CC BY
49
УДК 619:615:636.087
Жила М. I., к. вет. н., доцент*© Державный науково-дослгдний контрольный тститут ветеринарных npenapamie та кормових добавок
ПОРШНЯЛЬНА ОЦ1НКА ФАРМАКОЛОГ1ЧНИХ
ВЛАСТИВОСТЕЙ ПРОБ1ОТИЧНИХ ПРЕПАРАТ1В ПРИ IX КЛ1Н1ЧНОМУ ВИПРОБУВАНН1
У стaттi подано результати лабораторних до^джень та показники продуктивностi курчaт-бройлерiв при застосуванш пробютичних кормових добавок. Встановлено, що використання впродовж всього перюду вирощування, у рекомендованих виробником дозах пробютиюв Probion та Bio plus 2B, в якостi кормовог добавки, сприяе кращому засвоенню комбжорму, збереженостi птищ, збыьшенню маси тыа та забтного виходу тушки у порiвняннi з контролем. На основi отриманих гемaтологiчних, бiохiмiчних та iмунологiчних показниюв кровi, можна стверджувати про активуючий вплив пробютиюв на метaболiчнi процеси та показники неспецифiчног резистентностi оргатзму курчат, що тдтверджуеться високим рiвнем лiзоцимног aктивностi сироватки кровi, вiрогiдно вищим вмютом альбумту та у-глобулШв, а також гемоглобту, еритроцитiв та лiмфоцитiв у кровi.
Мiкробiологiчнi показники вказували на корегування мжрофлори кишечника в сторону збыьшення корисних мiкрооргaнiзмiв i зменшення умовно-патогенног мжрофлори у птищ, яюй згодовували пробютичт препарати та вiдсутнiсть мiкрооргaнiзмiв роду Salmonella, Campilobacter та Cl. perfringens, що виявляли в контрольтй грут. Результати морфометрп внутршшх оргатв курчaт-бройлерiв, яким згодовували пробютичш препарати, у порiвняннi до контролю, вказували на збыьшення висоти ворсинок та глибини крипт слизовог оболонки кишечника, у центральних та перифертних органах iмунног системи збыьшення лiмфогдних компонентiв i зниження вмюту сполучнотканинних елементiв, що вказувало на активний гх морфо-функцюнальний стан.
Ефективтсть та доцыьтсть застосування пробютичних препaрaтiв у формi кормовог добавки тдтверджено у вЫх до^дних групах, проте, найбыьш виражена рiзниця показниюв спостерйалась у курчат, яким згодовували Probion в дозi 1,0 г/кг корму.
Ключовi слова: пробютики, курчата-бройлери, клшчш випробування, гемaтологiчнi показники, морфометрiя.
УДК 619:615:636.087
Жила Н. И., к. в. н., доцент Государственный научно-исследовательский контрольный институт ветеринарных препаратов и кормовых добавок
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ИХ КЛИНИЧЕСКОМ ИСПЫТАНИИ
В статье поданы результаты лабораторных исследований и показатели продуктивности цыплят-бройлеров, которым применяли
© Жила М. I., 2014 *Науковий консультант
- доктор ветеринарних наук, професор,членкор НААНУ Коцюмбас 1.Я. 99
пробиотические кормовые добавки. Установлено, что использование на протяжении всего периода выращивания, в рекомендованных производителем дозах, пробиотиков Probion и Bio plus 2В, в качестве кормовой добавки, способствует лучшему усвоению комбикорма, сохранности птицы, увеличению массы тела и убойного выхода тушки по сравнении с контролем. На основе полученных гематологических, биохимических и иммунологических показателей крови, можно утверждать об активирующем влиянии пробиотиков на метаболические процессы и показатели неспецифической резистентности организма цыплят, которые подтверждаются высоким уровнем лизоцимной активности сыворотки крови, достоверно высшим содержимым альбумина и у-глобулинов, а также гемоглобина, эритроцитов и лимфоцитов в крови.
Микробиологические показатели указывали на коррекцию микрофлоры кишечника в сторону увеличения полезных микроорганизмов и уменьшения условно-патогенной микрофлоры у птицы, которой скармливали пробиотики и отсутствие микроорганизмов рода Salmonella, Campilobacter и Cl. perfringens, которые обнаруживали в контрольной группе. Результаты морфометрии внутренних органов цыплят-бройлеров, которым скармливали исследуемые препараты, по сравнении с контролем, указывали на увеличение высоты ворсинок и глубины крипт слизистой оболочки кишечника, в центральных и периферийных органах иммунной системы увеличения лимфоидных компонентов и снижения соединительной ткани, что указывало на их активное морфофункциональное состояние.
Эффективность и целесообразность применения пробиотиков в форме кормовой добавки подтверждена во всех опытных группах, однако, наиболее выраженная разница показателей наблюдалась у цыплят, которым скармливали Probion в дозе 1,0 г/кг корма.
Ключевые слова: пробиотики, цыплята-бройлеры, клинические испытания, гематологические показатели, морфометрия.
UDC 619:615:636.087
M. I. Zhyla
State Scientific-Research Control Institute of Veterinary Medicinal Products
and Feed Additives
COMPARATIVE ESTIMATION OF PHARMACOLOGICAL PECULIARITIES OF PREPARATIONS OF PROBIOTICS IS AT THEIR
CLINICAL TRIALS
In the article the results of laboratory researches and indexes of the productivity of chickens-broilers are given at application of feed additives of probiotics. It was determined that the use during all period of growing in the recommended doses ofprobiotics Probion and Bio plus 2B as feed additive facilitates better mastering of the compound feed, survival ofpoultry, body weight gain and for slaughter exit of carcass in comparison with control. On the basis of the obtained hematological, biochemical and immunological blood indexes it is possible to assert active influence of probiotics on metabolic processes and indexes by developing resistance of organism of chickens that is confirmed by the high level of lysocymic
100
activity of blood serum, it is possible by higher content of albumen and y-globulin, and also hemoglobin, red corpuscles and of lymphocytes in blood.
Microbiological tests showed that application of probiotics during feeding of piglets caused correction of intestinal microflora, increasing of beneficial microorganisms and decreasing of relatively pathogenic microflora of poultry that was fed by probiotics and the absence of microorganisms of Salmonella, Campilobacter and Cl. Perfringens observed in a control group. The results of morphometric of internal organs of chickens-broilers, medicinal product of probiotic were fed that, in comparison to control, showed the increase of villus height and crypt depth of mucous membrane of bowels, in the central and peripheral organs of the immune system the increase of lymphoid components and decline of connective tissue elements, that specified on active them morphofunctional condition.
Efficiency and expediency of application ofprobiotics in form offeed additive are confirmed in all treated groups, however the most expressed difference of indexes was observed in chickens fed by Probion in a dose of 1,0 g/kg.
Key words: probiotics, chickens-broilers, clinical trials, hematological indexes, morphometric.
Вступ. Розробка та впровадження у ветеринарну практику нових препарата чи кормових добавок передбачае обов'язкове проведення клмчного випробування !х на цшьових видах тварин [1, 3, 8]. Тепершш технологи промислового вирощування птищ передбачають застосування кормових добавок рiзних категорш (технолопчш, сенсорш, зоотехшчш, поживш тощо). Введення заборони на застосування кормових антибютиюв у годiвлi тварин та птищ призвело до активного пошуку альтернативних, безпечних та ефективних кормових добавок, яю запоб^али б колошзаци умовно-патогенно! кишково! мжрофлори та розвитку захворювань. В цьому аспект значна перевага надаеться пробютичним культурам мiкроорганiзмiв, а також пребютикам i симбютикам [5, 7, 9].
Спещалютами ветеринарно! медицини для тдвищення перетравност i засвоення кормiв, стимуляци росту та розвитку тварин, тдвищення неспецифiчного iмунiтету застосовуються ферментнi, пробiотичнi, пребiотичнi i комбiнованi ферментно-пробiотичнi препарати, а також комплексш пробiотичнi препарати збагаченi ф^окомпонентами. Пробiотики позитивно впливають на оргашзм, покращуючи процес травлення, пiдвищують ефектившсть вакцинацiй тощо. Застосування пробiотикiв суттево зменшуе витрати на лiкування захворювань, тдвищуе продуктивнiсть i покращуе якють тваринницько! продукцп [4, 5, 9].
Матер1ал i методи. Дослiдження проводили в приватному господарствi КТ "Его" Жовювського району Львiвсько! областi, на 1200 головах курчат-бройлерiв кросу "Кобб-500", добового вiку, сформованих в чотири групи по 300 голiв в кожнш. З метою вивчення фармакологiчних властивостей пробiотичних препаратiв використовували: Probion виробництва Woogen, Корея та Bio plus 2B, виробництва фiрми Biochem, Нiмеччина. Препарати згодовували з кормом: 1 група отримувала пробютик Probion в дозi 1 г/кг, 2 група - Probion в дозi 0,5 г/кг, 3 група курчат отримувала Bio plus 2B в дозi 0,4 г/кг, 4 група - контрольна.
101
Вакцинацш курчат проводили згщно загальноприйнято! у бройлерному птахiвництвi схеми. Динамжу змши маси тша курчат-бройлерiв вивчали шляхом шдивщуального зважування на 8, 15, 22, 28, 36 i 43 доби. Птицю утримували на пiдлозi з вшьним доступом до корму i води. На 15-, 30- та 43-доби з кожно! групи вщбирали по 50 голiв для гематолопчних, патоморфологiчних i мiкробiологiчних дослщжень. У гепаринiзованiй кровi визначали концентрацш гемоглобiну, гематокрит, число еритроцитiв, лейкоциив, лейкоформулу, фагоцитарну активнiсть нейтрофiлiв (ФАН) та фагоцитарний шдекс (Ф1). У сироватщ кровi (СК) — концентрацш загального бiлка та його фракцшний склад, лiзоцимну (ЛАСК) та бактерицидну (БАСК) актившсть сироватки кровi та циркулюючi iмуннi комплекси (Ц1К) [2].
Шсля забою птицi проводили повний патологоанатомiчний розтин, з вщбором матерiалу для гiстологiчного, гiстохiмiчного та морфометричного дослщжень. Внутршш органи зважували, вираховували !х ваговi коефiцieнти. Матерiал фiксували в 10% нейтральному формалЫ, фiксаторi Буена, 80° охолодженому етиловому спирт та рiдинi Карнуа, з наступною заливкою в парафiн. Парафiновi зрiзи фарбували гематоксилiном та еозином, за методом Браше [3]. Мжроскопш проводили з допомогою мiкроскопа OLIMPUS СХ-41 i морфометрично! програми DP-SOFT. Для мжробюлопчних дослiджень вiдбирали проби вмктимого слiпих кишок. В зразках вмктимого кишечнику дослiджували видовий, кшькюний та якiсний склад мiкрофлори методом розведень i посiву мiкроорганiзмiв на селективш середовища. Iдентифiкацiю мiкроорганiзмiв проводили за загальноприйнятими методиками. Отриманi результати обробляли статистично [2, 6].
Результати дослщження. Використання пробютиюв сприяло кращому засвоенню комбiкорму, збiльшенню маси тша та збереженост курчат-бройлерiв, в порiвняннi з контролем, впродовж всього перюду вирощування. Маса тiла курей-бройлерiв на кiнець дослiду (43 доба) вирощування у 1 грут була на 248 г вище, шж у контролi, 2 та 3 групах, вщповщно, на 233 г та 15 г. Птиця дослщних груп за середньодобовими приростами випереджала контрольних курей у 1 грут на 6,0 г, 2 i 3 групах, вщповщно, на 5,6 i 0,4 г, або 11,8 % у 1 грут, 11% та 0,8 %, вщповщно, у 2 та 3 групах. Вихщ тушки курей-бройлерiв у 1 грут на 275 г вищий у порiвняннi з 4 групою, вщповщно, у 2 грут - на 245 г, 3 грут - на 20 г.
Морфолопчт показники кровi знаходились у межах фiзiологiчно! норми для даного вжу птищ, впродовж всього перюду дослщження. На 15 на 30 добу дослщу спостер^али тенденцш до збшьшення вмкту гемоглобiну у курчат 1 -3 груп, а еритроциив у 2 дослщнш групi, порiвняно, з контролем. При аналiзi лейкоцитарно! формули спостер^али збiльшення вiдносного числа лiмфоцитiв у курчат дослiдних груп порiвняно з контролем, особливо на 15 i 43 доби дослiду, а також достовiрно нижчим був вмiст еозинофшв у дослiдних груп курчат вщносно контролю на 15 добу дослщу. Фагоцитарна актившсть псевдоеозинофшв зростала у вах дослiдних групах на 30 i 43 доби застосування препарату. Проте, достовiрне пiдвищення (р <0,05) було в 3-й
102
грут на 24 % (30 доба) i на 28 % (43 доба). Спостер^алось помине дост^рне пщняття фагоцитарного шдексу в 3-й грут, у порiвняннi з контрольною групою на 30 добу на 19 % i на 43 добу — на 24 %(р <0,05). Аналiз отриманих даних показникiв лiзоцимно! активност сироватки кровi курей дослiдних груп характеризувався позитивною динамiкою протягом перюду дослiджень. На 30 добу згодовування пробютиюв дослiдженнями встановлено найвищий рiвень ЛАСК у курей 1 дослщно! групи. Також суттево вищим (на 25,1%) показник був у порiвняннi з попередтм перiодом дослiджень. Показники контрольно! групи залишалися незмiнними.
Аналiз бiлкового спектру сироватки кровi курей на 15 добу застосування препарату показав вищий вмкт □! - глобулмв у курей 1 i 2 дослiдних груп порiвняно до контролю. На 30 добу застосування препарату виявлено вiрогiдно вищий вмкт сироваткового альбумшу курей 1 дослщно! групи у порiвняннi з контролем (р <0,05). У курей 2 групи показник був нижчим у порiвняннi з даними I групи на 21 i 12%. Рiвень в - глобулмв у СК курчат зростав протягом дослщу, а вщмшност мiж групами за цим показником проявлялися починаючи з 30 доби дослщу. Загалом на час завершення дослiду, у порiвняннi з вихщними даними, вмiст бiлкiв ще! фракцi! зрiс у 2,3 - 2,6 рази. Рiвень y-глобулiнiв на 15 добу застосування препарату був найвищим у СК 1 дослщно! та контрольно! груп. На 30 добу згодовування пробютиюв рiвень у-глобулмв залишався найвищим у курей 1 дослщно! групи. Рiвень y-глобулiнiв у СК курей на 43 добу дослщу уЫх груп був приблизно однаковим i вiдповiдав фiзiологiчним нормам.
Аналiз концентрацi! циркулюючих iмунних комплекЫв показав, що !х кiлькiсть знижувалася протягом дослiду в СК курчат уЫх груп. По мiрi зниження антигенного навантаження концентращя ЦК у СК курей нормалiзувалася, при цьому на кшцевий перiод проведення дослщжень найнижчими був показник ЦЕК курчат 1 дослщно! групи, що опосередковано свщчить про ефективне функщонування системи фагоцитозу та комплементу.
Результати проведених бiохiмiчних дослiджень показали, що у СК курчат-бройлерiв усiх дослiдних груп, яким застосовували пробiотики, активнiсть ЛФ була достатньо високою упродовж початкових перiодiв дослiджень. Проте, на 43 добу дослщу вщзначено помiтне зниження активност дослiджуваного ензиму, порiвняно з попередтми перiодами дослiдження, що вказувало на нормалiзуючий вплив пробiотикiв на метаболiчнi процеси розвитку в органiзмi курей. У СК курчат 1 дослщно! групи на 15 i 30 доби дослщу виявлена вiрогiдно вища активнiсть АсАТ, вiдповiдно, на 7,5 та 13,9 %, порiвняно з птицею контрольно! групи. На 15 добу застосування пробютика вщзначена пщвищена активнiсть АлАТ i АсАТ у СК курчат 3 групи, вщповщно, на 14,6 i 10 %, але цi рiзницi були не вiрогiднi. На 30 добу дослщу виявлена вiрогiдно вища актившсть АлАТ у СК курчат 2 групи на 21 %. На час завершення дослщу виявлено вiрогiдне пщвищення активност АлАТ у СК курчат 1 дослщно! групи на 17,8 %, порiвняно з курчатами контрольно! групи.
При мжробюлопчному дослщжент вмктимого слiпо! кишки курей рiзних груп, на 43 добу застосування препарату РгоЫоп в дозi 1 г/кг,
103
мiкроорганiзмiв роду Lactobacillus виЫвали на 15,3 % бшьше, шж в контрольнш rpyni. При застосуванш Probion в дозi 0,5 г/кг мiкроорганiзмiв роду Lactobacillus виЫвали - на 14 %, а при застосуванш Вю Plus 2B в дозi 0,4 г/кг -на 10,7 % бшьше, шж у контрольнш груш.
При застосуванш препарату Probion в дозi 1 г/кг кшьккть E. coli зменшилась у поpiвняннi з контролем - на 22,9 %. При застосуванш Probion в дозi 0,5 г/кг кшькють E. coli зменшилась - на 20,3 % та при застосуванш Вю Plus 2В в дозi 0,4г/кг - на 16,5 %. При щентифшацп видшених культур родини Enterobacteriaceaе у першш гpyпi видiлили: E. coli, Enterobacter sakasakii, E. fergusonii, E. hermannii, E. vulneris, Serratia odorifera; у другш грут: E. coli, E. fergusonii, E. fergusonii, Enterobacter cloacae; у третш: E. coli, E. vulneris, E. fergusonii, Kluyvera spp., Serratia odorifera, Citrobacter farmeri та у четвертш грут: E. coli, E. fergusonii, Serratia odorifera, Klebsiella oxytoca, Yersinia enterocolitica, Enterobacter aerogenes, Raoultella ornitinolytica, Klebsiella oxytoca, Enterobacter cloacea, Shigella spp.
Мiкpооpганiзмiв роду Salmonella, а також Campilobacter та Cl. perfringens при застосування пробютиюв не виявляли.
Пстолопчна структура оргашв травно! та iмyнноl систем курчат-бpойлеpiв в уЫх дослщних групах збережена. Результати морфометри внутршшх оргашв кypчат-бpойлеpiв, яким згодовували пpобiотичнi препарати, у поpiвняннi до контролю, вказували на збiльшення висоти ворсинок та глибини крипт слизово! оболонки кишечника, у центральних та пеpифеpiйних органах iмyнно! системи вiдзначали збiльшення лiмфо!дних компонентiв i зниження вмiстy сполучнотканинних елемента, що вказувало на активний !х моpфофyнкцiональний стан.
Висновки. За результатами проведених дослщжень встановлено, що фармаколопчш властивостi дослiджyваних пpобiотичних препарата Probion та Bio plus 2В проявлялися тдвищенням збеpеженостi поголiв'я, збшьшенням середньодобових пpиpостiв маси тiла та забшного входу тушки курчат-бpойлеpiв. На основi отриманих гематологiчних, бiохiмiчних та iмyнологiчних показникiв кpовi, можна стверджувати про активуючий вплив пробютиюв на метаболiчнi процеси та показники неспецифiчноl pезистентностi оpганiзмy курчат. Пстолопчна структура дослщжуваних внyтpiшнiх оpганiв збережена у вах груп кypчат-бpойлеpiв, яким згодовували, у фоpмi кормово! добавки пробютичш препарати. Морфометрично встановлено збшьшення висоти ворсинок та глибини крипт слизово! оболонки кишечника, лiмфоlдних компонента i зниження вмiстy сполучнотканинних елемента у центральних та пеpифеpiйних органах iмyнноl системи. Найбiльш виражену piзницю показникiв спостеpiгали в дослiднiй грут кypчат-бpойлеpiв, що отримували пpобiотик Probion у дозi 1г/кг корму впродовж всього перюду вирощування.
Перспективи подальших досл1джень. Вивчення впливу пpобiотичних пpепаpатiв на iмyномоpфогенез птицi у поствакцинальний пеpiод.
104
Л^ература
1. Довщник ветеринарних препарата / кол. авт. : В. М. Горжеев та ш.; укладачк О. С. Везденко та ш. — Львiв: ТзОВ "ВФ «Афша», 2013. — 1596 с.
2. Ьмунотоксиколопчний контроль ветеринарних препарата та кормових добавок: Методичш рекомендаци / I. Я. Коцюмбас, М. I. Жила, О. М. П'ятничко та ш. За ред. I. Я. Коцюмбаса. - Львiв, 2014. - 116 с.
3. Клмчш дослiдження ветеринарних препарата та кормових добавок /I. Я. Коцюмбас, I. Ю. Бкюк, В. М. Горжеев, О. Г. Малик [та ш.]; за ред. I. Я. Коцюмбаса. - Л.: ТОВ Видавничий дiм «САМ», 2013. - 252 с.
4. Шкодяк Н. В. Динамжа бiохiмiчних показниюв кровi курчат-бройлерiв за умов застосування пробютичного препарату / Н. В. Шкодяк, О. Й. Сободош, М. I. Жила М. I. // Науково-техшчний бюлетень Iнституту бюлоги тварин НААН i ДНДКI ветпрепаратiв та кормових добавок. — Львiв, — 2012— випуск 13, №1-2. — С. 70-74.
5. Kabir S.M.L. The role of Probiotics in the Poultry Industry // International of Molecular Sciences. - 2009. - 10. - P. 3531-3546.
6. Statistical principles for veterinary clinical trials. CVMP/EWP/ 81976/
2010.
7. Swiatkiewicz S. Dodatki paszowe o dzialaniu immunomodulacyjnym w zywieniu drobiu / S. Swiatkiewicz, J. Koreleski // Medycyna Wet. — 2007. —Vol. 63 (11). — S. 1291-1295.
8. VICH (2000). - VICH GL9: Good clinical practices. /www.vichsec. org/pdf/2000/Gl09.
9. Patyra E., Walczak M., Kwiatek K. Mikroorganizmy probiotyczne w dodatkach paszowych. Zastosowanie i aspekty prawne / Е. Patyra, М. Walczak, К. Kwiatek //Pasze Przemyslowe. - ROK XXIII. - NR 2/2014. - S. 19-26.
Рецензент - д.вет.н., професор Гунчак В.М.
105
