CC BY
18
HayKOBHH BicHHK .HbBiBCbKoro HamoHaibHoro ymBepcnreTy BeTepHHapHoi' MegnuUHH
Ta 6i0TexH0iroriH iMeHi C.3. f^H^Koro Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyj
doi: 10.15421/nvlvet7717
ISSN 2518-7554 print ISSN 2518-1327 online
http://nvlvet.com.ua/
УДК 619:636.02:636.08.003
11Столопчна, пстохшшна характеристика дванадцятипало1 кишки куреи-бройлер1в за згодовування кормив з високим вм1стом пробттичноУ добавки
Львiвський нацюнальнийунгверситет ветеринарног медицини та бютехнологт iMeHi С.З. Гжицького,
вул. Пекарська, 50, м. Львiв, 79010, Украгна
У cmümmi представлен результати гiстологiчних, aicmoxiMiumx до^джень слизовоi оболонки дванадцятипалоi кишки курeй-брoйлeрiв, яким згодовували 36 дiб поспыь комбжорм з nрoбioтичнoю добавкою «Probion forte» в дoзi 100 г/кг. На 36 добу до^ду по 10 курчат з кожног групи виводили з експерименту, проводили розтин i вiдбирали взiрцi дванадцятипалоi кишки, яю фжсували у 10% розчиш нейтрального формалту, рiдинi Карнуа з подальшою заливкою у парафт. Виготовляли гicтoзрiзи, фарбували гематоксилт-еозином, за Стiдмeнoм, Мак-Манусом.
Тривале згодовування птиц кoрмiв з прoбioтичнoю добавкою «Probion forte» в надмiрнiй дoзi 100 г/кг спричинило структурно-функщональю змти у слизовш оболонщ дванадцятипалог кишки, що виразилось утворенням виродливих розд-воених, широких ворсинок, зниженням вмкту глжозамтоглжашв, що cвiдчилo про дисфункщю ворсинок i вiдoбразилocь зниженням продуктивних показниюв птищ.
Ключовi слова: кури-бройлери, прoбioтичнi добавки, дванадцятипала кишка, ворсинки, крипти, кeлихoпoдiбнi клтини, гктоструктура, гicтoхiмiя.
Гистологическая, гистохимическая характеристика двенадцатиперстной кишки кур-бройлеров при скармлевании кормов с высоким содержанием
пробиотических добавок
Львовский национальный университет ветеринарной медицины и биотехнологий имени С.З. Гжицкого,
ул. Пекарская, 50, г. Львов, 79010, Украина
В статье представлены результаты гистологических, гистохимических исследований слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки кур-бройлеров, которым скармливали 36 суток подряд комбикорм с пробиотической добавкой «Probion forte» в дозе 100 г/кг. На 36 сутки опыта по 10 цыплят из каждой группы выводили из эксперимента, проводили вскрытие и отбирали образцы двенадцатиперстной кишки, которые фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, жидкости Карнуа с последующей заливкой в парафин. Изготавливали гистосрезы окрашивали гематоксилин-эозином, по Стидмен, Мак-Манус.
Длительное скармливание птице кормов с пробиотической добавкой «Probion forte» в чрезмерной дозе 100 г/кг привело к структурно-функциональным изменениям в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки, что выразилось образованием уродливых раздвоенных, широких ворсинок, снижением содержания гликозаминогликанов, что свидетельствовало о дисфункции ворсинок и отразилось снижением производительных показателей птицы.
Ключевые слова: куры-бройлеры, пробиотические добавки, двенадцатиперстная кишка, ворсинки, крипты, гистостру-ктура, гистохимия.
Citation:
Kotsyumbas, G., Kostynjuk, A., Mysiv, O., Fedyk, Yu. (2017). Histological, histochemical characteristics of duodenal intestine of hen-broilers for feed feeding with high content of probiotic supplements. Scientific Messenger LNUVMBT named after S.Z. Gzhytskyj, 19(77), 71-75.
Г.1. Коцюмбас, А.К. Костинюк, О.В. Мис1в, Ю.Я. Федик [email protected], [email protected]
Г.И. Коцюмбас, А.К. Костынюк, А.В. Мысив, Ю.Я. Федык [email protected], [email protected]
Histological, histochemical characteristics of duodenal intestine of hen-broilers for feed feeding with high content of probiotic supplements
G. Kotsyumbas, A. Kostynjuk, O. Mysiv, Yu. Fedyk [email protected], [email protected]
Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S.Z. Gzhytskyi,
Pekarska Str., 50, Lviv, 79010, Ukraine
The article presents results of histological, histochemical investigations of duodenal mucosa of broilers, which were fed 36 days in a row with were fed 36 days in a row with fodder mixed of probiotic supplements «Probion forte» in doses of 100 g/kg. At 36 day of the experiment 10 chickens from each group were taken out from the experiment, was performed autopsy and selected models of duodenum, which are fixed in 10% of solution neutral formalin, Karnua liquid, followed by pouring into paraffin. It was produced histological sections, were stained with hematoxylin-eosin, by Stidmen, McManus.
Prolonged feeding of poultry with probiotic supplements «Probion forte» in excessive dose of 100 g/kg has caused structural and functional changes in the mucosa of the duodenum, expressed the formation of ugly bifurcated broad villi and reflected a decrease in productive indexes of poultry.
Key words: chickens-broilers, probiotic preparations, duodenum, villi, crypts, goblet cells, histostructure, histochemistry.
Вступ
Кишечник птиц е одним з найважливших вщдшв травно! системи, у якому ввдбуваються складш фiзiо-лопчш, 6ioxiMi4rn процеси перетравлення та всмокту-вання поживних речовин. Стрес, порушення режиму та якосп годiвлi може спричинити стшш змши в кишечнику та негативно вплинути на загальний стан оргашзму птищ (Pavlova et al., 2002; Samarcev et al.,
2007).
Сьогодш при вирощуванш птищ широко викорис-товують рiзноманiтнi пробютичш кормовi добавки, яш мютять живi мжрооргашзми, що пов'язаш з нор-мофлорою кишечнику. Застосування !х грунтуеться на можливосп заселения кишечнику мшрооргашзма-ми, яш за рахунок антагошстичних властивостей, пригшчують рют патогенних та умовно-патогенних бактерш (Malik and Panin, 2001; Lytvyn and Polishchuk,
2008).
Нами попередньо було встановлено, що при згодо-вуваннi курам-бройлерам з кормом пробютично! добавки «Probion forte» в дозi 1 г/кг i 0,5 г/кг в двана-дцятипалiй кишщ вiрогiдно збiльшувалась довжина ворсинок слизово! оболонки, товщина стiнки м'язово! оболонки. Це вказуе на штенсифжацш процеав трав-лення слизовою оболонкою i бiльшу рухову актив-нiсть м'язово! оболонки та впливае на покращенням обмшних процесiв i зростання продуктивних показ-ник1в птицi (Kotsiumbas and Kostyniuk, 2012; Ko-tsiumbas et al., 2012).
Разом з тим виникла потреба в оцiнцi безпеки застосування кормових добавок (толерантносп), що включае визначення рiвия «запасу безпечносп», коли кормова добавка може використовуватись у бшьших дозах, шж рекомендовано (Levytskyi, 2013; Levytskyi, 2015).
Тому метою нашо! роботи було вивчити пстолоп-чнi, гiстохiмiчнi особливостi слизово! оболонки два-надцятипало! кишки курей-бройлерiв, яким згодову-вали комбiкорми з пробютичною кормовою добавкою «Probion forte» в дозi 100 г/кг 36 дiб поспiль.
Матерiал та методи дослщження
Дослал проводили на курчатах-бройлерах породи «Kobb-500» в умовах в1варш. Було сформовано дв1 дослщш групи курей-бройлер1в, масою тша 37-40 г, по 10 гол1в у кожнш. Птиця утримувалась на п1длоз1 з вшьним доступом до води та !ж1. Курчатам-бройлерам контрольно! групи (I група) згодовували комб1корм без пробютчно! добавки. Кури II групи отримували комб1корм з проб1отичною добавкою «Probion forte» в доз1 100 г/кг корму постль 36 дшв. На 36 добу досл!ду по 10 курчат з кожно! групи зва-жували, виводили з експерименту, проводили розтин i в1дбирали шматочки дванадцятипало! кишки, фiксу-вали у 10% р-ш нейтрального формалiну, рвдиш Кар-нуа, з подальшою заливкою у парафш. Зрiзи виготов-лялись на мiкротомi МС-2 i фарбували: гематоксиль ном та еозином, альщановим синiм, за Мак-Манусом (PAS-реакцiя) (Merkulov, 1961; Horalskyi et al., 2005). Мшроскошю та фотографування проводили за допо-могою мiкроскопа OLIMPUS СХ-41 та морфометрич-но! програми DP-SOFT.
Результати та обговорення
Кури-бройлери I групи були активними, добре по-!дали корми, тимчасом як у курей II групи вiдзначали перюдичш розлади травлення, але загибелi серед них не спостертали. Маса тша курей в контрольнiй груп в шнщ дослiду становила 1661,7 ± 69,2, тимчасом як у птищ II групи - 1420 ± 51,3 г, тобто була меншою на 15% порiвняно з контрольною.
Макроскотчно слизова оболонки кишок курей-бройлерiв контрольно! та досл!дно! груп були подiб-ними: свiтло-рожевими, вологими. За свгглооптично-го дослiдження слизово! оболонки контрольно! групи ворсинки довп, пальцеподiбно! форми, чiтко конту-роваш, вiльно розмiщувались одна бiля одно! i були спрямоваш у просвгг кишки (рис. 1). Цилiндричний ештелш мав виражену облямiвку (рис. 2). У стшщ ворсинки мiж ештелюцитами добре проглядались окремi лiмфоцити.
Серед стовпчастих ештелюципв, як1 складали ос-новну масу еп1тел1ального пласту ворсинки, вир1зня-лись келихопод1бн1 клтгани та кишков1 ендокриноци-ти. Келихопод1бш, видовжено-грушевидно! форми клггани розмщувались поодиноко i добре виявлялись на пстопрепаратах при фарбуваннi за Стiдменом. Вони набували синього забарвлення, що вказувало на bmîct у секрет! келихопод1бних клггинах глпсозамшо-
Рис. 1. Ворсинки i критпи дванадцятипало'1 кишки курей контрольно'1 групи.
Гематоксилiн та еозин. Ок. 10, об. 10
Рис. 3. Альщанофшьш келихиподiбнi клiтини та
бiоплiвка ворсинок дванадцятипало'1 кишки курей контрольно'1 групи. Спдмен. Ок. 10, об. 40
ткать. На поверхш ворсинок також видiлялось тоненька альщанофшьна облямiвка (рис. 3). У реакцп за Мак-Манусом ( PAS-реакцiя ) - келихоподiбнi клiтини набували малинового кольору (рис. 4). Утво-рення келихоподiбними клiтинами слизистого секрету, багатого глжозамшоглшанами сприяло формуван-ню захисно! бiоплiвки. У власнiй пластинщ слизово! оболонки проглядалися крипти ьидоьжено! форми.
S
k m
200 |im
Рис. 2. Ворсинки дванадцятипало'1 кишки курей контрольно'1 групи, вистеленi цилiндричним ештелieм, з вираженою облямiвкою.
Гематоксилiн та еозин. Ок. 10, об. 20
Рис. 4. PAS-позитивш келехиподiбнi кттини i по-верхня ворсинок дванадцятипало'1 кишки курей контрольно'1 групи. Мак-Манус. Ок. 10, об. 40
У дванадцятипалш кишцi курей II групи, яким з цих клiтин зумовила потовщення структур як власно!
кормом згодовували пробiотичну добавку «Probion пластинки слизово! оболонки, так i епiтелiального
forte» в дозi 100 г/кг, на 36 добу дослщу ворсинки, пласту ворсинок. У процес збшьшення ширини вор-
порiвняно з контрольною групою були товстiшими, синок зростала шльшсть стовпчастих епiтелiоцитiв та
коротшими, покрученими. Ввдзначали збiльшення келихоподiбних клгган. Сполучна тканина ворсинок
ширини ворсинок, потовщення власно! пластинки дано! групи птищ була густо шфшьтрована лiмфоци-
слизово! оболонки, збiльшення кiлькостi крипт тами та плазматичними клгганами. Часто серед вор-
(рис. 5). Вщомо, що джерелом регенерацiï епiтелiю е синок видiлялись роздвоeнi або коротка та широка,
стовпчастi епiтелiоцити без облямiвки, як1 мiстяться у вкрип еозинофiльною плiвкою (рис. 6). криптах. Ймовiрно, що пролiферативна активнiсть
Рис. 5. Слизова оболонка дванадцятипалоТ кишки
курей II групи. Ворсинки хаотично розмщеш.
Гематоксилш та еозин. Ок. 10, об. 10
На препаратах, забарвлених альщановим сишм за Стiдменом, у потовщених, складчастих ворсинках та криптах курей II групи мiж стовпчастими ештелюци-тами проглядались хаотично розмщеш, видовжено! форми келихоподiбнi клiтини, помiрно заповненi глiкозамiноглiканами. При цьому слщ вiдзначити, що бiоплiвка ворсинок не приймала альцiанофiльного забарвлення, що вказуе на зниження секреци глжо-замшоглжашв (рис. 7). У реакци за Мак-Манусом (PAS-реакцiя ) келихоподiбнi клггини видiлялись
Рис. 7. Альщанофшьш келихиподiбнi клiтини у потовщених ворсинках дванадцятипалоТ кишки курей II групи. Спдмен. Ок. 10, об. 40
Висновки
Тривале згодовування птиц корм1в з пробютич-ною добавкою «Probion forte» в надм1рнш доз1 100 г/кг спричинило структурно-функцюнальш змши у слизовш оболонщ дванадцятипало! кишки, що ви-кликало зниження продуктиктивних показник1в птиц1.
Рис. 6. Ворсинки слизовоТ оболонка дванадцятипалоТ кишки курей II групи потовщеш i роздвоеш.
Стiдмен. Ок. 10, об. 20
серед стовпчастих клггин сво1м малиновим забарв-ленням. Разом з тим слизиста 6ioraiBKa ворсинок також проявляла слабо виражену PAS-реакщю, що вказувало на зростання у слизистому секрет нейтра-льних мукополщу^в та зниження кислих (рис. 8). У riстохiмiI вуглеводiв PAS-реaкцiя вщграе важливу дiaгностичну роль при щентифжацп глiкопротеIнiв, полiцукрiв, деяких мукополiцукрiв, глшопротещв i ряду жирних кислот (Sreekumar and Hosono, 1998; Guo et al., 2004).
Рис. 8. PAS-позитивнi келехиподiбнi клiтини i бюп. мвка ворсинки дванадцятипалоТ кишки курей контрольноТ групи. Мак-Манус. Ок. 10, об. 40
EiS^iorpa^inm nocn^aHHH
Pavlova, N.V., Kirzhaev, F.S., Lapinskajte, R. (2002). Znachenie normal'noj mikroflory pishhevaritel'nogo trakta ptic dlja ih organizma. Bio. 1, 48-50 (in Russian).
Samarcev, A.A., Astanovich, N.I., Novik, G.I. (2007). Novye probiotiki dlja zhivotnovodstva. Efektivni kormi ta godivlja. 2(18), 14-15 (in Russian).
Lytvyn, V.P., Polishchuk, V.V. (2008). Porivnialna efek-tyvnist vitchyznianykh probiotykiv pry kyshkovykh zakhvoriuvanniakh molodniaku tvaryn. Visnyk Pol-tavskoi derzhavnoi ahrarnoi akademii. 1, 123-127 (in Ukrainian).
Malik, N.I., Panin, A.N. (2001). Veterinarnye probiotich-eskie preparaty. Veterinarija. 1, 46-51 (in Russian).
Kotsiumbas, H.I., Kostyniuk, A.K. (2012). His-tokhimichna ta ultrastrukturna kharakterystyka dvanadtsiatypaloi kyshky u kurei-broileriv vplyvu probiotykiv, zastosovanykh u riznykh dozakh. Nau-kovyi visnyk LNUVMBT imeni S.Z. Hzhytskoho. 14, 3(53), 128-136 (in Ukrainian).
Kotsiumbas, H.I., Shchebentovska, O.M., Kostyniuk, A.K. (2012). Histolohichni ta morfolohichni pokaznyky dvanadtsiatypaloi kyshky u kurei-broileriv za vplyvu probiotykiv, zastosovanykh u riznykh dozakh. Naukovyi visnyk LNUVMBT imeni S.Z. Hzhytskoho. 14, 2(52), 74-80 (in Ukrainian).
Levytskyi, T.R. (2013). Zahalni pidkhody do otsinky bezpechnosti kormovykh dobavok. Naukovo-tekhnichnyi biuleten Instytutu biolohii tvaryn i DND-
KI vetpreparativ ta kormovykh dobavok. 14, 3(4), 301-308 (in Ukrainian).
Levytskyi, T.R. (2015). Otsinka bezpechnosti kormovoi dobavky liatsyd. Naukovo-tekhnichnyi biuleten Derzhavnoho naukovo-doslidnoho kontrolnoho insty-tutu veterynarnykh preparativ ta kormovykh dobavok i Instytutu biolohii tvaryn. 16(2), 102-105 (in Ukrainian).
Merkulov, G.A. (1961). Kurs patogistologicheskoj tehniki. L. Izd. med. literatuiy (in Russian).
Horalskyi, L.P. Khomych, V.T., Kononskyi, O.I. (2005). Osnovy histolohichnoi tekhniky i morfofunktsionalni metody doslidzhen u normi ta pry patolohii. Navchal-nyi posibnyk. Zhytomyr. Polissia (in Ukrainian).
Sreekumar, O., Hosono, A. (1998). The antimutagenic of properties of a polysaccharide produced by Bifidobac-terium longum and its cultured milk against some het-erocyclicamines. Can. J. Microbiol. 44, 1029-1036.
Guo, F.C., Williams, B.F., Kwakkel, R.P. et. al. (2004). Effect of mushrooms and herb polysaccharides, as alternatives for an antibiotic, on the cecal microbial ecosystem in broiler chickens. J. Poult. Sci. 83, 175-182.
Cmammn nadiümna do peda^ii 11.03.2017
