CC BY
26УДК 537.533.35: 616.992: 57.012.4
ЭЛЕКТРОННО -МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ LICHTHEIMIA SPP. IN VIVO И IN VITRO
Степанова А.А. (в.н.с.)*, 2Хостелиди С.Н.
(ассистент кафедры),1 Аравийский Р.А. (в.н.с.)/ 33юзгин И.С. (зав.отд.), 3Ружинская О.С. (врач-гематолог), 4Криволапов Ю.А. (руководитель отделения),1 Синицкая И.А. (с.н.с.),
2Климко Н.Н. (зав. кафедрой)
Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова: 'НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина, 2кафедра клинической микологии, иммунологии и аллергологии и4клиника молекулярной морофлогии; Ленинградская областная клиническая больница, Санкт-Петербург, Россия
© Коллектив авторов, 2012
Сравнением ультраструктуры клеток вегетативного мицелия тканевых и культуральных форм Lichtheimia spp. показано, что они сходны по числу и строению ядер, митохондрий, по типу аккумулируемых запасных веществ, но сильно различаются по строению клеточных стенок. Тканевые формы гриба отличались большим разнообразием ультраструктуры клеточных стенок, что можно рассматривать в качестве защитного механизма в ответ на воздействие иммунной системы пациента и анти-фунгальной терапии. Показано, что для колоний культуральных форм гриба типично редуцированное спороношение.
Ключевые слова: in vitro, in vivo, Lichtheimia spp., световая, трансмиссионная и сканирующая электронная микроскопия, ультраструктура
ELECTRON-MICROSCOPIC INVESTIGATIONS OF LICHTHEIMIA CORYMBIFERA IN VIVO AND IN VITRO
Stepanova A.A. (leading scientific collaborator), 2Khostelidi S.N. (assistant
lecture of the chair),1 Araviyskiy R.A. (leading
scientific collaborator), 3Zuzgin I.S. (head of the department), 3Ruzjinskaiya O.S. (hematologist), 3Krivolapov Y.A. (head of the department),1 Sinitskaya I.A. (senior scientific
collaborator), 2Klimko N.N. (head of the chair)
* Контактное лицо: Степанова Амалия Аркадьевна Тел.: (812) 303-51-40
North-Western State Medical University named after l.l. Mechnikov: 'Kashkin Research Institute of Medical Mycology, 2Chair of Clinical Mycology, Immunology and Allergology and 4clinic of molecular morphology; Leningrad Region Clinical Hospital, St. Petersburg,
Russia
© Collective of authors, 2012
Comparison of ultrastructure of the cells of vegetative mycelium of Lichtheimia spp. tissue and cultural forms showed that they are similar on number and a structure of nuclei, mitochondrions, on type of accumulated spare substances, but strongly differed on a structure of cellular walls. The tissue fungal forms differed a big cell walls ultrastructural variety, that is possible to consider as the protective mechanism in reply to influence of patient immune system and antifungal therapy. It was shown that for colonies of cultural fungal forms the reduced sporogenesis are typical.
Key words: in vitro, in vivo, Lichtheimia spp., light, scanning and transmission electron microscopy, ultrastructure
ВВЕДЕНИЕ
Lichtheimia spp. - широко распространенные в природе виды патогенных грибов (отдел Zygomycetes, порядок Mucorales), способные поражать кожу, легкие и другие внутренние органы человека [1-2]. В научной литературе данные по особенностям уль-траструктурной организации этого вида гриба были фрагментарны (Gale G.T., 1963). Представляло интерес изучить особенности ультраструктуры клеток тканевых форм Lichtheimia spp. и особенности трансформации тонкого строения составляющих их клеток при последующем посеве на питательную среду.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
У пациентки (Ж., 1956 г.р., полное описание случая приведено в работе Хостелиди С.Н. с соавторами) [3] с острым миелобластным лейкозом 13.10.2010 г. появились интенсивные боли в области послеоперационной раны (мастэктомия слева от 22.08.2010 г.). При перевязке обнаружили зону некроза мягких тканей (кожа, грануляции) диаметром 2 см. Взят материал для микроскопии, посева, гистологического исследования мягких тканей в области послеоперационной раны. При микроскопии - несептированный мицелий гриба.
15.10.2010 г. была проведена некротомия мягких тканей и начата терапия амфотерицином В в дозе 1 мг/кг/сутки (7 дней), затем - 1,5 мг/кг/сутки. Параллельно пациентка получала лечение лейкостимом в дозе 480 мкг в течение недели. После проведенной некрэктомии вновь отмечены язвенные дефекты с некрозом и светлым налетом, напоминающим мицелий гриба (Рис. 1 а, стрелка).
21.10.2010 г. выполнено оперативное удаление не-кротизированных участков кожи, подкожной клетчатки области груди слева - 25x15 см. В ходе оперативного лечения в дне раны визуализированы и удалены нежизнеспособные ткани большой грудной мышцы (на 8 сутки от появления некроза кожи). Выполнен торакоцентез слева, дренирование плевральной полости. Операционный материал передан вновь
для посева, а также для проведения гистологических и электронно-микроскопических исследований.
При посеве биоптатов кожи на питательную среду сусло-агар был получен рост светло-серой колонии (Рис. 1 б). При гистологическом исследовании (окрашивание гематоксилин-эозином) фрагментов кожи и подкожной жировой ткани в световом микроскопе Leica DM LB были выявлены многочисленные широкие гифы несептированного мицелия (Рис. 1 в). Таким образом, у пациентки был диагностирован му-коромикоз мягких тканей левой половины грудной клетки, обусловленный Lichtheimia spp.
Биоптаты и небольшие (4x5 мм) кусочки агари-зированной среды с разных участков колоний гриба через 1, 2 и 3 суток после посева и их выращивания (при 28 °С) фиксировали для трансмиссионной (Jem 100SX) и сканирующей электронной (JSM 35) микроскопии по методике, описанной нами ранее [4].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Гистологические данные. Светооптические исследования продольных срезов биоптатов кожи и подкожной жировой ткани пациентки, окрашенных гематоксилином-эозином, позволили выявить в поверхностных отделах некротизированной кожи с характерными многочисленными кровоизлияниями обильные широкие несептированные, часто неправильной формы, гифы (Рис. 1 г, стрелки). На основании этого был диагностирован мукоромикоз кожи с распространенным вторичным некрозом. Элементы спороношения в анализируемых срезах кожи отсутствовали, что характерно для тканевых форм этого вида гриба, вне зависимости от того, какой тип ткани он инфицирует [5].
Ультраструктура Lichtheimia spp. in vivo. В
биоптатах пораженной кожи обнаружили только гифы несептированного мицелия, формирующие многочисленные скопления из профилей гиф различного (3,8-6,5 мкм) диаметра, которые различались между собой по характеру содержимого. Они находились на разных стадиях развития: роста, созревания, зрелости и старения. Довольно часто наблюдали полностью отмершие (Рис. 1 ц), часто - сильно искривленные гифы мицелия без содержимого.
Ядра (1,9x2,5 мкм) одиночные (Рис. 1 д, з) либо в небольших группах, обычно приурочены к клеточной стенке. Диффузный и конденсированный хроматин представлены в равной мере. Ядрышко одно, эксцентричное, крупное (0,5 мкм), с преобладанием гранулярного компонента. Контур оболочки ядра ровный либо слегка извилистый.
Митохондрии в большом числе, располагались в группах от 10 до 50 (Рис. 1 е) и находились в тесном контакте друг с другом. Они округлой (1,0-1,5 мкм) или эллипсоидной (0,4-0,5 мкм) формы. Матрикс ор-ганелл и содержимое крист по электронной плотности сходны с цитозолем.
Вакуоли в одних фрагментах гиф многочислен-
ные (Рис. 1 е), равномерно распределены по площади среза, мелкие, светлые, неправильной формы, с контрастным тонопластом. Чаще всего встречались профили гиф с небольшим числом светлых вакуолей средних размеров разнообразной формы либо с крупной центральной.
Из запасных веществ в цитозоле интактных гиф выявляли липидные включения, а также в содержимом вакуолей - гранулы полифосфатов. Липидные включения умеренной плотности, округлой или неправильной формы. Для просветов молодых гиф с большим числом мелких вакуолей и митохондрий характерно наличие довольно большого числа мелких (0,3-0,4 мкм) липидных включений (Рис. 1 е). В профилях гиф с вакуолями средних размеров, помимо описанных липидных включений, имели место более крупные (3,0-4,0 мкм), часто занимающие весь их просвет (Рис. 1 з). Профили гиф с мелкими (0,1-0,2 мкм) темными гранулами полифосфатов в вакуолях отмечали как исключение.
Из компонентов эндомембранной системы в цитозоле клеток наблюдали редкие мелкие светлые пузырьки и короткие цистерны агранулярного эндо-плазматического ретикулума (Рис. 1 ж). Плотный цитозоль богат свободными рибосомами. Плазмалем-ма трехслойная, асимметричная, плотно прилегала к клеточной стенке.
Особенностью ультраструктуры зрелых гиф тканевой формы мицелия было то, что они сильно различались между собой по строению (толщина, форма, электронная плотность, текстура) клеточных стенок. Выявили четыре основных типов строения клеточных стенок зрелых гиф изучаемого вида гриба: 1) довольно толстые (в среднем, 1,2 мкм) и равномерно утолщенные (Рис. 1 л, н, 2 а), двухслойные (с толстым темным, довольно плотным многослойным внутренним (в среднем, 0,8 мкм) и наружным тонким (в среднем, 0,2 мкм), умеренной электронной плотности тонкогранулярным); 2) трехслойные со средним тонким (0,1 мкм), темным, гомогенным (Рис. 1 и, 2 б), внутренним, варьирующей толщины (0,5-1,0 мкм), темным гомогенным (Рис.1 и, 2 б) и наружным (0,4-0,6 мкм), умеренной электронной плотности, тонкогранулярным; 3) с тонкими (в среднем, 0,1 мкм) темными гомогенными клеточными стенками, интегральной частью которых был прилегающий к ним хорошо развитый (0,5-2,5 мкм) наружный слой, состоящий из плотно расположенных контрастных микрофибрилл (Рис. 1 к, 2 в); 4) неравномерно толстыми (1,5-3,0 мкм), темными, разнообразной, часто причудливой (на поперечном срезе гифы) формы (Рис. 1 ж, о-х, 2 г). Наиболее часто встречались гифы с клеточными стенками четвертого типа (75% от общего числа изученных), а наиболее редко (1%) -третьего. Гифы с клеточными стенками второго типа составляли 5%, тогда как первого - 19% от общего числа исследованных.
ЭКШШМШАДШМШКОДОШ
Рис. 1. а - фрагмент послеоперационной раны с налетом мицелия (показан стрелкой); б - общий вид колонии ифжШМ зрр. в чашке Петри через 3 суток после посева на питательную среду сусло-агар; в - особенности морфологии гиф мицелия /./'сЬЛе/'т/'а Брр. в световом микроскопе (стрелками показаны спорангии); г - продольный срез кожи и подкожной жировой клетчатки (окраска гематоксилин-эозином) инфицированной ОсИШеша$рр. (стрелками показаны гифы гриба); д-ц - электроннограммы клеток вегетативного мицелия тканевых форм гриба. На рисунках н, и, к цифрами обозначены слои клеточной стенки. Ув.: а ~х40; б -х20; в -х250; г -х400; д, е, з -х18000; ж, л, и -х15000; н -Х25000; к, м, о-ц -хЮОО. Условные обозначения здесь и на рис. 2: А - апофиза; В - вакуоль; Г - гифа; Зг - зигоспора; КС - клеточная стенка; ЛВ -липидное включений; М - митохондрия; ОГ - отмершая гифа; ПГ - полифосфатные гранулы; С - спорагий; Сп - септа; Сс
- спорангиоспора
3 в в
I
д
Рис. 2. Схема, иллюстрирующая строение клеточных стенок гиф мицелия Lichtheimia spp. in vivo (а-г) и in vitro (д). Цифрами обозначены слои клеточной стенки
Отметим, что септы в гифах мицелия тканевых форм гриба не обнаружили, что связано с отсутствием спороношения.
В стареющих гифах мицелия цитозоль локально просветлялся, существенно сокращалась численность органелл и запасных веществ. Ядра теряли групповое расположение, ядрышко сокращались в размерах, позже исчезал конденсированный хроматин. В митохондриях просветлялся матрикс и резко сокращалось число крист; форма их становилась неправильной. Тонопласт вакуолей и плазмалемма распадались на фрагменты, формирующие везикулярные элементы. Со временем, в содержимом клеток органеллы и запасные вещества исчезали (Рис. 1 ц, стрелки). Латеральные клеточные стенки утоньшались, теряли слоистость и электронную плотность. В отмерших клетках последние приобретали сильно извилистые очертания и примыкали друг к другу.
Ультраструктура Lichtheimia spp. in vitro. После высева биоптатов на среду сусло-агар, уже через 7 часов (при 28 °С) формировалась пушистая колония (Рис. 1 б), характеризующаяся большой скоростью роста. Окраска колонии вначале роста белая, а со временем - светло-серая. При изучении морфологии колонии в световом микроскопе (Рис. 1 в) выявили довольно широкие гифы (3,5-6,0 мкм). Септы встречались редко и, в основном, в спорангиеносцах варьирующей длины (от 150 до 250 мкм), несущих разно-возрастные спорангии (Рис. 1 в, стрелки). Отметим, что формирование септ вблизи репродуктивных структур является характерной особенностью вегетативного мицелия зигомицетов.
Как видно на снимке, полученном на небольшом увеличении сканирующего электронного микроскопа, для изучаемой колонии характерны радиально и рыхло ориентированные гифы (Рис. 1 а), имеющие гладкую поверхность (Рис. 1 б). Морфологической особенностью гиф мицелия была редкая встречаемость латеральных ответвлений, располагающихся под прямым углом к несущей ее гифе (Рис. 3 в), а также спорангиев (Рис. 1 в, 3 а, стрелки) и зигоспор.
Спорангии - обратно грушевидной формы (от 2060 мкм, Рис. 3 г), с характерным тонко-гранулярным рисунком поверхности (Рис. 3 д). Апофиза (50-100 мкм) конической формы, что наглядно очевидно после разрыва (Рис. 3 ч, стрелка) оболочки спорангия и освобождения шаровидных или эллиптических
спорангиоспор (Рис. 3 е). Поверхность молодых спо-рангиоспор гладкая, тогда как зрелых - четко орнаментирована в виде хаотично расположенных (Рис. 3 ж), невысоких (0,6-0,9 мкм) гребневидных выростов. Интересной особенностью спорангиоспор было то, что сразу после их освобождения из спорангия, они имели гладкую поверхность (то есть были не зрелыми, Рис. 3 ч), а собственно процесс их созревания, сопровождающийся формированием орнаментированной оболочки, проходил уже за его пределами, создавая трудности при изучении истиной их скульптуры, имеющей важное таксономическое значение.
В исследуемой колонии исключительно редко наблюдали разновозрастные зигоспоры (Рис. 3 з, и, к, л). Вблизи молодых зигоспор выявляли так называемые «копулирующие отроги» (Рис. 3 з, стрелка), принимающие прямое участие в процессе их формирования. Зигоспоры закладывались и формировались при слиянии апексов двух копулирующих отрогов. Обнаружено, что поверхность копулирующего отрога тонкогранулярная, то есть по строению идентична таковой зрелого спорангия. Зрелые зигоспоры имели размеры от 15,5 до 20,0 мкм (в среднем, 17,7 мкм); их поверхность отличалась наличием хорошо выраженного рисунка в виде «сот» (Рис. 3 л), составленного из слегка волнистых гребней высотой, в среднем, 1,5 мкм, с неровным наружным краем. Отметим, что, согласно данным из научной литературы [5, 6], зигоспоры характерны для колоний L. corymbifera, выделенных от пациентов и из окружающей среды. Особенности строения зрелых зигоспор имеют важное таксономическое значение и наиболее обильны в колониях L. corymbifera, выращенных на агаре с дрожжевым экстрактом при 30 и 33 °С, тогда как на сусло-агаре они формируются в меньшем числе [6]. Нам представляется, что характерное для изучаемой колонии наличие редуцированного спороношения (формирование небольшого числа спорангиев и зигоспор может) быть результатом ингибирующего действия антимикотика - амфотерицина В, который применяли для лечения пациентки.
Клетки вегетативного мицелия in vitro, как и у тканевых форм гриба, проходили стадии роста, созревания, зрелости и старения. Часто отмечали и полностью отмершие профили гиф с сильно деформированными тонкими клеточными стенками.
В интактных клетках мицелия многочисленные ядра и митохондрии (Рис. 3 п) по числу, топографии, размерам, форме и особенностям тонкого строения были сходны с таковыми мицелия тканевых форм гриба. Профили гиф мицелия различались между собой по степени вакуолизации, что свидетельствовало о том, что они находились на разных стадиях развития. Так, в одном из них вакуоли многочисленные, мелкие (Рис. 3 м), в другом - многочисленные, средних размеров (Рис. 3 п), а в третьем имела место одна или несколько крупных, занимающих основную часть на площади среза гифы. Вакуоли светлые, содержали многочисленные мелкие (0,2-0,4 мкм), тем-
ЗКСДЕРИМШІМЬ1НМІШКОДОР4Я
Рис. 3. Особенности строения клеток вегетативного мицелия Lichtheimia spp., выращенных in vitro, в сканирующем (а-л) и трансмиссионном (м-ч) электронных микроскопах. Ув.: а -х250; б -х9000; в -х.7000; г, е, з -хЗОСЮ; д -Х20000; ж, к, л -
х12000; и - Х40000; о, р, с, т - Х25000; м, н, п, у, ф, х, ц - х10000
ные гранулы полифосфатов (Рис. 3 н), равномерно расположенные по площади среза вакуоли. В цитозоле имели место многочисленные липидные капли (0,2-0,3 мкм) умеренной электронной плотности. Усиление уровня вакуолизации в отдельных участках гифы сопровождалось снижением числа митохондрий и запасных включений. Компоненты эндо-мембранной системы, как и в содержимом тканевых форм гриба, встречались редко. Цитозоль плотный, богат свободными рибосомами.
Гифы мицелия не различались между собой по толщине и строению клеточных стенок, в отличие от тканевых форм гриба. Клеточные стенки тонкие (от 0,1 до 0,2 мкм), темные, гомогенные (Рис. 3 о, 2 д). В гифах, образующих спорангии, имели место одиночные, прямые (0,2 мкм), трехслойные (с двумя крайними темными слоями и центральным светлым) сплошные септы (Рис. 3 у). Помимо септ описанного строения, между участками гиф, находящихся на разных стадиях развития (включая старение), выявили «ложные септы». Они представляли собой сильно и симметрично расширенные на довольно большом протяжении (3,0-4,0 мкм) участки периплазматиче-ского пространства, заполненные тонкогранулярным содержимым, по морфологии напоминающим слизь (Рис. 3 ф). Описанные расширения периплаз-матического расширения могли формировать довольно протяженный, тонкий (0,2-0,3 мкм) просвет (аналог септальной поры, Рис. 3 ф, стрелка), по которому сообщался цитозоль близлежащих участков гифы. В случае, если в зоне просвета такой септы плазмалемма смыкалась, сообщение между смежными участками гифы по симпласту полностью прекращалось (Рис. 3 х), что имело место при переходе их на более продвинутые стадии развития, включая старение.
Факт наличия ложных септ в мицелии ЫсЫкет-1а ярр. проливает свет на одну из важных сторон биологии развития объекта настоящего исследования: каким образом протекает рост и развитие апикально растущих гиф, не имеющих регулярно расположенных ригидных септ, особенности строения порового аппарата которых позволяют в пределах одной гифы сосуществовать клеткам, находящимся на разных стадиях развития (основная догма биологии развития мицелиальных септированных грибов). Ложные септы, по-видимому, более лабильны, чем обычные; их присутствие обеспечивает более быстрый рост мицелия, поскольку на их формирование требуется меньше времени и «строительного» материала. Как следует из микрофотографии, представленной на рис. 3 ц, формирование настоящих сплошных септ в конидиеносцах также способствует изоляции формирующихся генеративных структур от стареющих клеток мицелия, что позволяет им благополучно завершать свое развитие. Их присутствие обеспечивает ригидность конициеносцев и возможность их вертикальной пространственной ориентации, важной для процесса распространения спорангиоспор.
Старение гиф мицелия протекало сходным образом с аналогичными тканевых форм гриба. Отличие состояло лишь в том, что в клеточных стенках гиф без содержимого формировались многочисленные перфорации варьирующей (0,02-0,17 мкм) толщины.
Таким образом, при сравнении ультраструктур-ной организации тканевых (кожа и подкожная жировая клетчатка) и культуральных форм L. corymbifera выявили, что характерной особенностью первых является способность формировать разнообразные (даже в пределах одной гифы) по строению мела-нифицированные клеточные стенки. Здесь уместно привести данные, представленные в работе Gale R.R (1963), согласно которым клетки мицелия Мисог corymbifera (синоним L. corymbifera), в ответ на действие противогрибкового антибиотика Ro 2-7758, не различались между собой по строению и формировали в условиях культуры в 6-7 раз более толстые, чем в контроле клеточные стенки, которые, судя по снимкам, представленным в данной работе, не были меланифицир ов аны.
Мы не обнаружили существенных различий в строении клеток вегетативного мицелия тканевых и культуральных форм гриба по числу и строению ядер, а также компонентов цитоплазмы. Отмечена лишь заметно большая способность аккумулировать полифосфатные гранулы клетками мицелия, выращенного на питательной среде, что можно объяснить разной «питательной ценностью» субстратов. Из данных настоящей работы следует, что к числу цитологических критериев вирулентности анализируемого штамма Lichtheimia spp. можно отнести способность тканевых форм гриба формировать разнообразные по строению клеточные стенки, что позволяет ему противостоять «натиску» со стороны иммунной системы хозяина и является основной их стратегической «уловкой».
Отметим, что в отличие от объекта настоящего исследования, тканевые формы клеток сильновирулентных штаммов базидиомицетового гриба Cryptococcus neoformans [7, 8] синтезировали большее число запасных веществ, формировали одну гигантскую митохондрию, многочисленные пузырьки и перокси-сомы, а также сильно утолщенные клеточные стенки, однако они были однообразного строения. Налицо факт наличия различных цитологических преобразований в строении клеток патогенных грибов в зависимости от их таксономического положения.
ВЫВОДЫ
1. Согласно данным сканирующей электронной микроскопии, для клеток вегетативного мицелия и спорангиеносцев Lichtheimia spp. in vitro было характерно наличие гладкой поверхности, тогда как для зрелых спорангиев и копулирующих отрогов - тонкогранулярной.
2. У объекта настоящего исследования формирование специфического рисунка слоя орнаментации
спорангиоспор проходило после их освобождения из спорангия. Поверхность зрелых зигоспор имела хорошо выраженный рисунок в виде «сот».
3. При сравнении ультраструктуры клеток вегетативного мицелия тканевых и культуральных форм Lichtheimia spp. выявили, что они были сходны по числу и строению ядер, митохондрий, по типу и количеству аккумулируемых запасных веществ, но
ЛИТЕРАТУРА
1. Roden М.М., Zaoutis Т.Е., Buchanan W.L., et al. Epidemiology and outcome of zygomycosis: A review of 929 reported cases // Clin. Infect. Dis. - 2005. - Vol. 41. - P. 634-653.
2. Gomes M.Z., Lewis R.E„ Kontoyiannis D.P. Mucormycosis caused by unusual mucormycetes, non-Rhizopus, -Mucor, and -Lichtheimia species // Clin. Microbiol. Rev. -2011. - Vol. 24 - P. 411-445.
3. Хостелиди C.H., Аравийский P.A., Богомолова T.C. и др. Случай успешного лечения рас-пространенного зигоми-коза (Absidia corymbifera) у больной острым лейкозом // Проблемы мед. микологии. - 2011. - Т. 13, №2.- Р. 116.
4. Степанова А.А., Синицкая И.А. Ультраструктура клеток Aspergillus niger. Вегетативный мицелий // Проблемы мед. микологии. - 2003. - Т. 5, №4. - С. 32-39.
5. Steven С., Diven M.D., Carlos А.А., et al. Intestinal zygomycosis due to Absidia corymbifera mimicking necrotizing enterocolitis in a preterm neonate II]. Perinatol. - 2004. - Vol. 24. - P. 794-796.
6. Alastruey-Izquierdo A., HoffmannK., Sybren deHoogG., etal. Species recognition and clinical relevance of the zygomycetous genus Lichtheimia (syn. Absidia Pro Parte, Mycocladus) IIJ. Clin. Microbiol. - 2010. - Vol. 48, №6. - P. 2154-2170.
7. Васильева H.B., Степанова A.A., Синицкая И.А. Электронно-микроскопическое изучение биологии развития клеток слабо и сильно вирулентного штаммов Cryptococcus neoformans in vitro и in vivo // Проблемы мед. микологии. - 2007. - Т. 9, №2. - С. 47-48.
8. Васильева Н.В., Степанова А.А., Синицкая И.А. Особенности морфогенеза клеток Cryptococcus neoformans в зависимости от вирулентности штаммов // Проблемы мед. микологии. - 2007. - Т. 9, №4. - С. 22-30.
Поступила в редакцию журнала 25.11.2012
Рецензент: Парусов В.Н.
сильно различались по строению клеточных стенок (толщина, форма, электронная плотность, текстура).
4. Выявленное разнообразие в строении клеточных стенок тканевых форм гриба можно рассматривать в качестве защитного механизма в ответ на воздействие иммунной системы пациента и антифун-гальной терапии.
