CC BY
47
УДК 616.12-005.4:615.281 ББК 56.127.7,31 С 73
Тугуз А.Р.
Доктор биологических наук, профессор кафедры ботаники факультета естествознания, зав. иммуноге-нетической лабораторией НИИ комплексных проблем Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Шумилов Д.С.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Смольков И.В.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Татаркова Е.А.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Ашканова Т.М.
Врач высшей категории Адыгейской республиканской клинической больницы, Майкоп, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Кушу Л.Т.
Врач высшей категории Адыгейской республиканской клинической больницы, Майкоп, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Спонтанная и стимулированная NK-активность мононуклеарных клеток и нейтрофилов периферической крови при ишемической болезни сердца
(Рецензирована)
Аннотация. Спонтанная и индуцированная фитогемагглютинином NK-активность мононуклеарных клеток (РВМС - от англ. peripheral blood mononuclear cells) и нейтрофильных гранулоцитов (НФ), выделенных из периферической крови больных ишемической болезнью сердца (n=19), достоверно (Р<0,01) ниже, чем у доноров (n=15), что свидетельствует о подавлении клеточного звена иммунной системы. При 1:1(а); 1:5(б); 1:10 (в) соотношениях клеток-мишеней (К-К562) и эффекторов (Кэф) NK-активность интактных РВМС составляет у больных и доноров соответственно: а) 31,06±2,99 и 41,60±2,68% (Р<0,05); б) 36,41±3,04 и 57,3±5,87% (Р<0,01); в) 29,61±4,77 и 55,57±5,26% (Р<0,01). Цитотоксичность интактных НФ у больных и доноров при тех же соотношениях Км/Кэф составляет: а) 15,44±3,22 и 36,15±5,62% (Р<0,001); б) 17,76±1,25 и 33,63±1,08% (Р<0,05); в) 8,13±2,0 и 24,25±4,33% (Р<0,001). ФГА in vitro повышает NK-активность НФ больных и доноров: a) 27,22±3,66 и 41,55±4,58% (Р<0,05); б) 33,21±3,7и 56,98±5,33% (Р<0,01); в) 28,56±3,17и 55,62±6,43% (P<0,01).
Ключевые слова: NK-активность, спонтанная и стимулированная, мононуклеарные клетки, нейтрофи-лы, ишемическая болезнь сердца.
Tuguz A.R.
Doctor of Biology, Professor of Botany Department of Natural Science Faculty, Head of Immunogenetic Laboratory of Research Institute of Complex Problems, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Shumilov D.S.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Smolkov I.V.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Tatarkova E.A.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Ashkanova T.M.
Doctor of Higher Category of the Adyghe Republican Clinical Hospital, Maikop, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Kushu L.T.
Doctor of Higher Category of the Adyghe Republican Clinical Hospital, Maikop, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Spontaneous and stimulated NK activity of peripheral blood mononuclear cells and neutrophils at a coronary heart disease
Abstract. The spontaneous and induced by a phytohemagglutinin NK activity of mononuclear cells (PBMC) and neutrocytes released from peripheral blood of sick people with coronary heart disease (n=19) is reliably (P<0,01) lower than that of donors (n=15) which demonstrates suppression of a cellular link of immune system. At 1:1 (a); 1:5(b); 1:10 (c) ratios of cell targets (K-K562) and effectors (Kef) the NK activity of intact PBMC is at patients and donors,
respectively: a) 31,06±2,99 and 41,60±2,68% (Р<0,05); b) 36,41±3,04 and 57,3±5,87% (Р<0,01); c) 29,61±4,77 and 55,57±5,26% (Р<0,01). Cytotoxicity of intact neutrocytes at patients and donors at the same ratios of Km/Kef makes: a) 15,44±3,22 and 36,15±5,62% (Р<0,001); b) 17,76±1,25 and 33,63±1,08% (Р<0,05); c) 8,13±2,0 and 24,25±4,33% (Р<0,001). PHA in vitro increases the NK activity of neutrocytes ofpatients and donors, correspondinly: a) 27,22±3,66 and 41,55±4,58% (Р<0,05); b) 33,21±3,7 and 56,98±5,33% (Р<0,01); c) 28,56±3,17 and 55,62±6,43% (P<0,01).
Keywords: NK activity, spontaneous and stimulated, mononuclear cells, neutrophils, coronary heart disease.
Введение
Триггерные механизмы атерогенеза связаны с нарушением интимы сосуда, индукцией воспалительного процесса и прогрессирующей эндотелиальной дисфункцией, которые в совокупности приводят к развитию коронарного атеросклероза (КА) и его осложнений: ише-мической болезни сердца (ИБС), инфаркта миокарда (ИМ), хронической сердечной недостаточности (ХСН) II-III степени. Повреждение эндотелия сосудов при ИБС может быть опосредовано натуральной киллерной активностью (NK-активность) мононуклеарных клеток периферической крови и нейтрофильных гранулоцитов [1-7].
Контактное взаимодействие натуральных киллеров (NK) и НФ при воспалении и в участках сосудов, пораженных атеросклерозом, подтверждено гистологическими исследованиями тканей и лимфоидных органов мышей и человека. Это предполагает совместное участие NK и НФ в развитии и прогрессировании атеросклероза с последующими инфекционно-воспалительными осложнениями, повышением уровня провоспалительных цитокинов и нарушением соотношения субпопуляций лимфоидных клеток [5-8].
По мнению ряда авторов, повреждение сосудов может быть вызвано изменением содержания NK в периферической крови. Повышение количества NK-клеток способствует их проникновению в стенки сосудов и цитолизу эндотелиоцитовперфорин-зависимым механизмом с участием гранзимов. Недостаток NK-клеток и снижение их функциональной активности запускает и поддерживает хроническое воспаление в интиме коронарных сосудов, усиливая атерогенез, что показано при ИБС [5-16].
В процессах повреждения и регенерации тканей могут участвовать и НФ, обладающие цитотоксической активностью, подобно NK-клеткам. Не случайно общее количество НФ периферической крови является независимым фактором риска развития и предиктором сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ). Более того, содержание НФ в крови лучше других показателей коррелирует с неблагоприятным течением и исходом коронарной патологии [12-16].
Предположение о связи функционального состояния нейтрофилов с КА подтверждается экспериментальными данными. Так, у больных острым коронарным синдромом (ОКС) и стабильной стенокардией, по сравнению со здоровыми донорами, NK-активность НФ значительно снижена. Связь между функциональным состоянием системы НФ и поражением сердечной мышцы при ИБС в процессе аортокоронарного шунтирования (АКШ) отмечена в работе Атамановой Т.Ю. (2009) [17].
Подавление клеточного звена иммунного ответа и факторов неспецифической резистентности способствует размножению условно патогенной микрофлоры, которая в свою очередь усугубляет течение основного заболевания, стимулирует продукцию протеолитиче-ских ферментов и медиаторов воспаления. Это снижает эффективность общепринятых стандартов лечения, ухудшает прогноз течения и исхода заболевания [5, 6, 10].
Однако, несмотря на цитируемые работы, роль NK-клеток и НФ в патогенезе ИБС слабо изучена, немногочисленные данные противоречивы и требуют дальнейшего исследования.
Цель работы: определение уровней спонтанной и стимулированной NK-активности мононуклеарных клеток и нейтрофилов периферической крови больных коронарным атеросклерозом с исходом в ишемическую болезнь сердца.
Контингент обследованных лиц. Контрольная группа в возрасте 27,32±7,4 лет (n=19) подобрана эмпирически, без клинических проявлений сердечно-сосудистых заболеваний по данным осмотра, регистрации артериального давления (АД) и электрокардиографии (ЭКГ) в условиях лечебно-профилактических учреждений Республики Адыгея.
Группа больных (n=15) представлена пациентами кардиологического отделения Ады-
гейской республиканской клинической больницы (АРКБ) с диагнозами ИБС, ИМ, ХСН II-III степени, артериальной гипертензии (АГ) II-III степени, стенокардией напряжения 2-3-ФК, развившимися на фоне КА и подтвержденными данными неинвазивных скрининговых и углубленных инструментальных исследований: ЭКГ, Холтеровского мониторирования ЭКГ, нагрузочных проб (велоэргометрии или Трэдмил-теста), эхокардиографии (ЭХО-КС). В соответствии с Хельсинкской декларацией (1964 г., доп. 2013 г.) исследование проведено с информированного согласия всех участников эксперимента.
Материалы и методы
Спонтанная и стимулированная цитотоксическая активность РВМС и НФ доноров и больных исследована на NK-чувствительных моделях эритромиелобластного лейкоза человека (К-562) при разных соотношениях клеток-мишеней (КМ) к клеткам-эффекторам (КЭ).
РВМС выделены из стабилизированной гепарином (25 ед/мл) периферической крови доноров и интактных больных (в первые сутки после поступления в стационар) на одноступенчатом градиенте фиколла ("Histopaque", плотность 1,077; «ПанЭко», г. Москва) центрифугированием при 40С и 400 g в течение 30 минут. Лимфоидные клетки, образовавшие интерфазное кольцо, собраны пипеткой и трехкратно отмыты средой DMEM 1X (Gibcolifetechnologies, США). После каждой отмывки в 10-кратном объеме среды клетки осаждены при 1000 об/мин, 4°С и ресуспендированы в кондиционной среде.
Для выделения НФ в конические центрифужные пробирки объемом на 10 мл к трем объемным частям гепаринизированной (25 ед/мл) периферической крови добавлена 1 часть 3% стерильного раствора желатина («ПанЭко», Москва) в фосфатном солевом буфере (PBS, pH=7,4). Смесь инкубирована в течение 30 минут при 37°С. Из расслоившейся на две фракции пробы отобрана верхняя, содержащая нейтрофилы. Гемолиз примесей эритроцитов в лейкоцитарной взвеси проведен на льду в течение 15 с при 8-кратном разведении дистиллированной водой. От раствора желатина нейтрофилы отмыты дважды 10-кратными объемами PBS центрифугированием при 200 g в течение 10 мин.
Подсчет PBMC и НФ проведен в 25 больших квадратах камеры Горяева по формуле: N=a-50-1000, где N - общее количество РВМС в 1 мл среды, а - количество РВМС в 25 больших квадратах камеры Горяева.
Ресуспендированные в 1 мл среды PBMC и НФ разведены кондиционной рабочей куль-туральной средой (РКС) до концентрации 2-106 клеток/мл.
Постановка спонтанной и стимулированной продукции цитокинов
Выделенные PBMC и НФ в концентрации от 5-105 до 2-106 кл/мл в среде DMEM 1X с добавлением 10% эмбриональной сыворотки крови телят (HyClone, США), 80 мкг/мл гента-мицина инкубированы в 96-луночных плоскодонных планшетах в течение 18 часов в СО2-инкубаторе ("Sanyo", Япония) при 37°С и 5% СО2 (спонтанная продукция) и в присутствии фитогемагглютинина (ФГА) (5 мкг/мл, «ПанЭко», Москва) (стимулированная продукция).
В 96-луночные плоскодонные планшеты ("FlowLaboratories") внесено по 100 мкл суспензии РВМС и 100 мкл клеток-мишеней с концентрацией 2-106кл/мл. Соотношения мишеней и эффекторов составляли 1:1 (2-106:2-106 на 1 мл РКС); 1:5 (2-106:4-105 на 1 мл РКС); 1:10 (2-102-105 на 1 мл РКС). В контрольные лунки помещены эффекторы или мишени (в 100 мкл РКС) и добавлено по 100 мкл культуральной среды. Через 18-24 час инкубации при 37°С и 5% СО2 (спонтанная продукция) и в присутствии ФГА («ПанЭко», Москва) с концентрацией 5 мкг/мл (стимулированная продукция) в СО2-инкубаторе ("Sanyo", Япония) при 5% содержании СО2 и 80% влажности во все лунки планшет добавлено по 20 мкл рабочего раствора MTT (Thiazolyl Blue Tetrazolium Blue "Fluka") в концентрации 5 мг/мл. После 3-4 часовой инкубации в СО2-инкубаторе (условия теже) планшеты отцентрифугированы при 1500 об/мин (5 мин), удален супернатант и в каждую лунку добавлено по 150 мкл ДМСО (диметилсульфоксид, "Serva"). Через 30 мин инкубации при комнатной температуре, после полного растворения кристаллов образовавшегося формазана, измерена оптическая плотность (ОП) содержимого лунок на мультилуночном спектрофотометре ("BIO-RAD", USA)
при длине волны 450 нм. Цитотоксичность выражена цитотоксическим индексом (ЦИ) в процентах, установленным по формуле:
ЦИ(%)=[1-(ОПэ+м-ОПэ)/ОПм]-100, где ОПэ+м - значение оптической плотности в опытных сериях;
ОПэ - значение оптической плотности в лунках с эффекторами;
ОПм - значение оптической плотности в лунках с мишенями.
Экспериментальные данные проанализированы статистическими методами с использованием программного обеспечения SPSS Statistics 17.0. и "MicrosoftExcel 2016". Для оценки различий ЦИ между группами сравнения использован t-критерий Стьюдента. Коэффициент корреляции (r) рассчитан по методу Спирмена. Различия считались достоверными при уровне значимости Р<0,05.
Результаты исследований
Функциональная NK-активность интактных и стимулированных ФГА РВМС и НФ доноров и больных коронарным атеросклерозом с исходом в ИБС определена в цитотоксиче-ском тесте на модели линий эритромиелобластного лейкоза (К-562) при разных соотношениях КМ и Кэф (табл. 1-3).
Таблица 1
NK-активность РВМС больных ИБС и здоровых доноров
Соотношение КМ и Кэф (РВМС) Цитотоксический индекс (%) t; Р
больные («=15) доноры («=19)
M±m Me M±m Me
Спонтанная (1:1) 31,06±2,99 34,11 41,60±2,68 39,58 2,62; Р:<0,05
Стимулированная ФГА (1:1) 40,27±2,97 38,11 48,21±5,57 46,52 0,21; P:>0,05
Спонтанная (1:5) 36,41±3,04 36,52 57,3±5,87 45,96 3,16; Р1<0,01
Стимулированная ФГА (1:5) 61,65±2,84 65,05 64,35±4,,28 60,53 0,53; P1>0,05
Спонтанная (1:10) 29,61±4,77 24,22 55,57±5,26 53,19 3,66; Р1<0,01
Стимулированная ФГА (1:10) 71,89±4,47 75,28 62,28±4,58 62,59 1,50; P:>0,05
V, Р 2,42; Р2<0,05 6,07; Р3<0,001 6,47; Р4<0,001 1,06; P2>0,05 0,94; P3>0,05 0,96; P4>0,05
Примечание: М- средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; t - критерий Стьюдента; Р - уровень значимости между: P1 - донорами и больными; P - спонтанной и стимулированной NK-активностью (1:1); P3 - спонтанной и стимулированной NK-активностью (1:5); P - спонтанной и стимулированной NK-активностью (1:10)
У больных ИБС спонтанная NK-активность РВМС во всех исследованных соотношениях КМ/Кэф достоверно ниже, чем у доноров (Р<0,05). Снижение NK-активности клеточного звена иммунной системы у обследованных больных аналогично результатам Jonasson L. et al. (2005) и Hak L. et al. (2007) при ИБС и согласуется с данными Backtemanetal. (2012), Houetal. (2012) при ОКС. Механизм супрессии функциональной активности и количественных показателей NK-клеток у больных ИБС не выяснен, однако имеются данные о возможном усилении апоптоза NK-клеток у больных КА [18, 19].
Следует предположить, что снижение NK-активности РВМС, отмеченное Backtemanetal. (2012), Whitmanetal. (2004), при ИБС и ОКС имеет определяющее значение в поддержании хронического воспаления в интиме сосудов на протяжении длительного времени, вовлекая в атерогенез коронарные сосуды и, таким образом, усугубляя течение и исход основного заболевания [10, 11].
Так как литические эффекты NK-клеток обусловлены непосредственным контактом с клетками-мишенями, научный интерес представляет исследование влияния растительного лектина с высокой агглютинирующей активностью - фитогемагглютинина на цитотоксич-ность РВМС больных ИБС (табл. 1). In vitro, при инкубации с ФГА, NK-активность РВМС обследованных больных ИБС достоверно повышается, достигая уровня аналогичных показа-
телей у доноров (табл. 1), что косвенно свидетельствует о снижении адгезивных свойств РВМС при КА с исходом в ИБС. NK-активность РВМС доноров в присутствии ФГА повышается незначительно (/">0,05).
Участие НФ в регуляции процессов повреждения и восстановления тканей, связь между их функциональным состоянием и поражением сердечной мышцы при ИБС и в процессе АКШ предопределило исследование NK-активности НФ (табл. 2) [12].
Таблица 2
NK-активность НФ больных ИБС и здоровых доноров
Соотношение КМ и Кэф (НФ) Цитотоксический индекс (%) t; Р
больные («=13) доноры («=10)
M±m Me M±m Me
Спонтанная (1:1) 15,44±3,22 14,37 36,15±5,62 38,5 3.20; Р:<0,01
Стимулированная ФГА (1:1) 27,22±3,66 26,41 41,55±4.58 43,32 2,44; Р:<0,05
Спонтанная (1:5) 17,76±1,25 17,7 33,63±1,08 33,07 9,61; Р:<0,001
Стимулированная ФГА (1:5) 33,21±3,7 27,81 56,98±5,33 50,65 3,66; Р:<0,01
Спонтанная (1:10) 8,13±2,0 6,1 24,25±4.33 21,14 3,38; Р:<0,01
Стимулированная ФГА (1:10) 28,56±3,17 26,32 55,62±6,43 52,73 3,77; ^<0,01
г, Р 2,19; Р2<0,05 3,96; Р3<0,001 5,45; Р4<0,001 0,74; Р2>0,05 4,29; Р3<0,001 4,05; Р4<0,001
Примечание: М- средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; t - критерий Стьюдента; Р - уровень значимости между: Р1 - донорами и больными; Р - спонтанной и стимулированной NK-активностью (1:1); Р3 - спонтанной и стимулированной NK-активностью (1:5); Р4 - спонтанной и стимулированной NK-активностью (1:10)
Цитотоксический эффект интактных и стимулированных ФГА НФ больных ИБС во всех исследованных соотношениях (1:1, 1:5 и 1:10) (Р<0,05) достоверно ниже, чем у доноров. Наши данные подтверждают наличие связи между цитотоксической активностью НФ и развитием ИБС по аналогии с данными, полученными Базарным В.В. и др. (2012) при стабильной стенокардии и ОКС с выявленным нарушением функциональной активности НФ [17]. Исходно более низкая NK-активность НФ больных ИБС по сравнению с донорами (табл. 2) in vitro эффективно модулируется ФГА с высоким уровнем значимости (Р3<0,001).
Роль НФ в атеросклеротическом поражении интимы сосудов подтверждается клиническими и экспериментальными данными, а механизмы, с помощью которых индуцируется образование атеросклеротических бляшек в коронарных сосудах, могут быть связаны, в первую очередь, с воспалением и аутоиммунными нарушениями. Ускоренный атеросклероз при аутоиммунных заболеваниях является убедительным подтверждением этого [5, 6, 10, 20-22].
Двойственная роль НФ в процессах регенерации и повреждения эндотелия сосудов, возможно, связана с генетическими дефектами. Так, подавление функций НФ ингибировало эндотелиальную регенерацию и способствовало образованию неоинтимы (фиброзной оболочки) после повреждения сосудов [23].
Исследования Costantinietal. (2011) и Jaegeretal. (2012), подтверждающие роль нейтро-филов в регуляции гомеостаза и функций NK-клеток, послужили основанием для сравнения NK-активности РВМС и НФ больных и доноров (табл. 3) [7, 8].
Спонтанная NK-активность интактных НФ доноров достоверно (Р<0,01) ниже, чем РВМС в соотношениях (КМ/Кэф) 1:5 и 1:10, а стимулированная ФГА NK-активность РВМС и НФ доноров отличается незначительно (Р>0,05). У больных ИБС ЦИ интактных и стимулированных ФГА РВМС значительно выше, чем у НФ при всех соотношениях КМ/Кэф. Также нами установлена сильная (Р<0,05) прямая корреляционная зависимость (г=1,000; Р=0,05) между спонтанной NK-активностью РВМС и НФ больных ИБС и стимулированной in vitro ФГА - у доноров. Высокая прямая корреляционная зависимость (г=1,000; Р=0,05) NK-активности РВМС и НФ обследованных больных подтверждает их совместное участие в развитии коронарного атеросклероза и ИБС и согласуется с данными Costantinietal. (2011) и Jaegeretal. (2012).
Таблица 3
NK-активность РВМС в сравнении с НФ здоровых и больных ИБС
Соотношение КМ/Кэф Цитотоксический индекс (%)
больные РВМС (n=15) больные НФ (n=13) t; Р доноры РВМС (n=19) доноры НФ (n=10) t; Р
M±m M±m M±m M±m
СП (1:1) 31,06±2,99 15,44±3,22 3,55; P1<0,001 41,60±2,68 36,15±5,62 0,88; P2>0,05
СТ ФГА (1:1) 40,27±2,97 27,22±3,66 2,77; P1<0,05 48,21±5,57 41,55±4,58 0,92; P2>0,05
СП (1:5) 36,41±3,04 17,76±1,25 5,67; P1<0,001 57,3±5,87 33,63±1,08 3,97; P2<0,01
СТ ФГА (1:5) 61,65±2.84 33,21±3,7 6,10; P1<0,001 64,35±4,28 56,98±5,33 1,08; P2>0,05
СП (1:10) 29,61±4,77 8,13±2,0 4,15; P1<0,01 55,57±5,26 24,25±4,33 4,60; P2<0,01
СТ ФГА (1:10) 71,89±4,47 28,56±3,17 7,91; P1<0,001 62,28±4,58 55,62±6,43 0,84; P2>0,05
t; Р 2,42; Р3<0,05 6,07; Р4<0,001 6,47; Р5<0,001 2,19; Р3<0,05 3,96; Р4<0,001 5,45; Р5<0,001 1,06; P3>0,05 0,94; P4>0,05 0,96; P5>0,05 0,74; P3>0,05 4,29; P4<0,001 4,05; P5<0,001
Коэффициент корреляции Спирмена; Р г=1,000; Р6<0,05 - сильная прямая корреляция г=0,500; Р7>0,05 - умеренная прямая корреляция г=-0,500; Р6<0,05 - умеренная обратная корреляция г=1,000; Р7>0,05 - сильная прямая корреляция
Примечание: СП - спонтанная NK-активность; СТ - стимулированная ФГА NK-активность; М - средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; ЦИ - цитотоксический индекс; t - критерий Стьюдента; r - коэффициент корреляции; Р - уровень значимости между: P1 - NK -активностью РВМС и НФ больных; P2 - NK-активностью РВМС и НФ доноров; P - спонтанной и стимулированной NK-активностью (1:1); P4 - спонтанной и стимулированной NK-активностью (1:5); P5 - спонтанной и стимулированной NK-активностью (1:10); P6 - коэффициент корреляции между интактными РВМС и НФ; P7 - коэффициент корреляции между стимулированными ФГА РВМС и НФ
Выводы
1. Спонтанная NK-активность мононуклеарных клеток и нейтрофилов периферической крови в группе больных ишемической болезнью сердца достоверно ниже, чем у здоровых доноров, что свидетельствует о нарушении клеточного звена иммунной системы при коронарном атеросклерозе.
2. Сильная (P<0,05) прямая корреляционная зависимость (r=1,000; P=0,05) между спонтанной NK-активностью РВМС и НФ больных ИБС подтверждает их совместное участие в развитии коронарного атеросклероза.
Примечания:
1. Ross R. Atherosclerosis - an inflammatory disease // New Engl Journal of Medicine. 1999. Vol. 340, No. 2. P. 115-126.
2. Аронов Д.М., Бубнова М.Г. Реальный путь снижения в России смертности от ишемической болезни сердца // Кардиосоматика. 2010. Т. 1, № 1. С. 11.
3. Hou X., Chen X., Shi J. Genetic polymorphism of MTHFR C677T and premature coronary artery disease susceptibility: A meta-analysis // Gene. 2015. Vol. 565, No. 1. P. 39-44.
4. Страмбовская Н.Н. Анализ комплексного носи-тельства генетического полиморфизма, ассоциированного с ишемическим инсультом // Оценка потребления кальция, железа и витамина «С» женщинами фертильного возраста. 2015. С. 315.
5. Biassoni R. Human Natural Killer Receptors, Co-Receptors and Their Ligands // Current Protocols in Immunology. 2009. P. 14.10. 1-14.10. 40.
6. Expression patterns of NKG2A, KIR and CD57 define a process of CD56 dim NK-cell differentiation uncoupled from NK-cell education / N.K. Bjorkstrom [et al.] // Blood. 2010. Vol. 116, No. 19. P. 3853-3864.
7. Neutrophil depletion impairs natural killer cell maturation, function, and homeostasis / B.N. Jaeger [et al.] // J. Exp. Med. 2011. No. 4. 209. P. 565-580.
References:
1. Ross R. Atherosclerosis - an inflammatory disease // New Engl Journal of Medicine. 1999. Vol. 340, No. 2. P. 115-126.
2. Aronov D.M., Bubnova M.G. The real way to reduce mortality in Russia from coronary heart disease // Car-diosomatics. 2010. Vol. 1, No. 1. P. 11.
3. Hou X., Chen X., Shi J. Genetic polymorphism of MTHFR C677T and premature coronary artery disease susceptibility: A meta-analysis // Gene. 2015. Vol. 565, No. 1. P. 39-44.
4. Strambovskaya N.N. Analysis of complex carrier of genetic polymorphism associated with ischemic stroke // Assessment of Calcium, Iron and Vitamin C Intake by Women of Fertile Age. 2015. P. 315.
5. Biassoni R. Human Natural Killer Receptors, Co-Receptors and Their Ligands // Current Protocols in Immunology. 2009. P. 14.10. 1-14.10. 40.
6. Expression patterns of NKG2A, KIR and CD57 define a process of CD56 dim NK-cell differentiation uncoupled from NK-cell education / N.K. Bjorkstrom [et al.] // Blood. 2010. Vol. 116, No. 19. P. 3853-3864.
7. Neutrophil depletion impairs natural killer cell maturation, function, and homeostasis / B.N. Jaeger [et al.] // J. Exp. Med. 2011. No. 4. 209. P. 565-580.
8. Human neutrophils interact with both 6-sulfo Lac-NAc+ DC and NK cells to amplify NK-derived IFNy: role of CD18, ICAM-1 and ICAM-3 / С. Costantini [et al.] // Blood. 2010. Vol. 117, No. 3. P. 1677-1686. 10.1182/blood-2010-06-287243
9. Natural killer (NK) cells augment atherosclerosis by cytotoxic-dependent mechanisms / A. Selathurai [et al.] // Cardiovascular Research. 2014. Vol. 102, No. 1. P. 128-137.
10. Lymphocyte subpopulations in lymph nodes and peripheral blood: a comparison between patients with stable angina and acute coronary syndrome / K. Backteman [et al.] // PLoS One. 2012. Vol. 7, No. 3. P. e32691.
11. Depletion of natural killer cell function decreases atherosclerosis in low-density lipoprotein receptor null mice / S.C. Whitman [et al.] // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 2004. Vol. 24, No. 6. P. 1049-1054.
12. Иммунология сердечно-сосудистой патологии / Т.Ю. Атаманова [и др.] // Медицинская иммунология. СПб.: РОРААКИ, 2009. № 4-5. С. 466.
13. Neutrophil infiltration of culprit lesions in acute coronary syndromes / T. Naruko [et al.] // Circulation. 2002. Vol. 106, No. 23. P. 2894-2900.
14. High neutrophil numbers in human carotid atherosclerotic plaques are associated with characteristics of rupture-prone lesions / M.G. Ionita [et al.] // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 2010. Vol. 30, No. 9. P. 1842-1848.
15. Hyperlipidemia-triggered neutrophilia promotes early atherosclerosis / M. Drechsler [et al.] // Circulation. 2010. Vol. 122, No. 18. С. 1837-1845.
16. Distinct infiltration of neutrophils in lesion shoulders in ApoE-/- mice / P. Rotzius [et al.] // The American Journal of Pathology. 2010. Vol. 177, No. 1. P. 493-500.
17. Базарный В.В., Тихонина Е.Н., Кондрашов К.В. Определение миелопероксидазы нейтрофилов при хирургическом лечении ишемической болезни сердца // Клиническая лабораторная диагностика. 2012. № 7. С. 8-10.
18. NK cell apoptosis in coronary artery disease: relation to oxidative stress / W. Li [et al.] // Atherosclerosis. 2008. Vol. 199, No. 1. С. 65-72.
19. Jonasson L., Backteman K., Ernerudh J. Loss of natural killer cell activity in patients with coronary artery disease // Atherosclerosis. 2005. Vol. 183, No. 2. С. 316-321.
20. NK cell compartment in patients with coronary heart disease / L. Hak [et al.] // Immunity & Ageing. 2007. Vol. 4, No. 1. P. 3.
21. Prognostic value of coronary CT angiography and calcium score for major adverse cardiac events in outpatients / Z. Hou [et al.] // JACC: Cardiovascular Imaging. 2012. Vol. 5, No. 10. P. 990-999.
22. Mocsai A. Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation and beyond // Journal of Experimental Medicine. 2013. Vol. 210, No. 7. P. 1283-1299.
23. Neutrophil-derived cathelicidin protects from neoin-timal hyperplasia / O. Soehnlein [et al.] // Science Translational Medicine. 2011. Vol. 3, No. 103. P. 103ra98-103ra98.
8. Human neutrophils interact with both 6-sulfo Lac-NAc+ DC and NK cells to amplify NK-derived IFNy: role of CD18, ICAM-1 and ICAM-3 / C. Costantini [et al.] // Blood. 2010. Vol. 117, No. 3. P. 1677-1686. 10.1182/blood-2010-06-287243
9. Natural killer (NK) cells augment atherosclerosis by cytotoxic-dependent mechanisms / A. Selathurai [et al.] // Cardiovascular Research. 2014. Vol. 102, No. 1. P. 128-137.
10. Lymphocyte subpopulations in lymph nodes and peripheral blood: a comparison between patients with stable angina and acute coronary syndrome / K. Backteman [et al.] // PLoS One. 2012. Vol. 7, No. 3. P. e32691.
11. Depletion of natural killer cell function decreases atherosclerosis in low-density lipoprotein receptor null mice / S.C. Whitman [et al.] // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 2004. Vol. 24, No. 6. P. 1049-1054.
12. Immunology of cardiovascular pathology / T.Yu. Atamanova [et al.] // Medical immunology. SPb.: RORAAKI, 2009. No. 4-5. P. 466.
13. Neutrophil infiltration of culprit lesions in acute coronary syndromes / T. Naruko [et al.] // Circulation. 2002. Vol. 106, No. 23. P. 2894-2900.
14. High neutrophil numbers in human carotid atherosclerotic plaques are associated with characteristics of rupture-prone lesions / M.G. Ionita [et al.] // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 2010. Vol. 30, No. 9. P. 1842-1848.
15. Hyperlipidemia-triggered neutrophilia promotes early atherosclerosis / M. Drechsler [et al.] // Circulation. 2010. Vol. 122, No. 18. C. 1837-1845.
16. Distinct infiltration of neutrophils in lesion shoulders in ApoE-/- mice / P. Rotzius [et al.] // The American Journal of Pathology. 2010. Vol. 177, No. 1. P. 493-500.
17. Bazarny V.V. Tikhonina E.N., Kondrashov K.V. Determination of myeloperoxidase of neutrophils in the surgical treatment of coronary heart disease // Clinical Laboratory Diagnostics. 2012. No. 7. P. 810.
18. NK cell apoptosis in coronary artery disease: relation to oxidative stress / W. Li [et al.] // Atherosclerosis. 2008. Vol. 199, No. 1. C. 65-72.
19. Jonasson L., Backteman K., Ernerudh J. Loss of natural killer cell activity in patients with coronary artery disease // Atherosclerosis. 2005. Vol. 183, No. 2. C. 316-321.
20. NK cell compartment in patients with coronary heart disease / L. Hak [et al.] // Immunity & Ageing. 2007. Vol. 4, No. 1. P. 3.
21. Prognostic value of coronary CT angiography and calcium score for major adverse cardiac events in outpatients / Z. Hou [et al.] // JACC: Cardiovascular Imaging. 2012. Vol. 5, No. 10. P. 990-999.
22. Mocsai A. Diverse novel functions of neutrophils in immunity, inflammation and beyond // Journal of Experimental Medicine. 2013. Vol. 210, No. 7. P. 1283-1299.
23. Neutrophil-derived cathelicidin protects from neoin-timal hyperplasia / O. Soehnlein [et al.] // Science Translational Medicine. 2011. Vol. 3, No. 103. P. 103ra98-103ra98.
