CC BY
39
УДК 616.831-005.4:577.176.149 ББК 56.127.7,33 С 73
Тугуз А.Р.
Доктор биологических наук, профессор кафедры ботаники факультета естествознания, зав. иммуноге-нетической лабораторией НИИ комплексных проблем Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Смольков И.В.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Шумилов Д.С.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Татаркова Е.А.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Кушу Л.Т.
Врач высшей категории Адыгейской республиканской клинической больницы, Майкоп, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Ашканова Т.М.
Врач высшей категории Адыгейской республиканской клинической больницы, Майкоп, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Спонтанная и стимулированная in vitro продукция основных провоспалительных цитокинов мононуклеарных клеток крови при ишемическом инсульте
(Рецензирована)
Аннотация. Соотношения IL-17А, IL-1 ft; TNF-a; IL-4 в образцах сывороток, супернатантов интакт-ных и стимулированных in vitro ФГА мононуклеарных клеток периферической крови у пациентов с ишемиче-ским инсультом (n=10) и неродственных доноров без клинических проявлений и наследственной отягощенно-сти сердечно-сосудистыми заболеваниями (n=12) достоверно различаются (Р<0,05) по трем цитокинам: IL-17А, IL-1 ft, TNF-a. У больных ишемическим инсультом в отличие от доноров статистически значимо (Р<0,05) повышены сывороточные концентрации IL-17А, уровни спонтанной и стимулированной ФГА продукции IL-1 ft; TNF-a. Содержание IL-4 в исследованных биологических средах не превышает 0,25 pg/ml и не имеет достоверных различий для всех обследованных групп (Р>0,05).
Ключевые слова: IL-17А, IL-1 ft; TNF-a; IL-4, мононуклеарные клетки, продукция цитокинов in vitro, периферический атеросклероз; ишемический инсульт, сердечно-сосудистые заболевания.
Tuguz A.R.
Doctor of Biology, Professor of Botany Department of Natural Science Faculty, Head of Immunogenetic Laboratory of Research Institute of Complex Problems, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Smolkov I.V.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Shumilov D.S.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Tatarkova E.A.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 593941, e-mail: lab_genetic@mail.ru Kushu L.T.
Doctor of Higher Category of the Adyghe Republican Clinical Hospital, Maikop, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Ashkanova T.M.
Doctor of Higher Category of the Adyghe Republican Clinical Hospital, Maikop, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Spontaneous and stimulated in vitro production of the main proinflammatory cytokines of blood mononuclear cells at an ischemic stroke
Abstract. Ratios of IL-17A, IL-1 ft; TNF-a;and IL-4 in serumal samples, supernatants of intact and stimulated in vitro PHA of peripheral blood mononuclear cells at patients with an ischemic stroke (n=10) and unrelated donors without clinical implications and heriditary burdeness of cardiovascular diseases (n=12) authentically differ (Р<0,05) in three cytokines: IL-17A, IL-1 ft, and TNF-a. At patients with an ischemic stroke, unlike donors, serumal concentra-
tions of 1L-17A, levels of spontaneous and stimulated PHA of production 1L-1ft; TNF-a are statistically significantly (P<0,05) increased. The contents of 1L-4 in the studied biological media do not exceed 0,25 pg/ml and have no reliable differences for all examined groups (Р>0,05).
Keywords: 1L-17A, 1L-1 ft; TNF-a; 1L-4, mononuclear cells, production of cytokines in vitro, peripheral atherosclerosis; ischemic stroke, cardiovascular diseases.
Введение
Воспалительный ответ в патогенезе ишемического инсульта (ИИ) играет двойственную роль, способствуя как удалению некротизированной ткани, так и увеличению зоны ишемии с отягощением заболевания. В регуляции воспалительных реакций при острой сосудистой патологии участвуют провоспалительные цитокины IL-17A, IL-lft, TNF-a, IL-4, оказывающие прямое и опосредованное повреждающее действие. Интерлейкины стимулируют продукцию множества других медиаторов воспаления, поэтому при ишемии мозга и миокарда возможно локальное и системное повышение провоспалительных медиаторов, уровни которых, по мнению ряда авторов, могут служить прогностическим критерием исхода заболевания (А.С. Бояджян и др., 2008; Е.Н. Андрианова и др., 2008; Е.И. Гусев и др., 2001; М.Ю. Мартынов и др., 2010; Е.А. Котина и др., 2013) [1-5].
При ИИ высвобождается, как минимум, 3 основных провоспалительных цитокина: IL-1P, IL-17A и TNF-a, однако данные о значимости их сывороточных уровней в развитии острой сосудистой патологии малочисленны и противоречивы. Так, с неблагоприятным неврологическим прогнозом коррелируют повышенные концентрации TNF-a и других провоспалительных цитокинов, а противовоспалительные интерлейкины, наоборот, связаны с улучшением клинического течению ИИ и тенденцией к восстановлению нарушенных функций (Е.И. Батищева и др., 2008; В.И. Скворцова, 2001; Г.Н. Жданов и др., 2006; Л.Н. Кашаева, 2005; В.И. Скворцова, 2003; Т А. Постникова и др., 2011; J. Oto et al., 2008; N. Vila et al., 2000) [б-13].
Сывороточные концентрации IL-1P, IL-17A, TNF-a, IL-4 у больных ИИ и доноров, по данным ряда авторов, не превышают 2-10 pg/ml (нижней границы чувствительности метода), поэтому не имеют прогностической значимости (А.В. Туев и др., 2011; С.Ю. Царенок и др., 2015; А.В. Донцов и др., 2014; Г.А. Зайцева и др., 2011) [14-17].
Уровни спонтанной и стимулированной ФГА продукции IL-1P, IL-4, IL-17A, TNF-a PBMC (peripheral blood mononuclear cell) доноров без наследственной отягощенности и клинических проявлений сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) варьируют в широком диапазоне значений от 11 до 2500 pg/ml. В международных БД (2012-2017 гг.) отсутствуют сведения о продукции in vitro медиаторов воспаления PBMC больных с ИИ (Н.С. Карпунина и др., 2011; Ю.С. Лобкова и др., 1999; В.Г. Лихванцева, 2000; E. Kovacs et al., 2000; M. Monagas et al., 2009; https://www.ncbi.nlm.nih.gov) [18-23].
Поэтому представляется целесообразным исследование спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции триггерных провоспалительных «медиаторов первой волны» IL-17A, IL-1P, TNF-a и противовоспалительного IL-4 PBMC больных периферическим атеросклерозом (ПА) с исходом в ИИ.
Контингент обследованных лиц. В исследование включено 22 человека, в том числе
10 больных и 12 неродственных доноров (контрольная группа) в возрасте 30-65 лет без клинических проявлений и наследственной отягощенности ССЗ. Больные - пациенты неврологического и нейрохирургического отделений Адыгейской республиканской клинической больницы, госпитализированные по экстренным показаниям с речевыми и другими нарушениями разной степени тяжести. Диагнозы ишемического инсульта в бассейнах левой и правой срединной мозговой артерии (кардиоэмболический подтип), хронической ишемии мозга
11 стадии, инфаркта мозга (ИМ) в височно-теменной, теменной и затылочной областях и др., нозологии, развившиеся на фоне цереброваскулярного атеросклероза (ЦВА) подтверждены данными неинвазивных скрининговых и углубленных инструментальных исследований: триплексного сканирования брахеоцефальных артерий (БЦА), МРТ головного мозга, ультразвуковой допплерографии (УЗДГ), транскраниальной доплерографии (ТКДГ), КТ головного мозга, МРА интракраниальных артерий.
Материалы и методы
Образцы периферической крови с Serum Clot Activator "VACCUETTE" (Австрия) и су-пернатантов интактных и митоген-стимулированных PBMC отцентрифугированы в режиме 3000 об/мин в течение 10 мин. Аликвоты образцов сывороток и супернатантов в пластиковых пробирках на 600 мкл (Axygen) до постановки ИФА хранились при t=-70°C (MDF-U5386S, Sanyo).
Мононуклеарные клетки выделены из стабилизированной гепарином (25 ед/мл) периферической крови на одноступенчатом градиенте фиколла ("Histopaque", плотность 1.077, «ПанЭко», г. Москва), с последующим центрифугированием при 4oC и 400g в течение 30 минут. Лимфоидные клетки, образовавшие интерфазное кольцо, собраны пипеткой и трехкратно отмыты средой RPMI-1640 ("Gibco", США). После каждой отмывки в 10-кратном объеме среды клетки осаждены центрифугированием при 1000 об/мин и 4oC. Ресуспендированные в 1 мл среды, PBMC разведены рабочей культуральной средой (фосфатным солевым буфером) до концентрации 2-5-106 клеток/мл. Подсчет PBMC проведен в 25 больших квадратах камеры Горяева по формуле: N=a-50-1000, где N - общее количество PBMC в 1 мл среды, а -количество PBMC в 25 больших квадратах камеры Горяева.
Постановка спонтанной и стимулированной продукции цитокинов. При исследовании продукции цитокинов, выделенные PBMC в концентрации 2-5-106 кл/мл в среде RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной сыворотки крови телят, 80 мкг/мл гентами-цина инкубированы в 24-луночных плоскодонных планшетах в течение 18 часов в СО2-инкубаторе ("Sanyo", Япония) при 37°С и 5% СО2 (спонтанная продукция) и в присутствии ФГА (5 мкг/мл, «ПанЭко», Москва) (стимулированная продукция).
Содержание цитокинов в образцах сыворотки, культурах интактных и стимулированных ФГА PBMC доноров и больных ПА с исходом в ИИ определены в твердофазном ИФА (ELISA). Учет результатов произведен на 96-плашечном спектрофотометре ("BioRad", США) при длине волны 450 нм. Образцы сыворотки протестированы в триплетах, в расчетах использованы средние значения оптической плотности.
Результаты исследований
Концентрации ГЬ-17А, IL-1ft TNF-a и IL-4, инициирующие патофизиологические механизмы хронических воспалительных, аутоиммунных и др. заболеваний, проанализированы в образцах сыворотки, супернатантах интактных и стимулированных ФГА PBMC больных с ПА (n=10) и доноров (n=12) (табл. 1).
Таблица 1
Уровни IL-17A в сыворотке и культуре PBMC доноров и больных ПА
Биологические среды Концентрации IL-17A, pg/ml tb Pi
больные (n=10) доноры (n=12)
M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me
Сыворотка крови 1035,29±27,39 1035,29 662,25±143,75 613,50 2,55; Р1<0,05
PBMC 2,03±1,35 0,00 7,95±5,24 0,00 1,09; Р1>0,05
PBMC+ФГА 502,66±64,10 502,66 179,67±50,50 140 3,96; Р1<0,001
t ■ Р t2=37,68; Р2<0,001 t3=7,64; Р3<0,001 t4=7,81; Р4<0,001 t2=4,55; Р2<0,001 t3=3,17; Р3 <0,01 t4=37,38; Р4<0,001
Примечание: М - средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; t - критерий Стьюдента; Р - достоверность различий концентраций цитокинов: Р1 - в исследуемых биологических средах больных и доноров; Р2 - в образцах сыворотки и супернатантов интактных PBMC; Р3 - в сыворотке и супернатантах стимулированных in vitro ФГА PBMC; Р4 - в супернатантах интактных и стимулированных in vitro PBMC ФГА
Сывороточные профили доноров и больных ИИ по трем (IL-1 ft, TNF-a, IL-4) из четырех исследованных цитокинов практически не различаются и составляют 0-2 pg/ml. Однако у всех обследованных лиц обнаружены чрезвычайно высокие уровни IL-17A, статистически
значимо (/>1<0,05) превышающие концентрации медиатора в супернатантах интактных и стимулированных in vitro ФГА PBMC. У больных ИИ сывороточные концентрации IL-17A статистически значимо выше, чем у доноров, но так как интактные PBMC доноров и больных секретируют следовые количества IL-17A (табл. 1), то продуцентами IL-17A могут быть другие популяции клеток.
Стимулированные in vitro ФГА PBMC больных с ИИ в отличие от доноров синтезируют достоверно более высокие уровни IL-17A (Р1<0,05). При попарном сравнении спонтанной и индуцированной продукции цитокинов PBMC с сывороточными уровнями и между собой найдены статистически значимые различия для всех групп (Р2<0,05; Р3<0,05; Р4<0,05) (табл. 1).
Основываясь на выводах Е.А. Котиной (2013) о прогностической значимости уровней провоспалительного IL-1P в сочетании с TNF-a, коррелирующих с тяжестью состояния больных при ИИ, возможности их использования в качестве маркеров прогрессирования заболевания, нами протестированы концентрации IL-1P и TNF-a у здоровых лиц и больных ИИ (табл. 2, 3) (Е.А. Котина и др., 2013) [5].
Таблица 2
Уровни IL-lß в сыворотке и культуральной среде PBMC доноров и больных ПЛ
Биологические среды Концентрации IL-lß, pg/ml К Pl
больные (n=lG) доноры (n=l2)
M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me
Сыворотка крови 2,97±G,96 2,2B G,24±G,G5 G,21 2,B4; Pl<G,G5
PBMC 47,9G±2,92 45,65 27,5l±4,79 26,47 3,63; Pj<G,Gl
PBMC+ФГЛ 2B2,5G±93,75 3BG 29,56±4,4B 34,3B 2,69; Pl<G,G5
t ■ P nn ¿2=14,62; P2<G,GG1 t3=2,9B; P3<G,G1 t4=2,5G; P4<G,G5 t2=5,69; P2<G,GG1 t3=6,54; P3 <G,GG1 t4=G,3l; P4>G,G5
Примечание: М - средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; t - критерий Стьюдента; Р - достоверность различий концентраций цитокинов: Р1 - в исследуемых биологических средах больных и доноров; Р2 - в образцах сыворотки и супернатантов интактных PBMC; Р3 - в сыворотке и супернатантах стимулированных in vitro ФГА PBMC; Р4 - в супернатантах интактных и стимулированных in vitro PBMC ФГА
Экспериментально определенные низкие/недектируемые сывороточные уровни IL-ip у обследованных больных ИИ и доноров составляли, соответственно, 2,97±0,96 и 0,24±0,05 pg/ml (табл. 2). Несмотря на достоверность различий (Pi<0,05), концентрации цитокинов (даже при 10-кратном повышении IL-ip у больных с ИИ) не подлежат обсуждению. Поэтому нами исследованы спонтанная и стимулированная in vitro ФГА продукция IL-ip PBMC доноров и больных ИИ. Установлено, что PBMC больных ИИ в большей степени (Р1<0,05) продуцируют IL-ip и отвечают на стимуляцию ФГА.
Свободный TNF-a в образцах сыворотки доноров и больных с ИИ не детектируется, но интактные PBMC больных с ИИ по сравнению с донорами продуцируют достоверно более высокие уровни TNF-a, статистически значимо отличающиеся от сывороточных концентраций (табл. 3).
РВМС обследованных лиц сохраняют способность к активации митогенами (ФГА), но у больных ИИ отмечены достоверно (Р1<0,01) более высокие уровни спонтанной и индуцированной продукции TNF-a, что подтверждает его роль в воспалении, протекающем в области «ишемической полутени». Это согласуется с результатами D. Brea et al. (2009), T. Nakase et al. (2009), установившими, что содержание TNF-a в плазме крови у пациентов с ишемическим инсультом значительно выше, чем у здоровых лиц, коррелирует с тяжестью неврологических нарушений в остром периоде ИИ, способствует деструктивным изменениям в ткани мозга.
Однако в экспериментальных и клинических работах показаны нейропротективные свойства TNF-a, связанные с регенерацией аксонов. Повышая экспрессию молекул адгезии, TNF-a тем самым усиливает миграцию лимфоцитов в участок воспаления с последующими эффектами (G.H. Danton et al., 2003; L.C. Alvaro-González et al., 2002; D. Brea et al., 2009; T. Nakase et al., 2009; P. Cordeau et al., 2008; Ф.Р. Охтова, 2014) [24-29].
Таблица 3
Уровни TNF-a в сыворотке и культуральной среде PBMC доноров и больных ПА
Биологические среды Концентрации TNF-a, pg/ml tb P1
больные (n=10) доноры (n=12)
M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me
Сыворотка крови 0,00±0,00 0,00 1,44±0,76 0,00 1,89; P1>0,05
PBMC 190,33±34,10 206 98,75±16,93 89,2 2,41; P1<0,05
PBMC+ФГА 382±69,02 413 141,5±21,74 151,52 3,32; P1<0,01
t ■ Р nn t2=5,58; Р2<0,001 t3=5,53; Р3<0,001 t4=2,49; Р4<0,05 t2=5,74; Р2<0,001 t3=6,44; Р3<0,001 t4=1,55; Р4>0,05
Примечание: М - средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; t - критерий Стьюдента; Р - достоверность различий концентраций цитокинов: Р1 - в исследуемых биологических средах больных и доноров; Р2 - в образцах сыворотки и супернатантов интактных PBMC; Р3 - в сыворотке и супернатантах стимулированных in vitro ФГА PBMC; Р4 - в супернатантах интактных и стимулированных in vitro PBMC ФГА
Уровни противовоспалительного IL-4, подавляющего активность макрофагов и секрецию ими IL-1P и TNF-a, клеточный иммунный ответ, в сыворотке, супернатантах интактных и стимулированных ФГА PBMC не превышали 0,25 pg/ml как у больных ПА, так и у доноров (Р>0,05) (табл. 4).
Таблица 4
Уровни IL-4 в сыворотке и культуральной среде PBMC доноров и больных ПА
Биологические среды Концентрации IL-4, pg/ml tb P1
больные (n=10) доноры (n=12)
M±m, pg/ml Me M±m, pg/ml Me
Сыворотка крови 0,00±0,00 0,00 0,01±0,01 0,00 1,00; P1>0,05
PBMC 0,25±0,13 0,06 0,16±0,12 0,00 0,51; P1>0,05
PBMC+ФГА 0,13±0,05 0,00 0,16±0,11 0,00 0,25; P1>0,05
t • Р nn t2=1,92; Р2>0,05 t3=2,60; Р3<0,05 t4=0,86; Р4>0,05 t2=1,25; Р2>0,05 t3=1,36; Р3>0,05 t4=0; Р4>0,05
Примечание: М - средняя арифметическая; m - стандартная ошибка среднего; Me - медиана; t - критерий Стьюдента; Р - достоверность различий концентраций цитокинов: Р1 - в исследуемых биологических средах больных и доноров; Р2 - в образцах сыворотки и супернатантов интактных PBMC; Р3 - в сыворотке и супернатантах стимулированных in vitro ФГА PBMC; Р4 - в супернатантах интактных и стимулированных in vitro PBMC ФГА
Аналогичные результаты получены И.Н. Волошиной и др. (2011) для больных гипертонической болезнью (ГБ), перенесших ишемический инсульт. Сывороточные уровни IL-4 статистически не отличались от контроля (Р>0,05), имели низкие значения (0,2 и 0,5 pg/ml соответственно) (http://www.uniprot.org/uniprot/P05112; И.Н. Волошина и др., 2011) [30, 31].
Заключение
Высокие сывороточные концентрации ГЬ-17А, уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции ГЬ-17А, IL-1ft, TNF-a PBMC подтверждают роль провоспалительных цитокинов в патогенезе цереброваскулярного атеросклероза и могут служить дополнительным критерием в оценке течения ИИ (Р<0,05). Уровни противовоспалительного IL-4 в образцах сыворотки, супернатантах интактных и стимулированных ФГА РВМС у больных ИИ и у доноров детектируются в следовых количествах, не превышающих нижних пределов чувствительности метода (15,5 pg/ml), что может свидетельствовать о протективных свойствах исследуемого цитокина.
Выводы
1. При анализе образцов сывороток выявлены достоверно повышенные уровни IL-17A у больных ИИ по сравнению с донорами (t=2,55; Р<0,05). Низкие, недетектируемые сывороточные концентрации IL-1 ft, TNF-a, IL-4 неинформативны в диагностике, прогнозе течения и исхода ИИ.
2. В супернатантах интактных и стимулированных in vitro ФГА PBMC пациентов с ИИ в сравнении с донорами выявлены достоверно более высокие концентрации (Р<0,05) IL-17A, IL-1ß, TNF-a, что подтверждает роль медиаторов воспаления «первой волны» в патогенезе периферического атеросклероза и ИИ.
3. Концентрации противовоспалительного IL-4 в сыворотке, а также супернатантах интактных и стимулированных ФГА РВМС у больных ИИ и у доноров статистически значимо не отличаются (Р>0,05).
Примечания:
1. Интерлейкины и хемокины при остром ишемиче-ском инсульте, отягощенном и не отягощенном диабетом / А.С. Бояджян [и др.] // Цитокины и воспаление. 2008. Т. 7, № 1. С. 41-45.
2. Взаимосвязь гемодинамического профиля и функционального состояния сосудистого эндотелия у подростков с высоким и нормальным артериальным давлением / Е.Н. Андрианова [и др.] // Педиатрия. 2008. Т. 87, № 2. С. 15-18.
3. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М.: Медицина, 2001. 328 с.
4. Окислительный стресс у больных с мозговым инсультом / М.Ю. Мартынов [и др.] // Consilium Medicum. Неврология. 2010. Т. 2, № 2. С. 14-17.
5. Котина Е.А., Новикова Л.В. Иммунные реакции у пациентов с острым ишемическим инсультом // Российский семейный врач. 2013. Т. 17, № 2. С. 18-22.
6. Батищева Е.И., Кузнецов А.Н. Геморрагическая трансформация инфаркта головного мозга: клини-ко-радиологические варианты, факторы риска, прогностическое значение // Неврол. журн. 2008. Т. 13, № 5. С. 29-34.
7. Скворцова В. И. Ишемический инсульт: патогенез ишемии, терапевтические подходы // Неврологический журнал. 2001. Т. 3, № 1. С. 4-9.
8. Жданов Г.Н., Герасимова М.М. Изучение содержания провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в сыворотке крови больных в остром периоде ишемического инсульта // Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5, № 1. С. 27-30.
9. Кашаева Л.Н. Иммунологические нарушения и роль их коррекции в профилактике пневмонии при церебральных инсультах. Москва, 2005. С. 22-34.
10. Скворцова В.И. Механизмы повреждающего действия церебральной ишемии и нейропротекция // Вестник РАМН. 2003. Т. 11, № 2. С. 74-80.
11. Постникова Т.А., Доронин Б.М., Песков С.А. Особенности цитокинового спектра сыворотки крови при геморрагическом инсульте // Дни иммунологии в СПб. 2011. Т. 13, № 4-5. С. 497-498.
12. Plasma proinflammatory, and anti-inflammatory cytokine, and catecholamine concentrations as predictors of neurological outcome in acute stroke patients / J. Oto [et al.] // Journal of Anesthesia. 2008. Vol. 22, No. 3. P. 207-212.
13. Proinflammatory cytokines and early neurological worsening in ischemic stroke / N. Vila [et al.] // Stroke. 2000. Vol. 31, No. 10. P. 2325-2329.
14. Туев А.В., Карпунина Н.С. Маркеры воспаления при артериальной гипертензии и некоторых формах ишемической болезни сердца: клиническая и прогностическая значимость // Артериальная ги-пертензия. 2011. Т. 17, № 6. С. 24-46.
15. Царенок С.Ю., Горбунов В.В., Терешков П.П. Уровень интерлейкина-1р, фактора некроза опу-
References:
1. Interleukins and chemokines in acute ischemic stroke, complicated and non-complicated by diabetes / A.S. Boyadzhyan [et al.] // Cytokines and inflammation. 2008. Vol. 7, No. 1. P. 41-45.
2. Correlation of hemodynamic profile and functional state of the vascular endothelium in adolescents with high and normal arterial pressure / E.N. Andrianova [at al.] // Pediatrics. 2008. Vol. 87, No. 2. P. 15-18.
3. Gusev E.I., Skvortsova V.I. Ischemia of the brain. M.: Medicine, 2001. 328 pp.
4. Oxidative stress in patients with cerebral stroke / M.Yu. Martynov [at al.] // Consilium Medicum. Neurology. 2010. Vol. 2, No. 2. P. 14-17.
5. Kotina E.A., Novikova L.V. Immune reactions in patients with acute ischemic stroke // Russian Family Doctor. 2013. Vol. 17, No. 2. P. 18-22.
6. Batishcheva E.I., Kuznetsov A.N. Hemorrhagic transformation of cerebral infarction: clinical and radiological variants, risk factors and prognostic value // Neurol. Journal. 2008. Vol. 13, No. 5. P. 29-34.
7. Skvortsova V.I. Ischemic stroke: pathogenesis of ischemia, therapeutic approaches // Neurological Journal. 2001. Vol. 3, No. 1. P. 4-9.
8. Zhdanov G.N., Gerasimova M.M. The study of the content of proinflammatory and anti-inflammatory cy-tokines in the blood serum of patients in the acute period of ischemic stroke // Cytokines and Inflammation. 2006. Vol. 5, No. 1. P. 27-30.
9. Kashaeva L.N. Immunological disorders and the role of their correction in the prevention of pneumonia in cerebral strokes. Moscow, 2005. P. 22-34.
10. Skvortsova V.I. Mechanisms of the damaging effect of cerebral ischemia and neuroprotection // Bulletin of the RAMS. 2003. Vol. 11, No. 2. P. 74-80.
11. Postnikova T.A., Doronin B.M., Peskov S.A. Features of the cytokine spectrum of blood serum in he-morrhagic stroke // Days of Immunology in St. Petersburg. 2011. Vol. 13, No. 4-5. P. 497-498.
12. Plasma proinflammatory, and anti-inflammatory cy-tokine, and catecholamine concentrations as predictors of neurological outcome in acute stroke patients / J. Oto [et al.] // Journal of Anesthesia. 2008. Vol. 22, No. 3. P. 207-212.
13. Proinflammatory cytokines and early neurological worsening in ischemic stroke / N. Vila [et al.] // Stroke. 2000. Vol. 31, No. 10. P. 2325-2329.
14. Tuev A.V., Karpunina N.S. Markers of inflammation in arterial hypertension and some forms of ischemic heart disease: clinical and prognostic significance // Arterial Hypertension. 2011. Vol. 17. No. 6. P. 2446.
15. Tsarenok S.Yu., Gorbunov V.V., Tereshkov P.P. The
холей и их растворимых рецепторов у женщин с ишемической болезнью сердца, коморбидной с остеопорозом // Клиническая лабораторная диагностика. 2015. Т. 60, № 3. С. 64-70.
16. Донцов А.В. Маркеры субклинического воспаления при метаболическом синдроме и ишемиче-ской болезни сердца // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Сер. Медицина. Фармация. 2014. Т. 25, № 4 (175). С. 12-44.
17. Цитокиновый статус доноров крови и ее компонентов / Г.А. Зайцева [и др.] // Фундаментальные исследования. 2011. № 3. С. 23-27.
18. Цитокиновый статус пациентов с артериальной гипертензией и дисфункцией синусного узла / Н.С. Карпунина [и др.] // Медицинский альманах. 2011. № 3. С. 124-131.
19. Цитокиновый профиль как критерий оценки специфической иммунотерапии атопических аллергических заболеваний / Ю.С. Лобкова, Н.М. Калинина, О.С. Лобкова [и др.] // Иммунология. 1999. № 2. С. 35-38.
20. Лихванцева В.Г. Влияние Ронколейкина® на системную продукцию цитокинов ФНО-а, ИФН-а, ИФН-у, иЛ-8, RJI-2Rs у пациентов с поздними и генерализованной стадиями увеальной мелано-мы. «BIOTECH» Применение препарата Ронко-лейкина. СПб., 2000. 65 с.
21. Kovacs E. Serum levels of IL-1, and the production of IFN-gamma, IL-2, and IL-4 by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in cancer patients treated with Viscum album extract // Biomedicine and Pharmacotherapy. 2000. Vol. 54, No. 6. P. 305-310.
22. Effect of cocoa powder on the modulation of inflammatory biomarkers in patients at high risk of cardiovascular disease / M. Monagas [et al.] // The American Journal of Clinical Nutrition. 2009. Vol. 90, No. 5. P. 1144-1150.
23. Uniprot. URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov
24. Danton G.H., Dietrich W.D. Inflammatory mechanisms after ischemia and stroke / J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2003. No. 62. P. 127-136.
25. Alvaro-González L.C., Freijo-Guerrero M.M., Sáda-ba-Garay F. Inflammatory mechanisms, arteriosclerosis, and ischemic stroke: clinical data, and perspectives // Rev. Neurol. 2002. Vol. 35, No. 6. P. 452462.
26. Inflammatory and Neuroimmunomodulatory Changes in Acute Cerebral Ischemia / D. Brea, T. Sobrino, P. Ramos-Cabrer [et al.] // Cerebrovasc. Dis. 2009. Vol. 27, Suppl. 1. P. 48-64.
27. The impact of inflammation on the pathogenesis and prognosis of ischemic stroke / T. Nakase, T. Yama-zaki, N. Ogura [et al.] // J. Neurol. Sci. 2008. Vol. 15, No. 271 (1-2). Р. 104-109.
28. Cordeau P., Lalancette M. Inflammatory response in ischemic injury. 2008. 245 pp.
29. Охтова Ф.Р. Ишемический инсульт и показатели клеточного и гуморального иммунитета (клини-коиммунологическое исследование): дис. ... канд. мед. наук. М., 2014. C. 66-98.
30. Uniprot. URL: http://www.uniprot.org/uniprot/P05112
31. Волошина И.Н. Состояние нейроиммунной активации у больных, перенесших ишемический инсульт // Международный неврологический журнал. 2011. № 8. С. 46.
level of interleukin-ip, tumor necrosis factor and their dissolving receptors in women with ischemic heart disease, comorbid with osteoporosis // Clinical Laboratory Diagnostics. 2015. Vol. 60, No. 3. P. 6470.
16. Dontsov A.V. Markers of subclinical inflammation in the metabolic syndrome and coronary heart disease // Scientific Bulletin of Belgorod State University. Ser. Medicine. Pharmacy. 2014. Vol. 25, No. 4 (175). P. 12-44.
17. Cytokine status of blood donors and its components. G.A. Zaytseva [at al.] // Fundamental Research. 2011. No. 3. P. 23-27.
18. Cytokine status of patients with arterial hypertension and dysfunction of the sinus node / N.S. Karpunina [at al.] // Medical Almanac. 2011. No. 3. P. 124-131.
19. Cytokine profile as a criterion for evaluating specific immunotherapy of atopic allergic diseases / Yu.S. Lobkova, N.M. Kalinina, O.S. Lobkova [at al.] // Immunology. 1999. No. 2. P. 35-38.
20. Likhvantseva V.G. The effect of Roncoleukin® on the systemic production of TNF-a, IFN-a, IFN-y, IL-8, RJI-2Rs cytokines in patients with late and generalized stages of uveal melanoma. BIOTECH Application of Roncoleukin. SPb., 2000. 65 pp.
21. Kovacs E. Serum levels of IL-1, and the production of IFN-gamma, IL-2, and IL-4 by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in cancer patients treated with Viscum album extract // Biomedicine and Pharmacotherapy. 2000. Vol. 54, No. 6. P. 305-310.
22. Effect of cocoa powder on the modulation of inflammatory biomarkers in patients at high risk of cardiovascular disease / M. Monagas [et al.] // The American Journal of Clinical Nutrition. 2009. Vol. 90, No. 5. P. 1144-1150.
23. Uniprot. URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov
24. Danton G.H., Dietrich W.D. Inflammatory mechanisms after ischemia and stroke / J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2003. No. 62. P. 127-136.
25. Alvaro-González L.C., Freijo-Guerrero M.M., Sáda-ba-Garay F. Inflammatory mechanisms, arteriosclerosis, and ischemic stroke: clinical data, and perspectives // Rev. Neurol. 2002. Vol. 35, No. 6. P. 452462.
26. Inflammatory and Neuroimmunomodulatory Changes in Acute Cerebral Ischemia / D. Brea, T. Sobrino, P. Ramos-Cabrer [et al.] // Cerebrovasc. Dis. 2009. Vol. 27, Suppl. 1. P. 48-64.
27. The impact of inflammation on the pathogenesis and prognosis of ischemic stroke / T. Nakase, T. Yama-zaki, N. Ogura [et al.] // J. Neurol. Sci. 2008. Vol. 15, No. 271 (1-2). P. 104-109.
28. Cordeau P., Lalancette M. Inflammatory response in ischemic injury. 2008. 245 pp
29. Okhtova F.R. Ischemic stroke and indices of cellular and humoral immunity (clinical and immunological study): diss. for the cand. of medicine degree. M., 2014. P. 66-98.
30. Uniprot. URL: http://www.uniprot.org/uniprot/P05112
31. Voloshina I.N. The state of neuroimmune activation in post-stroke patients // International Neurological Journal. 2011. No. 8. P. 46.
