CC BY
5
ФКП-1) при 43°С достаточно и дальнейшее уточнение может мало изменить конечные результаты (в большинстве случаев так оно и есть). Выявление дополнительно Ц+КП фекального происхождения может изменить индекс в сторону увеличения на доли логарифма, редко — на 1 порядок. Однако в нашей практике встречались случаи, когда дополнительное выявление Ц+КП фекального происхождения резко меняло картину и приближало ее к санитарной ситуации, складывающейся в данном биотопе.
Выводы
1. Цитратположительные кишечные палочки могут обладать признаками, указывающими на их фекальное происхождение, и в особых случаях следует применять их идентификацию.
2. Разработана схема идентификации кишечных палочек на основании определения основных диагностических признаков в трех пробирках с дополнительным экспрессным методом измерения уреазной активности.
3. Наиболее достоверными индикаторными БГК.П после Е. coli являются клебсиеллы.
ЛИТЕРАТУРА. Bagley S., Seidler R. — Appl. environm. Microbiol., 1977, v. 33, p. 1141 — 1148. — В a s с о m b S. et al. — J. gen. Microbiol., 1971, v. 66, p. 279—295. — С 1 о s s O., Digranes A. — Acta path, raicrobiol. scand., Sect. В, 1971, v. 79, p. 673—678. — С о w a n S., Steel К. Manual for the Identification of Médical Bacteria. Cambridge, 1965, 1973. — D u f о u г А., С a -belli V. — J. Water Pollut. Contr. Fed., 1976, v. 48, p. 872—879. — Duncan D„ R a z г e 1 W. — Appl. Microbiol., 1972, v. 24, p. 933—938. — Durand A., Blaze v i с D. — Ibid., 1970, v. 19, p. 134—137. — Taylor W. — Am. J. clin. Path., 1958, v. 30, p. 361—363. —Fuscoe F. — Med. Labor. Technol., 1974, v. 31, p. 247— 252. — Wolfe M., Amsterdam D. — Appl. Microbiol., 1968, v. 16, p. 1528— 1531.
Поступила 30/XI 1977 r.
УДК 576.851.48.07:637.»
Проф. И. С. Загаевский
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА ИНДИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ГРУППЫ КИШЕЧНЫХ ПАЛОЧЕК В МОЛОКЕ И ДОИЛЬНОМ ОБОРУДОВАНИИ
Сельскохозяйственный институт, г. Белая Церковь
Сложность и многоэтапность исследований молока и молочных продуктов с целью установления степени обсемененности его кишечными палочками затрудняют проведение систематического бактериологического контроля и вынуждают ограничиваться средой Кесслер, недостаточно информативной при учете реакции.
В связи с этим актуальной задачей является разработка ускоренных методов индикации кишечных палочек, которые позволяли бы в короткий срок давать ответ о санитарном состоянии молока, молочных продуктов, доильного инвентаря и оборудования, предприятий молочной промышленности.
Для индикации в молоке и молочных продуктах кишечных палочек и определения коли-титра хорошие результаты по чувствительности, элективным, дифференцирующим и демонстративным свойствам получены с предложенной нами средой ПЖ-65 следующего состава: лактозы 20 г, фосфорнокислого калия (двузамещенного) 3 г, питательного агара (в порошке) 50 г, стерилизованной желчи крупного рогатого скота 100 мл, 1 % спиртового раствора бриллиантового зеленого 2 мл. Указанные компоненты растворяют при подогреве и помешивании в 900 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 7,4—7,5, разливают столбиком в пробирки по 5 мл, прогре-
Таблица 1
Определение коли-титра в сыром сборном молоке на средах Кесслер н ПЖ-65
Число проб молока с коли-титром
Среда
3 1 0.1 0,01 0,001 0,0001 0,00001
Кесслер 7 63 341 508 227 156 34
ПЖ-65 5 54 425 507 204 173 37
вают текучим паром при 100СС в течение 15 мин, охлаждают до 45—47°С и помещают в пробирку 1 мл исследуемого продукта или соответствующих его разведении (1:10, 1:100 и т.д.).
В результате исследовании установлено, что при наличии кишечной палочки даже в разведениях до 10"" в течение 12—14 ч происходит разрыв столбика среды, но первоначальный зеленый цвет среды не изменяется. При росте сальмонелл среда приобретает оливковый цвет без разрыва ее. При высевах стафилококков, стрептококков и других грамположительных микроорганизмов рост отсутствует.
При определении коли-титра в сыром молоке мы параллельно со средой ПЖ-65 делали высев на среду Кесслер. Полученные данные представлены в табл. 1.
Представленные в табл. 1 данные свидетельствуют о том, что по чувствительности ПЖ-65 не уступает среде Кесслер. Производственная проверка среды ПЖ-65 показала, что она обладает высокими элективными и дифференцирующими свойствами при определении коли-титра молока и молочных продуктов и значительно сокращает срок анализа.
Свойство эшернхий хорошо расти при температуре 43—44°С и относительно малая чувствительность их к небольшим концентрациям хинозола и резорцина мы использовали для индикации в молоке этих бактерий. Для этой цели предложен индикатор еНитрин-6». Входящие в его состав резорцин и хипозол подавляют молочнокислые и многие сапрофитные микроорганизмы, не препятствуя росту кишечной палочки. Другие компоненты этой смеси, а также температура 44°С благоприятствуют восстановлению эшерихнями нитрата натрия в нитрит.
Для приготовления «Нитрина-6» в 800 мл дистиллированной воды растворяют 30 г глюкозы, 20 г химически чистой натриевой селитры, 5 г фосфорнокислого калия (двухосновного), 0,8 г резорцина и 0,005 г хинозола. Объем смеси доводят дистиллированной водой до 1 л и устанавливают pH 7,5—7,4.
Таблица 2
Результаты исследования пастеризованного молока нитритной пробой и на среде
Кесслер
Исходный коли-титр сырого молока Число исследованных проб Коли-титр после пастеризации (в абсолютных цифрах)
более 3 03 1.0 0,1 0,01
0,01—0,01 22 2 5 9 4 1
3 7 8 5 0
0,01—0,001 27 0 3 10 10 2 _
0 4 12 12 1
0,001—0,0001 45 0 0 4 15 23 3
0 0 5 ц 20 3
Примечание. Числитель — показатели нитритной пробы; знаменатель—данные, полученные на среде Кесслер.
Для исследования в 6 стерильных, химически чистых пробирок вносят по 5 мл исследуемого молока, сливок или другого продукта, затем с помощью автоматической пипетки наливают по 1 мл «Нитрина-6». После взбалтывания смеси пробы выдерживают на водяной бане при 44СС от 30 мин до 4 ч. Время наблюдения отсчитывают с момента, когда температура в контрольной пробирке с продуктом достигнет 44°С. Затем через 10, 30, 40 и 50 мин, 1 и 2 ч на внутренней стенке одной из пробирок наслаивают по 3—4 капли 10% водного раствора реактива Грисса, не допуская перемешивания его с молоком. При положительной реакции на нитрит на внутренней стенке пробирки через 1—3 мин появляется розовая или красная полоска.
При исследовании обязателен контроль — молоко и реактив Грисса (без нитрина). Необходимость контроля обусловливается тем, что при скармливании коровам недоброкачественного жома или при неправильной подготовке свеклы к скармливанию в молоке может быть выявлен нитрит и без добавления нитрина. Второй контроль — нитрин без молока.
Необходимо отметить, что при обсеменении молока молочнокислыми стрептококками, сарцинами, диплококками, микрококками, бактериями мезентерикус, мегатериум, ахромобактер, кори небактериям и и многими другими микроорганизмами восстановления нитрата натрия в нитрит не происходит. Между тем указанные микробы составляют около 90% видов, обнаруживаемых в сыром молоке. Это повышает значение ннтритной пробы при индикации в молоке кишечной палочки.
Сопоставлениями показателей нитритной пробы с данными определения коли-титра сырого молока на среде Кесслер установлено, что положительная реакция на нитрит в пробах молока после 10-минутной выдержки их при температуре 44°С соответствует коли-титру 0,00001. Если красная полоска появляется в пробе через 30 мин выдержки проб молока с нитрином при 44°С, то это соответствует коли-титру около 0,0001, при выдержке 40 мин—0,001, при выдержке 50 мин—0,01, при выдержке 1 ч — 0,1, при выдержке 2 ч —1, при выдержке 4 ч —3.
Как правило, сырое охлажденное молоко 3-й группы чнстотыдает реакцию на нитрит в течение 10—30 мин, 2-й группы чистоты — через 40— 50 мин, 1-й группы чистоты — через 1—4 ч.
Для удобства число пробирок при исследовании может быть уменьшено до 1—2. При этом в градуированную пробирку наливают 10 мл исследуемого молока и 2 мл «Нитрина-6» и через указанные промежутки времени выдержки на водяной бане отливают из каждой пробы по 2 мл смеси и исследуют реактивом Грисса по указанной выше методике.
Использованные в нитритной пробе пробирки подвергают химической обработке для удаления остатков нитрита. Тщательность обработки проверяют реактивом Грисса.
Кроме ускоренного метода определения санитарного качества молока и некоторых молочных продуктов, нитритная проба может быть использована для контроля режима пастеризации молока и его санитарной оценки после пастеризации (табл. 2).
Из табл. 2 видно, что при одинаковом режиме пастеризации коли-титр пастеризованного молока прямо пропорционален его исходному обсеменению кишечной палочкой. Отмечаются лишь небольшие расхождения показателей коли-титра, определяемого на среде Кесслер и ннтритной пробой. Поэтому последняя может быть использована для внутриведомственного контроля качества молока и молочных продуктов с целью определения степени обсеменения их кишечной палочкой.
Нитритную пробу мы использовали при контроле качества санитарной обработки доильной аппаратуры на фермах и оборудования предприятий молочной промышленности. Для этого применяли «Нитрин-4». Состав его следующий: глюкозы 25 г, химически чистой натриевой селитры 5 г, фосфорнокислого натрия (двухосновного) 3 г, сернокислого магния 0,5 г, резорцина 0,5 г, хинозола 0,001 г.
Указанные компоненты растворяют в 1 л стерильного обезжиренного молока, устанавливают pH 7,2—7,3. Смесь разливают по 9 мл в химически чистые пробирки с марлевыми тампонами на стеклянных палочках, закрывают пробками и прогревают текучим паром при 100°С в течение 15 мин. Смывы с оборудования производят стерильными тампонами, увлажненными «Нитрином-4», путем обтирания 100 см2 поверхности. Если дезинфекцию осуществляют хлорсодержащими препаратами, то смывы делают 1 % стерильным раствором гипосульфита (с каждого объекта по 4 смыва). Затем тампоны вкладывают в пробирки с «Нитрином-4». После взбалтывания пробы выдерживают в термостате или на водяной бане при 44°С в течение 1—4 ч. Нитрит в смывах выявляют реактивом Грисса по указанной выше методике. Санитарное состояние доильного инвентаря и оборудования предприятий молочной промышленности оценивают в зависимости от времени обнаружения в смывах нитрита. Так, при параллельном исследовании смывов на среде Кесслер и «Нитрином-4» установлено, что отсутствие реакции на нитрит в течение 4 ч термостатирования при 44°С соответствует коли-титру 3, в течение 3 ч —1—0,1 (санитарное состояние оборудования хорошее), в течение 2 ч — 0,1—0,01 (санитарное состояние удовлетворительное), в течение 1 ч — менее 0,01 (санитарное состояние обследуемых объектов плохое). Обнаружение кишечной палочки на молочном оборудовании служит показателем фекального загрязнения и указывает на его неудовлетворительную санитарную обработку.
Выводы
1. Среда ПЖ-65 сокращает срок определения коли-титра в 2—3 раза (по сравнению с существующим ГОСТом) без снижения достоверности получаемых результатов, демонстративна при учете реакции и по чувствительности не уступает среде Кесслер.
2. Нитритная проба может служить экспресс-методом определения степени обсеменения кишечной палочкой молока и оборудования.
Поступила 7/VI 1977 г.
УДК 576.895.1.095.6:614.771
В. П. Ростиков
НОВОЕ В МЕТОДИКЕ ИЗУЧЕНИЯ ВЫЖИВАЕМОСТИ ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ
В ПОЧВЕ
Омский медицинский институт им. М. И. Калинина
Противоречивость литературных данных о сроках выживаемости яиц. гельминтов в почве, по-видимому, обусловлена не только постановкой экспериментов в различных почвенно-климатических условиях, но и применением различных методик. Изучение сроков развития и выживаемости яиц гельминтов в почве требует проведения специальных экспериментальных исследований с искусственной закладкой тест-проб на заданные глубины. Для таких опытов необходимы, с одной стороны, условия, наиболее приближенные к естественным, с другой — легкое извлечение яиц для исследования в нужные сроки.
Для закладки яиц гельминтов в почву предлагалось нанесение их на мембранные фильтры, завернутые в металлическую сетку (3. Г. Василь-кова), инокулирование в пробирки (Л. К. Зерчанинов), «стаканы» из нержавеющей проволоки (Д. В. Сергеев), коробочки из металлической сетки (Р. Н. Гагарина), капроновые мешочки (И. С. Кизевальтер и В. В. Дере-вицкая), перфорированные капсулы (Н. А. Романенко).
Для этой цели мы использовали и полиэтиленовые цилиндры длиной 70 мм и диаметром 23 мм. Естественные условия влажности и аэрации в поч-
