CC BY
108
АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
© Е. С. Михайлин, т. Э. Иващенко, РОль ПОлИМОРФНЬ1Х ВАРИАНтОВ гЕНА Э. К. Айламазян HLA-G ПЛОДА В РАЗВИТИИ ГЕСТОЗА У
МАтЕРИ
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, Санкт-Петербург
УДК: 618.3-008.6+618.33]-07:575
■ Целью настоящей работы являлась оценка влияния полиморфизма гена HLA-G беременной и ее плода на развитии гестоза. Методом ПЦР исследован Del/Ins полиморфизм 14 п. н. в 8 экзоне гена HLA-G. Обследовано
76 женщин и их новорожденных детей с чистым гестозом различной степени тяжести. Группу сравнения составили 69 здоровых женщин и их новорожденных. Анализ частот аллелей выявил некоторое повышение частоты аллели I у женщин с гестозом по сравнению с группой здоровых женщин (52,1 % и 47,9 % соответственно). Частота аллели I у плодов от беременностей с гестозом также была несколько выше, чем у плодов группы сравнения (49,3 % и 50,7 %). Анализ частот генотипов у матерей в различных группах не выявил значимых различий. При анализе распределения генотипов у плодов зарегистрировано повышение частоты гомозигот Ins/Ins у плодов от беременностей с гестозом (24,28 %) по сравнению с таковой у плодов от здоровых женщин (16,92 %). Частоты сочетаний генотипов, при которых плод имел генотип Ins/Ins, при гестозе были выше, чем в группе сравнения (15,87 % против 9,68 % для сочетания Ins/Ins + Ins/Ins и 9,52 % против 6,45 % для сочетания Ins/Del + Ins/Ins). Таким образом, мы полагаем, что генотип плода Ins/Ins гена HLA-G может являться фактором риска развития гестоза у беременной.
■ Ключевые слова: гестоз; имплантация; гены плода; HLA-G.
Введение
Гестоз — это сложный нейрогуморальный патологический процесс, проявляющийся различными расстройствами функции центральной и вегетативной нервной, сердечнососудистой и эндокринной систем, а также нарушением ряда обменных процессов, иммунного ответа и других функций организма беременной [1]. Данная патология занимает лидирующие позиции в осложнениях беременности и остается одной из наиболее актуальных проблем современного акушерства. В последние годы его частота во всем мире увеличивается и составляет от 7 до 22 % [2].
В России, при наблюдающемся в последние десятилетия снижении абсолютного числа родов, частота данного заболевания растет из года в год и достигает 16-22 % [3]. Несмотря на современные достижения в диагностике и лечении гестоза, в развивающихся странах около 40 % смертей беременных и 70 % мертворождений возникают в результате гестоза, а перинатальная смертность в 3-4 раза превышает смертность в группе здоровых женщин.
Этиология гестоза до настоящего времени остается невыясненной, однако не вызывает сомнений связь данной патологии с беременностью: гестоз появляется во время беременности, тяжесть его симптомов нарастает по мере прогрессирования беременности и исчезает после ее завершения.
Многочисленные исследования указывают на то, что ге-стоз является генетически обусловленным заболеванием. Согласно современным научным знаниям, генетическая составляющая болезни предполагает влияние как материнских, так и фетальных, и отцовских генов. В настоящее время при изучении генетической предрасположенности к данной патологии, основное число работ — это исследование роли полиморфных вариантов генов матери в развитии гестоза. В то же время роль полиморфизма генов плода в развитии заболевания изучена недостаточно.
Общеизвестно, что в генезе развития гестоза важную роль играет нарушение инвазии трофобласта. При этом трофобласт несет на себе HLA антигены отцовского и материнского происхождения, а степень инвазии трофобласта в слизистую оболочку матки, помимо прочих факторов, определяется и уровнем экспрессии генов системы HLA. Также велико влияние HLA антигенов на становление иммуносупрессорного статуса у матери, при недоразвитии которого создаются предпосылки для отторжения плода как чужеродного организма.
Система генов главного комплекса гистосовместимости человека (Major Histocompatibility Complex — MHC, у человека это лейкоцитарные антигены — Human Leukocyte Antygens —
HLA) — это одна из наиболее полиморфных генетических систем, осуществляющих контроль за взаимодействием всех иммунокомпетентных клеток организма, распознавание своих и чужеродных клеток, запуск и реализацию иммунного ответа и, в целом, обеспечивает выживание человека как вида в условиях экзогенной и эндогенной агрессии.
Одной из особенностей строения этой системы является полигенность — наличие нескольких неаллельных генов, белковые продукты которых похожи в структурном отношении и выполняют идентичные функции. Другим немаловажным свойством выступает экстремальный аллельный полиморфизм комплекса генов HLА.
Молекулы антигенов HLA обеспечивают презентацию иммунодоминантных пептидов, против которых будет развиваться иммунный ответ. Однако физиологическая функция аллелей и кодируемых ими HLA-антигенов, относящихся к различным классам HLA, в значительной степени различается.
Выделяют 2 класса антигенов системы HLA. Антигены HLA I класса экспрессируются практически во всех клетках организма и осуществляют взаимодействие с Т-киллером при помощи корецептора CD8, в результате чего происходит индукция Т-киллера против иммунодоминант-ного пептида, экспонированного на поверхности клеток-мишеней. Выделяют классические: антигены HLA-A, HLA-В и HLA-C и неклассические: ^А-Е, -Н, -Т.
Антигены II класса кодируют гены локуса HLA ^Р, -DQ и -DR, обеспечивающие взаимодействие антиген-презентирующей клетки с Т-хелпером при помощи корецептора CD4, что ведет к формированию популяции ТЫ- и ТЪ2-клеток.
Зигота, возникающая в результате слияния генетического материала двух гамет, обычно в значительной степени отличается генетически от материнского организма и обладает антигенами отцовского происхождения, являясь по существу по-луаллотрансплантатом, в соответствии с иммунологическими законами должна быть отторгнута.
Наиболее пристальное внимание исследователей привлекают неклассические HLA-антигены: HLA-C, HLA-E и HLA-G, поскольку именно они в основном экспрессируются клетками трофобла-ста. Особое значение в работах, связанных с ге-стозом и другими патологиями при беременности, придается изучению HLA-G антигена. Это объясняется тем, что HLA-G может защищать клетки трофобласта от лизиса, опосредованного NK-клетками (натуральные киллеры), способствуя становлению толерантности между матерью и
плодом [16]. Наличие экспрессии HLA-G на ин-вазивном трофобласте, вероятно, имеет главное значение в защите от эффективного материнского иммунного распознавания [5, 8, 17]. Цель настоящей работы — оценить влияние полиморфных вариантов гена HLA-G беременной и ее плода на развитии гестоза.
Методы
Работа выполнена на образцах ДНК, выделенных из лейкоцитов периферической крови матери и пуповинной крови новорожденного.
Методом ПЦР исследованы частоты полиморфных вариантов гена HLA-G. Проведен анализ полиморфизма Del/Ins 14 п. о. в 8 экзоне.
Смесь для ПЦР обьемом 25 мкл включала 15 нМ каждого праймера (F: 5'-GTGATGG GCTGTTTAAAGTGTCACC-3'; R: 5-GGAAGGA ATGCAGTTCAGCATGA-3'), 67 мМ трис-HCl, рН 8,8, 16,6 мМ сульфата аммония, 6,7 мМ MgCl2, 6,7 мкМ ЭДТА, 10 мМ меркаптоэтанола, 170 мкг BSA, 1,0 мМ каждого dNTP и 1U Taq-ДНК-полимеразы (производства «Бион», Москва).
После предварительной денатурации ДНК проводили 30 циклов амплификации в следующем режиме: денатурация образовавшихся двуни-тевых структур при 96 ° С — 10 секунд, гибридизация ДНК с праймерами (отжиг праймеров) при 61 ° С — 20 секунд, синтез последовательности, комплементарной матричной ДНК (элонгация) при 72 ° С — 30 секунд и заключительный этап синтеза при 72 ° С — 3 минут. Для проведения ПЦР использовали программируемый термоци-клер фирмы «ДНК-технология» (Москва).
После ПЦР продукты реакции анализировались в 6 % полиакриламидном геле с последующей окраской этидиумбромидом и визуализацией в проходящем УФ свете.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерной программы «STATISTICA v6.0».
Определение достоверности различий между сравниваемыми группами или подгруппами по частотам генотипов и аллелей производили с помощью критерия Фишера и критерия хи-квадрат (х2) по стандартной формуле.
Клиническая характеристика групп
В основной группе анализ клинических характеристик проведен у 77 беременных с чистым ге-стозом. Все пациентки были разделены на 3 группы: легкую, среднюю и тяжелую степени тяжести по баллам в зависимости от распространенности отеков, уровня артериального давления и протеи-нурии, а также в зависимости от времени появления симптомов и наличия фоновых заболеваний
Таблица 2
Показатели гемодинамики в функциональной системе мать—плацента—плод в исследуемых подгруппах
Таблица 1
Основные клинические характеристики гестоза у обследованных женщин
Клинический показатель Здоровые беременные (п = 68) Гестоз в целом (п=77) Гестоз легкой степени (п=44) Гестоз средней степени (п = 16) Гестоз тяжелой степени (п = 17)
Возраст 28,97 ± 0,77 29,39 ± 0,71 29,21 ± 0,84 30,92 ± 1,82 28,41 ± 1,65
Прибавка массы тела, кг. 10,77 ± 0,41 15,57 ± 0,53* 15,78 ± 0,59* 16,37 ± 1,58* 14,34 ± 1,13*
Срок появления отеков, нед. 29,49 ± 0,93 30,50 ± 1,23 33,20 ± 1,39 26,57 ± 1,59#
Систолическое АД 115,47 ± 0,85 138,25 ± 1,93* 129,77± 1,34* 138,33 ± 3,40#* 158,82 ± 4,50##*
Диастолическое АД 73,61 ± 0,96 88,90 ± 1,21* 83,86 ± 0,97* 90,94 ± 1,95#* 100,00 ± 3,06##*
Срок появления гипертензии, нед 33,97 ± 0,93 33,46 ± 1,90 35,00 ± 2,01 33,71 ± 1,21
Протеинурия, г/л 0,30 ± 0,11 0,04 ± 0,01 0,25 ± 0,10 1,05 ± 0,45#
Срок появления протеинурии 33,57 ± 1,16 34,62 ± 1,59 37,25 ± 0,45 28,78 ± 2,43#
* — р < 0,01 по сравнению с контролем # — р < 0,05 ## — р < 0,01 по сравнению с легким гестозом
Показатель СДО КСК Здоровые беременные (п = 68) Гестоз в целом (п=77) Гестоз легкой степени (п=44) Гестоз средней степени (п = 16) Гестоз тяжелой степени (п = 17)
СДО АП 2,37 ± 0,08 2,68 ± 0,11 2,49 ± 0,08 2,71 ± 0,23 3,30 ± 0,38*#
СДО ПМА 1,84 ± 0,09 2,10 ± 0,12 1,88 ± 0,09 1,91 ± 0,07 3,10 ± 0,53*#
СДО ЛМА 1,89 ± 0,09 2,25 ± 0,13 2,12 ± 0,07 2,10 ± 0,16 3,08 ± 0,75*
* — р < 0,05 по сравнению с контролем # — р < 0,05 по сравнению с легким гестозом
до наступления беременности (классификация Савельевой и соавт., 2005).
Было обследовано 17 пациенток с наличием чистого гестоза тяжелой степени, 16 пациенток с гестозом средней степени и 44 женщины с гесто-зом легкой степени тяжести. Группу сравнения составили 68 здоровых беременных женщин.
По результатам анализа историй родов были получены данные клинических, лабораторных и ультразвуковых методов обследования во всех группах пациенток.
Основные клинические проявления гестоза представлены в таблице 1.
При сравнительном анализе среднего возраста больных с различными степенями гестоза и женщин из контрольной группы не выявлено статистически значимых различий (р > 0,05). Средняя прибавка массы тела за беременность при всех степенях тяжести гестоза была достоверно выше, чем в группе сравнения (р < 0,05), причем наибольшей она была при средней степени гестоза (16,37 ± 1,58 кг). Как систолическое, так и диастолическое АД при всех степенях гестоза было достоверно выше, чем в группе сравнения (р < 0,05). Количество белка в моче значимо различалось только между гестозом с тяжелым течением (1,05 ± 0,45 г/л) и легким гестозом (0,04 ± 0,01 г/л) (р < 0,05). Значимые
отличия в сроках появления протеинурии были обнаружены между тяжелым (28,78 ± 2,43 нед.) и легким гестозом (34,62 ± 1,59 нед.) (р < 0,05).
При сравнительном анализе показателей клинического и биохимического анализов крови в различных группах не было обнаружено статистически значимых различий (р > 0,05). Отмечалась тенденция к уменьшению количества тромбоцитов в периферической крови при тяжелом гестозе (216,88 ± 15,14) по сравнению с легким гестозом (243,84 ± 8,78).
Показатели гемодинамики в функциональной системе мать—плацента—плод представлены в таблице 2.
При анализе показателей допплерометрии в системе мать—плацента—плод были выявлены достоверные различия между систоло-диастолическим отношением в артерии пуповины при тяжелом гестозе (3,30 ± 0,38) по отношению к группе сравнения (2,37 ± 0,08) (р < 0,05) и легкому гестозу (2,49 ± 0,08) (р < 0,05), а также между данным показателем в правой маточной артерии (при тяжелом гестозе — 3,10 ± 0,53, при легком —
1.88 ± 0,09, в группе сравнения — 1,84 ± 0,09) (р < 0,05) и левой маточной артерии (при тяжелом гестозе — 3,08 ± 0,75, в группе сравнения —
1.89 ± 0,09) (р < 0,05).
Таблица 3
Исходы беременностей в различных подгруппах
Показатель Здоровые беременные (n=55) Гестоз в целом (n=62) Гестоз легкой степени (n=33) Гестоз средней степени (n = 14) Гестоз тяжелой степени (n = 15)
Срок родоразрешения, нед. 38,57 ± 0,18 38,15 ± 0,26 38,84 ± 0,20 38,38 ± 0,46 36,18 ± 0,80**™
Кровопотеря, мл 361,63 ± 35,45 437,01 ± 26,25 396,59 ± 37,30 484,35 ± 48,67* 497,06 ± 49,35*
Вес, грамм 3304,41 ± 61,67 3278,96 ± 79,72 3452,27 ± 66,64 3239,38 ± 163,68 2867,65 ± 258,24*
Рост, см 50,62 ± 0,25 50,40 ± 0,48 51,11 ± 0,50 50,63 ± 0,28 48,35 ± 1,53
Оценка по шкале Апгар 7,72 ± 0,07 7,51 ± 0,12 7,82 ± 0,07 7,50 ± 0,22 6,71 ± 0,41*"
* — p < 0,05 по сравнению с контролем # — p < 0,05 ## — p < 0,01 по сравнению с легким гестозом
При тяжелом течении гестоза гипотрофия плода была выявлена в 24,0 % (4) случаев, при среднем ге-стозе — в 12,5 % (2), при легком гестозе и в группе сравнения признаков гипотрофии плода не было.
Исходы беременностей представлены в таблице 3.
В группе с тяжелым течением гестоза срок родоразрешения был достоверно меньше (36,18 ± 0,80 нед.), чем при легком течении гестоза (38,84± 0,20 нед.) (p < 0,01) и в группе сравнения (38,57 ± 0,18 нед.) (p < 0,0). 52,6 % (40) женщин в группе с гестозом были родоразрешены путем операции кесарева сечения (58,8 % (10) женщин с тяжелым ге-стозом, 62,5 % (10) со средним и 46,5 % (20) с легким гестозом), причем основным показанием при тяжелом и среднем течении гестоза явилось отсутствие стойкого эффекта от терапии гестоза. В группе сравнения абдоминальным путем было родоразрешено 40 % (27) беременных. При этом оперативное родо-разрешение было произведено в основном в плановом порядке по совокупности показаний.
Средняя кровопотеря в родах в группе с тяжелым (497,06 ± 49,35 мл) и со средним течением гестоза (484,35 ± 48,67 мл) была статистически достоверно выше, чем в группе сравнения (361,63 ± 35,45 мл) (p < 0,05).
Средняя масса новорожденного в подгруппе с тяжелым гестозом была достоверно меньше (2867,65 ± 258,24 г), чем в группе сравнения (3304,41 ± 61,67 г) (p < 0,05).
Средняя оценка новорожденного по шкале Апгар при гестозе тяжелой степени была статистически достоверно меньше (6,71 ± 0,41), чем в группе сравнения (7,72 ± 0,07) или при легком гестозе (7,82 ± 0,07) (p < 0,05).
Результаты
Частоты аллелей D/I полиморфизма гена HLA-G у обследованных беременных женщин и их плодов представлены в таблице 4.
Сравнительный анализ частот аллелей выявил некоторое повышение частоты аллели I у жен-
Таблица 4
Частоты аллелей гена HLA-G в группе беременных с чистым гестозом различной степени тяжести и в группе сравнения
Группы Частоты аллелей, %
I D
Гестоз в целом Мать 52,1 47,9
Плод 49,3 50,7
Тяжелая степень Мать 56,3 43,7
Плод 40,0 60,0
Средняя степень Мать 42,3 57,7
Плод 58,3 41,7
Легкая степень Мать 53,7 46,3
Плод 51,2 48,8
Группа сравнения Мать 47,6 52,4
Плод 46,2 53,8
щин с гестозом по сравнению с группой сравнения (52,1 и 47,9 % соответственно). Частота аллели I у плодов от беременностей с гестозом также была несколько выше, чем у плодов группы сравнения (49,3 и 50,7 %), однако эти отличия были статистически недостоверны (p > 0,05). Наибольшая частота аллели I среди беременных женщин встречалась при наличии гестоза тяжелой степени выраженности (56,3 %). У плодов наибольшая частота аллели I отмечена при наличии гестоза средней степени выраженности (58,3 %).
Распределение генотипов по гену HLA-G у беременных в различных подгруппах и их плодов представлены на рисунках 1 и 2.
Распределение генотипов у беременных с гестозом не отличалось от такового у их плодов. Носительство I аллеля в группе матерей составило 81,4 %, тогда как у плодов эта величина составила 72,9 %. Интересно отметить, что при тяжелой форме гестоза генотип I/- встречался у матерей с частотой 93,8 %, тогда как у плодов с частотой 66,7 %.
Таблица 5
Частоты сочетаний разных генотипов матери и ее плода в подгруппах
Группы Сочетание генотипов матери и плода
I/I+I/I I/I+I/D I/D+I/I I/D+I/D I/D+D/D D/D+I/D D/D+D/D
Гестоз в целом 15,87 11,11 9,52 26,98 19,05 11,11 6,35
Тяжелый гестоз 7,14 14,29 7,14 28,57 35,71 7,14 0
Средний гестоз 9,09 0 27,27 27,27 9,09 18,18 9,09
Легкий гестоз 21,05 13,16 5,25 26,32 15,79 10,53 7,89
Группа сравнения 9,68 9,68 6,45 38,00 12,90 11,29 12,90
Uns/Ins lins / Del Del/Del
Гестоз в целом Тяжелый гестоз Средний гестоз Легкий гестоз Группа сравнения Рис. 1. Распределение генотипов по гену ИЬА-О у беременных с гестозом различной степени тяжести и в группе сравнения
Рис. 2. Распределение генотипов по гену ИЬА-О у плодов от беременностей с гестозом различной степени тяжести и в группе сравнения
При сравнении частот генотипов у матерей в различных группах не было выявлено статистически значимых различий.
При анализе распределения генотипов у плодов зарегистрировано повышение частоты гомозигот
I/I у плодов от беременностей с гестозом (24,28 %) по сравнению таковой у плодов от здоровых женщин (16,92 %). Наибольшая частота генотипа I/I отмечена у плодов от беременных с гестозом средней степени тяжести (33,33 %).
В таблице 5 представлены частоты встречаемости сочетаний разных генотипов матери и ее плода при гестозе и в группе сравнения.
При гестозе с наибольшей частотой встречалось сочетание генотипов Ins/Del+Ins/Del (26,98 %). Это сочетание генотипов также преобладало при легком гестозе (26,32 %) и в группе сравнения (38,0 %). Сочетание Ins/Ins+Ins/Ins наиболее часто встречалось при легкой форме гестоза (21,05 %), при гестозе в целом частота этого сочетания составила 15,87 %, при этом при наличии тяжелого гестоза — 7,14 %, при среднем гестозе составила 9,09 %, а в группе сравнения 9,68 %. Сочетание Ins/Ins+Ins/Del при гестозе в целом отмечено с частотой 11,11 %, при тяжелой форме гестоза — в 14,29 %, при гестозе средней степени отсутствовало, при легком гестозе составило 13,16 %, а в группе сравнения — 9,68 %. Ins/Del+Ins/Ins — сочетание при гестозе встречалось в 9,52 %, при тяжелой его форме — в 7,14 %, при средней — в 27,27 % случаев, при легкой — в 5,25 %, в группе сравнения — в 6,45 % наблюдений. Интересно отметить, что сочетание генотипов Ins/Del+Del/Del было самым распространенным сочетанием при тяжелой форме гестоза (38,0 %), тогда как в группе сравнения эта величина составила 12,90 %.
Таким образом, нами выявлено повышение (p~0,1) частоты сочетания Ins/Ins+Ins/Ins у женщин в группе с легким гестозом (21,05 %), по сравнению с группой сравнения (9,68 %).
Частоты сочетаний генотипов, при которых плод имел генотип I/I, при гестозе были выше, чем в группе сравнения (15,87 % против 9,68 % для сочетания Ins/Ins+Ins/Ins и 9,52 % против 6,45 % для сочетания Ins/Del+Ins/Ins), хотя эти различия не были статистически достоверны (p > 0,05).
Обсуждение
В результате проведенного анализа результатов клинических исследований обследованных групп показано, что у беременных с гестозом имеется значительное ухудшение многих параметров гомеостаза в системе мать-плацента-плод, что приводит к менее благополучному исходу беременности для матери и плода по сравнению со здоровыми беременными. При нарастании тяжести гестоза отмечено достоверное снижение сроков родоразрешения, веса новорожденных и их оценки по шкале Апгар, а также увеличение кровопотери в родах, что связано с увеличением процента оперативного родоразрешения.
Согласно современным научным взглядам, гестоз является мультифакториальным заболеванием. К настоящему моменту уже определен целый ряд генов, полиморфные варианты которых
вовлечены в развитие заболевания [6, 9]. Однако существуют разные мнения о механизмах генетической предрасположенности к гестозу и вопрос относительно того, какие полиморфные варианты генов матери или плода в большей мере определяют развитие заболевания, остается открытым.
Работы Lie et al. (2005) [15] указывают на то, что генетический вклад плода в развитии данной патологии, по меньшей мере, столь же важен, как и вклад матери. Поэтому поиск генов, продукты которых могут участвовать в развитии гестоза, целесообразно проводить как у матери, так и у плода.
Установлено, что в организме беременной женщины фетоплацентарный комплекс является своего рода аллотрансплантантом и служит уникальным примером иммунологической «толерантности» между аллогенной тканью плода и материнским организмом [10]. Имеется мнение о том, что гестоз развивается из-за недостаточного распознавания матерью аллоантигенов плода и слабой продукцией организмом матери супрес-сорных факторов [19].
Как известно, особенностью плацентации у человека является прямой контакт клеток трофобласта с материнской кровью. Другой важной составляющей является принятие клетками трофобласта эндотелиального фенотипа — феномен «эндотелиальной мимикрии». Такая эпителиально-эндотелиальная трансформация изначально не эндотелиальных клеток является генетически запрограммированной и необходима для успешной инвазии трофобласта в кровеносные сосуды матки.
В процессе имплантации клетки эндометрия не разрушаются, а как бы «отодвигаются» путем контактного ингибирования. Освободившееся место занимает эмбрион. Эта фаза имплантации называется «аваскулярной» и является наиболее уязвимой, многие повреждающие факторы могут непосредственно влиять на полноценность имплантации.
Ранее предполагалось, что избежать отторжения эмбриона способствует абсолютная не-иммуногенность клеток трофобласта. Однако, в настоящее время получены данные о том, что зигота имеет на своей поверхности антигены отцовского происхождения. Антигенный состав в основном представлен антигенами II класса ги-стосовместимости, так как классические антигены I класса не экспрессируются на поверхности синцитиотрофобласта. Исключение составляет лишь неклассический антиген HLA-G [5, 8, 17].
Отличие эмбриона от материнского организма по HLA-антигенам II класса и HLA-G явля-
ется важным моментом, необходимым для вынашивания беременности. Клетки трофобласта, несущие на своей поверхности отцовские антигены, внедряются в кровоток матери, в результате чего происходит контакт антигенов плода с Т-лимфоцитами матери, в результате чего у нее формируется клон иммунных клеток, вырабатывающий специальные защитные антитела, которые покрывают поверхность клеток трофобла-ста и способствуют его более глубокой инвазии в спиральные артерии матери в процессе имплантации [5, 8, 17].
Выработка защитных аллоантител приводит к ингибированию цитотоксичности натуральных киллеров и реализации Th-ответу по 2 типу. При недостаточной стимуляции антигенами плода не происходит выработки необходимых блокирующих антител, происходит активация NK-клеток, реализация Th-ответа по 1 типу и вырабатываются провоспалительные цитоки-ны, что вызывает повреждение хориона и неполноценную эпителиально-эндотелиальную трансформацию, препятствующую успешной глубокой инвазии трофобласта в кровеносные сосуды матки.
Показано, что в 90 % случаев при исследовании плацент беременных с гестозом при наличии гестоза экспрессия HLA-G отсутствует или значительно снижена по сравнению с нормально протекающей беременностью. Еще несколькими исследованиями показано снижение или отсутствие экспрессии HLA-G мРНК в плацентах женщин с гестозом, по сравнению со здоровыми женщинами [4, 14]. Известно также, что человеческий цитомегаловирус (HCMV) и вирус герпеса уменьшает экспрессию HLA-G в плаценте [13, 18]. Интересно отметить, что присутствие последовательностей цитомега-ловируса у женщин, несущих определенные аллели HLA, увеличивает относительный риск развития гестоза до 40 раз [8]. Известно, что аллель с инсерцией 14 п. н. ассоциирован со снижением уровня HLA-G mRNA в трофобла-сте [11, 12]. Нами проанализирован Del/Ins полиморфизм 14 п. н. в 8 экзоне гена HLA-G в группе беременных с чистым гестозом различной степени тяжести и их плодов, а также в группе сравнения.
При анализе частот генотипов у плодов выявлено повышение частоты генотипа Ins/Ins у плодов от беременностей с гестозом (24,3 %) по сравнению с плодами здоровых женщин (16,9 %) (p~0,1). Наибольшая частота генотипа Ins/Ins отмечена у плодов от беременных с гестозом средней степени тяжести (33,3 %). Полученные нами результаты согласуются с данными литературы.
Два независимых исследования продемонстрировали существенное возрастание риска развития гестоза у первородящих при наличии у плода генотипа +14/+14 HLA-G [4, 7].
Нами отмечено также повышение частоты встречаемости сочетания Ins/Ins + Ins/Ins у женщин в группе с легким гестозом (21,1 %), по сравнению с группой сравнения (9,7 %) (p = 0,09). Также при гестозе частоты сочетаний генотипов у матери и плода, при которых плод имел генотип Ins/Ins были выше, чем в группе сравнения (15,9 % против 9,7 % при сочетании Ins/Ins + Ins/Ins и 9,5 % против 6,5 % при сочетании Ins/Del + Ins/Ins), хотя эти различия не были статистически достоверны (p > 0,05).
Полученные нами результаты согласуются с данными Hylenius et al. (2004) [7], и свидетельствуют о повышении частоты встречаемости + 14 п. н. аллелей в комбинации материнского и плодового генотипов при гестозе. В то же время анализ частоты встречаемости.
Литература
1. Айламазян Э. К., МозговаяЕ. В. Гестоз: теория и практика. — М.: МЕДпресс информ, 2008. — 272 с.
2. Кулаков В. И., Мурашко Л. Е. Введение // Актуальные вопросы диагностики, профилактики и лечения гестоза: материалы междунар. симп. — М.,1998. — С. 5-7.
3. Неотложная помощь при экстремальных состояниях в акушерской практике: руководство / Айламазян Э. К. [и др.]. — СПб.: Н.-Л, 2002. — 432 с.
4. Altered HLA-G transcription in pre-eclampsia is associated with allele specific inheritance: possible role of the HLA-G gene in susceptibility to the disease / O'Brien M. [et al.] // Cell Mol. Life. Sci. — 2001. — Vol. 58. — P. 1943-1949.
5. Antigenic heterogeneity of human cytotrophoblast and evidence for the transient expression of MHC class I antigens distinct from HLA-G / Shorter S. C. [et al.] // Placenta. — 1993. — Vol. 14. — P. 571-582.
6. ArngrimssonR., BjornssonН., GeirssonR. T. Genetic and familial predisposition to eclampsia and pre-eclampsia in a defined population // Br. J. Obstet. Gynaecol. — 1990. — Vol. 97. — P. 762-769.
7. Association between HLA-G genotype and risk of pre-eclampsia: a case-control study using family triads / Hylenius S. [et al.] // Mol. Hum. Reprod. — 2004. — Vol. 10, N 4. — P. 237-246.
8. Carosella E. D., Dausset J., Kirszenbaum M. HLA-G revisited // Immunol. Today. — 1996. — Vol. 17. — P. 407-409.
9. CooperD. W., BrenneckeS.P., WiltonA.N. Genetics of preeclampsia// Hypertens. Pregn. — 1993. — Vol. 12. — P. 1-23.
10. Experimental preeclampsia produced by chronic constriction of the lower aorta: validation with longitudinal blood pressure measurements in conscious rhesus monkeys / Combs C.A. [et al.] // Am. J. Obstet. Gynecol. — 1993. — Vol. 169, N 1. — P. 215-223.
11. Fujii T, Ishitani A., GeraghtyD. E. A soluble form of the HLA-G antigen is encoded by a messenger ribonucleic acid containing intron 4 // J. Immunol. — 1994. — Vol. 153. — P. 5516-5524.
12. HLA-G allelic variants are associated with differences in the HLA-G mRNA isoform profile and HLA-G mRNA levels / Hviid T. V. [et al.] // Immunogenetics. — 2003. — Vol.55. — P.63-79.
13. Human cytomegalovirus infection of placental cytotrophoblasts in vitro and in utero: implications for transmission and pathogenesis / Fisher S. [et al.] // J. Virol. — 2000. — Vol. 74. — P. 6808-6820.
14. Lack of human leukocyte antigen-G expression in extravillous trophoblasts is associated with pre-eclampsia / GoldmanWohl D.S. [et al.] // Mol. Hum. Reprod. — 2000. — Vol. 6. — P. 88-95.
15. Lie R. T., Rasmussen S., Brunborg H. Fetal and maternal contributions to risk of pre-eclampsia: population based study // BMJ. — 1998. — Vol. 316. — P. 1343-1347.
16. Protection from natural killer cell-mediated lysis by HLA-G expression on target cells / Pazmany L. [et al.] // Science. — 1996. — Vol. 274, N. 5288. — P. 792-795.
17. Sargent I. L. Maternal and fetal immune responses during pregnancy // Exp. Clin. Immunogenet. — 1993. — Vol. 10. — P. 85-102.
18. Schust D. J., Hill A. B., Ploegh H. L. Herpes simplex virus blocks intracellular transport of HLA-G in placentally derived human cells // J. Immunol. — 1996. — Vol. 157. — P. 3375-3380.
19. SkajaaK. Pre-eclampsia. Etiology-physiopathology-treatment // Ugeskr. Laeger. — 1993. — Vol. 155, N 24. — P. 1845-1851.
Статья представлена Е. В. Мозговой, ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта,
Санкт-Петербург
THE INFLUENCE OF FETUS HLA-G GENE POLYMORPHISM ON THE DEVELOPMENT OF GESTOSIS
Mikhailin E. S., Ivaschenko T. E., Ailamazyan E. K.
■ Summary: The goal of our study was to reveal inluence of HLA-G gene polymorphism in pregnant women and their fetuses on the development of gestosis. The frequency of Del/Ins polymorphism 14 b. p. in exon 8 for HLA-G gene was studied by polymerase chain reaction. We examined 76 pregnant women and their newborns with different severity of pure gestosis. The healthy pregnant women (69 individuals) and their newborns were included to control group. The frequency analysis revealed equal ratios of I and D alleles in women with gestosis (52,1 % and 47,9 % respectively). The frequencies of alleles in newborns from mothers with gestosis were similar to previous group (I allele — 49,3 %; D allele — 50,7 %). There was no significant difference between maternal genotype frequencies in two groups. We have found the tendency of genotype Ins/Ins frequency to be higher in newborns in case of gestosis (24,28 °%) in comparison with control group (16,92 °%). The frequencies of maternal/newborn genotype combinations in which newborn had Ins/ Ins genotype were higher in gestosis group, than in control group (15,9 % against 9,7 % in cases of Ins/Ins+Ins/Ins genotype and 9,5 % against 6,5 % in cases of Ins/Del + Ins/Ins genotype). Thus we suggest that Ins/Ins newborn genotype can be the factor of the risk for gestosis development in pregnant women.
■ Key words: gestosis; implantation; fetus genes; HLA-G.
■ Адреса авторов для переписки-
Михайлин Евгений Сергеевич — научный сотрудник. ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: mihailin@mail.ru
Иващенко Татьяна Эдуардовна — д. б. н., вед. науч. сотрудник лаборатории пренатальной диагностики наследственных заболеваний человека.
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: tiv@hosp.ru
Айламазян Эдуард Карпович — директор ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О.Отта РАМН, академик РАМН, з. д. н. РФ, д. м. н., профессор.
ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, 199034, Россия, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3. E-mail: iagmail@ott.ru
Mikhailin Evgeny Sergeevich — scientific researcher. D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: mihailin@mail.ru
Ivaschenko Tatyana Eduardovna — doctor of biological sciences, main scientific researcher, Laboratory of prenatal diagnostics of human congenital diseases.
D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: tiv@hosp.ru
Ailamazyan EdwardKarpovich — director of the D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology, Russian Academy of Medical Sciences (RAMS), doctor of medical sciences, professor, associate member of the Russian Academy of Medical Sciences (RAMS). D. O. Ott Research Institute of Obstetrics and Gynecology. 199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: iagmail@ott.ru
