CC BY
10
раздел ХИМИЯ
УДК 547.821.2: 544-971.62: 577.322.23
СИНТЕЗ И ПРОТИВОГРИППОЗНАЯ АКТИВНОСТЬ АДДУКТОВ ДИЛЬСА-АЛЬДЕРА ^-ЗАМЕЩЕННЫХ 2-ПИРИДОНОВ С ^-ЗАМЕЩЕННЫМИ ИМИДАМИ МАЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ
© Е. И. Фарафонтова-Антипина1, А. В. Ковальская2, П. Р. Петрова2'3, Р. Р. Сайфутдиярова3, Д. О. Цыпышев1'3, В. А. Федорова4, А. Н. Лобов2, С. С. Борисевич2*
1Институт биохимии и генетики УФИЦ РАН Россия, Республика Башкортостан, 450054 Уфа, пр. Октября, 71.
2 Уфимский институт химии УФИЦ РАН Россия, Республика Башкортостан, 450054 Уфа, пр. Октября, 71.
3 Башкирский государственный университет Россия, Республика Башкортостан, 450076 Уфа, ул. Заки Валиди, 32.
4Научно-исследовательский институт гриппа Министерства здравоохранения Россия, 197376 Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17.
Тел: +7 (347) 235 55 60. *Email: monrel@mail.ru
В термических условиях реакции Дильса-Альдера с выходами 72-95% синтезированы ад-дукты N-замещенных 2-пиридонов и N-замещенных имидов малеиновой кислоты. Методами квантовой химии определены термодинамические и активационные параметры прямой реакции Дильса-Альдера N-замещенных 2-пиридонов и N-замещенных имидов малеиновой кислоты и ретро-реакции продуктов [4+2]-циклоприсоединения, что позволило объяснить наблюдаемую в эксперименте эндо-специфичность процесса. Проведена оценка способности синтезированных соединений ингибировать репродукцию вируса гриппа А/ Puerto Rico /8/34 (H1N1). В результате проведенного скрининга выявлены три соединения, полученные из N-метил-, N-аллил-, N-бензилпиридона-2 и N-бензилмалеинимида, с индексами селективности более 10 (SI > 10), что может служить основанием для дальнейшей оптимизации их противогриппозных свойств посредством направленных химических трансформаций.
Ключевые слова: реакция Дильса-Альдера, 2-пиридоны, квантово-химические расчеты, вирус гриппа A, противовирусная активность.
Грипп представляет собой острую респира- применению и побочные эффекты [3]. Поэтому
торную инфекцию, характеризующуюся высокой поиск эффективных средств для химиотерапии
контагиозностью и, следовательно, высокой скоро- гриппа, ориентированных на принципиально новые
стью распространения. По различным оценкам, в мишени и с новыми механизмами противовирусной
каждый эпидемический сезон только в нашей стра- активности, не теряет своей актуальности.
не заболевает 10-15% трудоспособного населения. Целью настоящего исследования является
Массовый характер ежегодно повторяющихся эпи- синтез новых ингибиторов репродукции вируса
демий гриппа, резкое повышение смертности от гриппа А на основе реакции Дильса-Альдера N-
острых респират°рных заболеваний (особенно сре- замещенных 2-пиридонов и N-замещенных имидов
ди детей и стариков), тяжелые осложнения - все малеиновой кислоты, являющихся структурными
эти причины определяют социально-экономическое аналогами некоторых производных хинолизидино-
значение эпидемий гриппа, а, следовательно, и ак-
вого алкалоида (-)-цитизина, обладающего проти-
туальность разработки средств защиты от данного
вогриппозной активностью 141. заболевания. Эффективность известных противо- ^ L 1
гриппозных препаратов ограничена тем, что из-за Экспериментальная часть
особенностей организации генома и высокой скорости мутаций вирус гриппа способен в течение Контроль за ходом реакций осуществлялся ме-
короткого промежутка времени вырабатывать к тодом ТСХ на пластинах ALUGRAM с алюминие-
ним устойчивость [1]. Так, например, с 90-х гг. на- вой годДО^й, покрытых слоем °.2 мм стандарт-
чал наблюдаться резкий рост устойчивости штам- ного силикагеля 60 (MACHEREY-NAGEL, Germa-
мов вируса гриппа к римантадину, а с 2007 по пУ). Колоночная хроматография выполнялась на
2009 гг. была выработана 100%-ая устойчивость стандартном стотгагеда 60 (°.°5-0Л мм)
сезонного вируса гриппа А(ШМ) к наиболее рас- (ММНтКГ^ЖЦ Germany). Тшшрэтуры
пространенному противогриппозному препарату плавления кристаллических веществ определены на
осельтамивиру [2]. Кроме того, многие антивирус- аппарате Boetius (PHMK 05 VEB Wagetechnik Rapi-
ные препараты имеют ряд противопоказаний к d° Radebeul).
Спектры ЯМР 1Н и 13С зарегистрированы на оборудовании ЦКП «Химия» УфИХ УФИЦ РАН (импульсный спектрометр Bruker Avance III с рабочей частотой 500.13 МГц (1H), 125.47 МГц (13C) и 50.67 МГц (15N) с использованием 5-миллиметрового датчика с Z-градиентом РАВВО при постоянной температуре образца 298 K. Химические сдвиги в спектрах ЯМР 13С, 1Н приведены в м.д. относительно сигнала внутреннего стандарта тетраметил-силана (ТМС). Двумерные гомо- и гетероядерные корреляционные спектры зарегистрированы в стандартных режимах многоимпульсных последовательностей программного обеспечения прибора.
Исходные 2-пиридоны получены по литературной методике, исходя из 2-бромпиридина [5], в качестве диенофилов использовали коммерчески доступные имиды малеиновой кислоты. Физико-химические константы аддукта 7 соответствовали литературным [6].
2-Изопропил-9-метил-3а,4,7,7а-тетрагидро-1Н-4,7-(эпииминометано)изоивдол-1,3,8-трион (8) :
К раствору 0.5 г (4.6 ммоля) Ж-метилпири-дона 1 в 10 мл толуола добавили 0.96 г (6.9 ммоля) Ж-изопропилмалеинимида 5. Смесь кипятили с обратным холодильником, осуществляя контроль за ходом реакции методом ТСХ. После окончания реакции раствор упарили, остаток хроматографи-ровали на SiO2 (элюент CHCl3:CH3OH = 97:3). Получили 1 г продукта 8 с выходом 90%.
Т. пл. = 123-125 °С (метанол). 13C ЯМР (CDCl3), 5, м.д.: 18.9 (C2'), 18.9 (C3'), 32.3 (C1''), 40.5 (C7a), 44.1 (C1'), 45.7 (C7), 46.2 (C3a), 56.6 (C4), 131.4 (C5), 131.6 (C6), 171.3 (C8), 175.0 (C3), 175.5 (C1). 15N ЯМР (CDCl3), 5, м.д.: 113.64 (N9), 195.25 (N2).1H ЯМР (CDCl3), 5, м.д. (J, Гц): 1.29 (д, 3H, 3J = 7.0, H-2'), 1.29 (д, 3H, 3J = 7.0, H-3'), 2.94 (с, 3H, H-1''), 3.18 (дд, 1H, 3J7a-3a = 8.0, 3J7a-7 = 3.4, H-7a), 3.38 (дд, 1H, 3J3a-7a = 8.0, 3J3a-4 = 4.1, H-3a), 3.95 (ддд, 1H, 3J7-6 = 5.7, 3J7-7a = 3.4, 4J7-5 = 1.8, H-7), 4.24 (м, 1H, 3J = 7.0, H-1'), 4.54 (ддд, 1H, 3J4-5 = 5.4, 3J4-3a = 4.1, 4J4-6 = 1.8, H-4), 6.39 (ддд, 1H, 3J6-5 = 7.6, 3J6-7 = 5.7, 4J6-4 = 1.8, H-6), 6.44 (ддд, 1H, 3J5-6 = 7.6, 3J5-4 = 5.4, 4J5-7 = 1.8, H-5).
2-Бензил-9-метил-3а,4,7,7а-тетрагидро-1Н-4,7-(эпииминометано)изоиндол-1,3,8-трион (9):
Получили из 0.5 г (4.6 ммоля) Ж-метилпи-ридона 1 и 1.3 г (6.9 ммоля) Ж-бензилмалеинимида 6 по методике для соединения 8. Получили 1.2 г продукта 9 с выходом 85%.
Т. пл. = 170-171 °С (метанол). 13C ЯМР (CDCl3), 5, м.д.: 32.3 (C1''), 40.8 (C7a), 42.6 (C1'), 45.5 (C7), 46.5 (C3a), 56.5 (C4), 128.1 (C5'), 128.6 (C4'(6')), 128.8 (C3'(7')), 131.4 (C5), 131.6 (C6), 135.2 (C2'), 171.2 (C8), 174.6 (C3), 175.2 (C1). 15N ЯМР (CDCl3), 5, м.д.: 113.09 (N9), 187.92 (N2). 1H ЯМР (CDCl3), 5, м.д. (J, Гц): 2.92 (с, 3H, H-1''), 3.25 (дд,
1Н, 3./7а_3а = 8.0, ^ = 3.4, Н-7а), 3.45 (дд, 1Н, 3У3а.7а = 8.0, 3./3а-4 = 4.1, Н-3а), 3.94 (ддд, 1Н, ^ = 5.1, ! 1а = 3.4, 437.ъ = 1.8, Н-1), 4.52 (ддд, 1Н, ЪJA_Ъ = 5.4, 3а = 4.1, 4J4-6 = 1.8, Н-4), 4.54 (с, 2Н, Н-1'), 6.20 (ддд, 1Н, ^ = 7.6, ! = 5.7, %4 = 1.8, Н-6), 6.25 (ддд, 1Н, 3./5-6 = 7.6, = 5.4, ^^ = 1.8, Н-5), 7.29 (м, 5Н, Н-РИ).
9-Аллил-2-фенил-3а,4,7,7а-тетрагидро-Ш-4,7-(эпииминометано)изоиндол-1,3,8-трион (10):
Получили из 0.5 г (3.7 ммоля) Ж-аллилпи-ридона 2 и 0.96 г (5.6 ммоля) Ж-фенилмалеиними-да 1 по методике для соединения 8. Получили 0.91 г продукта 10 с выходом 80%.
Аморфное вещество. 13С ЯМР (ДМСО-а6), 5, м.д.: 40.7 (С7а), 45.4 (С7), 46.2 (С1''), 46.4 (С3а), 53.7 (С4), 117.9 (С3''), 126.7 (С2'(6')), 128.7 (С4'), 129.0 (С3'(5')), 130.9 (С6), 131.7 (С1'), 132.7 (С5), 132.7 (С2''), 170.5 (С8), 174.5 (С3), 175.3 (С1). ^ ЯМР (ДМСО-а6), 5, м.д.: 124.28 (N9), 193.25 (N2). 1Н ЯМР (ДМСО-а6), 5, м.д. (Л Гц): 3.50 (дд, 1Н, 3а = 8.0, 3^а-7 = 3.4, Н-7а), 3.74 (дд, 1Н, ^а = 8.0, ^3а-4 = 4.1, Н-3а), 3.78 (ддд, 1Н, ^ = 5.7, ^ = 3.4, 4J1-5 = 1.8, Н-7), 3.85 (ддт, 2J = 15.5, %А-2. = 5.8, %А-3'транс = 1.5, 4Jl"A-3''цис = 1.5, На-1''), 4.00 (ддт, 2J =
15.5, •^Г,Б-2И = 5.8, •^1,,Б-3,,транс = 1.5, •^Г,Б-3,,цис = 1.5, НБ-
1''), 4.68 (ддд, 1Н, ^ = 5.4, ^ = 4.1, ^ = 1.8, Н-4), 5.20 (дкв, ^^3„1транс-2" = 17.7, ^"транс-ГА = 1.5,
•^"транс-ГБ = 1.5, Нтранс-3 ), 5.20 (ДК^ •^3мцис-2м = 10.1,
•^"цис-ГА = 1.5, ^"цис-ГБ = 1.5, Нцис-3 ), 5.73 (ДДT, J2,,-
= 17.7, ^2"-3„цис = 10.1, ^"-ГА = 5.8, Л'-ГВ =
3'Ч:транс
5.8, Н-2"), 6.55 (ддд, 1Н, ^ = 7.6, 3J6-1 = 5.7, = 1.8, Н-6); 6.65 (ддд, 1Н, ЪJ5.6 = 7.6, ?Ч5.4 = 5.4, ^ = 1.8, Н-5), 7.14 (д, %(в)-у(5') = 8.2, Н-2'(6')), 7.44 (т, ^(зо = 8.2, Н-4"), 7.49 (т, 3J3,(5,)-2,(6,) = 8.2, ъJъ,iУ).4, = 8.2, Н-3,(5,)).
9-Аллил-2-изопропил-3а,4,7,7а-тетрагидро-1Н-4,7-(эпиминометано)изоиндол-1,3,8-трион (11):
Получили из 0.5 г (3.7 ммоля) Ж-аллилпи-ридона 2 и 0.77 г (5.6 ммоля) Ж-изопропилма-леинимида 5 по методике для соединения 8. Получили 0.88 г продукта 11 с выходом 70%.
Т. пл. = 120 °С (хлороформ). 13С ЯМР (ДМСО-а6), 5, м.д.: 18.5 (С2'), 18.6 (С3'), 40.0 (С7а), 42.9 (С1'), 45.3 (С7), 45.9 (С3а), 46.2 (С1"), 53.7 (С4), 117.9 (С3М), 130.6 (С6), 132.4 (С5), 132.8 (С2"), 170.6 (С8), 175.4 (С3), 176.1 (С1). ^ ЯМР (ДМТО-а6), 5, м.д.: 124.16 (N9), 193.45 (N2). 1Н ЯМР (ДМТО-а6), 5, м.д. (I, Гц): 1.19 (д, 3Н, %-г = 6.9, Н-2'), 1.20 (д, 3Н, %_г = 6.9, Н-3'), 3.25 (дд, 1Н, 3J1л.3л = 8.0, ^ = 3.5, Н-7а), 3.50 (дд, 1Н, 3J3a-1a = 8.0, 3!3а-4 = 4.2, Н-3а), 3.66 (ддд, 1Н, ^^ = 5.8, ^^ = 3.5, = 1.8, Н-7), 3.81 (ддт, 2! = 15.5, ^„а-г = 5.8, 4JrA-3>анс = 1.5, 4!гА-3"цис = 1.5, На-Г,), 3.95 (ддт, 2! = 15.5, ^„б-г
= 5.8, ^1"Б-3,'транс = 1.5, ^"Б^цис = 1.5, HБ-1"), 4.09
(септ, 1Н, %_2, = 6.9, ^.у = 6.9, Н-1'), 4.56 (ддд, 1Н, 3J4-5 = 5.4, 3!4-3а = 4.2, 4J4-6 = 1.8, Н-4), 5.17 (дкв,
3J3
3''транс-2''
= 17.7, 4J3
1анс-1''А
= 1.5, 4J3
Нгранс-3'^ 5.17 (дKB, 3./3''цис-2и = 10.1, 4./3"цис-1мА = 1.5, ^3мцис-ГВ = 1.5, Hцис-3M), 5.69 (ДДт, «^2''-3''транс = 17.7,
3''транс-1''В
= 1.5,
3./2''-з''цис = 10.1, ^"-га = 5.8, ^ч-в = 5.8, Н-2''), 6.39 (ддд, 1Н, 316-5 = 7.6, ъ167 = 5.8, 4J6-4 = 1.8, Н-6), 6.49 (ддд, 1Н, 315-6 = 7.6, 315-4 = 5.4, = 1.8, Н-5).
9-Аллил-2-бензил-3а,4,7,7а-тетрагвдро-1Я-4,7-(эриминометано)изоиндол-1,3,8-трион (12):
Получили из 0.5 г (3.7 ммоля) Ж-аллилпиридона 2 и 1 г (5.6 ммоля) Ж-бензилмалеинимида 6 по методике для соединения 8. Получили 1 г продукта 12 с выходом 88%.
Т. пл. = 129-130 °С (хлороформ). 13С ЯМР (СБС13), 5, м.д.: 40.9 (С7а), 42.6 (С1'), 45.8 (С7), 46.8 (С3а), 47.2 (С1''), 53.7 (С4), 119.3 (С3''), 128.1 (С5'), 128.6 (С3'(7')), 128.8 (С4'(6')), 131.5 (С6), 131.8 (С5), 132.0 (С2''), 135.2 (С2'), 170.8 (С8), 174.6 (С3), 175.2 (С1). ^ ЯМР (СБС13), 5, м.д.: 123.42 (N9), 187.97 (N2). 1Н ЯМР (СБС13), 5, м.д. (I, Гц): 3.27 (дд, 1Н, 317а-3а = 8.0, 317а-7 = 3.4, Н-7а), 3.40 (дд, 1Н,
J
= 8.0, 3J3a-4 = 4.1, H-3a), 3.78 (ддт, 2J = 15.5,
4
3а-7а
11,,А-2П = 5.8, •11,,А-3,,транс = 1.5, •11,,А-3,,цис = 1.5, HA-1''),
3.97 (ддд, 1Н, 317-6 = 5.7, 317-7а = 3.4, 417-5 = 1.8, Н-7), 4.06 (ддт, 21 = 15.5, 31Гв-2- = 5.8, 41Гв-3>анс = 1.5, 11''в-3''цис = 1.5, Нв-1''), 4.54 (с, 2Н, Н-1'); 4.57 (ддд, 1Н, 314-5 = 5.4, 314-3а = 4.1, 414-6 = 1.8, Н-4), 5.21 (дкв,
•13,,транс-2и = 16.7, •13,,транс-1 ''А = 1.5, •13,,транс-1 ''В = 1.5, Нтранс-3''); 5.23 ^К^ •13"цис-2'' = 10.5, -^"цис-ГА = 1.5, •^''цис-ГВ = 1.5, Hцис-3''), 5.65 (ДДT, 12и-3''транс = 16.7,
^12''-3''цис = 10.5, 312Ч,'А = 5.8, 312'-Г'в = 5.8, Н-2''), 6.20 (ддд, 1Н, 316-5 = 7.6, 316-7 = 5.7, 416-4 = 1.8, Н-6), 6.25 (ддд, 1Н, 315-6 = 7.6, 3!5-4 = 5.4, 415-7 = 1.8, Н-5); 7.287.29 (м, 5Н, Н-Аг).
9-Бензил-2-фенил-3а,4,7,7а-терагвдро-1Н-4,7-(эпиминометано)изоиндол-1,3,8-трион (13):
Получили из 0.5 г (2.7 ммоля) Ж-бензил-пиридона 3 и 0.7 г (4.1 ммоля) Ж-фенилмалеи-нимида 4 по методике для соединения 8. Получили 0.92 г продукта 13 с выходом 95%.
Аморфное вещество. 13С ЯМР (СБС13), 5, м.д.: 41.1 (С7а), 46.1 (С7), 46.8 (С3а), 48.2 (С1''), 54.1 (С4), 26.2 (С2'(6')), 128.1 (С4'), 128.2 (С3''(7'')), 128.9 (С4''(6'')), 129.0 (С5''), 129.2 (С3'(5')), 131.3 (С1'), 131.3 (С6), 132.3 (С5), 135.9 (С2''), 170.7 (С8), 173.9 (С3), 174.5 (С1). ^ ЯМР (СБС13), 5, м.д.: 127.34 (N9), 193.59 (N2). 1Н ЯМР (СБС13), 5, м.д. (I, Гц): 3.39 (дд, 1Н, 313а-7а = 8.0, ^ = 4.1, Н-3а), 3.44 (дд, 1Н, ^17а-3а = 8.0, 317а-7 = 3.4, Н-7а), 4.14 (ддд, 1Н, 317-6 = 5.7, 317-7а = 3.4, 417-5 = 1.8, Н-7), 4.44 (д, 1Н, 21 = 14.8, НА-1''), 4.62 (ддд, 1Н, 314-5 = 5.4, 314-3а = 4.1, 4146 = 1.8, Н-4), 4.64 (д, 1Н, 21 = 14.8, НВ-1''), 6.44 (ддд, 1Н, 315-6 = 7.6, 315-4 = 5.4, 415-7 = 1.8, Н-5), 6.49 (ддд, 1Н, 316-5 = 7.6, 1 = 5.7, 416-4 = 1.8, Н-6), 7.10 (д, 2Н,
J
2'(6')-3'(5')
= 7.7, H-2'(6')), 7.21 (д, 2H, J
3"(7")-4"(6")
= 7.6,
H-3''(7'')), 7.31 (т, 1H, J 3(50 = 7.7, H-4'), 7.33 (т, 2H
J
4"(6")- 3''(7'') ■
'(5') '
= 7.6, 3J4"(6")-5" = 7.6, H-4"(6'')), 7.37 (т, 1H,
3J
5''-4''(6'')
= 7.6, H-5''), 7.42 (т, 2H, 3J
3'(5')-2'(6')
= 7.7,J
3'(5')-
4 = 7.7, H-3'(5')).
9-Бензил-2-изопропил-3а,4,7,7а-терагидро-1.0-4'7-(эпиминометано)изоиндол-1'3'8-трион (14):
Получили из 0.5 г (2.7 ммоля) Ж-бензилпи-ридона 3 и 0.56 г (4.1 ммоля) Ж-изопропилма-леинимида 5 по методике для соединения 8. Получили 0.7 г продукта 14 с выходом 80%.
Т. пл. = 200 °С (хлороформ). 13С ЯМР (СБСЬ), 5, м.д.: 18.9 (С2'), 18.9 (С3'), 40.6 (С7а), 44.0 (С1'), 45.9 (С7), 46.4 (С3а), 48.3 (С1''), 54.0 (С4), 128.0 (С5''),128.2 (С3''(7'')), 128.9 (С4''(6'')), 131.0 (С6), 132.0 (С5), 135.9 (С2''), 170.9 (С8), 175.0 (С3), 175.5 (С1). ^ ЯМР (СБС13), 5, м.д.: 127.52 (N9), 195.18 (N2). 1Н ЯМР (СБС13), 5, м.д. (I, Гц): 1.25 (д, 3Н, 31 = 7.0, Н-2'), 1.25 (д, 3Н, I = 7.0, Н-3'), 3.13 (дд, 1Н, 313а-7а = 8.0, 13а-4 = 4.2, Н-3а), 3.20 (дд, 1Н, ^17а-3а = 8.0, 317а-7 = 3.4, Н-7а), 4.03 (ддд, 1Н, ъ11.6 = 5.7, = 3.4, 417-5 = 1.8, Н-7), 4.20 (м, 1Н, I = 7.0, Н-1'), 4.41 (д, 1Н, 21= 14.9, НА-1''), 4.50 (ддд, 1Н, 314-5 = 5.4, 314-3а = 4.2, 414-6 = 1.8, Н-4), 4.60 (д, 1Н, 21 = 14.9, НВ-1''), 6.30 (ддд, 1Н, 315-6 = 7.6, 315-4 = 5.4, 415-7 = 1.8, Н-5), 6.36 (ддд, 1Н, 316-5 = 7.6, 316-7 = 5.7, 416-4 = 1.8, Н-6), 7.19 (д, 2Н, %'(Гу4''Ю = 8.2, Н-3''(Т')), 7.31 (т, 1Н, ^15"-4''(6") = 8.2, Н-5''), 7.33 (т, 2Н, ^^(т = 8.2, 314'(6'')-5'' = 8.2, Н-4''(6'')).
2,9-Дибензил-3а,4,7,7а-тетрагидро-1Н-4,7-(эпиминометано)изоиндол-1,3,8-трион (15):
Получили из 0.5 г (2.7 ммоля) Ж-бензил-пиридона 3 и 0.76 г (4.1 ммоля) Ж-бензилма-леинимида 6 по методике для соединения 8. Получили 0.96 г продукта 15 с выходом 95%.
Аморфное вещество. 13С ЯМР (СБС13), 5, м.д.: 41.0 (С7а), 42.6 (С1'), 45.9 (С7), 46.71 (С3а), 48.3 (С1''), 53.9 (С4), 128.1 (С5''), 128.1 (C3''(1'')), 128.4 (С5'), 128.5 (С4'(6')), 128. 8 (С3'(7')), 128.9 (С4''(6'')), 131.0 (С6), 132.0 (С5), 135.2 (С2'), 135.9 (С2''), 170.8 (С8), 174.5 (С3), 175.1 (С1). ^ ЯМР (СБС13), 5, м.д.: 128.02 (N9), 188.86 (N2). 1Н ЯМР (СБС13), 5, м.д. (I, Гц): 3.20 (дд, 1Н, ^ = 8.0, ^ = 4.1, Н-3а), 3.26 (дд, 1Н, 317а-3а = 8.0, ^ = 3.4, Н-7а), 4.01 (ддд, 1Н, 317-6 = 5.7, 317-7а = 3.4, 417-5 = 1.8, Н-7), 4.37 (д, 1Н, 21 = 14.8, НА-1''), 4.49 (ддд, 1Н, 314-5 = 5.4, 314-3а = 4.1, 414-6 = 1.8, Н-4), 4.49 (с, 2Н, Н-1'), 4.59 (д, 1Н, 21 = 14.8, НВ-1''), 6.11 (ддд, 1Н, 315-6 = 7.6, 315-4 = 5.4, 415-7 = 1.8, Н-5), 6.16 (ддд, 1Н, 316-5 = 7.6, 316-7 =
43
5.7, 4J6-4 = 1.8, H-6), 7.16 (д, 2H, J
3''(7'')-4''(6'')
= 8.2, H-
да
3''(7")), 7.29 (м, 5H, H-Ph'), 7.32 (т, 2H, Ь^-уц») -8.2, 3Ь4и(6и)-5" - 8.2, H-4''(6'')), 7.37 (т, 1H, 3J5MW -8.2, H-5'').
Метод расчета. Квантово-химические расчеты выполнены с помощью программного комплекса GAUSSIAN 09 [7]. Процедуру оптимизации молекулярной структуры реагентов, продуктов и переходных состояний реакции Дильса-Альдера проводили, используя наиболее популярный DFT-метод расчета B3LYP [8] с базисным набором 6-311+G(d,p) [9-10]. Ранее было показано [11], что использование данного метода расчета для оценки активационных и термодинамических параметров реакции Дильса-Альдера позволяет получить результаты, хорошо согласующиеся с экспериментальными данными.
Все расчеты проводили с учетом условий эксперимента - растворитель толуол (модель поляризованного континуума [12]), температура 383 K. Согласно [13] при теоретическом исследовании механизмов органических реакций, возможно, учитывать взаимодействия соединений со средой методом неспецифической сольватации.
Изучение цитотоксичности и противогриппозной активности. В исследовании противогриппозных свойств использовали штамм вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), полученный из Центра по контролю за заболеваемостью (CDC, Atlanta, USA). В качестве препарата сравнения использовали римантадин. Клетки MDCK (Madin-Darby canine kidney cell) сеяли на 96-луночные микропланшеты (Orange scientific № 5530100) по 0.2 мл в лунку и культивировали при 36 °С при 5% СО2 до образования монослоя. Вирус гриппа культивировали в 10-11-дневных развивающихся куриных эмбрионах, вводя в аллантоисную полость 1-10 ИД50/0.2 мл вируссодержащей жидкости, культивацию проводили 48 ч при +36 °С.
Для определения цитотоксичности соединений готовили серию двукратных разведений каждого из препаратов от 300 до 4 мкг/мл на среде МЕМ (Биолот, Санкт-Петербург). Клетки инкубировали в присутствии растворенных препаратов в течение 48 ч при 36 °С и 5% СО2, после чего степень деструкции клеточного монослоя оценивали при помощи микротетразолиевого теста (МТТ). С этой целью отмытые от среды клетки инкубировали 1 ч с раствором МТТ (Calbiochem №475989, 0.5 мкг/мл) в физиологическом растворе. Лунки промывали и заливали 0.1 мл DMSO, после чего оптическую плотность клеток измеряли на микропланшетном ридере Victor2 1420 (Perkin Elmer, Финляндия) при длине волны 535 нм. На основании полученных данных рассчитывали концентрацию
препарата в лунке, при которой происходит 50% деструкция клеточного монослоя (СС50).
В культуру клеток MDCK добавляли препараты, растворенные в среде MEM (PAA, Австрия) и выдерживали планшеты 1 ч при 36 °С и 5% СО2. Клеточную культуру заражали 10-кратными разведениями вируса от 10-1 до 10-6. Планшеты с вирусом и препаратами инкубировали в CO2 инкубаторе 48 ч при 36 °С и 5% СО2. По истечении срока инкубации культуральную жидкость переносили в соответствующие лунки планшетов с круглым дном и вносили равное количество 1% суспензии куриных эритроцитов. Реакцию гемагглютинации учитывали через 40 мин при комнатной температуре. За титр вируса принимали величину, противоположную десятичному логарифму максимального разведения вируса, способного вызвать полную агглютинацию эритроцитов. На основании полученных результатов рассчитывали 50% ингибирующую концентрацию (IC50) для каждого препарата, снижающую вирусную продукцию вдвое, и индекс селективности (отношение СС50 к IC50). Более подробно методики поведения эксперимента описаны в [7].
Результаты и их обсуждение
Реакцию Дильса-Альдера диенов 1-3 с дие-нофилами 4-6 (мольное соотношение 1:1.5) проводили в термическом варианте - кипячением в толуоле при 110 °С (схема 1). Контроль за ходом реакции осуществляли методом ТСХ. Продукты реакции выделяли методом колоночной хроматографии на SiO2. Строение полученных соединений устанавливали на основании данных ЯМР спектроскопии. Выходы аддуктов 7-15 приведены в табл. 1.
Схема 1
О
R1 = Me, R2 = Ph (7) R1 = Me, R2 = i-Pr (8) R1 = Me, R2 = Bn (9) R1 = AU, R2 =Ph (10) R1 = AU, R2 = i-Pr (11) R1 = AU, R2 = Bn (12) R1 = Bn, R2 = Ph (13) R1 = Bn, R2 = i-Pr (14) R1 = Bn, R2 = Bn (15)
Таблица 1
Выходы аддуктов Дильса-Альдера 7-15 (толуол 110 °С)
1 Б Б 2 Выход, %а 1 Б Б 2 Выход, %а 1 Б Б 2 Выход, %а
e M P h 83 0 ll A P h 80 3 n I P h 95
e M i -Pr 90 1 ll A i -Pr 72 4 n I i -Pr 80
e M I n 85 2 ll A I n 88 5 n I I n 95
а После колоночной хроматографии на SiO2.
взаимодействия для эндо-аддуктов 7-15.
условий эксперимента. Результаты выполненных расчетов представлены в табл. 2. Согласно полученным результатам, наблюдаемое стереоспеци-фичное образование эндо-аддуктов 7-15 обусловлено более низкой энтальпией активации прямой реакции между 2-пиридонами 1-3 и соответствующими малеинмидами 4-6. Действительно, значения активационных параметров прямой реакции образования эндо-аддуктов находятся в интервале 115.2-118.1 кДж/моль, тогда как для прямой реакции образования экзо-аддуктов этот интервал составляет 125.2-124.2 кДж/моль. Кроме того, значения энтальпии активации ретро-реакции Дильса-Альдера для экзо-аддуктов заметно выше (от 130.2 до 143.2 кДж/моль) соответствующих значений эндо-аддуктов (126.4 - 129.6 кДж/моль).
Таблица 2
Значения В3ЬУР/6-311+0((1,р) энтальпии реакций АгН° и энтальпии активации прямой (АНпр) и обратной (АНобр) реакций получения продуктов (7-15), кДж/моль
Рис. 1. Значимые ШЕ и НМВС
Согласно литературным данным [4+2]-цикло-присоединение имидов малеиновой кислоты к 2-пиридонами является эндо-селективным процессом [15]. Однако в нашем случае взаимодействие диенов 1-3 с малеинимидами 4-6 в термических условиях протекало стереоспецифично: ни в одном из проведенных экспериментов образование соответствующих экзо-аддуктов не зафиксировано. Эндо-стереохимия соединений 7-15 установлена на основании данных двумерной спектроскопии ЯМР; типичный характер NOE и НМВС взаимодействий представлен на рис. 1.
С целью оценки возможности получения экзо-изомеров аддуктов 7-15 определены термодинамические и активационные параметры прямой реакции Дильса-Альдера 2-пиридонов 1-3 и малеини-мидов 4-6 и ретро-реакции аддуктов 7-15 с учетом
№
A,ff
А ff п
Aff о
эндо экзо
-8.3 -6.9
118.1 128.3
126.4 135.3
эндо
экзо
-10.3 -8.2
119.2 134.2
129.6 142.4
эндо экзо
12.6 -8.7
117.6 130.2
130.2 138.9
10
эндо экзо
11.5 10.7
116.6 125.9
128.0 136.6
11
эндо экзо
13.7 11.6
116.8 127.6
130.5 139.2
12
эндо экзо
16.0 12.6
115.7
127.8
131.7 140.4
13
эндо экзо
12.4 11.1
115.7 125.2
128.1 136.3
14
эндо экзо
14.4 12.3
116.6 130.9
131.0 143.2
эндо экзо
16.5 14.5
115.2 127.1
131.7 141.6
7
8
9
Таблица 3
Цитотоксические и противогриппозные свойства соединений 9, 12, 15 (штамм вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34)
№ CC50' IC506 SI'
9 >300 19.6 15
12 >300 15.4 19
15 >300 9.1 33
Римантадин 240 58 6
а МТТ-тест, клетки MDCK (ATCC # CCL-34). б В отношении штамма вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). в Рассчитывали как отношение CC50/ IC50.
Высокие активационные барьеры ретро-реакции Дильса-Альдера в совокупности с положительными значениями энтальпии обратной реакции свидетельствует о, том, что протекание такого процесса маловероятно в данных условиях эксперимента. Ранее [16] было показано, что проведение реакции в условиях статического высокого давления (СВД) приводит к блокированию именно ретро-реакции Дильса-Альдера. Исходя из этого, можно сделать вывод, что проведение [4+2]-циклоприсоединения Ж-замещенных имидов ма-леиновой кислоты 4-6 к 2-пиридонам 1-3 в условиях СВД вероятнее всего, не повлияет на стереохи-мический результат процесса.
Синтезированные соединения были переданы в НИИ гриппа Министерства здравоохранения РФ для определения их способности ингибировать репродукцию вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). В опытах in vitro была изучена цитоток-сичность и противовирусная активность полученных эндо аддуктов 7-15, рассчитаны значения 50% цитотоксической концентрации (CC50), 50% виру-сингибирующей концентрации (IC50) и индекса селективности (SI) - отношения CC50 к IC50.
В результате проведенного скрининга установлено, что соединения 7-15 не проявляют цито-токсических свойств, о чем свидетельствуют значения их CC50 (для всех соединений более 300 мкг/мл). Три соединения 9, 12 и 15, эффективно ингибируют репродукцию штамма вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), их величины IC50 составляют 19.6, 15.4 и 9.1 мкг/мл соответственно (табл. 3). Индексы селективности для 9, 12, 15, рассчитанные как отношение CC50/IC50, соответственно равны 15, 19 и 33, что превосходит индекс селективности препарата сравнения римантадин (SI = 6). Это позволяет предположить, что производные 9, 12, 15 имеют иную мишень и иной механизм противогриппозного действия, отличные от препарата сравнения.
Таким образом, установлено, что среди синтезированных соединений 7-15 три аддукта - 9, 12 и 15, содержащие бензильный фрагмент в качестве заместителя R2 (схема 1), обладают выраженными противогриппозными свойствами. Выявленная закономерность между структурой и активностью 9, 12 и 15 может служить основанием для дальнейшей оптимизации их противогриппозных свойств посредством направленных химических трансформаций.
Выводы
С выходами 72-95% синтезированы аддукты Дильса-Альдера Ж-замещенных 2-пиридонов и Ж-замещенных имидов малеиновой кислоты.
На основании данных спектроскопии ЯМР и квантово-химических расчетов подтверждена эндо-специфичность процесса [4+2]-циклоприсоедине-ния данных реактантов.
Проведена оценка способности синтезированных соединений ингибировать репродукцию вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), выявлены лидирующие соединения, несущие бензильный заместитель у атома азота сукцинимидного фрагмента, с индексами селективности более 10 (SI > 10).
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РФФИ№16-34-00879-мол_а.
ЛИТЕРАТУРА
1. Furuse Y., Suzuki A., Oshitani H. Large-scale sequence analysis of M gene of influenza A viruses from different species: mechanisms for emergence and spread of amantadine resistance // Antimicrob Agents Chemother. 2009. Vol. 53. P.4457-4463.
2. Samson M., Pizzorno A., Abed Y. Boivin G. Influenza virus resistance to neuraminidase inhibitors // Antiviral Res. 2013. Vol. 98. P. 174-185.
3. Mortada M., Neuenschwander P., Tekko. S. S. Influenza and oseltamivir phosphate (Tamiflu) in infants: what you need to know // Pediatr Nurs. 2014. Vol. 40. №1. P. 16-20.
4. Tsypysheva I. P., Koval'skaya A. V., Lobov A. N., Zarubaev V. V., Karpinskaya L. A., Petrenko I. A., Nikolaeva E. A., Shtro A. A., Yunusov M. S. Search for compounds with antiviral activity among synthetic (-)-cytisine derivatives // Chemistry of Natural Compounds. 2013. V. 48. №6. P. 1042-1046.
5. Heravi M. M., Hamidi H. J. Recent advances in synthesis of 2-pyridones: a key heterocycle is revisited // Iran Chem. Soc. 2013. Vol. 10. P. 265-273.
6. Шушерина Н. П., Пилипенко В. С., Киреева О. К., Геллер Б. И., Степананц А. У. 1-Алкил-3-метил-2-пиридоны и их тиоаналоги в реакции Дисльма-Альдера с Ж-фенил-малеинимидом // Журнал органической химии. 1980. Т. 16. №11. C. 2390-2395.
7. Frisch M. J., Trucks G. W., Schlegel H. B., Scuseria G. E., Robb M. A., Cheeseman J. R., Scalmani G., Barone V., Men-nucci B., Petersson G. A., Nakatsuji H., Caricato M., Li X., Hratchian H. P., Izmaylov A. F., Bloino J., Zheng G., Sonnenberg J. L., Hada M., Ehara M., Toyota K., Fukuda R., Hase-gawa J., Ishida M., Nakajima T., Honda Y., Kitao O., Na-kai H., Vreven T., Montgomery J., J. A., Peralta J. E., Oglia-ro F., Bearpark M., Heyd J. J., Brothers E., Kudin K. N., Sta-roverov V. N., Kobayashi R., Normand J., Raghavachari K., Rendell A., Burant J. C., Iyengar S. S., Tomasi J., Cossi M., Rega N., Millam J. M., Klene M., Knox J. E., Cross J. B., Bakken V., Adamo C., Jaramillo J., Gomperts R., Strat-mann R. E., Yazyev O., Austin A. J., Cammi R., Pomelli C.,
Ochterski J. W., Martin R. L., Morokuma K., Zakrzews-ki V. G., Voth G. A., Salvador P., Dannenberg J. J., Dapprich S., Daniels A. D., Farkas Ö., Foresman J. B., Ortiz J. V., Cioslowski J., Fox D. J. Gaussian 09, Revision D. 1 // Book Gaussian 09, Revision D. 1 / Editor. - Wallingford CT: Gaussian, Inc., 2009A.
8. Becke D. Density-functional thermochemistry. III. The role of exact exchange // J. Chem. Phys. 1993. Vol. 98. P. 5648-5652.
9. McLean A. D., Chandler G. S. Contracted Gaussian-basis sets for molecular calculations. 1. 2nd row atoms, Z= 11-18 // J. Chem. Phys. 1980. Vol. 72. P. 5639-5648.
10. Raghavachari K., Trucks G. W. Highly correlated systems: Excitation energies of first row transition metals Sc-Cu. // J. Chem. Phys. 1989. Vol. 91. P. 1062-1065.
11. Borisevich S. S., Tsypysheva I. P., Kovalskaya A. V., Khursan S. L. Thermodynamically controlled Diesl-Alder reaction of 12-N-methylcytisine: A DFT study // J. Theor. Comput. Chem. 2014. Vol. 13. №6. P. 1450048 (1-13).
12. Tomasi J., Mennucci B., Cammi R. Quantum mechanical continuum solvation models // Chem. Rev. 2005. Vol. 105. P. 2999-3093.
13. Ильина М. Г., Хамитов Э. М., Мустафин А. Г. Проблема учета сольватации при теоретической оценки газофазной кислотности урацила и его производных // Вестник Баш-ГУ. 2017. Т. 22. №3. С. 644-648.
14. Zarubaev V. V., Golod E. L., Anfimov P. M., Shtro A. A., Saraev V. V., Gavrilov A. S., Logvinov A. V., Kiselev O. I. Synthesis and anti-viral activity of azolo-adamantanes against influenza A virus // Bioorg. Med. Chem. 2010. Vol. 8. P. 839-848.
15. Afarinkia K., Vinader V., Nelson T. D., Posner G. H. Diels-Alder Cycloadditions of 2-Pyrones and 2-Pyridones // Tetrahedron. 1992. Vol. 48. №42. P. 9111-9171.
16. Tsypysheva I. P., Borisevich S. S., Lobov A. N., Kovalskaya A. V., Shamukaev V. V., Safiullin R. L., Khursan S. L. The Inversion of Diastereoselectivity under High Pressure Conditions: Diels-Alder Reaction of 12-W-substituted Derivatives of (-)-Cytisine with W-Phenylmaleimide // Tetrahedron: Asymmetry. 2015. Vol. 26. P. 732-737.
Поступила в редакцию 25.12.2017 г.
SYNTHESIS AND ANTIFLU ACTIVITY OF DIELS-ALDER ADDUCTS OF ^-SUBSTITUTED 2-PYRIDONES WHITH ^-SUBSTITUTED MALEIMIDES
© E. I. Farafontova-Antipina1, A. V. Koval'skaya2, P. R. Petrova2"3, R. R. Sayfutdiyarova3, D. O. Tsypyshev1'3, V. A. Fedorova4, A. N. Lobov2, S. S. Borisevich2*
1Institute of Biochemistry and Genetics of Ufa Science Center of RAS 71 Oktyabrya Avenue, 450054 Ufa, Republic of Bashkortostan, Russia.
2Ufa Institute of Chemistry of RAS 71 Oktyabrya Avenue, 450054 Ufa, Republic of Bashkortostan, Russia.
3Bashkir State University 32 Zaki Validi Street, 450076 Ufa, Republic of Bashkortostan, Russia.
4Research Institute of Influenza 15/17 Professor Popov Street, 197376 Saint Petersburg, Russia.
Phone: +7 (347) 235 55 60.
*Email: monrel@mail.ru
The adducts of N-substituted 2-pyridones and N-substituted maleimides were synthesized under thermal conditions of Diels-Alder reaction with yields ranging from 72 to 95%. The thermodynamical and activation parameters of direct Diels-Alder reaction of both N-substituted 2-pyridones and N-substituted maleimides to retro reaction of [4+2]-cycloaddition was determined. Calculated results allow explaining of endo specificity of the process, observed in the experiment. Ability of synthesized compounds to inhibit the reproduction of influenza virus was evaluated. Three compounds obtained from N-methyl-, N-allyl-, N-benzylpyridone-2 and N-benzylmaleimide with the indexes of selectivity more than 10 (SI > 10) were identified on the base of screening results. Three derivatives obtained from N-methyl-, N-allyl-, N-benzylpyridone-2 and N-benzylmaleimide were identified as the leading compounds with the selectivity indexes more than 10 (SI > 10). This fact may become the basis for further optimization of their anti-influenza properties by targeted chemical transformations.
Keywords: Diels-Alder reaction, 2-pyridones, quantum-chemical calculations, virus of influenza A, antiviral activity.
Published in Russian. Do not hesitate to contact us at bulletin_bsu@mail.ru if you need translation of the article.
REFERENCES
1. Furuse Y., Suzuki A., Oshitani H. Large-scale sequence analysis of M gene of influenza A viruses from different species: mechanisms for emergence and spread of amantadine resistance. Antimicrob Agents Chemother. 2009. Vol. 53. Pp. 4457-4463.
2. Samson M., Pizzorno A., Abed Y. Boivin G. Influenza virus resistance to neuraminidase inhibitors. Antiviral Res. 2013. Vol. 98. Pp. 174-185.
3. Mortada M., Neuenschwander P., Tekko. S. S. Influenza and oseltamivir phosphate (Tamiflu) in infants: what you need to know. Pediatr Nurs. 2014. Vol. 40. No. 1. Pp. 16-20.
4. Tsypysheva I. P., Koval'skaya A. V., Lobov A. N., Zarubaev V. V., Karpinskaya L. A., Petrenko I. A., Nikolaeva E. A., Shtro A. A., Yu-nusov M. S. Search for compounds with antiviral activity among synthetic (-)-cytisine derivatives. Chemistry of Natural Compounds. 2013. Vol. 48. No. 6. Pp. 1042-1046.
5. Heravi M. M., Hamidi H. J. Recent advances in synthesis of 2-pyridones: a key heterocycle is revisited. Iran Chem. Soc. 2013. Vol. 10. Pp. 265-273.
6. Shusherina N. P., Pilipenko V. S., Kireeva O. K., Geller B. I., Stepanants A. U. 1-Alkil-3-metil-2-piridony i ikh tioanalogi v reaktsii Disl'ma-Al'dera s N-fenilmaleinimidom. Zhurnal organicheskoi khimii. 1980. Vol. 16. No. 11. Pp. 2390-2395.
7. Frisch M. J., Trucks G. W., Schlegel H. B., Scuseria G. E., Robb M. A., Cheeseman J. R., Scalmani G., Barone V., Mennucci B., Peters-son G. A., Nakatsuji H., Caricato M., Li X., Hratchian H. P., Izmaylov A. F., Bloino J., Zheng G., Sonnenberg J. L., Hada M., Ehara M., Toyota K., Fukuda R., Hasegawa J., Ishida M., Nakajima T., Honda Y., Kitao O., Nakai H., Vreven T., Montgomery J., J. A., Peralta J. E., Ogliaro F., Bearpark M., Heyd J. J., Brothers E., Kudin K. N., Staroverov V. N., Kobayashi R., Normand J., Raghavachari K., Rendell A., Burant J. C., Iyengar S. S., Tomasi J., Cossi M., Rega N., Millam J. M., Klene M., Knox J. E., Cross J. B., Bakken V., Adamo C., Jaramillo J., Gomperts R., Stratmann R. E., Yazyev O., Austin A. J., Cammi R., Pomelli C., Ochterski J. W., Martin R. L., Moroku-ma K., Zakrzewski V. G., Voth G. A., Salvador P., Dannenberg J. J., Dapprich S., Daniels A. D., Farkas O., Foresman J. B., Ortiz J. V., Cioslowski J., Fox D. J. Gaussian 09, Revision D.1. Book Gaussian 09, Revision D.1 / Editor. - Wallingford CT: Gaussian, Inc., 2009A.
8. Becke D. Density-functional thermochemistry. III. The role of exact exchange. J. Chem. Phys. 1993. Vol. 98. Pp. 5648-5652.
9. McLean A. D., Chandler G. S. Contracted Gaussian-basis sets for molecular calculations. 1. 2nd row atoms, Z= 11-18. J. Chem. Phys. 1980. Vol. 72. Pp. 5639-5648.
10. Raghavachari K., Trucks G. W. Highly correlated systems: Excitation energies of first row transition metals Sc-Cu. J. Chem. Phys. 1989. Vol. 91. Pp. 1062-1065.
11. Borisevich S. S., Tsypysheva I. P., Kovalskaya A. V., Khursan S. L. Thermodynamically controlled Diesl-Alder reaction of 12-N-methylcytisine: A DFT study. J. Theor. Comput. Chem. 2014. Vol. 13. No. 6. Pp. 1450048 (1-13).
12. Tomasi J., Mennucci B., Cammi R. Quantum mechanical continuum solvation models. Chem. Rev. 2005. Vol. 105. Pp. 2999-3093.
13. Il'ina M. G., Khamitov E. M., Mustafin A. G. Problema ucheta sol'vatatsii pri teoreticheskoi otsenki gazofaznoi kislotnosti uratsila i ego proizvodnykh. Vestnik BashGU. 2017. Vol. 22. No. 3. Pp. 644-648.
14. Zarubaev V. V., Golod E. L., Anfimov P. M., Shtro A. A., Saraev V. V., Gavrilov A. S., Logvinov A. V., Kiselev O. I. Synthesis and antiviral activity of azolo-adamantanes against influenza A virus. Bioorg. Med. Chem. 2010. Vol. 8. Pp. 839-848.
15. Afarinkia K., Vinader V., Nelson T. D., Posner G. H. Diels-Alder Cycloadditions of 2-Pyrones and 2-Pyridones. Tetrahedron. 1992. Vol. 48. No. 42. Pp. 9111-9171.
16. Tsypysheva I. P., Borisevich S. S., Lobov A. N., Koval-skaya A. V., Shamukaev V. V., Safiullin R. L., Khursan S. L. The Inversion of Diastereoselectivity under High Pressure Conditions: Diels-Alder Reaction of 12-N-substituted Derivatives of (-)-Cytisine with N-Phenylmaleimide. Tetrahedron: Asymmetry. 2015. Vol. 26. Pp. 732-737.
Received 25.12.2017.
