CC BY
44
БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ BIOLOGICAL SCIENCES
УДК 616.13-004.6:611.018.1 ББК 54.102.1,41
М 76
Тугуз Аминат Рамазановна
Доктор биологических наук, зав. иммуногенетической лабораторией НИИ комплексных проблем Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Шумилов Дмитрий Сергеевич
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Смольков Иван Владимирович
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Татаркова Елена Анатольевна
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Казачко Светлана Владимировна
Студент факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, e-mail:
svet_lana_961201@mail.ru
Мамий Дана Даудовна
Учащаяся Республиканской естественно-математической школы, Майкоп, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Молярный дисбаланс провоспалительных цитокинов IL-17A, IL-1ß, TNF-a при коронарном и цереброваскулярном атеросклерозе
(Рецензирована)
Аннотация. Сывороточные уровни медиаторов воспаления IL-17A, IL-1ß, TNF-a у больных коронарным, церебральным атеросклерозом (n=20) и доноров (n=12) варьируют в узком диапазоне физиологических значений (0—50 pg/ml) и не различаются (Р>0,05). В супернатант ахинтактных РВМС и НФ больных ИБС, ИИМ концентрации IL-17A, IL-1ß, TNF-a достоверно (Р<0,01) превышают показатели для здоровых индивидов и составляют соответственно для медиатора хронического воспаления - IL-17A: 65,85±15,89; 2,03±1,35; 2,95±1,26pg/ml; острого воспаления - IL-1ß: 65±22,19; 47,90±2,92; 11,95±3,86 pg/ml; ключевого медиатора воспаления и повреждения эндотелия сосудов TNF-a - 435,63±77,14; 190,33±34.10; 36,71±7,2pg/ml. Определены эквимолярные соотношения IL-17A, IL-1ß, TNF-a в супернатант ахинтактных РВМС доноров (0,8:0,7:0,7). Молярный дисбаланс у больных ИБС с конститутивной гиперпродукцией основных медиаторов воспаления характеризуется каскадным двукратным усилением в ряду IL-17A, IL-1ß,TNF-a (1,88: 3,82:8,38) и отличается при ИИМ (0,06:2,82:3,65). В цитокиновом профилеинтактных НФ, стимулированных in vitro ФГА РВМС и НФ больных, преобладает TNF-a.
Ключевые слова: цитокины, IL-ПА, IL-1ß; TNF-a; продукция, молярный дисбаланс, мононуклеарные клетки периферической крови, атеросклероз, сердечно-сосудистые заболевания, нейтрофилы, ишемическая болезнь сердца, ишемический инсульт мозга.
Tuguz Aminat Ramazanovna
Doctor of Biology, Head of Immunogenetic Laboratory of Research Institute of Complex Problems, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Shumilov Dmitriy Sergeevich
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Smolkov Ivan Vladimirovich
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Tatarkova Elena Anatolyevna
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Kazachko Svetlana Vladimirovna
Student of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, e-mail: svet_lana_961201@mail.ru Mamiy Dana Daudovna
Student of the Republican Natural Science-Mathematical School, Maikop, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Molar imbalance of inflammatory mediators IL-17A, IL-ip and TNF-a at coronary and cerebrovascular atherosclerosis
Abstract. Serum levels of proinflammatory mediators IL-17A, IL-1 в, TNF-a at patients with coronary and cerebral atherosclerosis (n=20) and donors (n=12) vary in the narrow range of physiological values (0-50 pg/ml) and do not differ (Р>0,05). In a supernatant of the ahintactic PBMC and NE of sick of IHD and IIM, concentration of IL-17A, IL-1 в and TNF-a authentically (Р<0,01) exceeds indicators for healthy individuals and makes respectively for a mediator of chronic inflammation - IL-17A: 65,85±15,89; 2,03±1,35; 2,95±1,26 pg/ml; an acute inflammation - IL-1ft: 65±22,19; 47,90±2,92; 11,95±3,86 pg/ml; a key mediator of inflammation and damage an endothelium of vessels of TNF-a - 435,63±77,14; 190,33±34,10; 36,71±7,2 pg/ml. Equimolar ratios of IL-17A, IL-1fi and TNF-a in a supernatant of the ahintactic PBMC of donors are defined (0,8:0,7:0,7). The molar imbalance at sick of IBS with constitutive hyperproduction of the main inflammatory mediators is characterized by cascade double strengthening among IL-17A, IL-1 в and TNF-a (1,88:3,82:8,38) also differs at IIM (0,06:2,82:3,65). In cytokine profile intact NE, stimulated in vitro PHA PBMC and NE of patients, TNF-a prevails.
Keywords: cytokine, IL-17A, IL-1 ft; TNF-a; production, molar imbalance, mononuclear cells of peripheral blood, atherosclerosis, cardiovascular diseases, neutrophils, coronary heart disease, ischemic stroke of a brain.
Введение
В рамках современных концепций атерогенеза морфофункциональная связь острого и хронического иммунного воспаления с фибросклеротическими процессами в эндотелии сосудов подтверждена фенотипированием в атеросклеротических бляшках одних и тех же клеточных элементов: субпопуляций лимфоцитов, натуральных киллеров, моноцитов/макрофагов, нейтрофилов, эндотелиоцитов, фибробластов, гладкомышечных клеток и др. [1]. Исследованы гуморальные и клеточные реакции ключевых этапов развития неспецифической базовой воспалительной реакции с участием медиаторов иммунной системы, молекул адгезии, хемо-таксических сигналов. Однако единый фактор, запускающий и длительно поддерживающий патогенетические изменения, связанные между собой так, что одно из следствий становится причиной дальнейшего развития при атеросклерозе, не идентифицирован [1-42].
Участие низкомолекулярных сигнальных белков-цитокинов в патогенезе сердечнососудистых заболеваний (ССЗ), детерминированное иммунным воспалением, подтверждается повышенной экспрессией в очагах активного атерогенезам РНК про- и протвовоспали-тельных медиаторов IL-ip, TNF-a, IL-12, IL-4, IFN-y, M-CSF. Регуляция цитокинами холестеринового обмена в макрофагах с последующей их трансформацией в пенистые клетки исследована в отечественных и зарубежных публикациях. Биологически активные медиаторы воспаления «первой волны» IL-ip и TNF-a с вазоконстрикторными свойствами в высоких концентрациях способны индуцировать практически весь спектр ССЗ, необратимо повреждать эндотелий коронарных, цереброваскулярных и сосудов других басейнов, обуславливая прогрессирование и развитие осложнений атеросклероза [1-19].
Триггерная роль цитокинов при атерогенезе не подтверждена, так как в системном кровотоке медиаторы воспаления не выявляются, а детектируемые сывороточные концентрации у больных ССЗ и доноров достоверно не отличаются и не превышают физиологических значений (0-100 pg/ml) [5-19]. Участие провоспалительных медиаторов первой волны, IL-1B, IL-6, TNF-a в развитии коронарного (КА) и цереброваскулярного атеросклероза (ЦВА) с исходами в ишемическую болезнь сердца (ИБС), ишемический инсульт мозга (ИИМ) и другие ССЗ, тем не менее обсуждается в отечественных и зарубежных исследованиях [1-28].
В международных базах приводятся данные о прогностически значимых уровнях сывороточных цитокинов, варьирующих в узком диапазоне значений (0-50 pg/ml) или нижнего предела (0-20 pg/ml) чувствительности используемого метода детекции сэндвич ИФА, что явно противоречит утверждениям о патологических функциях свободных цитокинов при многократном превышении физиологических концентраций [1-32].
Цитокины образуют комплексы с белками и растворимыми рецепторами (sRp), которые накапливаются в сыворотке пришеддинге мембранных рецепторов (mRp), выступают в качестве ловушек избыточных количеств медиаторов воспаления, но в сэндвич ИФА не выявляются. Системная циркуляция депонированных цитокинов подтверждается обнаружением в фильтратах более высоких, чем в сыворотке крови, концентраций медиаторов воспаления при постоянной высокообъемной гемфильтрации [33].
Низкие/недектируемые сывороточные/плазменные уровни медиаторов не исключают локальную гиперцитокинемию вследствие диссоцииации из циркулирующих, нековалентно связанных форм медиаторов, персистирующих в системном кровотоке. Поэтому использование данных по сывороточным/плазменным концентрациям свободных IL-1ß, TNF-a и других провоспалительных медиаторов в качестве прогностических маркеров ИБС, ИИМ и других осложнений атеросклероза не вполне корректно [6-9, 31, 32].
Более информативна оценка цитокиновой регуляции патологических состояний при анализе спонтанной и стимулированной in vitro продукции медиаторов. Продукция цитоки-нов in vitro нейтрофилами (НФ) и мононуклеарными клетками периферической крови Peripheral Blood Mononuclear Cells - PBMC) отражает функциональное состояние клеток специфического и неспецифического звена иммунной системы. Уровни спонтанной продукции цитокинов в культурахинтактных PBMC и НФ свидетельствуют об активации клеток in vivo, а индуцированный in vitro митогенами синтез цитокинов определяет резервные возможности клеток отвечать на антигенный стимул [33-35].
Уровни спонтанной/индуцированной продукции и соотношения медиаторов воспаления могут служить одним из важных признаков иммунного дисбаланса. Поэтому неинформативные в специфической диагностике гуморальные факторы иммунной системы - цитоки-ны - значимы в оценке тяжести и прогноза течения воспалительных процессов при системных заболеваниях. Однако такие исследования в отечественной и зарубежной научной литературе немногочисленны или практически отсутствуют [2-34].
Цель работы: исследование баланса медиаторов воспаления IL-17A, IL-1ß, TNF-a, IL-4 в образцах сывороток и супернатантов интактных, стимулированных in vitro мононуклеар-ных клеток, нейтрофилов периферической крови больных ишемической болезнью сердца и монополушарным ишемическим инсультом головного мозга.
Контингент обследованных лиц. В соответствии с Хельсинкской декларацией (1964 г., доп. 2013 г.) исследование проведено с информированного согласия всех участников эксперимента или лиц, представляющих интересы больных. Контрольная группа (n=24) представлена неродственными донорами в возрасте 30-65 лет без наследственной отягощенности, по данным опроса (анкетирования) и клинических проявлений ССЗ (на основании осмотра, регистрации АД и ЭКГ в условиях лечебно-профилактических учреждений Республики Адыгея).
Группа больных (n=20) - пациенты кардиологического, неврологического и нейрохирургического отделений Адыгейской республиканской клинической больницы (АРКБ) с осложнениями коронарного и цереброваскулярного атеросклероза. Диагнозы ИБС, ИИМ, хронической сердечной недостаточности (ХСН) II-III степени, артериальной гипертензии (АГ) II-III степени, стенокардии напряжения (СКН) (2-3-ФК) подтвержденны данными неинва-зивных скрининговых и углубленных инструментальных исследований: ЭКГ, Холтеровского мониторирования ЭКГ, нагрузочных проб (велоэргометрии либо Трэдмил-теста), эхокардио-графии (ЭХО-КС).
Стационарные больные неврологического и нейрохирургического отделений АРКБ госпитализированы по экстренным показаниям с речевыми и другими нарушениями разной степени тяжести. Диагнозы ишемического инсульта (ИИ) в бассейнах левой и правой срединной мозговой артерии (кардиоэмболический подтип), хронической ишемии мозга II стадии, инфаркта мозга в височно-теменной, теменной и затылочной областях и др., нозологии, развившиеся на фоне цереброваскулярного атеросклероза, подтверждены данными трип-лексного сканирования брахеоцефальных артерий (БЦА), МРТ головного мозга, ультразвуковой допплерографии (УЗДГ), транскраниальной доплерографии (ТКДГ), КТ головного мозга, МРА интракраниальных артерий.
Основные биохимическиеи гематологические показатели крови больных, полученные при поступлении в профильные отделения АРКБ на базе биохимической лаборатории АРКБ, не отличались от референсных значений для жителей Республики Адыгеи. В первые сутки на фоне клинических проявлений патологии у больных незначительно повышены уровни холестерина и количество базофилов.
Материалы и методы
Образцы венозной крови обследованных больных, доноров в пробирках с "VACCUETTE" (Австрия) и кондиционных сред с нейтрофилами, мононуклеарными клетками отцентрифугированы соответственно в режиме 3000 об/мин и 1000 об/мин в течение 10 мин. Отобранные в пластиковые пробирки аликвоты сывороток и супернатантов интакт-ных и стимулированных РВМС до постановки ИФА хранили при t=-70°C (Sanyo, Япония).
РВМС выделены из стабилизированной гепарином (25 ед/мл) периферической крови на одноступенчатом градиенте фиколла ("Pharmacia", плотность 1,077) центрифугированием при 40С и 400 g в течение 30 минут. Лимфоидные клетки, образовавшие интерфазное кольцо, собраны пипеткой, перенесены в конические пробирки, трехкратно отмыты средой DMEM 1X ("Gibco by life technologies"). После каждой отмывки в 10-кратном объеме средой DMEM 1X клетки осаждены центрифугированием при 1000 об/мин и 4°С.
Для выделения нейтрофилов в конические центрифужные пробирки к трем объемным частям гепаринизированной (25 ед/мл) крови добавлена 1 часть 3% раствора желатина («Па-нЭко», г. Москва) в фосфатно-солевом буфере (PBS, pH 7,4). Смесь инкубирована в течение 30 минут при 37°С, из расслоившейся на две фракции пробы пипеткой отобрана верхняя, содержащая нейтрофилы. Гемолиз эритроцитов, оставшихся в лейкоцитарной взвеси, проведен при 8-кратном разведении дистиллированной водой на льду в течение 15 с. От раствора желатина нейтрофилы отмыты дважды 10-кратными объемами PBS и центрифугированием при 200 g в течение 10 мин. Ресуспендированные в 1 мл среды или PBS нейтрофилы разведены рабочей культуральной средой или PBS до концентрации 2-106 кл./мл. Подсчет нейтрофилов проведен в 25 больших квадратах камеры Горяева при разбавлении в 20 раз (к 10 мкл суспензии нейтрофилов добавлено 190 мкл раствора краски Задорожного-Дозморова) по формуле: N=a-50-1000, где N - общее количество нейтрофилов в 1 мл среды, а - количество ней-трофилов в 25 больших квадратах камеры Горяева.
Постановка спонтанной и стимулированной продукции цитокинов. При исследовании продукции цитокинов in vitro отмытые РВМС и НФ культивированы в концентрации 2-106 кл./мл при 37оС в атмосфере 5% CO2 в 96-луночных плоскодонных планшетах в среде DMEM 1X с добавлением 5% фетальной сыворотки коров, 80 мкг/мл гентамицина в течение 18 часов (спонтанная продукция) и в присутствии ФГА в концентрации 5 мг/мл (стимулированная продукция).
Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА). Содержание цитокинов в образцах сывороток, супернатантов культур интактных и стимулированных in vitro ФГА РВМС, НФ доноров и больных определены в сэндвич ИФА (ELISA- твердофазном иммуноферментном анализе). Оптическая плотность (ОП) тестируемых и контрольных образцов определена на мультилуночном спектрофотометре (Model 680, Microplate Reader "BioRad", США) при длине волны 450 нм. Расчет концентраций исследуемых проб произведен автоматически при коэффициенте корреляции 0,86-0,98 концентраций стандартных проб и значений их оптической плотности.
Молярные концентрации (Cv) медиаторов в mM-10"9/ml рассчитаны по отношению массы в миллитре (в пкг или pg) к индивидуальным молекулярным (молярным) массам исследуемых цитокинов.
Обсуждение результатов исследования
Участие медиаторов иммунной системы в прогредиентном течении атеросклероза и развивающихся ССЗ обуславливает необходимость исследования не только сывороточных уровней, но и функциональных, резервных возможностей мононуклеарных клеток и нейтро-филов периферической крови к продукции основных провоспалительных цитокинов IL-17A, IL-1ß, TNF-a и IL-4 при ИБС, ИИМ. Сравнительный анализ сывороточных уровней, спонтанной и митоген-стимулированной продукции медиаторов воспаления РВМС и НФ в обследованных группах больных КА и доноров представлен в таблицах 1-4.
Таблица 1
Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro продукция IL-17A
в группах доноров и больных ИБС
Биологические среды Концентрации IL-17A, pg/ml t1; Р1 t2; P2
БольныеИБС (n=10) Больные ИИМ (n=10) Доноры (n=22)
M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me
Сыворотка 0,91±0,91 0,00 1,16±0,27 0,00 4,88±2,61 0 t'=1,42; Р1<0,05 t2=1,44; P2>0,05
PBMC 65,85±15,89 85,5 2,03±1,35 0,00 2,95±1,26 0 t'=0,5; Р1>0,05 (=3,95; Р2=0,0004
PBMC+ ФГА 107,8±8,2 103,5 502,66±64,10 502,66 84,09±12,96 91 , t'=6,4; Р1=0,000001 t2=1,55; P2>0,05
tn; Pn t3=4,08; Р3=0,0007; t4=12,96; P4=0,0000001; t5=2,35; P5=0,03 t3=37,68; Р3<0,001; t4=7,64; Р4<0,001; t5=7,81; Р5<0,001 t3=0,67; Р3>0,05; t4=5,99; Р4=0,0000001; t5=6,23; Р5=0,0000001 - -
НФ 112,73±6,49 106,47 - - 16,82±4,02 17,7 t=12,56; Р1=0,00001 -
НФ+ФГА 126,81±15,5 124,57 - - 104,51±13,8 118,13 t'=1,07; P1>0,05 -
tn; Pn t6=0,84; Р6=0,4; t7=2,73; Р7=0,01; t8=1,08; Р8>0,05 - t6=6,1; Р6=0,000005; t7=2,1; Р7=0,04; t8=1,21; Р8>0,5 -
Примечание: М- средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; t - критерий Стьюдента; Р - уровень значимости между: P1 - донорами и больными ИБС, P2 - донорами и больными ИИМ; P3 - PBMC и сывороткой, P4 - PBMC+ФГА и сывороткой, P5 - PBMC и РВМС+ФГА, P6 - НФ и НФ+ФГА, P7 -НФ и РВМС, P8 - НФ+ФГА и PBMC+ФГА
Несмотря на утверждения отечественных и зарубежных ученых о прогностической значимости «высоких» сывороточных уровней цитокинов и, в частности, TNF-a при ССЗ, в 70% образцов сывороток обследованных больных ИБС, ИИМ и здоровых лиц TNF-a и другие провоспалительные цитокины IL-17A, IL-1ß не детектируются (Ме=0), у 30% - в следовых количествах (2-5 pg/ml), не превышающих нижней границы чувствительности метода (табл. 1-4) [2-34].
Экспериментальные данные согласуются с выводами ряда авторов, подтверждающих отсутствие достоверных различий по сывороточным уровням провоспалительных цитокинов у доноров и больных ССЗ. Но при этом незначительное превышение IL-1ß и TNF-a в сыворотке больных ИБС по сравнению с донорами (0,8±2,34 pg/ml / 1,2±0,14 pg/ml; Р<0,05 для IL-1ß и 1,0±3,78 pg/ml / 3,2±1,2 pg/ml; Р<0,05 для TNF-a) расценивается Туевым А.В. и др. (2014) как «значимые отличия, которые могут внести вклад в дестабилизацию атеросклеро-тической бляшки и провоцировать инфаркт миокарда» [8].
Супернатанты интактных и стимулированных ФГА PBMC и нейтрофилов обследованных доноров и больных содержат более высокие концентрации IL-17A, IL-1B, TNF-a и у больных ИБС по сравнению с донорами достоверно (Р<0,05) повышены, что свидетельствует о гиперпродукции IL-ПА, IL-1B, TNF-a PBMC и НФ больных КА (табл. 1-4).
Провоспалительный IL-1ß, ответственный за развитие местной воспалительной реакции и острой фазы иммунного ответа, в образцах сывороток больных ИБС не детектируется (1,05±0,48 pg/ml; t=2,06; P>0,05), что на первый взгляд согласуется с данными Волкова В.И. (2002 г.) об отсутствии системной циркуляции IL-1 ß как при стабильной, так и нестабильной стенокардии. Однако достоверно более высокие уровни спонтанной (соответственно, 65±22,19 pg/ml и 11,95±2,87 pg/ml; t=8,78; P<0,000001) и стимулированной (соответственно, 91,46±17,55 pg/ml и 30,6±4,95 pg/ml; t=2,68; P<0,01) продукции IL-1ß у больных ИБС (табл. 2) по сравнению с донорами может служить подтверждением оверэкспрессии IL-1 ß РВМС и НФ при КА.
Ключевой провоспалительный TNF-a в процессах повреждения эндотелия сосудов в образцах сывороток больных ИБС практически не детектируется (0,10±0,06 pg/ml; t=1,76; P>0,05), но в супернатантах интактных и стимулированных ФГА РВМС и НФ больных ИБС выявляется в достоверно более высоких концентрациях (табл. 3), не исключающих участие TNF-a в развитии ССЗ.
Таблица 2
Уровни IL-1ß в сыворотках, супернатантах PBMC, НФ доноров и больных ИБС
Биологические среды Концентрации IL-1ß, pg/ml t1; Р1 t2; P2
Больные ИБС (n=10) Больные ИИМ (n=10) Доноры (n=22)
M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me
Сыворотка 1,05±0,48 0,56 2,97±0,96 2,28 2,3±1,5 0,1 t2=0,38; P2<0,05; t=0,79; P1>0,05
PBMC 65±22,19 27,31 47,90±2,92 45,65 11,95±2,87 5,9 t2=8,78; P2<0,000001 t1=2,37; P1=0,02
PBMC+ ФГА 91,46±17,55 101 282,50±93,75 380 30,6±4,95 33,84 t2=2,68; P2<0,01 t=3,34; P1=0,002
f; Pn t3=2,88; Р3=0,009; t4=5,15; Р4=0,00004; t5=0,94; Р5>0,05 t3=14,62; Р3=0,0000001; t4=2,98; Р4=0,01; t5=2,50; Р5<0,05 t3=2,98; Р3=0,004; t4=5,47; Р4=0,000002; t5=3,26; Р5>0,002 - -
НФ 25,7±5,72 25,7 - - 7,36±2,45 7,36 <=2,95; P1=0,008 -
НФ+ФГА 26,84±6,51 26,84 - - 7,93±1,31 7,93 t=2,85; P1=0,01 -
tn; Pn t6=0,13; Р6>0,05; t7=1,72; Р7>0,05; t8=3,45; Р8=0,003 - t6=0,21; Р6>0,05; t7=0,77; Р7>0,05; t8=2,34; Р8=0,02 -
Примечание: М- средняя арифметическая; т - стандартная ошибка среднего; Ме - медиана; / - критерий Стьюдента; Р - уровень значимости между: Р1 - донорами и больными ИБС, Р2 - донорами и больными ИИМ, Р3 - РВМС и сывороткой, Р4 - РВМС+ФГА и сывороткой, Р5 - РВМС и РВМС+ФГА, Р6 - НФ и НФ+ФГА, Р7 -
НФ и РВМС, P8 - НФ+ФГА и PBMC+ФГА
Таблица 3
Уровни TNF-a в сыворотках, супернатантах PBMC, нейтрофилов доноров и больных КА
Биологические среды Концентрации TNF-a, pg/ml t1; Р1 t2; P2
БольныеИБС n=10) Больные ИИМ (n=10) Доноры (n=22)
M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me
Сыворотка 0,10±0,06 0,00 0,00±0,00 0,00 6,31±0,7 6,44 t1=8,84; P1>0,0000001 t2=9 1-P2<0,000001
PBMC 435,63±77,14 356,3 190,33±34,10 206 36,71±7,2 24,75 1t1=5,15; P1=0,00001 t2=4,41; P2=0,0001
PBMC+ ФГА 672,22±30,69 698,5 382±69,02 413 140,01±36,33 329 /=11,19; P1=0,000001 t2=3,10; P2=0,003
tn; Pn t3=5,65; Р3=0,00002; t4=21,9; Р4=0,0000001; t5=2,85; Р5=0,01 t3=5,58; Р3=0,0001; t4=5,53; Р4=0,0001; t5=2,49; Р5<0,05 t3=4,2; Р3=0,0001; t4=3,68; Р4=0,0006; t5=2,79; Р5=0,007 - -
НФ 405,5±121,5 405,5 - - 35,86±30,49 10,3 t1=2,95; P1=0,01 -
НФ+ФГА 601,4±15,6 601,4 - - 86±10,6 86 t1=27,33; P1=0,01 -
tn; Pn t6=1,6; Р6>0,05; t7=0,21; Р7>0,05; t8=2,06; Р8>0,05 - t6=3,14; Р6=0,004; t7=0,13; Р7>0,05; t8=6,73; Р8=0,000001 -
Примечание: М- средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; t - критерий Стьюдента; Р - уровень значимости между: P1 - донорами и больными ИБС, P2 - донорами и больными ИИМ, P3 - PBMC и сывороткой, P4 - PBMC+ФГА и сывороткой, P5 - PBMC и РВМС+ФГА, P - НФ и НФ+ФГА, P7 -НФ и РВМС, P8 - НФ+ФГА и PBMC+ФГА
РВМС обследованных лиц сохраняют способность к активации митогенами (ФГА), но у больных ИИМ отмечены достоверно более высокие уровни спонтанной и индуцированной (P1<0,003) продукции TNF-a, что подтверждают его роль в воспалении, протекающем в области «ишемической полутени». Это согласуется с результатами Brea D. et al. (2009), Nakase T. et al. (2009), установившими, что содержание TNF-a в плазме крови у пациентов с ишемическим инсультом мозга значительно выше, чем у здоровых лиц, коррелирует с тяжестью неврологических нарушений в остром периоде ИИМ, деструктивными изменениям в ткани мозга.
Однако в экспериментальных и клинических работах показаны нейропротективные свойства Т№-а, связанные с регенерацией аксонов. Повышая экспрессию молекул адгезии, ТКР-а тем самым усиливает миграцию лимфоцитов в участок воспаления с последующими эффектами [50-54].
Уровни ГЬ-4, подавляющего активность макрофагов, секрецию 1Ь-1р, Т№-а, клеточный иммунный ответ, в сыворотке, супернатантах интактных и стимулированных ФГА РВМС не превышали 0,6 р§/ш1 (табл. 4) как у больных ПА, так и у доноров (Р>0,05).
Таблица 4
Уровни IL-4 в сыворотках, среде PBMC и нейтрофилах доноров и больных ИБС
Биологические среды Концентрации IL-4, pg/ml t1; Р1 t2; P2
Больные ИБС (n=10) Больные ИИМ (n=10) Доноры (n=22)
M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me
Сыворотка 0,00±0,00 0,00 0,00±0,00 0,00 0,01±0,01 0,00 t'=1,0; P1>0,05 t2=1,00; P2>0,05
PBMC 0,2±0,17 0,00 0,25±0,13 0,06 0,6±0,2 0,00 t'=1,52; P1>0,05 t2=1,47; P2>0,05
PBMC+ ФГА 0,56±0,24 0,17 0,13±0,05 0,00 0,6±0,1 0,00 t'=0,15; P1>0,05 t2=4,2; P2>0,0002
tn; Pn <4=1,18; Р4>0,05; t4=2,33; Р4=0,02; t5=1,22; Р5>0,05 t3=1,92; Р3>0,05; t3=2,60; Р4=0,001; t4=0,86; Р5>0,05 413=2,95; Р3=0,005; t4=5,87; Р4>0,000001; t5=0; Р5>0,05 - -
НФ 0,15±0,15 0,00 - - 0,00±0,00 0,00 1t1=1; P1>0,05 -
НФ+ФГА 0,01±0,01 0,00 - - 0,00±0,00 0,00 1t1=1; P1>0,05 -
tn; Pn t6=0,93; Р6>0,05; t7=0,22; Р7>0,05; t8=0,29; Р8=0,03 - t6=0; Р6>0,05; t7=0; Р7>0,05; t8=0; Р8>0,05 -
Примечание: М- средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; t - критерий Стьюдента; Р - уровень значимости между: P1 - донорами и больными ИБС, P2 - донорами и больными ИИМ P3 - PBMC и сывороткой, P4 - PBMC+ФГА и сывороткой, P5 - PBMC и РВМС+ФГА, P6 - НФ и НФ+ФГА, P7 -НФ и РВМС, P8 - НФ+ФГА и PBMC+ФГА
Полученные данные не согласуются с утверждениями Закировой Н.Э. с соавт. (2007) о более высоких сывороточных концентрациях IL-4 у больных стабильной стенокардией III и IV ФК (128,2±10,73 pg/ml), достоверно не отличающихся от контроля (122,6±11,90 pg/ml; Р>0,05). Однако при стенокардии I-II ФК, по сравнению с III-IV ФК, установлено статистически значимое (Р<0,01) повышение IL-4 [17].
Молярные соотношения медиаторов в исследуемых образцах супернатантов РВМС и НФ. Общепринятые способы выражения концентраций медиаторов в pg/ml не учитывают их различий в молекулярных массах и, следовательно, в количественных соотношениях молекул, определяющих конечные эффекты цитокинов в конкурентном взаимоидейст-вии за общие рецепторные субъединицы. Молярные концентрации (Cv) медиаторов отражают их количественные характеристики (v), существенные для иммунных реакций. Учитывая чрезвычайно низкие пикограммовые (1pg=10-12 г) концентрации цитокинов в биологических средах, молярные концентрации, выраженные в милимоль/миллилитр (n*10-9 тМ/rnl), определены исходя из относительных (relative) молекулярных масс (Mr), численно соответствующих молярным массам (Mv) биологически активных (гликозилированных) форм медиаторов: MviL.17A=35 г/моль; MvIL-1ß=17,4 г/моль; MvxNF-a=52 г/моль (активная форма TNF-a содержит три субъединицы); MvIL-4=18 г/моль). Соответствующие молярные концентрации цитокинов в образцах сывороток, супернатантов интактных и стимулированных РВМС и НФ доноров, больных ИБС и ИИМ приведены в таблице 5.
В образцах сывороток больных коронарным и цереброваскулярным атеросклерозом молярные концентрации IL-1ß, TNF-a, IL-17A, IL-4 существенно не различаются, но значительно снижены по сравнению с донорами. Более того, атерогенный TNF-a при ИБС и ИИМ, вопреки цитируемым работам, весьма скромно представлен (табл. 5).
Таблица 5
Молярные (и-10-9 mM/ml) концентрации цитокинов в образцах
Обследованные группы Молярные концентрации цитокинов (n-10-y mM/ml)
IL-17A I IL-1ß 1 TNF-a I IL-4
сыворотка
Доноры 0,12 0,13 0,12 0,0005
Больные ИБС 0,03 0,06 0,0001 0,00
Больные ИИМ 0,03 0,17 0,0001 0,00
Супернатанты интактных РВМС
Доноры 0,8 0,7 0,7 0,03
Больные ИБС 1,88 3,82 8,38 0,01
Больные ИИМ 0,06 2,82 3,65 0,01
Супернатанты РВМС, инкубированных с ФГА
Доноры 2,4 1,8 2,69 0,03
Больные ИБС 3,08 5,38 12,93 0,03
Больные ИИМ 14,36 16,62 7,35 0,007
Супернатанты интактных НФ
Доноры 0,48 0,43 0,69 0,00
Больные ИБС 3,22 1,51 7,8 0,008
Больные ИИМ - -
Супернатанты НФ, стимулированные ФГА
Доноры 2,99 0,45 1,65 0,00
Больные ИБС 3,62 1,58 11,57 0,0005
Больные ИИМ - - - -
Примечание: тМ/т1 - милимоли на милилитр; ИБС - ишемическая болезнь сердца; ИИМ - ишемический инсульт мозга; РВМС - мононуклеарные клетки; НФ - нейтрофилы
Содержание цитокинов в культурах интактных и стимулированных РВМС у этих же больных по сравнению с донорами в большей степени подтверждают роль воспаления в развитии ССЗ. Базальные молярные соотношения провоспалительных медиаторов «первой волны» IL-17A, IL-ip, TNF-a (0,8:0,7:0,7) в супернатантах интактных РВМС доноров отражают порядок и интенсивность сложной взаимной регуляции цитокиновой сети, функционирующей по каскадному принципу. В норме для поддержания медиаторного тонуса основные провоспалительные цитокины продуцируется в эквимолярных концентрациях. У больных ИБС спонтанная продукция всех трех цитокинов количественно (1,88:3,82:8,38) превосходит базальный уровень доноров: по IL-17A - в 2,35 раз, IL-ip - в 5,45, TNF-a - почти с 12-ти кратным превышением. При ИИМ на фоне нормальных концентраций IL-17A интактные РВМС продуцируют IL-1P в 4 раза больше, чем у доноров, а TNF-a - в 6 раз. Полученные данные свидетельствует об исходно высокой функциональной активности РВМС больных ИБС, ИИМ с гиперпродукцией основных провоспалительных цитокинов, способных поддерживать хроническое воспаление и участие медиаторов первой волны в развитии атеросклероза (рис. 1 и 2) [3, 13, 46].
Выявленная для МНК и НФ больных коронарным и цереброваскулярным атеросклерозом конститутивная гиперпродукция медиаторов воспаления является важным параметром, предрасполагающим к атерогенезу и последующим ССЗ. Генетическим фактором, обуславливающим оверэкспрессию медиаторов иммунной системы, могут быть SNP промоторных регионов соответствующих генов. Ранее нами показано, что у больных с ИБС и ИИМ типи-рованы полиморфизмы промоторных регионов генов, ассоциированных с гиперпродукцией провоспалительных цитокинов «первой волны» ГЬ-17А, IL-1P, TNF-a.
Резюме. Таким образом, функциональная активность мононуклеарных клеток больных ССЗ в отличие от доноров характеризуется повышенной продукцией провоспалительных медиаторов первой волны: спонтанная продукция IL-17A, IL-1P, TNF-a РВМС больных ИБС, ИИМ, развившихся на фоне КА и ПА, проявляется в многократном превышении продукции, особенно триггерного IL-17A, медиатора хронического воспаления. Молярные соотношения основных провоспалительных медиаторов первой волны, в норме составляющие 0,8:0,7:0,7, у больных отличаются выраженным дисбалансом - 1:2:4,4 (ИБС) и 1:47:61 (ИИМ) с заметным
«превышением» всех трех (при КА) или только двух (при ПА) цитокинов. Это может иметь существенное значение в дизрегуляции иммунных реакций, так как, несмотря на общие свойства, каждый из них вносит свой вклад в воспалительную реакцию, нарушая согласованное взаимодействие и адекватную реакцию организма.
10"9 mM/ml 14,00 12,00 10,00 8,00 6,00 4,00
2,00 0,800,700,70
g gg 11 ESS ■ Доноры
Ннтактные РВМС
8,38
3,82
I
I
2,8:
0,06
'■,66
I
10"9 mM/ml
18,00 16,00 14,00 12,00 10,00 8,00 6,00
4.°° 2,401 802,69 2,00 ~~ '
Стимулированные ФГА РВМС
16,62
0,00
ИБС
ИИМ
Доноры
14,36
12,93
7,35
I
ИИМ
IIL-17A
□ IL-lb
I TNF-a
-17 A S IL-lb
I TNF-a
Рис. 1. Молярные соотношения цитокинов в культурах РВМС больных и доноров
10"9 mM/ml 14,00 12,00 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0.00
Ннтактные НФ
7.80
з 22
Я151
0,48 0.43 0,69 F.::.: :.:-:.:-:j ГТЧ ^Н Ш
10"9 mM/ml 14,00 12,00 10,00 8,00 6,00 4,00 2,00 0.00
Стимулированные ФГА НФ
11.57
3.62
1,65 1.58
Iii 0,45 км H
Доноры ИБС
IIL-17A HlL-lb ■ TNF-a
Доноры ИБС
0IL-17A ElIL-lb ■ TNF-a
Рис. 2. Молярные соотношения цитокинов в культурах НФ доноров и больных ИБС
Важным фактором развития атеросклероза является оверэкспрессия атерогенного TNF-a, способного повреждать эндотелий периферических и коронарных сосудов. Преимущественное вовлечение периферических или коронарных сосудов в атерогенез регулируется, вероятно, в большей степени IL-1ß, контролирующим среди множества функций и такие ключевые процессы, как экспрессия рецепторов TNF-RI и TNF-RII к TNF-a.
Выводы
1. Низкие/недектируемые сывороточные концентрации медиаторов воспаления IL-17A, IL-1ß, TNF-a, IL-4 неинформативны в прогнозе риска развития ишемической болезни сердца и цереброваскулярного инсульта.
2. Уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции IL-17A, IL-1ß, TNF-a мононуклеарными клетками и нейтрофилами достоверно (Р<0,05) повышены у больных ИБС и ЦВИ, что свидетельствует о связи медиаторов «первой волны» с атеросклерозом.
3. Повышение амплитуды провоспалительного компонента (острого и хронического) в сочетании с молярным дисбалансом IL-17A, IL-1ß, TNF-a запускает и длительно поддерживает патофизиологические процессы при коронарном и цереброваскулярном атеросклерозе.
Примечания:
1. Влияние полиморфизма генов TNF-a (G308A) и IL-10 (G1082A) при инфаркте миокарда на экспрессию про- и противовоспалительных цитокинов / В.С. Голышко [и др.] // Журнал Гродненского государственного медицинского университета. 2012. № 3 (39). С. 39-50.
2. Кушхова Д.Х. Диагностическое и прогностическое значение ФНО-a у больных ишемической болезнью сердца: дис. ... канд. мед. наук. Москва, 2009. С. 24-30.
3. Волкова С.Ю., Шалаев С.В. Прогностическое значение уровней в плазме N-концевого фрагмента мозгового на-трийретического пропептида и провоспалительных цито-кинов у больных сердечной недостаточностью ишемиче-ской этиологии // Кардиология. 2009. № 10. С. 22-26.
4. Салахова Г.М. Клинико-диагностическое значение маркеров воспаления при ишемической болезни сердца: дис. ... канд. биол. наук. Уфа, 2009. С. 21-46.
5. Клиническое значение определения в крови фактора некроза опухоли-a у больных ишемической болезнью сердца / О.П. Шевченко [и др.] // Вестник Российского государственного медицинского университета. 2009. № 2. С. 6-9.
6. Цитокиновый статус доноров крови и ее компонентов / Г.А. Зайцева [и др.] // Фундаментальные исследования. 2011. № 3. С. 70-76.
7. Донцов А.В. Маркеры субклинического воспаления при метаболическом синдроме и ишемической болезни сердца // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. Фармация. 2014. Т. 25, № 4 (175). С. 65-76.
8. Туев А.В., Карпунина Н.С. Маркеры воспаления при артериальной гипертензии и некоторых формах ишеми-ческой болезни сердца: клиническая и прогностическая значимость // Артериальная гипертензия. 2011. Т. 17, № 6. С. 22-26.
9. Динамика изменений уровней цитокинов на госпитальном этапе у больных с различными клиническими вариантами острого коронарного синдрома / С.А. Бернс [и др.] // Медицинская иммунология. 2016. Т. 18, № 1. С. 20-31.
10. Гордеева Е.К., Каде А.Х. Динамика уровня противоспа-лительных цитокинов при лечении стабильной стенокардии напряжения II-III функционального класса // Медицинский вестник Юга России. 2016. № 3. С. 52-62.
11. Предикторы коронарного атеросклероза у мужчин с метаболическим синдромом / Д.М. Рудакова [и др.] // Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний. 2017. Т. 6, № 3. С. 12-26.
12. Correlation between cytokine profile and metabolic abnormalities in young subjects / I. Matia-Garcia [et al.] // Int. J. Clin. Exp. Med. 2016. Vol. 9, No. 8. P. 16596-16604.
13. Serum interleukin-6: Association with circulating cytokine serum levels in patients with sinus arrhythmia and patients with coronary artery disease / A.L. Shim [et al.] // Cellular Immunology. 2016. Vol. 310. P. 178-183.
14. Premature atherosclerosis in premenopausal women: Does cytokine balance play a role? / J.A. Eastwood [et al.] // Medical Hypotheses. 2017. Vol. 109. P. 38-41.
15. Influence of cytokine gene polymorphisms on proinflam-matory/anti-inflammatory cytokine imbalance in premature coronary artery disease / W.M. Ansari [et al.] // Postgraduate Medical Journal. 2017. Vol. 93, No. 1098. P. 209-214.
16. Аймагамбетова А.О. Атерогенез и воспаление // Наука и здравоохранение. 2016. № 1. С. 50-56.
17. Иммуновоспалительные реакции при ишемической болезни сердца / Н.Э. Закирова [и др.] // Рациональная фармакотерапия в кардиологии. 2007. Т. 3, № 2. С. 2-16.
18. Карпунина Н.С., Бахметьев Б.А. Продукция цитокинов клетками цельной крови и уровень С-реактивного протеина сыворотки у больных сердечно-сосудистыми заболеваниями // Уральский медицинский журнал. 2011. № 10. С. 5-8.
19. Кравченко А.Я., Черняева Ю.М. Роль цитокинов в развитии и течении сердечной недостаточности // Клини-
References:
1. The Influence of polymorphism of TNF-a (G308A) and IL-10 (G1082A) genes in myocardial infarction on pro- and anti-inflammatory cytokines expression / V.S. Golyshko [et al.] // Journal of Grodno State Medical University. 2012. No. 3 (39). P. 39-50.
2. Kushkhova D.Kh. Diagnostic and prognostic value of FNO-a of patients with ischemic heart disease: Diss. for the Cand. of Medicine degree. Moscow, 2009. P. 24-30.
3. Volkova S.Yu., Shalaev S.V. Prognostic value of plasma levels of N-terminal fragment of brain natriuretic propeptide and pro-inflammatory cytokines in patients with heart failure of ischemic etiology // Cardiology. 2009. No. 10. P. 22-26.
4. Salakhova G.M. Clinical and diagnostic significance of markers of inflammation in ischemic heart disease: Diss. for the Cand. of Biol. degree. Ufa, 2009. P. 21-46.
5. Clinical importance of the determination in blood of the tumor necrosis factor-a in patients with ischemic heart disease / O.P. Shevchenko [et. al] // Bulletin of the Russian State Medical University. 2009. No. 2. P. 6-9.
6. Cytokine status of blood donors and its components / G.A. Zaitseva [et. al.] // Fundamental research. 2011. No. 3. P. 70-76.
7. Dontsov A.V. Markers of subclinical inflammation in the metabolic syndrome and coronary heart disease // Scientific Bulletin of Belgorod State University. Ser. Medicine. Pharmacy. 2014. Vol. 25, No. 4 (175). P. 65-76.
8. Tuev A.V., Karpunina N.S. Markers of inflammation in arterial hypertension and some forms of ishemic heart disease: clinical and prognostic significance // Arterial Hypertension. 2011. Vol. 17, No. 6. P. 22-26.
9. Dynamics of changes in cytokine levels in the hospitalized patients with different clinical types of acute coronary syndrome / S.A. Berns [et al.] // Medical Immunology. 2016. Vol. 18, No. 1. P. 20-31.
10. Gordeeva E.K., Kade A.Kh. Dynamics of the level of anti-inflammatory cytokines in the treatment of stable angina of the tention of the II-III functional class // Medical Journal of the South of Russia. 2016. No. 3. P. 52-62.
11. Predictors of coronary atherosclerosis in men with metabolic syndrome / D.M. Rudakova [et al.] // Complex Problems of Cardiovascular Diseases. 2017. Vol. 6, No. 3. P. 12-26.
12. Correlation between cytokine profile and metabolic abnormalities in young subjects / I. Matia-Garcia [et al.] // Int. J. Clin. Exp. Med. 2016. Vol. 9, No. 8. P. 16596-16604.
13. Serum interleukin-6: Association with circulating cytokine serum levels in patients with sinus arrhythmia and patients with coronary artery disease / A.L. Shim [et al.] // Cellular Immunology. 2016. Vol. 310. P. 178-183.
14. Premature atherosclerosis in premenopausal women: Does cytokine balance play a role? / J.A. Eastwood [et al.] // Medical Hypotheses. 2017. Vol. 109. P. 38-41.
15. Influence of cytokine gene polymorphisms on proinflam-matory/anti-inflammatory cytokine imbalance in premature coronary artery disease / W.M. Ansari [et al.] // Postgraduate Medical Journal. 2017. Vol. 93, No. 1098. P. 209-214.
16. Aymagambetova A.O. Atherogenesis and inflammation // Science and Health. 2016. No. 1. P. 50-56.
17. Immuno-inflammatory response in ischemic heart disease / N.E. Zakirova [et al.] // Rational Pharmacotherapy in Cardiology. 2007. Vol. 3, No. 2. P. 2-16.
18. Karpunina N.S., Bakhmetyev B.A. Production of cytokines by whole blood cells and serum C-level of reactive protein in patients with cardiovascular diseases // Ural Medical Journal. 2011. No. 10. P. 5-8.
19. Kravchenko A.Ya., Chernyaeva Yu.M. The role of cyto-kines in the development and course of heart failure //
ческая медицина. 2013. Т. 91, № 10. С. 7-19.
20. Dihydroxylated phenolic acids derived from microbial metabolism reduce lipopolysaccharide-stimulated cytokine secretion by human peripheral blood mononuclear cells / M. Monagas [et al.] // British Journal of Nutrition. 2009. Vol. 102, No. 02. P. 201-206.
21. Царенок С.Ю., Горбунов В.В., Терешков П.П. Уровень интерлейкина-1р, фактора некроза опухолей, и их растворимых рецепторов у женщин с ишемической болезнью сердца, коморбидной с остеопорозом // Клиническая лабораторная диагностика. 2015. Т. 60, № 3. С. 202-206.
22. Уровни содержания интерлейкинов и мелатонина у больных острым коронарным синдромом / М.А. Шаленкова [и др.] // Медицинская иммунология. 2014. Т. 16, № 5. C. 152-166.
23. Воспалительные и аутоиммунные маркеры у больных с инфарктом миокарда / Е.В. Константинова [и др.] // Вестник Российского государственного медицинского университета. 2010. № 1. С. 22-26.
24. Plasma levels of TNF-a, IL-6 and IL-10 and their relationship with left ventricular diastolic function in patients with stable angina pectoris and preserved left ventricular systolic performance / W. Kosmala [et al.] // Coronary Artery Disease. 2008. Vol. 19, No. 6. P. 375-382.
25. Serial changes in plasma levels of cytokines in patients with coronary artery disease / R.H. Heinisch [et al.] // Vascular Health and Risk Management. 2005. Vol. 1, No. 3. P. 245.
26. Белокопытова И. С. Диагностическое значение некоторых маркеров иммунного воспаления при ишемиче-ской болезни сердца // Рос. иммунолог. журн. 2014. Т. 8, № 3. С. 509-512.
27. Study of cytokines kinetics in severe sepsis and its relationship with mortality and score of organic dysfunction / A. Dougnac [et al.] // Rev. Med. Chil. 2001. Vol. 1129, No. 94. P. 58-347.
28. Bone R.C. Sir Isaac Newton, sepsis, SIRS and CARS // Crit. Care. Med. 1996. Vol. 24. P. 1125-1129.
29. The evidence of possibility of interleukin -2 receptor expression on human solid tumors different histogenesis / N.M. Barezhnaya, E.V. Osirova [et al.] // Exp. Oncology. 1994. No. 16. P. 40-47.
30. Цитокиновый баланс в патогенезе системного воспалительного ответа: новая мишень иммунотерапевтиче-ских воздействий при лечении сепсиса / Е. Р. Черных, О.Ю. Леплина, М.А. Тихонова, М.А. Пальцев [и др.] // Мед. иммунология. 2001. Т. 3, № 3. С. 415-429.
31. Фрейдлин И.С. Интерлейкин-12 ключевой цитокин иммунорегуляции // Иммунология. 1999. № 4. С. 5-9.
32. Симбирцев А.С. Интерлейкин-8 и другие хемокины // Иммунология. 1999. № 4. С. 9-14.
33. Динамика цитокинов при проведении постоянной вы-сокобъемной гемфильтрации (ПВГДФ) / Н.В. Пурло, А.А. Левина, Ю.И. Мамукова [и др.] // Общая реаниматология. 2008. Т. IV, № 2. С. 38-42.
34. Casey L.C., Balk R.A., Bone R.C. Plasma cytokine and endotoxine levels correlate with survival in patients with the septsis syndrome // Ann. Intern. Med. 1993. Vol. 15, No. 119 (8). C. 1-8.
35. Исследование соотношений основных цитокинов в крови онкологических больных и здоровых доноров / А.Р. Тугуз [и др.] // Иммунология. 2003. № 3. С. 184185.
36. Особенности цитокинового статуса у больных атеросклерозом / Е.П. Турмова, Е.В. Маркелова, А.А. Силаев [и др.] // Медицинская иммунология. 2014. Т. 16, № 4. С. 323-332.
37. Венков А.Г. Построение и идентификация нечетких
математических моделей технологических процессов в условиях неопределенности: автореф. дис. ... канд. техн. наук. Липецк: ЛГТУ, 2002. 20 с.
38. Тулякова Г.Х. Полиморфизм генов цитокинов и предрасположенность к инфаркту миокарда и внезапной смерти: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Москва, 2007. 27 с.
Clinical Medicine. 2013. Vol. 91, No. 10. P. 7-19.
20. Dihydroxylated phenolic acids derived from microbial metabolism reduce lipopolysaccharide-stimulated cytokine secretion by human peripheral blood mononuclear cells / M. Monagas [et al.] // British Journal of Nutrition. 2009. Vol. 102, No. 02. P. 201-206.
21. Tsarenok S.Yu., Gorbunov V.V., Tereshkov P.P. The level of interleukin-1p, tumor necrosis factor, and their dissolving receptors in women with ishemic heart disease, comor-bid with osteoporosis // Clinical Laboratory Diagnostics. 2015. Vol. 60, No. 3. P. 202-206.
22. Levels of interleukins and melatonin in patients with acute coronary syndrome / M.A. Shalenkova [et al.] // Medical Immunology. 2014. Vol. 16, No. 5. P. 152-166.
23. Inflammatory and autoimmune markers in patients with myocardial infarction / E.V. Konstantinova [et al.] // Bulletin of the Russian State Medical University. 2010. No. 1. P. 22-26.
24. Plasma levels of TNF-a, IL-6 and IL-10 and their relationship with left ventricular diastolic function in patients with stable angina pectoris and preserved left ventricular systolic performance / W. Kosmala [et al.] // Coronary Artery Disease. 2008. Vol. 19, No. 6. P. 375-382.
25. Serial changes in plasma levels of cytokines in patients with coronary artery disease / R.H. Heinisch [et al.] // Vascular Health and Risk Management. 2005. Vol. 1, No. 3. P. 245.
26. Belokopytova I.S. The diagnostic value of some markers of immune inflammation in ishemic heart disease // Russian Journal of Immunology. 2014. Vol. 8, No. 3. P. 509-512.
27. Study of cytokines kinetics in severe sepsis and its relationship with mortality and score of organic dysfunction / A. Dougnac [et al.] // Rev. Med. Chil. 2001. Vol. 1129, No. 94. P. 58-347.
28. Bone R.C. Sir Isaac Newton, sepsis, SIRS and CARS // Crit. Care. Med. 1996. Vol. 24. P. 1125-1129.
29. The evidence of possibility of interleukin -2 receptor expression on human solid tumors different histogenesis / N.M. Barezhnaya, E.V. Osirova [et al.] // Exp. Oncology. 1994. No. 16. P. 40-47.
30. Cytokine balance in the pathogenesis of the systemic inflammatory response: a new target of immunotherapeutic effects in the treatment of sepsis / E.R. Chernykh, O.Yu. Leplina, M.A. Tikhonova, M.A. Paltsev [et al.] // Med. Immunology. 2001. Vol. 3, No. 3. P. 415-429.
31. Freidlin I.S. Interleukin-12 key cytokine of immunoregulation // Immunology. 1999. No. 4. P. 5-9.
32. Simbirtsev A.S. Interleukin-8 and other chemokines // Immunology. 1999. No. 4. P. 9-14.
33. Dynamics of cytokines during constant high-volume hae-mofiltration (PVGDF) / N.V. Purlo, A.A. Levina, Yu.I. Mamukova [et. al.] // General Reanimatology. 2008. Vol. IV, No. 2. P. 38-42.
34. Casey L.C., Balk R.A., Bone R.C. Plasma cytokine and endotoxine levels correlate with survival in patients with the septsis syndrome // Ann. Intern. Med. 1993. Vol. 15, No. 119 (8). C. 1-8.
35. Investigation of the correlation of main cytokines in the blood of oncological patients and healthy donors / A.R. Tuguz [et al.] // Immunology. 2003. No. 3. P. 184185.
36. Features of cytokine status in patients with atherosclerosis / E.n. Turmova, E.V. Markelova, A.A. Silaev [et al.] // Medical Immunology. 2014. Vol. 16, No. 4. P. 323-332.
37. Venkov A.G. Construction and identification of fuzzy mathematical models of technological processes in conditions of uncertainty: Diss. abstract for the Cand. of Tech. sciences degree. Lipetsk: LSTU, 2002. 20 pp.
38. Tulyakova G.Kh. Polymorphism of cytokine genes and predisposition to myocardial infarction and sudden death: Diss. abstract for the Cand. of Medicine degree. Moscow, 2007. 27 pp.
39. Князева Л.В. Влияние бета-адреноблокаторов на состояние эндотелиальной функции, оксидативный стресс и цитокиновый механизм воспаления у больных хронической сердечной недостаточностью: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Москва, 2010. 28 с.
40. Толстов С.Н. Клинико-диагностическое значение цито-киновой активации и эндотелиальной дисфункции у больных хронической сердечной недостаточностью и возможности коррекции имеющихся нарушений: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Москва, 2002. 27 с.
41. Поскребышева А.С. Клиническое значение уровня ци-токинов и некоторых нейрогуморальных показателей при хронической сердечной недостаточности различного генеза: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Москва, 2004. 27 с.
42. Сажина Е.Ю. Клинико-диагностическое значение выраженности воспаления и энедотелиальной дисфункции у больных хронической сердечной недостаточностью: ав-тореф. дис. ... канд. мед. наук. Саратов, 2005. 27 с.
43. Endothelial cell gene expression of a neutrophil chemotac-tic factor by TNF-alpha, LPS and IL-1 beta / Т. Standiford, R. Strieter, S. Chensue [et al.] // Med. 1992. Vol. 120. C. 179-180.
44. Dinarello C.A. Interleukin-1 and interleukin-1 antagonism // Blood. 1991. Vol. 77, No. 8. P. 1627-1652.
45. Inflammation of the brain after ischemia / K. Kogure [et al.] // Mechanisms of Secondary Brain Damage in Cerebral Ischemia and Trauma. Springer; Vienna, 1996. P. 40-43.
46. Induction of Interleukin-1 в mRNA in Rat Brain After Transient Forebrain Ischemia / M. Minami [et al.] // Journal of neurochemistry. 1992. Vol. 58, No. 1. С. 390-392.
47. Buttini M., Sauter A., Boddeke H. Induction of interleukin-
1P mRNA after focal cerebral ischaemia in the rat // Molecular Brain Research. 1994. Vol. 23, No. 1-2. P. 126-134.
48. Interleukin-1 as a pathogenetic mediator of ischemic brain damage in rats / Y. Yamasaki [et al.] // Stroke. 1995. Vol. 26, No. 4. P. 676-681.
49. Alvaro-Gonzalez L.C., Freijo-Guerrero M.M., Sadaba-Garay F. Inflammatory mechanisms, arteriosclerosis and ischemic stroke: clinical data and perspectives // Revista de Neurologia. 2002. Vol. 35, No. 5. P. 452-462.
50. Danton G.H., Dietrich W.D. Inflammatory mechanisms after ischemia and stroke // Journal of Neuropathology & Experimental Neurology. 2003. Vol. 62, No. 2. P. 127-136.
51. Inflammatory and neuroimmunomodulatory changes in acute cerebral ischemia / D. Brea [et al.] // Cerebrovascular Diseases. 2009. Vol. 27, Suppl. 1. P. 48-64.
52. Ischemia alters the expression of connexins in the aged human brain / T. Nakase [et al.] // BioMed Research International. 2009. Vol. 2009. P. 22-26.
53. Live imaging of neuroinflammation reveals sex and estrogen effects on astrocyte response to ischemic injury / P. Cordeau [et al.] // Stroke. 2008. Vol. 39, No. 3. P. 935-942.
54. Новые возможности нейропротекции при ишемическом инсульте / Д.В. Сергеев [и др.] // Неврология, нейроп-сихиатрия, психосоматика. 2011. № 4. С. 101-106.
39. Knyazeva L.V. Influence of beta-adrenoblockers on the state of endothelial function, oxidative stress and cytokine mechanism of inflammation in patients with chronic heart failure: Diss. abstract for the Cand. of Medicine degree. Moscow, 2010. 28 pp.
40. Tolstov S.N. Clinical and diagnostic significance of cyto-kine activation and endothelial dysfunction in patients with chronic heart failure and possibility of correction of existing disorders: Diss. abstract for the Cand. of Medicine degree. Moscow, 2002. 27 pp.
41. Poskrebysheva A.S. Clinical significance of the level of cytokines and some neurohumoral indicators in chronic heart failure of different genesis: Diss. abstract for the Cand. of Medicine degree. Moscow, 2004. 27 pp.
42. Sazhina E.Yu. Clinical and diagnostic significance of the severity of inflammation and edetothelial dysfunction in patients with chronic heart failure: Diss. abstract for the Cand. of Medicine degree. Saratov, 2005. 27 pp.
43. Endothelial cell gene expression of a neutrophil chemotac-tic factor by TNF-alpha, LPS and IL-1 beta / T. Standiford, R. Strieter, S. Chensue [et al.] // Med. 1992. Vol. 120.
C. 179-180.
44. Dinarello C.A. Interleukin-1 and interleukin-1 antagonism // Blood. 1991. Vol. 77, No. 8. P. 1627-1652.
45. Inflammation of the brain after ischemia / K. Kogure [et al.] // Mechanisms of Secondary Brain Damage in Cerebral Ischemia and Trauma. Springer; Vienna, 1996. P. 40-43.
46. Induction of Interleukin-1 p mRNA in Rat Brain After Transient Forebrain Ischemia / M. Minami [et al.] // Journal of neurochemistry. 1992. Vol. 58, No. 1. C. 390-392.
47. Buttini M., Sauter A., Boddeke H. Induction of interleukin-
1p mRNA after focal cerebral ischaemia in the rat // Molecular Brain Research. 1994. Vol. 23, No. 1-2. P. 126-134.
48. Interleukin-1 as a pathogenetic mediator of ischemic brain damage in rats / Y. Yamasaki [et al.] // Stroke. 1995. Vol. 26, No. 4. P. 676-681.
49. Alvaro-Gonzalez L.C., Freijo-Guerrero M.M., Sadaba-Garay F. Inflammatory mechanisms, arteriosclerosis and ischemic stroke: clinical data and perspectives // Revista de Neurologia. 2002. Vol. 35, No. 5. P. 452-462.
50. Danton G.H., Dietrich W.D. Inflammatory mechanisms after ischemia and stroke // Journal of Neuropathology & Experimental Neurology. 2003. Vol. 62, No. 2. P. 127-136.
51. Inflammatory and neuroimmunomodulatory changes in acute cerebral ischemia / D. Brea [et al.] // Cerebrovascular Diseases. 2009. Vol. 27, Suppl. 1. P. 48-64.
52. Ischemia alters the expression of connexins in the aged human brain / T. Nakase [et al.] // BioMed Research International. 2009. Vol. 2009. P. 22-26.
53. Live imaging of neuroinflammation reveals sex and estrogen effects on astrocyte response to ischemic injury / P. Cordeau [et al.] // Stroke. 2008. Vol. 39, No. 3. P. 935-942.
54. New possibilities of neuroprotection in ischemic stroke /
D.V. Sergeev [et al.] // Neurology, Neuropsychiatry, Psy-chosomatics. 2011. No. 4. P. 101-106.
