CC BY
24
HayKOBHH BicHHK .HbBiBCbKoro Ha^OHaibHoro ymBepcurery BeTepHHapHoi' MegnuUHH Ta 6i0TexH0iroriH iMem C.3. f^H^Koro Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies
ISSN 2518-7554 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/
УДК 619:636.71:616-03:616-036:616-097:521.27
Стан клггинно1 ланки шуштету у цуценят за умов вакцинацп та дп нового
1 • • •• ••• комплексного препарату у формп лшосомально1 емульсп
М.М. Брошков1, О.1. Вщур2, 1.В. Кичун2, C.I. Федоришин2, В.В. Парченко3
1Одесъкий нацюналъний медичний ушверситет, вул. Олъгieвсъка, 2, м. Одеса, 65082, Укра'ша;
21нститут бюлоги тварин НААН, вул. В. Стуса, 38, м. Лъвiв, 79024, Укра'та;
3Запор1зъкий державний медичний ушверситет, пр. Маяковсъкого, 26, м. Запор1жжя, 69035, Украша
Пошук нових iмуноактивних препаратгв як i способгв ïx застосування для тдвищення ¡мунного потенщалу оргашзму тварин за умов вакцинацй е актуалъною проблемою для тваринництва. Мета до^дженъ полягала у з 'ясувант впливу введення цуценятам нового комплексного препарату, що мiститъ птеридинш 2-[5-(фуран-2-iл)-4-фенiл-1,2,4-mрiазол-3-iлтiо] ацетат, жиророзчинш втамти, твт, лецитин у формi лinосомалъноï емулъсй на стан клiтинноï ланки iмунноï вiдповiдi оргашзму за умов вакцинацй. До^д проведено на двох групах одномiсячниx цуценят по чотири тварини у кожнш, породи лабрадор. Пiсля nоnереднъоï дегелъмттизацй i клШчного огляду вах цуценят iмушзували вакциною Nobivac Puppy DP (A139c01) зггдно настанови для застосування. Дослгднгй груш цуценят додатково вводили вказаний препарат тдшюр-но, дворазово: перший раз разом з вакциною окремою т'екщею i вдруге через 72 години тсля вакцинацй
Кров у тварин брали двiчi: перший раз безпосереднъо перед вакцинащею i вдруге через 14 дiб тсля iмунiзацiï. У кровi ви-значали абсолютну ктъюстъ лейкоцитiв та вiдносну юлъюстъ Т- i В-лiмфоциmiв та ïx iмунорегуляторниx популяцш, фаго-цитарну актившстъ нейтрофтв та юлъюстъ NK-клтин.
До^дження показали, що iмунiзацiя цуценят конmролъноï групи вакциною проти nарвовiрусного ентериту та чуми м'ясоïдниx призводитъ до тдвищення абсолюmноï кiлъкосmi лейкоциmiв, зниження вiдносноï кiлъкосmi Т- i В-лiмфоциmiв, фагоциmарноï акmивносmi нейтрофтв та ктотно не впливае на число NK-клтин.
Пiдшкiрне введення цуценятам дослiдноï групи до^джуваного препарату у формi лinосомалъноï емулъсй за умов вакцинацй спричиняе тенденцю до зростання вiдносноï кiлъкосmi Т-лiмфоциmiв (загалъних i теофтт-резистентних) та NK-клтин i зниження на 4,6% фагоциmарноï акmивносmi нейmрофiлiв кровi.
Отже, застосування цуценятам нового комплексного препарату у формi лinосомалъноï емулъсй на mni ïx вакцинацй проти nарвовiрусного ентериту та чуми м'ясоïдниx спричиняе стимулювалъний вплив на клтинну ланку iмунноï вiдnовiдi оргашзму, про що свiдчиmъ бтъша ктъюстъ Т-лiмфоциmiв та ïx регуляторних популяцт i NK-клтин. Водночас констато-вано iнгiбуючий вплив до^джуваного препарату на процеси фагоцитозу нейтрофтв кровi.
Knmnoei слова: лейкоцити, лiмфоциmи, фагоцитарна актившстъ нейmрофiлiв, nk-клтини, iмунорегуляmорний тдекс.
Status of the cellular link of immunity in dogs under conditions of vaccination and action of «Trifusol» in the form of liposomal emulsion
M.M. Broshkov1, O.I. Vishchur2, I.V. Kychun2, S.I. Fedoryshyn2, V.V Parchenko3
1Odessa National Medical University,
Citation:
Broshkov, M.M., Vishchur, O.I., Kychun, I.V., Fedoryshyn, S.I., Parchenko, V.V. (2017). Status of the cellular link of immunity in dogs under conditions of vaccination and action of «Trifusol» in the form of liposomal emulsion. Scientific Messenger LNUVMB, 19(82), 166-169.
науковий rich и к
Scientific Mauagcr nfl.it» Чшши.И antrvty al
HayKOBHH BicHHK HHyBME iMeHi C.3. IKH^KOTO, 2017, T 19, № 82
2, Olgievskaya st., Odessa, 65082,Ukraine;
2Institute of Animal Biology NAAS, 38, V.Stusa st., Lviv, 79034, Ukraine;
3Zaporizhzhia State Medical University, 26, Majakovskogo, Zaporizhzhia, 69035,Ukraine
The investigations for new immunoactive drugs as well as the methods of their use to increase the immune potential of animals in the context of vaccination is a actual problem for livestock breeding. The aim of the research was to find out the effect of the introduction of new complex drug piperidiniy 2- [-5-(furan-2-il)-4-phenil-1,2,4-triazol-3-iltio] acetate fat-soluble vitamins, tvin, lecihtin in the form of a liposomal emulsion to the puppies on the state of the cellular link of the immune response of the body under vaccination conditions.
The experiment was conducted on two groups of one-month Labrador puppies per four animals in each. After a preliminary de-worming and clinical examination all puppies were immunized with the Nobivac Puppy DP (A139c01) vaccine according to the manual. The experimental puppy group was additionally administered the this drug in the form of a liposomal emulsion subcutane-ously, twice: the first time with the vaccine by separate injection and the second time 72 hours after vaccination.
Blood in animals was taken twice: the first time immediately before vaccination and the second time in 14 days after immunization. In the blood the absolute amount of leukocytes and the relative number of T- and B-lymphocytes and their immunoregulatory populations, the phagocytic activity of neutrophils, and the number of NK cells were determined.
Studies have shown that the immunization of puppies in the control group with the vaccine against parvovirus enteritis and plague of carnivores leads to an increase in the absolute amount of leukocytes, a reduction in the relative number of T- and B-lymphocytes, phagocytic activity of neutrophils, and does not significantly affect the number of NK cells.
Subcutaneous administration to the puppies of the experimental group of preparation in the form of liposomal emulsion under vaccination causes a probable increase in the relative number of T-lymphocytes (common and theophylline-resistant) and NK-cells and a 4.6% decrease in the phagocytic activity of neutrophils of blood.
Thus, the use of new drug in the form of a liposomal emulsion for puppies under vaccination against parvovirus vulgaris and plague of carnivores causes stimulatory action on the cellular link of the immune response of the organism, as evidenced by a greater number of T-lymphocytes and their regulatory populations and NK cells . At the same time, the inhibitory effect of the drug on the processes ofphagocytosis of blood neutrophils was confirmed.
Key words: leukocytes, lymphocytes, phagocytic activity of neutrophils, NK-cells, immunoregulatory index.
BcTyn
Big0M0, ^0 ogHHM 3 kphthhhhx nepiogiB po3BHTKy y co6aK e 2-3 MicaHHun BiK. ^ n0B'a3aH0, no-nepme, 3 thm, ^0 y ^h nepiog 3gincHroroTbca 3axogu ^ogo iMy-Hi3a^i' i 3a3BHHan gBO- a6o TpHpa30B0i, ^0 MOKe cnpu-hhhhth iMyHocynpecHBHHH BngHB Ha opraHi3M. no-gpyre, caMe b ^OMy B^i b opraHi3Mi TBapuH Big6yBa-eTbca 3MiHa ^eTagbHoro reMorgo6iHy Ha BgacHHH, ^0 npH3B0gHTb go BHHHKHeHHa $i3iogoriHHo! aHeMii (Tizard and Saunders, 1996).
3 orgagy Ha nomyK mgaxiB gga nigBH^eHHa iMy-HHoro noTeH^agy TBapuH i 3HHKeHHa no6iHHHx BngHBiB Ba^HHa^i' Ha opraHi3M y ^h nepiog, a TaKOK onTHMi-3aqia ^apMaKogorinHHx 3aco6iB, BHKopucTOByBaHHx gga npoBegeHHa iMyH0K0peKqii, e aKTyagbHHMH aK y HayKO-BOMy TaK i npaKTHHHOMy 3HaneHHi.
BKgroneHHa giKapcbKHx npenapaTiB y ginocoMH moKe 3HanH0 nigBH^HTH i'x TepaneBTHHHy e^eKTHBHicTb, ocKigbKH, 3 ogHoro 6oKy, npenapaT, hkhh MicTHTbca b ginocoMi, 3axH^eHHH ii MeM6paH0ro Big gii' HecnpuaTgu-bhx ^aKTopiB, a 3 iHmoro - caMa MeM6paHa He g03B0gae TOKcHHHOMy npenapaTy nepeBH^mu npHnycTHMy koh-^mpa^ro b 6iogorinHHx pigHHax opraHi3My (Varpahovskaja, 1999; Ohorodnyk et al., 2016). .Hmoco-Ma npH цb0мy BHKOHye pogb TpaHcnopTepa, 3 aKoro npenapaT BHBigbHaeTbca n0cTyn0B0, y n0Tpi6HHx g03ax Ta мicцax i BnpogoBK neBHoro npoMiKKy nacy.
^k Hocii' giKapcbKHx npenapaTiB ginocoMH, MaroTb HH3Ky nepeBar: bohh 3axu^aroTb KgiTHHH opraHi3My Big tokchhhoi gii' giKapcbKHx 3aco6iB, npogoHryroTb giro BBegeHoro b opraHi3M giKapcbKoro 3aco6y, 3axu^aroTb giKapcbKi penoBHHH Big gerpagaqii, cnpuaroTb cnpaMO-BaHin cпeцн$iнноcтi 3a paxyHOK cegeKTHBHoi' npoHHK-
HocTi 3 KpoBi b TKaHHHH, 3MiHroroTb ^apMaKOKiHeTHKy giKapcbKHx npenapaTiB, nigBH^yronu i'x ^apMaKogorin-Hy e^eKTHBHicTb, g03B0garoTb cTBoproBaru Bogopo3HHH-Hy $opMy hh3kh giKapcbKHx cy6craH^H, TaKHM hhhom 36igbmyMHH i'x 6iogocTynHicTb (Juliano and Stamp, 1975; Goren et al., 1996).
Kope^ia iMyHHOi cucreMH mgaxoM BHKopucTaHHa hobhx iMyHoaKTHBHHx npenapaTiB 3 MeToro nigBH^eHHa cпeцн$iнноl iMyHHOi BignoBigi opraHi3My TBapuH 3a yMOB BaKqHHaqii e nepcneKTHBHHM HanpaMOM gocgi-g5KeHb, a nomyK TaKHx npenapaTiB, aK i MeTogiB ix 3a-cTocyBaHHa - aKTyagbHoro npo6geMoro gga TBapuHHH^-Ba, npo ^0 BHcgoBgroeTbca 6araT0 aBTopiB (Israf et al., 1996; Zhiljakova, 2006; Ohorodnyk et al., 2016).
B yKpaiHi BiTHH3HaHHMH BneHHMH po3po6geHHH npenapaT - «Tpu$y30g». flirona penoBHHa npenapaTy -ninepugHHin 2-[5-($ypaH-2-ig)-4-$emg-1,2,4-Tpia30g-3-igTio] aqeTaT HageKHTb go noxigHHx Tpia30gy. Mexa-Hi3M gii aKTHBHogironoi cy6cTaH^i nogarae b aKTHBi3aqii 6ioxiMinHHx пpоцeciв y KgiTHHax TKaHHH. npenapaT Mae aHTHO KcugaHTHy, iMyHOMogygrorony, npoTH3anagbHy, renaTonpoTeKTopHy Ta geTOKcuKaqinHy gii.
3 orgagy Ha цe MeTa gocgigKeHb nogaraga y 3'acyBaHHi BngHBy napeHTepagbHoro BBegeHHa ^^Ha-TaM H0B0r0 KOMngeKcHoro npenapaTy, ^o MicTHTb nine-pugHHift 2-[5-($ypaH-2-ig)-4-$eHig-1,2,4-Tpia30g-3-igTio] aqeTaT, Kupopo3HHHHi BiTaMiHH, TBiH, geцнтнн y $opMi gin0c0MagbH0i eMygbcii Ha ^opMyBaHHa KgiTHH-hoi gaHKH iMyHHOi BignoBigi opraHi3My 3a yMOB Ba^H-Haqii.
MaTepia™ i методи досл1джень
Для дослвдження використовували периферичну кров одномюячних цуценят з одного гшзда, породи Лабрадор, яку брали з лжтьово! вени в проб1рки з антикоагулянтом (EDTA). Всього в дослщ використовували кров ввд восьми цуценят: 4 дослщна група i 4 контрольна. Шсля попередньо! дегельмштизацп i клiнiчного огляду всiм цуценятам проводили вакци-нацiю з використанням вакцини Nobivac Puppy DP (A139c01) зпдно настанови для застосування. Дослщ-нш групi цуценят додатково вводили новий комлекс-ний препарат, що мютить пiперидинiй 2-[5-(фуран-2-iл)-4-фенiл-1,2,4-трiазол-3-iлтiо] ацетат, жиророзчин-нi вiтамiни, твiн, лецитин у формi лшосомально! ему-льси пвдшкрно, дворазово: перший раз разом з вакциною окремою ш'екщею i вдруге через 72 години шсля вакцинаци.
Кров у тварин брали двiчi: перший раз безпосере-дньо перед вакцинащею i вдруге через 14 дшв пiсля вакцинаци. У кровi визначали абсолютну к1льк1сть лейкоципв, вiдносну кiлькiсть лiмфоцитiв та !х iму-норегуляторних популяцiй, фагоцитарну актившсть нейтрофiлiв, а також к1льк1сть шлерних клiтин (NK-клiтин).
Вiдносну шльшсть Т-лiмфоцитiв та !х субпопуля-цш визначали методом спонтанного розеткоутворен-ня з еритроцитами барана в якосп маркерiв. Шдрахо-вували розетки у пофарбованих за Романовським-Гiмзою та висушених мазках. До Т-розеткоутворюючих лiмфоцитiв ввдносили клiтини, якi приеднали до себе не менше трьох еритроцитiв барана. Вiдносну кiлькiсть В^мфоципв визначали методом спонтанного розеткоутворення з еритроци-тами мишi в якосп маркерiв.
К1льк1сть к1лерних клiтин (NK-клггин) шдрахову-вали за допомогою ушверсального методу морфолоп-чного дослiдження форменних елеменлв кровi (Liddell and Weeks, 1995).
Реакцш для визначення фагоцитарно! активносп нейтрофiлiв (ФА) проводили у 96-пористих планше-
тах для iмунологiчних реакцiй з осередками, емнiстю 0,2 мл i круглим дном. Тест фагоцитозу проводили з додаванням до клiтин 0,06 мл 0,1%-о! суспензи клiтин пекарських дрiжджiв, попередньо iнактивованих шляхом нагрiвання. У препаратах тдраховували к1льк1сть фагоцитуючих нейтрофшв на 50 нейтрофiлiв. За фа-гоцитуючу клiтину вважали нейтрофiл, який поглинув одну i бiльше дрiжджових клiтин.
Результати та i'x обговорення
Важливе значення при вивченнi iмунно! вiдповiдi органiзму за умов вакцинаци мае дослiдження шльш-сного складу лейкоцнпв, i зокрема Т- i В-лiмфоцитiв, як провiдних iмунокомпетентних клтшн кровi, осш-льки вони характеризують рiвень захисних сил орга-шзму та стан специфiчного iмунiтету.
Результати дослвджень кiлькостi Т- i В^мфоципв i !х iмунорегуляторних субпопуляцiй у периферичнш кровi дослiджуваних тварин наведеш у таблицi. Як бачимо з отриманих даних, iмунiзацiя тварин спричи-няе змiни у периферичнiй кровi кiлькостi лейкоцитiв, Т- i В^мфоципв та !х iмунорегуляторних субпопу-ляцш. Зокрема, у кровi цуценят контрольно! групи на 14-ту добу шсля введення вакцини зафiксовано збi-льшення абсолютно! кiлькостi лейкоцитiв з 6,17 ± 0,9 до 7,1 ± 0,81 Г/л та зниження ввдносно! кiлькостi лiм-фоцитiв з 40,7 ± 4,85 до 36,3 ± 4,04%. При цьому у кровi цуценят контрольно! групи пiсля введення вакцини шльшсть Т-хелперiв i Т-супресорiв також була меншою, н1ж до вакцинацi!. Констатовано зниження показника iмунорегуляторного iндексу у тварин контрольно! групи через 14 дшв шсля вакцинаци.
Таким чином у кровi тварин на 14-ту добу шсля вакцинаци збшьшувалася абсолютна шльшсть лейко-ципв i зменшувалася вщносна кiлькiсть Т- i В-лiмфоцитiв та !х регуляторних популяцiй. Щ данi св1дчать про iмуносупресивний вплив вакцинаци на Т- i В-клгганну ланки iмунно! вiдповiдi органiзму цуценят i стимулювальний на кiлькiсть лейкоципв кровi.
Таблиця
Кiлькiсть лeйкоцитiв, Т- i В-лiмфоцитiв i i'x iмуноpeгулятоpниx субпопуляцiй у кров1 цуценят за
Показники До введення Пiсля введення
контроль дослщ контроль дослiд
Лейкоцити, Г/л 6,17 ± 0,9 7,03 ± 0,26 7,1 ± 0,81 7,0 ± 1,01
Шмфоцити, % 40,7 ± 4,85 38,7 ± 3,50 36,3 ± 4,04 41,0 ± 2,64
Т-лiмфоцити, % 64,0 ± 8,71 57,3 ± 5,03 60,0 ± 6,00 64,0 ± 2,00
Т-хелпери, % 50,0 ± 5,71 44,0 ± 4,21 46,0 ± 5,29 50,0 ± 4,46
Т-супресори, % 16,0 ± 1,00 12,0 ± 2,00 14,0 ± 2,00 12,7 ± 1,15
В^мфоцити, % 15,0 ± 2,64 15,3 ± 1,15 14,0 ± 0,89 15,7 ± 1,52
1мунорегуляторний iндекс 3,8 ± 0,72 3,13 ± 0,40 3,3 ± 0,52 3,96 ± 0,55
Пвдшшрне введення цуценятам досл1дно! групи нового комплексного препарату у формi лшосомаль-но! емульсi! за умов вакцинаци спричинило тенден-ц1ю до збшьшення в1дносно! кiлькостi Т-лiмфоцитiв (загальних i теофiлiн-резистентних) та зростання iму-норегуляторного iндексу на тлi зниження Т-супресорiв. Цi данi сввдчать про стимулювальний
вплив досл1джуваного препарату на Т-клгшнну ланку iмунно! ввдповщ органiзму цуценят.
Змiни кiлькостi В^мфоципв у кровi цуценят за умов вакцинаци та дп дослiджуваного препарату були подiбнi, але вираженi меншою мiрою. Цi данi можна пояснити тим, що у цуценят ввдносна шльшсть Т-лiмфоцитiв, а саме CD-4, була бшьшою мiрою схиль-на до пролiферацi!, н1ж В^мфоцити. Ймовiрно це
пов'язано з тим, що Т-л1мфоцити належать до клгган-но! ланки 1мунггету, як1 першими вступають у контакт з 1муногеном, на ввдмшу в1д Вшмфоципв яких ввдно-сять до гуморально! ланки 1мун1тету.
При дослвдженш показник1в фагоцитозу (рис.1) звертае на себе увагу зниження фагоцитарно! активносп нейтрофшв кров1 у цуценят контрольно! та дослвдно! груп через 14 д1б тсля 1мушзацп, вщповвд-но на 2 та 4,6%. Проте результати цих дослвджень не в1ропдш. Разом з тим, щ дат сввдчать про 1муносуп-ресивну дш вакцинацп на клпинну ланку неспецифь чно! резистентносп оргашзму тварин i ввдсутшсть суттевого впливу дослвджуваного препарату на про-цеси фагоцитозу. Бшьш виражене зниження фагоцитарно! активносп нейтрофiлiв кровi у цуценят дослано! групи може бути пов'язано зi зменшенням шлько-стi поверхневих рецепторiв на мембранах нейтрофшв внаслвдок специфiчно! дп дослвджуваного препарату на цi клiтини.
60 58 56 54 52 50 48
58,7
ЗЕТ
57,3
ж
52,7
37
контроль
ДО СП I д
□ до введення ■ гпсля введення
Рис.1. Динамiка ввдносноТ кiлькостi фагоцитуючих нейтрофiлiв у кров1 цуценят
При дослiдженнi у кровi цуценят NK-клiтин (рис.2), яка також як i нейтрофiли ввдноситься до вродженого клiтинного iмунiтету, звертае на себе увагу те, що у тварин контрольно! групи шльшсних змш популяци цих клiтин практично не вщбулося. Водночас у кровi цуценят дослщно! групи зафжсова-но зростання кiлькостi NK-клiтин з 7,33 ± 0,51 до 9,0 ± 1,0%. Збшьшення кiлькостi NK-клгган у кровi цуценят дослвдно! групи ймовiрно обумовлено компенсаторною реакщею органiзму на зниження ФА нейтрофшв. Ввдсутшсть кшьшсних змiн NK-клiтин у контрольнiй груш тварин сввдчить про те, що щ кль тини меншою мiрою реагують на вакцинний антиген.
контроль
ДОСЛ1Д
□ до введення □ nie ля введения
Рис. 2. Динамика ввдносноТ кiлькостi NK-клiтин у KpoBi цуценят
Висновки
1. Iмунiзацiя цуценят контрольно! групи вакциною проти парвовiрусного ентериту та чуми м'ясо!д-них призводить до тдвищення у кровi абсолютно! кiлькостi лейкоцитiв, зниження ввдносно! кiлькостi Т-i В-лiмфоцитiв, фагоцитарно! активносп нейтрофiлiв та iстотно не впливае на число NK-клгтин.
2. Введення цуценятам нового комплексного препарату у формi лiпосомально! емульси на rai вакцинацй сприяе пролiферативним процесам клiтин адаптивного iмунiтету та шпбуе процеси фагоцитозу нейтрофiлiв кров^ про що вказуе збiльшення ввднос-но! кiлькостi Т-лiмфоцитiв (загальних i теофшн-резистентних) та NK-клiтин i зниження фагоцитарно! активностi нейтрофiлiв.
Перспективи подальших дослгджень. Дощльно до-слщити вплив нового комплексного препарату у фор-мi л1посомально! емульси на бiохiмiчнi показники кровi та стан антиоксидантно! системи цуценят.
Бiблiографiчмi посиламмя
Tizard, I.R., Saunders, W.B. (1996). Veterinary
Immunology. An Introduction. Toronto. Varpahovskaja, I. (1999). Liposomal'nye formy lekarstvennyh sredstv. Remedium. 5, 26-34 (in Russian).
Ohorodnyk, N.Z., Kychun, I.V., Vishchur, O.I., Yasnyskyi, R.S. (2016). Zastosuvannia novykh kompleksnykh preparativ u formi liposomalnoi emulsii u veterynarnii medytsyni. Naukovo-praktychni rekomendatsii (in Ukrainian). Juliano, B.L., Stamp, D. (1975). The effect of particle size and change on the clerance rates of liposomes and liposome encapsulated drugs. Biochem. Biophys. Res. Com. 63, 651-658. Goren, D., Horowitz, A.T., Zalipsky, S. (1996). Targeting of stealth liposomes to er-B2 (Her/2) receptor: in vitro and in vivo studies. Br. J. Cancer. 74, 1749-1756. Liddell, E., Weeks, I. (1995). Antibody Technology.
BIOS Scientific Publisher. 8, 40-103. Ohorodnyk, N.Z., Kychun, I. V., Vishchur, O.I., Yasnyskyi, R.S. (2016). Zastosuvannia novykh kompleksnykh preparativ u formi liposomalnoi emulsii u veterynarnii medytsyni. Naukovo-praktychni rekomendatsii. Lviv (in Ukrainian). Zhiljakova, T.P. (2006). Povyshenie rezistentnosti organizma zhivotnyh putem primenenija preparata gumiton: Avtoref. diss. na soiskanie uch. stepeni kand. biol. nauk: spec. 03.00.13 «Fiziologija cheloveka i zhivotnyh». Tomskij gos. un-t. Tomsk, 20 (in Russian).
Israf, D.A., Coop, R.L., Stevenson, L.M. (1996). Dietary protein influences upon immunity to Nematodirus battus infection in lambs. Veterinary Parasitology. 61(3-4), 273-286.
Received 5.10.2017 Received in revised form 3.11.2017 Accepted 7.11.2017
