CC BY
166
заключение
Полученные результаты исследования не дают оснований считать потенциально ценным определение уровня белка HSP70 сыворотки крови пациентов с дегенеративными заболеваниями позвоночника. В то же время анализ содержания шаперона HSP60 может использоваться не столько как показатель лихорадочной реакции, сколько как индикатор длительно существующего радикулярного синдрома. В дальнейшем это может быть использовано как объективный биохимический индикатор радикулоалгии, степень субъективности которой общеизвестна, а также как критерий эффективности лечения больных с компрессионными радикулярными синдромами при дегенеративных поражениях позвоночника на поясничном уровне.
Список литературы
1. Гудков А.В., Подлипаева Ю.И. Прогностическое значение белков теплового шока при ВИЧ-инфекции // Цитология. 2009. № 12. С. 1019-1024.
2. Котовская М.А. Клиническое значение антител к нуклеосомам и белкам теплового шока при системной красной волчанке: автореф. дис.: к-та мед. наук. Москва, 2007. 21 с.
3. Лапшина К.В. Влияние белка теплового шока 70 кДа на изменение показателей лихорадочной реакции у крыс // Фундаментальная и клиническая медицина. Материалы десятой Всероссийской медико-биологической конференции. Санкт-Петербург, 2007. С. 24-26.
4. Birnbaum G., Kotilinek L. Immunity to heat shock proteins and neurological disorders of women // Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 1999. Vol. 7. P 39-48.
5. Hermisson M., Strik H. et al. Expression and functional activity of heat shock proteins in human glioblastoma multiforme // Neuro Oncol. 2005. Vol. 7. P. 260-278.
6. Romi F., Helgeland G., Gilhus N.E. Heat-shock proteins in clinical neurology // Eur. Neurol. 2011. Vol. 66. P. 65-69.
Сведения об авторах
1. кислицын юрий витальевич - профессор кафедры неврологии и нейрохирургии Кировской государственной медицинской академии, доктор медицинских наук, доцент, 610027, г. Киров, ул. Воровского, 42, КОКБ, нейрохирургическое отделение, (8332) 670730, uv70@ mail.ru
2. васютин константин Алексеевич - клинический ординатор кафедры неврологии и нейрохирургии Ки-ров-ской государственной медицинской академии, 610027, г. Киров, ул. Воровского, 42, КОКБ, нейрохирургическое отделение, (8332) 670730
3. вожегова нина парменовна - заведующая лабораторией клинической иммунологии Кировской областной клинической больницы, кандидат медицинских наук, 610027, г. Киров, ул. Воровского, 42, КОКБ, лаборатория клинической иммунологии, (8332) 670125
4. Стражников михаил романович - клинический ординатор кафедры челюстно-лицевой хирургии Российской медицинской академии последипломного образования.
УДК 612.118
А.В. Крысова1, А.А. Куншин1, В.И. Циркин2
роль альфа- и бета-адренорецепторов в реализации способности адреналина изменять осмотическую PEЗиcтEнтноcть Эритроцитов небеременных женщин
A.V. Krisova1, A.A. Kunshin1, V.I. Tsirkin2 ROLE OF ALPHA- AND BETA-ADRENERGIC RECEPTORS IN REALIZATION OF ADRENALIN ABILITY TO CHANGE OSMOTIC RESISTANCE OF ERYTHROCYTES AMONG NON-PREGNANT WOMEN
1Вятский государственный гуманитарный университет, г. Киров.
2Казанский государственный медицинский университет, г. Казань
У 116 небеременных женщин исследовали влияние адреналина и трех адреноблокаторов на осмотическую резистентность эритроцитов (ОРЭ), которую оценивали по числу эритроцитов, не подвергнутых гемолизу, при их экспозиции в дистиллированной воде (ДВ). Установлено, что способность адреналина повышать или снижать ОРЭ зависит от его концентрации, фракции эритроцитов и уровня половых гормонов. Обзидан усиливал способность адреналина повышать ОР эритроцитов, в то время атенолол, ницерголин или их смесь снижали эту способность. Это означает, что рост ОРЭ под влиянием адреналина обусловлен активацией альфа-адренорецепторов (АР) и в меньшей степени бета1-АР, а снижение ОРЭ связано с активацией бета2-АР.
ключевые слова: эритроциты, осмотическая резистентность, адренореактивность, адренорецепторы, адреналин, адреноблокаторы.
In current research the effects of adrenaline and three adrenoceptor blocking agents on the osmotic resistance of erythrocytes (ORE) are investigated, it was assessed by the number of red blood cells not subjected to hemolysis, while exposure to distilled water (DW). It is established that the ability of adrenaline to raise or lower ORE depends on its concentration, erythrocytes fraction and the level of sex hormones. Obzidan increased the ability of adrenaline to raise ORE whereas atenolol, nicergoline or their mixture reduced this ability. This means that the growth of ORE under adrenaline is caused by activation of alpha-adrenergic receptors (AR) and beta1-AR in a less degree, and ORE reduction due to activation of be ta2-AR.
Key words: erythrocytes, osmotic resistance, adrenoreactivity, adrenoceptors, adrenaline, adrenoceptor blocking agents.
введение
Известно, что эритроциты содержат различные адренорецепторы (АР), в том числе а1-АР,
а2-АР, Р1-АР, Р2-ЛР и Р3-АР [13, 19]. Считается [1, 3, 4, 5, 14, 15], что адренореактивность эритроцитов зависит от соотношения различных типов АР [13] и отражает адренореактивность внутренних органов. По этой причине информация о ней может иметь важное значение при профессиональном отборе лиц экстремальных профессий [14], при оценке тяжести бронхиальной астмы [3, 12] и гестоза [4, 16], при прогнозе течения родов [1, 4] и во многих других ситуациях.
Известны разные способы оценки адренореак-тивности эритроцитов. Чаще используются способы, основанные на изучении влияния адренергических средств на осмотическую резистентность эритроцитов (ОРЭ) [2, 12, 14]. Однако до настоящего времени отсутствует общепризнанная методика оценки ОРЭ, в том числе в отношении степени гипотонич-ности среды и вида адренергических средств. Так, Стрюк Р.И., Длусская И.Г. [14], Адамян Л.В. и др. [1], Бабин А.П. и соавт. [2] определяли адренореактивность эритроцитов по изменению числа гемо-лизированных эритроцитов в гипотонической среде (0,40-0,45% раствор №С1), используя для этого фотоэлектроколориметрический способ Идельсона. Реже для оценки адренореактивности эритроцитов применяется способ адренозависимой СОЭ [4] или способ адренозависимой агрегации эритроцитов, индуцированной алциановым голубым [16]. Однако отсутствие однозначных данных о физиологической роли адренорецепторов в реализации осмотического гемолиза, оседания и агрегации эритроцитов, отсутствие четкой зависимости эффекта адреналина от его концентрации в среде - все это привело к тому, что вышеуказанные способы не получили широкого распространения. Поэтому необходима разработка новых методов оценки адренореактивности эритроцитов. В связи с этим нами был разработан метод оценки ОРЭ [17], основанный на подсчете числа не-гемолизированных эритроцитов (ЧНЭ), оставшихся после их 30-, 45-, 60-, 90- и 120-секундной экспозиции в дистиллированной воде (ДВ), содержащей 2,5 мМ СаС12. Мы считали возможным на базе этого метода создать способ оценки адренореактивности, основанный на регистрации изменений ОРЭ под влиянием адренергических средств (адреналина и адреналина совместно с адреноблокаторами). Наши предварительные исследования выявили способность адреналина изменять ОР эритроцитов [9]. Поэтому в данной работе была поставлена цель изучить роль а-АР и Р1-АР и Р2-АР в изменении ОР эритроцитов небеременных женщин, происходящих под влиянием адреналина. Для этого в 4 сериях опытов было изучено влияние неселективного блокатора Р-АР обзидана (10-8 и 10-5 г/мл), селективного бло-катора Р1-АР атенолола (10-8 г/мл), неселективного блокатора а-АР ницерголина (10-8 и 10-6 г/мл) и смеси ницерголина и атенолола (оба - 10-6 г/мл) на способность адреналина (10-10-10-6 г/мл) изменять ОР эритроцитов небеременных женщин.
Материалы и методы
Все опыты проведены с эритроцитами капиллярной крови 116 небеременных женщин (с личного их согласия) в возрасте от 18 до 25 лет.
В серии 1 (п=40, без учета фазы цикла) оценивали влияние обзидана (10-5 и 10-8 г/мл), ницерголина (10-6 и 10-8 г/мл), атенолола (10-8 г/мл) и смеси ни-церголина и атенолола (оба в концентрации 10-6 г/мл) на ОР эритроцитов, подвергнутых 30-, 45-, 60-, 90-и 120-секундной экспозиции в ДВ, т.е. на ОР пяти фракций (Ф30, Ф45, Ф60, Ф90 и Ф120) эритроцитов.
В серии 2 оценивали влияние высоких концентраций обзидана (10-5 г/мл), ницерголина (10-6 г/мл), а также смеси ницерголина (10-6 г/мл) и атенолола (10-6 г/мл) на способность адреналина (10-6 г/мл) изменять ОР пяти фракций (Ф30, Ф45, Ф60, Ф90 и Ф120) эритроцитов женщин (п=38; без учета фазы цикла). В серии 3 оценивали влияние низких (10-8 г/мл) концентраций обзидана, ницерголина и атено-лола на способность адреналина (10-6 г/мл) изменять ОР двух фракций эритроцитов (Ф30 и Ф60) женщин (п=17; без учета фазы цикла).
В серии 4 оценивали влияние смеси двух адре-ноблокаторов - ницерголина и атенолола (оба -10-6 г/мл) на способность адреналина в концентрациях 10-10, 10-9, 10-8, 10-7 и 10-6 г/мл изменять ОРЭ фракции Ф45. Опыты проведены с эритроцитами небеременных женщин, 11 из которых находились в фолликулярной фазе цикла (ФФЦ), т.е. на 3-12 день от первого дня менструации, а 10 женщин - в лютеиновой фазе (ЛФЦ), т.е. на 16-24 день цикла.
Исследование ОР эритроцитов капиллярной крови проводили по методике Циркина В.И. и соавторов [17], т.е. оценивали число негемолизированных эритроцитов (ЧНЭ) после фиксированной по времени (30, 45, 60, 90 и 120 с) экспозиции определенного объема крови в дистиллированной воде (ДВ), содержащей 2,5 мМ СаС12. С целью остановки гемолиза эритроцитов использовали 6% раствор №С1. Влияние адренергических веществ на ОРЭ проводили по такому же принципу, добавляя в ДВ адреналин, адре-ноблокатор или их смесь.
Методика проводилась следующим образом. Объем капиллярной крови, равный 0,02 мл и полученный с помощью микропипетки гемометра Сали, вносили в пробирку с 0,2 мл 0,9% раствора №С1, содержащего гепарин (1 МЕ/мл) и СаС12 (2,5 мМ), т.е. кровь разводили в 10 раз. Затем 0,02 мл этого разведения добавляли в пробирку, содержащую 0,4 мл 3% раствора №С1, т.е. разводя кровь в конечном итоге в 200 раз. Это позволяло оценить исходное число неге-молизированных эритроцитов (ЧНЭ) в 1 л крови, т.е. абсолютный контроль (АК). Затем определяли ЧНЭ при 30-, 45-, 60-, 90- и 120-секундной экспозиции в ДВ, т.е. так называемый экспозиционный контроль для каждой фракции эритроцитов (ЭК1). Для этого 10-кратно разведенную кровь в объеме 0,02 мл вносили в пробирки с 0,2 мл ДВ, содержащую 2,5 мМ СаС12, а через 30, 45, 60, 90 и 120 с добавляли в них по 0,2 мл 6% раствора №С1. Для оценки влияния адренергических средств (адреналина, адренобло-каторов или смеси адреналина с адреноблокатора-ми) проводили подобную процедуру. Для этого добавляли 0,02 мл 10-кратно разведенной крови в 0,2 мл ДВ, которая помимо СаС12 содержала вещество (вещества) в соответствующей концентрации, а че-
рез 30, 45, 60, 90 и 120 с добавляли по 0,2 мл 6% раствора №С1. Затем определяли ЧНЭ, оставшихся после соответствующей экспозиции в ДВ совместно с адренергическим веществом, т.е. определяли Оадр, или О , или О _ . Все показатели, характеризу-
блок адр+блок 1 J
ющие интенсивность гемолиза, выражали в процентах к АК и к ЭК.
Во всех 4 сериях подсчет эритроцитов проводили микроскопическим методом, используя микроскоп типа Биолам ЛОМО (ИМ13) и счетную камеру Алферова-Бюргера с сеткой Горяева.
Результаты исследования подвергали статистической обработке [6]. В тексте они представлены в виде М±т, а различия оценивали непараметрическим методом Манна-Уитни, считая их достоверными при р<0,05.
результаты исследования и их обсуждение
Показали, что уровень эритроцитов в крови небеременных женщин, т.е. абсолютный контроль (АК), во всех 4 сериях варьирует от 3,83 до 4,59 (х1012) в 1 л. Это соответствует данным литературы, касающихся молодых женщин [8].
Оценка ОРЭ выявила, что при экспозиции в ДВ длительностью в 30 с ЧНЭ достоверно снижалось до 84,6±2,9% - 66,8±4,2% от исходного уровня, т.е. от АК, при 45 с - до 70,3±3,9% - 56,3±4,6%, при 60 с - до 53,9±2,1% - 37,9±3,9%, при 90 с - до 30,1±2,6% -13,9±3,4%, при 120 с - до 13,6±1,6% - 1,4±0,4%. Это означает, что эритроциты проявляют разную ОР, т.е. различаются между собой по способности мембраны выдерживать внутриклеточное давление входящей в клетку воды. На основании этих результатов предлагаем условно говорить, как минимум, о пяти фракциях эритроцитов (Ф30, Ф45, Ф60, Ф90 и Ф120). С учетом данных литературы о том, что ОРЭ уменьшается по мере их старения [7, 21], считаем, что фракция Ф120, обладающая максимальной ОР, представляет собой совокупность самых «молодых» эритроцитов, а фракция Ф30, обладающая самой низкой ОР, является популяцией самых «старых» эритроцитов. Наша гипотеза о наличии различных фракций эритроцитов базируется на представлении о том, что мембрана эритроцитов содержит аквапорины типа AQP0, AQP1 и AQP3, обеспечивающие транспорт воды из среды в эритроцит и обратно [18, 20]. Это означает, что число аквапоринов, содержащихся в поверхностной мембране эритроцита, должно определять скорость гемолиза эритроцитов в гипотонической среде. С этих позиций мы предполагаем, что по мере старения эритроцита в нем возрастает число аквапоринов, что ускоряет транспорт воды в эритроцит, т.е. снижает ОРЭ. В то же время мы не исключаем, что в процессе «старения» эритроцитов помимо роста числа аквапоринов одновременно снижается и прочность поверхностной мембраны, т.е. способность выдерживать натяжение под влиянием входящей в эритроцит воды, что также проявляется в снижении ОРЭ.
Исследование влияния адреноблокаторов (обзидана, атенолола, ницерголина и смеси ницер-
голина и атенолола) на ОРЭ было проведено в серии 1. Установлено, что неселективный блокатор Р-АР обзидан (10-8 и 10-5 г/мл) не оказывает достоверного влияния на ОР всех исследованных нами фракций эритроцитов небеременных женщин. Так, при действии обзидана в концентрации 10-5 г/мл на эритроциты фракций Ф30, Ф45, Ф60, Ф90 и Ф120 число негемолизированных эритроцитов, т.е. показатель Облок составил соответственно 100,7±2,8%, 94,7±3,2%, 111,8±9,9%, 120,2±24,5% и 83,0±15,9% от ЭК1. Эти результаты не согласуются с представлениями ряда авторов о способности обзидана повышать ОРЭ [14]. Полагаем, что это связано с различием в методике определения ОРЭ - мы оценивали ее по ЧНЭ, в то время как вышецитируемые авторы определяли ОРЭ по условному уровню гемоглобина, выходящего из эритроцитов при их экспозиции в гипотонической среде.
Нами впервые показано, что на ОРЭ не влияют селективный блокатор Р1-АР атенолол (10-8 г/мл), неселективный блокатор а-АР ницерголин (10-8 и 10-6 г/мл) и смесь ницерголина и атенолола (оба - 10-6 г/мл). Так, при действии ницерголина (10-6 г/мл) на эритроциты фракций Ф30, Ф45, Ф60, Ф90 и Ф120 показатель Облок составил соответственно 108,1±3,9%, 103,7±5,9%, 107,3±6,8%, 95,8±14,5% и 92,5±16,8% от ЭК1, а при действии смеси ницерголина и атенолола (оба - 10-6 г/мл) эти значения составили соответственно 99,4±7,4%, 97,2±3,3%, 107,9±6,3%, 105,2±16,9% и 119,2±14,2% от ЭЮ. Отметим, что все изменения ОРЭ, наблюдаемые при воздействии адреноблокаторов, были недостоверны (р>0,05 , по критерию Манна-Уитни). В целом результаты серии 1 позволяли использовать адреноблокаторы для изучения роли АР в реализации эффектов адреналина.
Влияние адреналина на ОРЭ проведено в сериях 2, 3 и 4. В серии 2 было установлено, что адреналин (10-6 г/мл) не влияет на ОРЭ четырех фракций (Ф30, Ф45, Ф60 и Ф120), но достоверно (р<0,05, или #) повышает ОРЭ фракции Ф90. Действительно, показатель Оадр, отражающий ЧНЭ в присутствии адреналина, для фракций Ф30, Ф45, Ф60 и Ф120 составил соответственно 99,4±6,5%, 111,8±15,8%, 119,0±11,4% и 223,0±128,7% от ЭЮ, а для фракции Ф90 - 125,2±8,5%# от ЭК90. Результаты серии 3 показали, что адреналин (10-6 г/мл) не влияет на ОРЭ фракции Ф30 (Оадр = 112,6±8,8% от ЭК30), но достоверно повышает ОРЭ фракции Ф60 (Оадр = 149,7±13,5%# от ЭК60). В серии 4 исследовали влияние пяти концентраций адреналина (10-10, 10-9, 10-8, 10-7 и 10-6 г/мл) на ОРЭ только одной фракции (Ф45). Показано, что адреналин не влиял на резистентность эритроцитов женщин с ЛФЦ (О составил соответственно 94,3 ±7,8%, 91,9±5,9%, 90р5±5,6%, 90,4±7,7% и 96,7±8,7% от ЭК45), но достоверно снижал ОРЭ женщин с ФФЦ (О составил соответственно 84,4±4,8%#, 87,2±4,9%#, 87,9±4,0%#, 91,5±4,5% и 98,9±9,5% от ЭК45). Таким образом, влияние адреналина на ОРЭ зависело от концентрации адреналина, фракции эритроцитов и уровня половых гормонов. Нами установлена способность адреналина повышать ОРЭ (в концентрации 10-6 г/мл он повышал
ОРЭ фракции Ф60 и Ф90 у женщин без учета фазы цикла) или, наоборот, способность адреналина снижать ОРЭ (в концентрациях 10-10 г/мл, 10-9 г/мл и 10-8 г/мл он снижал ОРЭ фракции Ф45 женщин с фолликулярной фазой цикла).
В целом наши результаты частично подтверждают данные литературы о способности адреналина изменять ОРЭ небеременных женщин - либо повышать ОРЭ [2, 3], либо снижать [2, 12, 15]. Полагаем, что эта способность связана с тем, что под влиянием адреналина либо меняется число аквапоринов на мембране эритроцитов (за счет их транслокации из цитозоля в мембрану, или из мембраны в цитозоль), либо меняется прочность поверхностной мембраны эритроцитов, т.е. ее устойчивость к растяжению входящей водой. Каков конкретный механизм этого влияния, пока неясно. Но в любом случае можно утверждать, что способность адреналина изменять ОРЭ зависит от его взаимодействия с адренорецеп-торами эритроцитарной мембраны, эффективность активации которых (и/или число которых) зависит от фракции эритроцитов и от уровня половых гормонов. Доказательством участия АР в эффекте адреналина являются наши данные о влиянии адреноблокаторов на эффект адреналина.
Влияние обзидана на способность адреналина изменять ОРЭ исследовали в серии 2 (фракции Ф30-Ф120) и в серии 3 (фракции Ф30 и Ф60). В серии 2 показано, что адреналин (10-6 г/мл) при совместном действии с обзиданом (10-5 г/мл) достоверно (р<0,05) повышает ОРЭ фракции Ф30, Ф45 и Ф60. Так, в опытах с эритроцитами фракции Ф30 сам по себе адреналин (10-6 г/мл) не влиял на ОРЭ (Оадр = 99,4±6,5% от ЭК30), а при его воздействии совместно с обзиданом он повышал ОРЭ (О ^ . = 113,2±6,5%#
4 адр+обз
от ЭК30). Аналогичные данные получены для фрак-
(Оадр+ат= 115,9±13,5%). Результаты опытов с эритроцитами фракции Ф60 позволяют заключить, что блокада Р1-АР при интактных а-АР и Р2-АР усиливают способность адреналина снижать ОРЭ. Это означает, что активация Р1-АР катехоламинами повышает ОРЭ. С учетом наших данных о том, что обзидан увеличивает способность адреналина повышать ОРЭ, можно утверждать, что активация адреналином Р2-АР, в отличие от активации Р1-АР, снижает ОРЭ.
Влияние ницерголина на способность адреналина изменять ОРЭ оценивали в серии 2 (фракции Ф30-Ф120) и в серии 3 (фракции Ф30 и Ф60). В серии 2 показано, что ницерголин (10-6 г/мл) не изменяет влияние адреналина (10-6 г/мл) на ОРЭ фракций Ф30, Ф45 и Ф120, но ослабляет способность адреналина (10-6 г/мл) повышать ОРЭ фракций Ф60 и Ф90. Действительно, для фракции Ф30 показатель О = 99,4±6,5%, а показатель О = 92,7±2,3% от ЭаКдр ;
7 7 7 адр+ниц 7 7 30'
для фракции Ф45 - соответственно 111,8±15,8% и 94,9±2,6% от ЭК45, а для фракции Ф120 - 111,8±15,8% и 94,9±2,6% от ЭК120 (все изменения недостоверны, р>0,05). В то же время для фракции Ф60 показатель О = 119,0±11,4%, а показатель О , = 89,1±4,1%#
адр адр+ниц
от ЭК60, а для фракции Ф90 эти значения составили соответственно 125,2±8,5%# и 95,7±4,4% от ЭК90. В серии 3 показано, что даже в низкой концентрации (10-8 г/мл) ницерголин усиливает способность адреналина (10-6 г/мл) снижать ОРЭ или препятствует способности адреналина повышать ОРЭ. Так, в опытах с эритроцитами фракции Ф30 сам по себе адреналин не влиял на ОРЭ (Оадр = 112,6±8,8% от ЭК30), а при совместном с ницерголином воздействии достоверно снижал ОРЭ (О ^ = 85,3±6,2%#
адр+ниц
от ЭК30). В опытах с эритроцитами фракции Ф60 адреналина сам по себе достоверно повышал ОРЭ (О = 149,7±13,5%# от ЭК), а при совместном с ни-
ции Ф45 (О =111,8±15,8%; О ^ , = 121,4±10,5%# церголином воздействии - не влиял на ОРЭ (О
адр адр+обз
адр+обз
от ЭК45) и для фракции Ф60 (Оадр =119,0±11,4% и (Ощр+обз = 122,0±7,1%#). В серии 3 в опытах с эритроцитами фракции Ф30 и Ф60 показано, что обзидан при его использовании в более низкой концентрации (10-8 г/мл) не изменяет способность адреналина (10-6 г/мл) повышать ОРЭ. Действительно, в опытах с эритроцитами фракции Ф30 О =112,6±8,8%, а Оадр+о6з = 107,3±10,7% от ЭК30, а дляфракции Ф60 эти значения составили соответственно 149,7±13,5%# и 133,1±28,8% от ЭК60. Таким образом, эти результаты указывают на то, что блокада Р1-АР и Р2-АР обзида-ном при его использовании в достаточно высокой концентрации (10-5 г/мл) усиливает способность адреналина повышать ОРЭ.
Влияние атенолола на способность адреналина изменять ОРЭ оценивали в серии 3 в опытах с эритроцитами фракций Ф30 и Ф60, используя атенолол лишь в низкой концентрации (10-8 г/мл). В опытах с эритроцитами фракции Ф30 установлено, что сам по себе адреналин не менял ОРЭ (Оадр = 112,6±8,8%) и он не менял ОРЭ при совместном воздействии с атенололом (О ^ = 99,2±11,7%). В опытах с эрит-
4 адр+ат. 7 7/ 1
роцитами фракции Ф60 адреналин сам по себе достоверно повышал ОРЭ (Оадр =149,7±13,5%#), а при совместном с атенололом воздействии не менял ОРЭ
адр+ниц
= 111,6±12,3% от ЭК60). Таким образом, нами впервые установлено, что блокада а-АР эритроцитов ни-церголином (10-8 или 10-6 г/мл) на фоне интактных Р1-АР и Р2-АР ослабляет способность адреналина (10-6 г/мл) повышать ОРЭ. Эти данные указывают на то, что активация а-АР повышает ОРЭ.
Влияние смеси ницерголина и атенолола на способность адреналина изменять ОРЭ оценивали в серии 2 (фракции Ф30-Ф120) и в серии 4 (фракция Ф45), используя оба блокатора в концентрации 10-6 г/мл. В серии 2 в опытах с эритроцитами фракций Ф30, Ф45, Ф60, Ф90 и Ф120 адреналин (10-6 г/мл) сам по себе не изменял ОР у эритроцитов всех фракций, за исключением фракции Ф90, у которых он повышал ОР (показатель О составил соот-
адр
ветственно 99,4±6,5%, 111,8±15,8%, 119,0±11,4%, 125,2±8,5%# и 223,0±128,7% от ЭК). Однако на фоне смеси ницерголина и атенолола, т.е. при блокаде а-АР и бета1-АР адреналин достоверно снижал ОР эритроцитов фракций Ф30, Ф45, Ф90 и Ф120, но не повышал ОР эритроцитов фракции Ф60 (показатель Оадр+блок для эритроцитов фракций Ф30-Ф120 составил соответственно 86,3±5,8%#, 77,8±6,2%#, 92,0±5,5%, 69,2±6,5%#А и 44,4±7,0%#). При этом в отношении эритроцитов фракции Ф90 выявлено
достоверное различие (А) с эффектом адреналина. Таким образом, результаты опытов с эритроцитами фракции Ф30, Ф45, Ф90 и Ф120 указывают на то, что блокада а-АР и бета1-АР при интактных бета2-АР способствует снижению ОРЭ под влиянием адреналина. Это позволяет заключить, что при активации адреналином а-АР и Р1-АР происходит рост ОРЭ, а при активации Р2-АР - снижение ОРЭ.
В серии 4 в опытах с эритроцитами фракции Ф45 было исследовано влияние 5 концентраций адреналина (10-10, 10-9, 10-8, 10-7 и 10-6 г/мл), в том числе на фоне блокады а-АР и бета1-АР смесью ницерго-лина и атенолола на их ОР. В опытах с эритроцитами женщин с ФФЦ сам по себе адреналин достоверно снижал ОРЭ в концентрациях 10-10, 10-9 и 10-8 г/мл и не влиял на ОРЭ в концентрациях 10-7 и 10-6 г/мл (показатель О составил соответственно 84,4±4,8%#,
адр
87,2±4,9%#, 87,9±4,0%#, 91,5±4,5% и 98,9±9,5% от ЭК45). На фоне смеси ницерголина и атенолола адреналин также достоверно снижал ОРЭ в концентрациях 10-10 г/мл (О ^ = 85,9±5,1%#) и в 10-8 г/мл
А 4 адр+блок 77/
(О ^ = 80,9±4,9%#), не влияя достоверно на ОРЭ
адр+блок
в концентрациях 10-9 г/мл (Оадр+6лок= 82,4±9,3%) и 10-7 г/мл (О _ = 87,8±6,5%) и приобретал способ-
адр+блок
ность достоверно снижать ОРЭ в концентрации 10-6 г/мл (Оадр+блок = 81,8±6,5%#). Таким образом, данные, полученные в опытах с эритроцитами фракции Ф45 при использовании адреналина в концентрации 10-6 г/мл, также говорят о том, что блокада а-АР и Р1-АР на фоне интактных Р2-АР усиливает способность адреналина снижать ОРЭ.
В опытах с эритроцитами женщин с ЛФЦ сам по себе адреналин во всех исследованных концентрациях (10-10 - 10-6 г/мл) не влиял достоверно на ОРЭ (показатель О составил соответственно 94,3±7,8%,
адр
91,9±5,9%, 90,5±5,6%, 90,4±7,7% и 96,7±8,7% от ЭК45). В то же время на фоне смеси ницерголина и атенолола адреналин достоверно снижал ОРЭ во всех концентрациях, кроме концентрации, равной 10-8 г/мл (показатель Оадр+блок для адреналина в концентрациях 10-10, 10-9, 10-8, 10-7 и 10-6 г/мл составил соответственно 87,6±4,6%#, 85,2±5,3%#, 97,9±6,8%, 86,7±4,5%# и 82,1±7,2%#).
Таким образом, результаты опытов с эритроцитами фракции Ф45 при использовании адреналина в концентрациях 10-10, 10-9, 10-7 и 10-6 г/мл также указывают на то, что блокада а-АР и Р1-АР на фоне интактных Р2-АР повышает способность адреналина снижать ОРЭ. Кроме того, результаты исследований позволяют предположить, что различие между женщинами с ФФЦ и женщинами с ЛФЦ по характеру изменения ОРЭ под влиянием адреналина связаны с тем, что половые гормоны меняют эффективность активации а-АР и Р-АР
В целом результаты серий 2, 3 и 4 позволяют утверждать, что содержащиеся в эритроцитах небеременных женщин а-АР (а1-АР и а2-АР) и Р-АР (Р1-АР и Р2-АР) участвуют в изменении ОРЭ под влиянием адреналина. В частности, мы полагаем, что при активации а-АР (скорее всего, при активации и
Œj-АР, и а2-АР) и при активации Р^АР происходит рост ОРЭ, а при активации Р2-АР происходит снижение ОРЭ. Мы не исключаем, что при активации а-АР и Pj-АР снижается число аквапоринов в мембране (за счет их перехода в цитозоль) и, возможно, повышается жидкостность мембраны, т.е. ее способность выдерживать напряжение, создаваемое входящей в эритроцит воды. При активации Р2-АР, в результате которой ОРЭ снижается, происходят противоположные процессы.
Зависимость эффекта адреналина в отношении ОРЭ от вида фракций эритроцитов и от уровня половых гормонов мы объясняем изменением соотношения числа соответствующих рецепторов и/или изменением эффективности их активации.
В заключение отметим, что результаты наших исследований позволили предложить новый способ исследования адренореактивности разных фракций эритроцитов (Ф30,.. Ф120), основанный на оценке характера изменения ОР экспонируемых в ДВ эритроцитов под влиянием адреналина (10-10 - 10-6 г/мл) на фоне интактных АР и в условиях одновременной блокады а-АР ницерголином и Pj-АР атенололом, т.е. на фоне интактных Р2-АР [10]. С помощью этого метода удалось показать, что адренореактивность эритроцитов у женщин зависит от этапа репродуктивного процесса [9].
Выводы
1. С помощью предложенного авторами метода оценки осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ), основанного на определении числа негемо-лизированных эритроцитов после их экспозиции в дистиллированной воде (ДВ), установлено, что при 30-, 45-, 60-, 90- и 120-секундной экспозиции эритроцитов небеременных женщин их число снижается соответственно до 84,6-66,8%, 70,3-56,3%, 53,9-37,9%, 30,1-13,9% и 13,6-1,4% от исходного уровня. Это позволяет говорить о фракциях (Ф30, Ф45,.. Ф120) эритроцитов, отличающихся между собой по осмотической резистентности.
2. Добавление адреналина в экспозиционную среду в одних случаях повышает ОРЭ, а в других -снижает или не изменяет ее. Характер влияния адреналина на ОРЭ зависит от фракции эритроцитов, его концентрации и уровня половых гормонов. Например, для фракции Ф45 установлено, что способность адреналина снижать ОРЭ уменьшается с ростом концентрации адреналина и ростом содержания в крови прогестерона.
3. Обзидан усиливает способность адреналина повышать ОР эритроцитов, а атенолол, ницерголин или их смесь - снижает эту способность. Это означает, что рост ОРЭ под влиянием адреналина обусловлен активацией а-АР и в меньшей степени Pj-АР, а снижение ОРЭ связано с активацией Р2-АР.
Список литературы
1. Адамян Л.В., Смольникова Т.Ю., Длусская И.Г., Стрюк Р.И., Ляшко Е.С., Бейлин А.Л., Мисхин С.В., Герасимов А.Н., Брагинская С.Г. Метод оценки адренореак-
тивности организма (ß-АРМ) у беременных для прогнозирования течения родов // Проблемы репродукции. 2006. № 1. С. 91-97.
2. Бабин А.П., Дворянский С.А., Циркин В.И., Трош-кина Н.А., Гусева Е.В., Круть И.Ю., Костяев А.А. Изменение осмотической резистентности и адренореактивности эритроцитов у женщин при беременности// Гемореология в микро- и макроциркуляции: Материалы V международной конференции. Ярославль: ЯГПУ им. К.Д. Ушинского, 2005. С. 196.
3. Бацев Н.М. Состояние эритроцитарной системы у детей, больных бронхиальной астмой, при горноклиматическом лечении: автореф. дис.... к.м.н.. Ростов-на-Дону, 2002. 23 с.
4. Гусева Е.В., Дворянский С.А., Циркин В.И. ß-ад-ренореактивность эритроцитов женщин при нормальных и осложненных родах // Акушерство и гинекология. 1998. № 4. С. 17-22.
5. Геворкян Н.А. Состояние мембрано-рецепторного комплекса эритроцитов у больных различными клинико-патогенетическими формами первичного хронического бронхита: автореф. дис. к.м.н., СПб., 1995. 19 с.
6. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. 459 с.
7. Кленов Р.О. Действие адреналина, цАМФ и АТФ на образование пептидов возрастными фракциями эритроцитов человека: автореф. дис. ... к.б.н.. Уфа, 2010. 24 с.
8. Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. М.: ГЭОТАР- Медиа, 2007. 800 с.
9. Крысова А.В., Куншин А.А., Циркин В.И., Тройлова М.Е. Джалилова В.Д., Иванова Е.П., Сысуева Е.А., Торо-пова А.Л., Саитова О.В. Кинетика гемолиза эритроцитов человека в дистиллированной воде и влияние на нее адре-нергических средств //Гемореология и микроциркуляция: Материалы VII международной научной конференции. Ярославль: ЯГПУ им. К.Д. Ушинского, 2009. С. 218.
10. Крысова А.В., Циркин В.И. Способ оценки альфа- и бета2-адренореактивности эритроцитов человека по изменению их осмотической резистентности под влиянием адреналина и адреноблокаторов: приоритетная справка № 2011134138/17(050548) от 17.08.2011.
11. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. C.119-120.
12. Минеев В.Н., Шпетная Е.А., Шадрина Е.Б. Мем-брано-рецепторные нарушения при бронхиальной астме //Терапевтический архив.1999. Т. 71, № 3. С. 9-13.
13. Манухин Б.Н., Нестерова Л.А., Смурова Е.А. Характеристика кинетики взаимодействия ß-адренорецепто-ров эритроцитов крыс со специфическим блокатором про-пранололом // Биологические мембраны. 1994. Т. 11. № 5. С. 489-495.
14. Стрюк Р.И., Длусская И.Г. Адренореактивность и сердечно-сосудистая система. М.: Медицина, 2003. 160 с.
15. Соминский В.Н., Окунь К.В. Повышение осмотической резистентности эритроцитов крови под влиянием пропранолола //Лабораторное дело. 1981. № 9. С. 525-527.
16. Трошкина Н.А., Циркин В.И., Дворянский С.А., Ивашкина Е.П. Оценка адренореактивности эритроцитов небеременных и беременных женщин с физиологически протекающей и осложненной гестозом беременностью // Пермский медицинский журнал. 2007. Т. 24. № 1-2. С. 140-145.
17. Циркин В.И., Крысова А.А., Куншин А.А. Способ оценки осмотической резистентности эритроцитов. // Патент на изобретение Ru № 2419792 C1 от 07.12.2009. Описание изобретения к патенту Российской Федерации. Бюллетень № 5, 2011.
18. Cho M, Knowles D., Smith B., Moulds J., Agre P., Mohandas N., Golan D. Membrane dynamics of the water
transport protein aquaporin-1 in intact human red cells. // Biophys. J. 1999. Vol. 76, № 2. Р. 1136-1144.
19. Lomsadze G., Khetsuriani R., ArabuliM., Intskirveli N., Sanikidze T. Age related alterations of adrenoreceptor activity in erythrocyte membrane //Georgian Med. News. 2011. Vol. 195. Р. 58-61.
20. MolaM., Nicchia G., SveltoM., Spray D., FrigeriA. Automated cell-based assay for screening of aquaporin inhibitors // Anal. Chem. 2009. Vol. 81. № 19. Р. 8219-8229.
21. Marks P., Johnson A. Relationship between the age of human erythrocytes and their osmotic resistance: a basis for separating young and old erythrocytes // J.Clin. Invest. 1958. Vol. 37, № 11. Р. 1542-1548.
Сведения об авторах
1. крысова Анна владимировна - очный аспирант кафедры биологии Вятского государственного гуманитарного университета, e-mail: tsirkin@list.ru
2. Диркин виктор Нванович - д.м.н., профессор кафедры нормальной физиологии Казанского государственного медицинского университета, профессор кафедры биологии Вятского государственного гуманитарного университета, e-mail: tsirkin@list.ru
3. Куншин Алексей Александрович - к.б.н., доцент кафедры медико-биологических дисциплин Вятского социально-экономического института, внештатный научный сотрудник научно-исследовательской лаборатории «Физиологии мышц и биологически активных веществ» кафедры биологии Вятского государственного гуманитарного университета, e-mail: valeology@vshu.kirov.ru
УДК 612.63.02
Г.Н. Ходырев1, С.Л. Дмитриева2, А.В. Новоселова2, С.В. Хлыбова2, В.И. Циркин 13
ИЗМЕНЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ
ВАРИАБЕЛЬНОСТИ СЕРДЕЧНОГО РИТМА ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ, В РОДАХ И ПОСЛЕРОДОВОМ ПЕРИОДЕ
G.N. Khodyrev, S.L. Dmitrieva, A.V. Novoselova, S.V. Khlybova, V.I. Tsirkin
CHANGES OF HEART RATE VARIABILITY DURING PREGNANCY,
INTRAPARTUM AND POSTPARTUM
1Вятский государственный гуманитарный университет, г. Киров
2Кировская государственная медицинская академия, г. Киров
3 Казанский государственный медицинский университет, г. Казань
Оценивали состояние ВНС по вариабельности сердечного ритма (ВСР) у 377 женщин, используя медицинские диагностические системы (МДС) «Валента» и «Нейрон-Спектр-3», отличающиеся анализируемыми диапазонами HF-, LF- и VLF-волн кардиоинтервалограм-мы. Установили, что значения спектральных показателей (n=10) ВСР, в отличие от временных (n=16), зависят от
