animals. Both strains were passed the procedure of expert species identification by targeted DNA sequencing of internal transcribed spacer (ITS) and the D1/D2 domain of large subunit ribosomal RNA. The results of the study include descriptions of the macro- and micromor-phological structure of cultures of selected strains, where special attention is paid to the observation of intact passages in transmitted light, including stereomicroscopy. In L. corymbif-era, in more details than are reflected in modern atlases and manuals, we determined the structure of the substrate mycelium, the modification of rhizoids, as well as the branching forms of sporangiophores. The observed R. oryzae strain exhibited morphological properties characteristic of the species. The article although provides brief information about the history of the study of morphology and the identification of these two species and the group of mucoromycetes in general, including domestic and foreign sources.
Key words: light microscopy, Lichtheimia corymbifera, morphology, mucormycosis, mucoromycetes, Rhizopus oryzae
ВВЕДЕНИЕ
Мукормикоз в XXI веке продолжает лидировать по летальности среди инвазивных микотических инфекций. Данная проблема в определенной степени связана с тем обстоятельством, что современные средства быстрой диагностики микозов, включая генодиагностику и экспресс-обнаружение уникальных биомаркеров возбудителей, пока еще не получили воплощения в виде готовых тест-систем, внедренных в систему практического здравоохранения. Кроме того, хотя создание синтетических противогрибковых препаратов в последние годы интенсифицировали, эффективных средств для терапии мукормикозов все еще неоправданно мало. Путь к преодолению двух этих барьеров непосредственно связан с экспериментальным воспроизведением мукормикоза на подходящих моделях in vivo. Важным обстоятельством успеха здесь является использование коллекционных штаммов мукоромицетов, идентифицированных экспертными методами и тщательно охарактеризованных, что в совокупности составляет паспорта штаммов. В этиологии мукормикоза человека лидирующие позиции занимают Rhizopus spp. (особенно - R. oryzae) и Lichtheimia corymbifera [1]. Изоляты этих видов применяют для воспроизведения модельной инфекции на животных [2, 3]. В настоящем исследовании мы приводим данные морфологической характеристики штаммов, ранее использованных с этой целью коллективом НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина [4, 5]. Ряд итогов этого был освещен в докладе: Босак И.А., Выборнова И.В., Чилина Г.А., Мамошин А.Н. «Экспериментальная модель мукормикоза легких». Секция: «Экспериментальные модели в инфектологии» (Российско-китайская науч-
но-практическая конференция по медицинской микробиологии и клинической микологии. Санкт-Петербург, 10.05.2015 г.).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В исследование включили штаммы R. oryzae РКПГ F-1537/1722 и L. corymbifera РКПГ F-1601/1966 из Российской коллекции патогенных грибов. Мик-ромицеты идентифицировали путем таргетного ДНК-секвенирования с интерпретацией согласно протоколу CLSI MMM-А [6] по локусам внутреннего транскрибируемого спейсера (ITS) и Б1/Б2-домена рибо-сомальной РНК большой субъединицы [7]. Колонии штаммов получали на агаре Сабуро в модификации Эммонса в колбе на 500 мл (для R. oryzae) и в пробирках (для обоих штаммов) с инкубацией при 30 °С до 10 суток. Микроскопическое исследование ин-тактных культур проводили с применением стерео-микроскопа Stemi 2000-C с осветителем KL 1500 LCD (Carl Zeiss Jena, Германия). Также из культур готовили препараты типа «раздавленная капля» (для L. corymbifera эти данные представлены ранее [8]) в монтирующей жидкости этанол-глицерин 1:1, которые изучали с помощью микроскопов проходящего света Leica CME и Leica DM LB2 с микрофотокамерой DFC320 (Leica, Германия). Для инструментов Stemi 2000-C и Leica CME использовали фотокамеру Presto T55 (Rekam, Канада). Цифровую обработку изображений выполняли в графических редакторах XnView 2.35 и GIMP 2.8.6.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Результаты изложены в форме морфологического описания изученных штаммов.
Характеристика колоний и микроморфология L. corymbifera РКПГ F-1601. Штамм отличается быстрым ростом на питательной среде. В пробирке мицелий сначала густо покрывает поверхность скоса, затем колония формирует поднимающуюся в полости пробирки рыхлую ватообразную массу. Колония гриба вначале тускло-белая, затем, по мере развития спорангиев, приобретает светло-серый оттенок (Рис. 1: а).
В воздушном мицелии изученного штамма хорошо видны многочисленные протяженные столоны, на их поверхности рядами расположены капли конденсированной жидкости (Рис. 1: б, в, г). Спорангие-носцы находятся на столонах в мутовках, а также одиночно. Спорангиеносцы прямые (Рис. 1: д), но многие имеют изгиб в основании или на всем протяжении (U-образные; Рис. 1: е, ж). Как выявили ранее, формирование спороносцев происходит асинхронно [8]. Спорангии сильно варьируют по размерам, кроме того, отметили различные соотношения длин кониди-еносцев и диаметров спорангиев. В отдельных случаях спороносцы отходят от столонов в местах образования мутовок не самостоятельно, а один от другого, имея как бы общий «ствол» (Рис. 1: з, и).
Субстратный мицелий на слое агара отличается образованием мелкопетлистой неправильной сети. Напротив, выходящие из края агара на стекло гифы вблизи места отхождения почти прямые, ветвятся мало (Рис. 1: к, л). Далее, продолжаясь на стекле, такие гифы и их ветви отличаются извилистым контуром, часто имеют характерное для мукоромицетов ветвление под почти прямым углом (Рис. 1: м). На некоторых участках ветвление происходит преимущественно унилатерально (Рис. 1: н).
Часть субстратного мицелия, находящегося на поверхности стекла, отличается наличием утолщенной оболочки, состоящей из аморфной гиалиновой субстанции (Рис. 1: о). Происхождение этого вещества дискуссионное: возможно, это конденсат из питательной среды либо продукты метаболизма культуры, либо новообразованный материал клеточной стенки. Внутри гиалинового «чехла» виден более светоотражающий цилиндр гифы. Такие особенности свойственны и субстратным гифам, и ризоидам.
Субстратный мицелий имеет видоизменения: встречаются гифы в форме крючков и завитков, ветвления типа «канделябров» (Рис. 1: п, р, с, т). Извитые гифы обычно формируются как небольшие боковые и концевые ветви, могут иметь форму крюка, «клюва фламинго», зигзага, небольших спиралей на 1-2 завитка. Такие гифы часто встречаются группами. Иногда прямо на субстратном мицелии формируются спороносцы.
Ризоиды, адгезированные на стекле, могут иметь как регулярную, так и нерегулярную организацию. В первом случае из основания столона они выходят в форме многолучевой звезды, имеют различный диаметр, ветвятся преимущественно моноподиально, образуя более мелкие боковые гифы (Рис. 1: у). В других случаях ризоиды формируют неправильные фигуры с гифами сильно варьирующего размера, анастомозами и «крючками» (Рис. 1: ф).
Кроме основной колонии, сформировавшейся на питательной среде, также наблюдали микроколонии, которые выросли из спор на поверхности стекла. Некоторые из них аспорогенные, на других формируются спорангиеносцы со спорангиями (Рис. 1: х). В таких случаях спорангиеносцы не сосредоточены в оформленных мутовках, чаще формируются одиночно на субстратных гифах, вне столонов, иногда, как и в основной колонии, имеют общую «стволовую» часть. Встречали и атипичные микроколонии, которые в основном состоят из конгломератов споран-гиоспор, большей части не прорастающих. Из таких колоний радиально выходят стелящиеся по стеклу гифы, иногда образующие анастомозы с гифами других колоний (Рис. 1: ц).
При микроскопии в отраженном свете мицелий гриба отличается сильной блесткостью с белым оттенком (Рис. 1: ч).
Рис. 1. Организация колоний и светооптическая микроморфология 1-. corymbifera РКПГ F-1601. Увеличение х80. Объяснение в тексте.
Рис. 2. Организация колоний и светооптическая микроморфология ИЫгврив вгугав РКПГ Р-1537. Увеличения: в - х30; г - х40; д - х50; е - х80; ж, з - х200; и, к - х400. Условные обозначения: р - ризоиды, у - узел, ст - столон, сн - спорангиеносцы, сп -спорангии, кл - колумеллы, а - апофизы, ср - спорангиоспоры.
Характеристика колоний и светооптическая микроморфология R. oryzae РКПГ F-1537. Изученный штамм в целом проявляет типовые морфологические черты, характерные для вида Rhizopus oryzae seu arrhizus Went & H.C. Prinsen Geerligs, 1895 [Zheng R.-Y, et al. Sydowia. 2007; 59: 273-372]. При культивировании в колбе формируется гигантская колония ватообразной консистенции, возвышающаяся над поверхностью среды максимально по краям и в центральной части примерно на 2,5-3 см. Рост гриба вначале беловато-серый, затем темно-бурый из-за выраженного спорангиального спороношения (Рис. 2: а). В пробирках массив воздушного мицелия заполняет всю полость сосуда вплоть до самой верхней точки агарового скоса, в более глубокой (ближе к столбику) части посева колония светлая, спорангии видны разреженно, в более высокой части спорангии расположены плотнее, и окрас колонии здесь более темный (Рис. 2: б). При стереомикроскопии базальной части колонии на уровне вершины агарового скоса в наиболее близкой к агару области виден плотный сетчатый субстратный мицелий (подобие примитивной стро-мы), далее расположен очень плотный воздушный мицелий с буро-черными спорангиями, в глубокой ближней к среде области более мелкими, в воздушной поверхностной области - более крупными. В наиболее поверхностной части колонии элементы строения более отчетливо дифференцируются на столоны, спорангиеносцы, ризоиды и спорангии (Рис. 2: в). Лучше всего дифференцировку элементов строения культуры R. oryzae РКПГ F-1537 можно наблюдать в отделенных частях колонии, растущих путем адгезии непосредственно на стекле и питающихся, очевидно, путем транспорта нутриентов по столонам из «агаровой» части культуры (Рис. 2: г, д). На стекле отчетливо заметны ризоиды, которые у этого штамма развиты (у R. oryzae в некоторых культурах ризоиды могут быть рудиментарными), в основном - простые, мало ветвящиеся. Иногда заметны столоны, от которых также могут отходить очень короткие отростки, напоминающие ризоиды. В узлах расположено по 23-4 спорангиеносца. У некоторых спорангиев, по-видимому, зрелых, мы отметили вдавление апофизы в колумеллу. Спорангии, спорангиеносцы, ризоиды отчетливо пигментированы, а столоны и другие вегетативные гифы пигментированы довольно слабо. Вегетативные гифы сильно варьируют по диаметру. При микроскопии препаратов типа «раздавленная капля» хорошо визуализируются колумеллы спорангиев (Рис. 2: е, з), которые имеют форму лопатки или широкого колпака. В отличие от картины при сте-реомикроскопии культуры на стекле, в части колонии, снятой с агара, видна заметная редукция ризоидов (Рис. 2: е, ж, з). Высвобождение спорангиоспор, по-видимому, происходит неупорядоченно, иногда на обнажающейся колумелле видна «шапочка» из «последних» адгезированных спорангиоспор (Рис. 2: и). Спорангиоспоры при одиночном расположении свет-
ло-буроватые или буровато-зеленоватые, а в массе -черно-бурые (Рис. 2: з, и, к). Спорангиоспоры обладают выраженной способностью к самоаггрегации, хотя и не столь сильно выраженной, как, например, у грибов рода Aspergillus. Споры сравнительно однородны по размеру, встречаются и клетки заметно крупнее остальных (готовность к прорастанию?). Споры имеют неправильную полигональную форму со скругленными гранями, а также характерную ис-черченность поверхности. В отдельных клетках, попадающих в плоскость оптического среза, отчетливо заметна довольно толстая оболочка споры (Рис. 2: к).
ОБСУЖДЕНИЕ
Для понимания полученных результатов, общего представления о состоянии системы знаний по включенным в исследование мукоромицетам необходима краткая ретроспектива важнейших работ в этой области.
История изучения L. corymbifera давно перешла вековой рубеж. Под именем Mucor corymbifer этот микроскопический гриб описан и иллюстрирован в монографических работах «Die mikroorganismen. Mit besonderer berücksichtigung der ätiologie der infektionskrankheiten» [Flügge K., i896], «Flora von Deutschland, Osterreich and der Schweiz. Kryptogamen-Flora. Moose, Algen, Flechten und Pilze» [Migula W., 1910] и «Pathogenic microorganisms, including bacteria and Protozoa; a practical manual for students, physicians and health officers» [Park W.H., Williams A.W., то]. В указанных трудах можно найти схемы строения таллома и аппарата вегетативного спороношения, а в 1908 г. Lendner A. в работе «Les Mucorinees de la Suisse» описал половое размножение абсидий, вероятно, основанное также на наблюдениях за изучаемым нами видом. Термин-элемент «Corymb» используют в ботанике для обозначения соцветия, когда отдельные цветки на цветоножках разной длины формируют собой некую поверхность щитка или зонтика. По-видимому, мутовки спороносцев этого гриба напомнили его первооткрывателям такие соцветия. Поэтому в русской номенклатуре L. corymbifera иногда называют «лихтеймия зонтико-кистевидная или щитоносная». Уже в конце XIX века этот микромицет обнаружили у людей при поражениях органов дыхания, а в XX веке материалы по морфологии штаммов с наименованиями Mucor corymbifer, Mycocladus corymbifer, Absidia или Lichtheimia corymbifera неоднократно помещали в атласы и руководства по медицинской микробиологии и смежным вопросам [9-11].
Детальный (включая морфологический) пересмотр рода Absidia, в то числе A. corymbifera, предпринят Vanova M. [Ceska Mycologie. 1983; 37 (3): 151-17i], приведены данные по вариациям в строении спорангия. Классик изучения мукоромицетов -Schipper M.A.A. (1923-2011) составила обновленный ключ-определитель видов, к которому в числе прочих приложила описание и схему строения A. corymbifera,
включая организацию спороносцев, спорангиев и гигантских клеток [Persoonia. 199G; 14 (2): 133-148].
Тем не менее, несмотря на накопленный опыт, в исследовании строения L. corymbifera до сих пор имелись «белые пятна»: мы располагали довольно ограниченными сведениями о микроскопическом полиморфизме лихтеймии щитоносной, о том, как у этого гриба устроен субстратный мицелий, включая ризоиды. В данном исследовании, хотя и ограничиваясь конкретным штаммом, эти вопросы удалось несколько освятить.
Наиболее ранние признанные описания микро-мицетов, соответствующих Rhizopus oryzae, относятся к 90-м гг. XIX в. (Amylomyces rouxii, Chlamydomucor rouxii, Mucor rouxii). Хотя, вероятно, подобные сообщения появились много ранее, поскольку ризопус рисовый входит в состав традиционной закваски «джиуку» (имеет много названий). Ее и сходные рецептуры используют в странах Дальнего Востока и Юго-Восточной Азии для ферментации некоторых продуктов, например риса (откуда вид получил свое название). Есть предположения, что «джиуку» начали производить с III в. до н.э. в Китае. Мукоромицеты в целом и ризопусы в частности являются сравнительно крупными микроскопическими объектами, вполне доступными и для оптики XVIII века. Скорее всего, представителей R. oryzae описали много раньше, но представленные в сообщениях характеристики не позволили установить связь с диагнозами видов-синонимов рубежа XIX и XX вв.
Вид R. oryzae введен в таксономию грибов в 1S95 г., а в 19G2 г. известный французский миколог Jean Paul Vuillemin (1861-1932) в своем сочинении «Recherches sur les Mucorineers saccharifiantes (Amylomyces)» (Исследование осахаривающих му-коромицетов - «амиломицетов») описал различия открытого почти на 75 лет ранее R. stolonifer и рисового ризопуса с зарисовками своих наблюдений [Revue mycologique. 1905; 24: 45-60].
На факт связи Rhizopus spp. с заболеваниями органов дыхания у человека указал в своем руководстве один из классиков медицинской микологии первой половины XX века Dodge C.W. [Medical mycology. Fungous diseases of men and other mammals. St. Louis: The C.V. Mosby company, 1935; 900 p.], наиболее ранний описанный им случай относится к 1901 г. Однако о рисовом ризопусе в его работе прямых упоминаний нет — указаны иные видовые названия, которые трудно соотнести с принятыми в настоящее время. Обстоятельное исследование морфологических свойств Rhizopus spp. проведено словацкими исследователями Kockova-Kratochvilova A. и Palkosks V. [A taxonomic study of the genus Rhizopus Ehrenberg 1820. Preslia. 1958; 30: 150-164]. В работе для штаммов установленных на тот период видов рода авторы провели микрометрию спороносного аппарата с детальным анализом ее результатов, а также определение предельной температуры роста на питательной среде.
Основу современной системы рода предложила Schipper M.A.A. [A revision of the genus Rhizopus. I. The Rhizopus stolonifer-group and Rhizopus oryzae. Studies in Mycology. 1984; 25: 1-19]. Подходы к идентификации, описанные ею, просты и удобны, они до сих пор не потеряли своей актуальности для диагностической работы с биоматериалами человека. Наиболее поздний определитель ризопусов представили сотрудники института микробиологии Китайской Академии наук [Zheng R.-Y., et al. A monograph of Rhizopus. Sydowia. 2007; 59 (2): 273-372]. В этом труде имеются описания признанных видов с рисунками элементов строения, а также дихотомический и синоптический ключи для их идентификации.
Таким образом, морфологические признаки R. oryzae как элементы диагноза вида проработаны достаточно тщательно. Однако на сегодня остается нерешенным вопрос о таксономической правомочности существования вариантов рисового ризопуса: R. oryzae var. delemar, R. oryzae var. rouxii, R. oryzae var. arrhizus, R. oryzae var. tonkinensis и других предложенных. Дальнейшие исследования в этом направлении должны дать ответы на вопросы: характеристики таких вариететов в культурах эфемерны или стабильны, связаны ли они с таксономически значимыми ло-кусами генома либо являются только культуральны-ми формами.
В советской-российской школе микологов начальные вехи изучения разнообразия, морфологической организации и идентификации мукоромице-тов, включая рассматриваемых здесь представителей, положены работами члена-корреспондента АН СССР Николая Александровича Наумова (1888-1959) [Наумов Н.А. Определитель мукоровых. М., 1935; 136 с.]. Эта монография получила международное признание, была переведена на 4 европейских языка, а в 1939 г. одно из переводных изданий вошло в состав французской «Микологической энциклопедии» в качестве IX тома. Хотя мукоромицеты не считают типичными продуцентами микотоксинов, характеристики ряда частых в практике представителей (наряду c R. arrhizus = R. oryzae и Absidia lichtheimii = L. corymbifera) приведены в труде «Токсинообразующие микроскопические грибы» видных советских микологов, член-корреспондентов АН УССР Веры Иосифовны Билай (1908-1994) и Николая Макаровича Пи-допличко (1904-1975) [Киев, 1970; 292 с.]. Качественно новым воплощением изучения разнообразия мукоромицетов, созданием идентификационных ключей стал труд «Атлас мукоральных грибов», составленный Пидопличко Н.М. и Милько А.А. [Киев, 1971; 187 с.]. Авторы не только объединили в «Атласе...» установленные на тот момент виды, но и ввели новое микологические таксоны и термины. На настоящий момент, несмотря на «солидный возраст» этого сочинения, аналогичных ему по охвату представителей Mucoromycotina трудов пока нет.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Изученные штаммы R. oryzae РКПГ F-1537 и Ь. corymbifera RCPF F-1601 обладают типовыми морфологическими чертами, позволяющими, вкупе с моле-кулярно-генетическим паспортами, использовать их в качестве «эталонных» модельных объектов в изучении биологии возбудителей мукормикозов. Проведенное исследование позволило сформировать представление в аспекте микроскопического строения о модельном штамме R. о^ае РКПГ Б-1537, как о микромицете с регулярным устройством, а о Ь. corymbifera RCPF F-1601 - как о достаточно полиморфном (даже в пределах одного пассажа) микромицете, при этом не отклоняющемся от ключевых признаков в диагнозе вида. В работе, в частности, в вопросе паспортизации грибковых культур, удалось обратить особое внимание на применение для муко-ромицетов микроскопического исследования интакт-ной культуры. Хотя этот прием имеет определенные ограничения (невозможность использовать большие увеличения и микрометрию, некоторые искажения
микроскопической картины из-за больших размеров наблюдаемого объекта), он позволяет наблюдать культуры МисоготусоШа при сохранности их естественной организации, что неоценимо важно в силу хрупкости элементов колоний этих грибов при манипуляциях с ними.
Авторы признательны за консультативную помощь в работе по данному разделу доктору биологических наук, ведущему научному сотруднику, заведующей НИЛ патоморфологии и цитологии НИИ ме-
дицинской микологии им. П.Н. Кашкина Амалии Ар-
кадьевне Степановой
Работа выполнена в рамках Государственного задания Минздрава России «Морфо-биологические особенности патогенных мукоромицетов возбудителей микозов у пациентов с иммунодефицитами».
ЛИТЕРАТУРА
1. Pilmis B., Alanio A., Lortholary O., Lanternier F. Recent advances in the understanding and management of mucormycosis. F1000Research. 2018; 7: 1429. doi: 10.12688/f1000research.15081.1.
2. Jacobsen I.D. Animal Models to Study Mucormycosis. Journal of Fungi. 2019; 5 (2): 27. doi: 10.3390/jof5020027
3. MiyajiM. Animal Models in Medical Mycology. CRC Press, 2018. 176 pp.
4. Босак И.А., Авдеенко Ю.Л., Выборнова И.В. и др. Мукормикоз легких мышей, вызванный Lichtheimia corymbif-era. Проблемы медицинской микологии. 2017; 19 (2): 43. [Bosak I.A., Avdeenko Y.L., Vybornova I.V., et al. Mucormycosis of murine lung caused by Lichtheimia corymbifera. Problems in Medical Mycology. 2017; 19 (2): 43. (in Russ)].
5. Васильева Н.В., Степанова А.А., Богомолова Т.С., Босак И.А. и др. Цитологическое изучение возбудителя му-кормикоза Lichtheimia corymbifera in vivo. Проблемы медицинской микологии. 2019; 21 (4): 3-7. [Vasil'yeva N.V., Stepanova A.A., Bogomolova T.S., Bosak I.A., et al. Cytological study of the causative agent of mucormycosis Lichtheimia corymbifera in vivo. Problems in Medical Mycology. 2019; 21 (4): 3-7. (in Russ)].
6. CLSI. Interpretive criteria for identification of bacteria and fungi by DNA target sequencing; approved guideline. CLSI document MM14-A. - Wayne, PA: Clin. Lab. Stands Inst.; 2008: 76 p.
7. Михайлова Ю.В., Лавникевич Д.М., Чилина Г.А. и др. Молекулярная идентификация клинических изолятов Aspergillus и Zygomycetes из Санкт-Петербурга. Успехи медицинской микологии. 2013; 11: 37-39. [Mikhaylova Y.V., Lavnikevich D.M., Chilina G.A. et al. Molecular identification of clinical isolates of Aspergillus and Zygomycetes from Saint Petersburg. 2013; 11: 37-39. (in Russ)].
8. Васильева Н.В., Степанова А.А., Богомолова Т.С., Авдеeнко Ю.Л. и др. Цитологическое изучение Lichtheimia corymbifera in vitro. Проблемы медицинской микологии. 2019; 21 (3): 3-8. [Vasil'yeva N.V., Stepanova A.A., Bogomolova T.S., Avdeenko Y.L., et al. Cytological investigation of Lichtheimia corymbifera in vitro. Problemy med-itsinskoy mikologii. 2019; 21 (3): 3-8 (in Russ)].
9. Kee Peng Ng, Tuck Soon Soo-Hoo, Shiang Ling Na. A Guide to the Study of Basic Medical Mycology. Partridge Publishing Singapore, 2014. 92 pp.
10. Sciortino C.V.Jr. Atlas of Clinically Important Fungi. John Wiley & Sons, 2017. 456 pp. doi.org/10.1002/9781119069720
11. De Hoog G.S., Guarro J., Gene J., et al. Atlas of Clinical Fungi. 3rd e-edition. Utrecht/Reus, 2019. http: //www.clinicalfungi.org/
Поступила в редакцию журнала: 16.06.2020. Рецензент: Богомолова Т.С.
