CC BY
81
УДК 612.118
А.В. Крысова1, В.И. Циркин2, С.В. Хлыбова3, А.А. Куншин1, М.Г. Тарлавина4,
С.П. Норина4
АДРЕНОРЕАКТИВНОСТЬ И ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ ЖЕНЩИН ПРИ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ ПРОТЕКАЮЩЕЙ БЕРЕМЕННОСТИ И ПРИ НАЛИЧИИ УГРОЗЫ ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫХ
РОДОВ
A.V. Krysova1, V.I. Tsirkin2, S.V. Khlybova3, A.A. Kunshin1, M.G. Tarlavina4,
S.P. Norina4
ADRENOREACTIVITY AND OSMOTIC RESISTANCE OF ERYTHROCYTES
AT NORMAL PREGNANCY AND THREATENED PRETERM LABOUR
вятский государственный гуманитарный университет;
2Казанский государственный медицинский университет;
3Кировская государственная медицинская академия;
4Кировская областная клиническая больница.
У 77 женщин исследовали осмотическую резистентность эритроцитов (ОРЭ), помещенных в дистиллированную воду, и их адренореактивность по изменению ОРЭ при действии адренергических средств. Установили, что при беременности, в том числе осложненной угрозой преждевременных родов (УПР), ОРЭ возрастает и сохраняется высокой в родах. Активация бетаг-адренорецепторов (АР) эритроцитов снижала ОРЭ, а эффективность активации этих рецепторов не металась на протяжении менструального цикла (МЦ) и возрастала при беременности и в родах. Активация альфа-АР и бета]-АР эритроцитов повышала ОРЭ, а ее эффективность изменялась на протяжении МЦ (возрастала в лютеиновую фазу и снижалась в фолликулярную) и при беременности (в I и II триместрах она осталась такой же низкой, как в фолликулярную фазу, а в III триместре и в родах она возрастала до уровня, характерного для лютеиновой фазы цикла). При УПР меняется эффективность активации АР эритроцитов (для бета2-АР она снижается, а для альфа-АР и бетагАР - возрастает), что указывает на снижение силы бета-адренорецепторного ингибирующего механизма (бета-АРИМ) и на перспективность применения в терапии УПР не только бета-адреномиметиков, но экзогенных сенсибилизаторов бетаг-АР и блокаторов альфа-АР. Определение адренореактивности эритроцитов может использоваться в клинической практике как один из способов оценки состояния бета-АРИМ.
Ключевые слова: беременность, угроза преждевременных родов, осмотическая
резистентность и адренореактивность эритроцитов, эндогенные модуляторы адренорецепторов.
The osmotic resistance of erythrocytes (ORE), estimated by the number of non-hemolyzed erythrocytes inserted in distilled water and changes in the ORE under the influence of adrenergic agents, have been studied in 77 women. It has been established that in case of pregnancy the ORE increase and keep near this level in labour as well as in women who threatened premature labour (TPL). Activation of beta2-adrenoreceptors (AR) of erythrocytes decreased the ORE. The degree of this decrease, i.e. efficiency of beta2-AR activation, remained unchanged during the menstrual cycle (MC) and rose under pregnancy and in labour. Activation of alpha-AR and betai-AR increased the ORE,
while its efficiency changed during the MC (it increased in luteal phase) and during pregnancy (in the I-st and Il-nd trimesters it remained at the same low level as compared with the follicular phase, but in the Ill-d trimester and in labour it increased and reached the level typical for luteal phase of MC). The effectiveness of activation of erythrocyte’s AR under the TPL (is decreases for beta2-AR and increases for alpha-AR and betarAR), that shows diminution of strength of beta-adrenoreceptor inhibit mechanism (beta-ARIM) and perspective of using either beta-adrenoceptor agonists and alfa-adrenoceptor blocators, and exogenic beta2-adrenoceptor sensibilizators in TPL therapy. Definition of erythrocyte’s adrenergic responsiveness can be used in clinical practice as one of ways of estimation a beta-ARIM condition.
Key words: pregnancy, threatened premature labour, osmotic resistance and adrenoreactivity of erythrocytes, endogenic modulators of adrenoreceptors.
Введение
Угроза преждевременных родов (УПР) и преждевременные роды (ПР) относятся к распространенным акушерским осложнениям - УПР наблюдается у 23-29% беременных [9,11,13], а ПР - у 4-12% беременных [11]. Вместе с тем, вопрос о патогенезе и диагностике этих осложнений остается отгрытым, в том числе в связи с тем, что до настоящего времени нет общепринятой точки зрения на механизмы регуляции сократительной деятельности матки (СДМ) у женщин при неосложенном течениии беременности и родах. В последние годы обосновывается представление о том, что у женщин ведущую роль в создании оптимальных условий для вынашивания беременности играет бета-адренорецепторный ингибирующий механизм (бета-АРИМ), реализующийся за счет активации бета2-адренорецепторов (АР) миометрия с участием катехоламинов и эндогенного сенсибилизатора бета-АР (ЭСБАР), содержащегося в крови и околоплодных водах [18,12,17]. С этих позиций предродовое и родовое повышение СДМ рассматривается как результат снижения силы бета-АРИМ, что позволяет за счет автоматии миометрия и действия окситоцина, серотонина и других веществ активировать СДМ. В рамках этой гипотезы предполагается [18,9,17], что УПР и ПР являются следствием досрочного снижения силы бета-АРИМ. Поэтому для диагностики и выбора оптимальной терапии этих состояний важным является оценка состояния бета-АРИМ. Ее предложено проводить различными способами, в том числе по адренореактивности эритроцитов, в том числе по адренозависимой СОЭ [18,5] и по адренозависимой осмотической резистентности эритроцитов, или ОРЭ [3,1]. Однако малочисленность таких исследований и неоднозначность трактовки их результатов наряду с несовершенством самих методов исследования адренореактивности эритроцитов указывают на необходимость дальнейшего ее изучения у беременных и рожениц, в том числе при наличии у них УПР. С учетом всего сказанного и принимая во внимание важность разработки эффективных методов лечении УПР и ПР, в работе была поставлена цель — исследовать адренореактивностъ эритроцитов женщин при физиологически протекающей беременности и при наличии УПР, используя принципиально новый метод оценки ОРЭ [6,19].
Методика исследований.
Исходную ОРЭ определяли по способу [19], основанному на определении числа негемолизированных эритроцитов (ЧНЭ) при их 30-, 45-, 60-, 90- и 120-секундной экспозиции в дистиллированной воде (ДВ), содержащей 2,5 мМ СаС12. Адренореактивность эритроцитов оценивали по способу [6], основанному на изменении их ОР в условиях 4 5-секундной экспозиции в ДВ под влиянием адреналина или адреналина совместно с ницерголином (блокатором альфа-АР) и атенололом (блокатором бетагАР).
Исследовали капиллярную или венозную кровь, полученные с личного согласия исследуемых. Капиллярную кровь (в объеме 0,02 мл) получали у 18-25-летних соматически здоровых студенток (п=21) в фолликулярную (группа 1) или в лютеиновую фазу цикла (группа 2). Венозную кровь в объеме 1 мл, который вносили в пробирку с 0,2 мл водного раствора гепарина в концентрации 1МЕ/мл, получали в женской консультации у 18-36-летних женщин (п=33) в I, II и III триместрах неосложненной беременности (соответственно на 4-11, 14-20 и 27-38 нед.; группы 3,4 и 5), в родильном отделении у 23-32-летних женщин (п=10) во время 1 периода неосложненных срочных (38-41 нед.) родов (группа 6), а также в отделении патологии беременных у 16-37-летних женщин (п=13) с УПР на сроках 20-36 нед. беременности до начала терапии (группа 7). Диагноз выставлялся в соответствии с общепринятым стандартом [2] по клинической картине и данным наружной гистерографии. Забор крови для исследования у этих женщин проводили до начала лечения. Оно включало токолитики, в том числе магнезию (2 женщин), блокатор кальциевой проницаемости нифедипин (2), а также седативные и спазмолитические средства. У всех этих женщин лечение оказалось эффективным.
Капиллярную или венозную кровь в объеме 0,02 мл добавляли в пробирку, содержащую 0,2 мл 0,9% раствора ЫаС1, гепарин в концентрации 1 МЕ/мл и 2,5 мМ СаС12. Затем 0,02 мл этого 10-кратного разведения крови добавляли в пробирку, содержащую 0,4 мл 3% раствора ЫаС1. Это приводило к конечному разведению крови в 200 раз и позволяло оценить исходное число эритроцитов в 1 л крови, т.е. абсолютный контроль (АК). Эритроциты считали классическим методом [8], используя счетную камеру Алферова-Бюргера и микроскоп типа Биолам ЛОМО (ИМ13).
Для определения исходной ОРЭ в 5 пробирок вносили по 0,2 мл ДВ, содержащей 2,5 мМ СаС12, и по 0,02 мл 10-кратно разведенной крови, а соответственно через 30с, 45с, 60с, 90с и 120с вносили по 0,2 мл 6% раствора №01. Это приводило к остановке гемолиза, к конечному разведению крови в 200 раз и к созданию среды (3% раствор ЫаС1), удобной для подсчета эритроцитов. Затем для каждой пробирки подсчитывали ЧНЭ, в том числе после 45-секундной экспозиции. Это число принимали в качестве экспозиционного контроля (ЭК45). Для интегральной оценки ОРЭ рассчитывали также показатель Т50, т.е. длительность экспозиции, при которой ЧНЭ составляет 50%.
Для определения адренозависимой ОРЭ готовили ряд из 10 пробирок. Первые пять содержали по 0,2 мл ДВ, в которой помимо СаС12 (2,5 мМ) находился адреналин в соответствующей концентрации (Ю'10, 10'9, 10'8, 10'7 и 10'6 г/мл). Они служили для определения показателя Оадр, т.е. ЧНЭ после 45-секундной экспозиции эритроцитов в ДВ совместно с адреналином. Остальные пять пробирок вносили по 0,2 мл ДВ, в которой помимо СаС12 (2,5 мМ) содержались атенолол (10'6 г/мл), ницерголин (10'6 г/мл) и адреналин в исследуемой концентрации. Эти пробирки служили для определения показателя ОаДр+блок, т.е. ЧНЭ после 45-секундной экспозиции эритроцитов в ДВ совместно с адреналином адреноблокаторами. Затем в каждую из десяти пробирок добавляли по 0,02 мл 10-кратного разведения крови, а через 45с для остановки гемолиза - по 0,2 мл 6% раствора ЫаС1 и оценивали ЧНЭ. Для нивелирования разброса значений показателей Оадр и ОаДр+блок их выражали в процентах к экспозиционному контролю (ЭК45), т.е. к ЧНЭ после их 45-секундной экспозиции в ДВ в отсутствии адренергических средств.
Результаты исследования подвергали статистической обработке (в таблице они представлены в виде М±т), а различия оценивали непараметрическим методом Манна-Уитни, считая их достоверными при р<0,05 [4].
Результаты исследования и их обсуждение
Исходная ОРЭ. Установлено (табл.1), что содержание эритроцитов в крови у небеременных женщин не зависит от фазы цикла и соответствует данным литературы [8]. Содержание эритроцитов у женщин в I, II и III триместрах беременности, у рожениц и у женщин с УПР было достоверно (р<0,05) ниже, чем у небеременных, что согласуются с данными литературы [20] и объясняется гемодиллюцией. Оценка ОРЭ показала (табл.1), что экспозиция эритроцитов в дистиллированной воде (ДВ) сопровождается гемолизом, интенсивность которого возрастала с увеличением длительности экспозиции. У небеременных женщин ОРЭ не зависела от фазы цикла. Уже в I триместре беременности (группа
3) ОРЭ становится выше, чем у небеременных, о чем свидетельствуют достоверные различия между группами (1,2 и 3) по ЧНЭ при 90- и 120 -секундных экспозициях. Во II триместре (группа 4) ОРЭ была выше, чем у небеременных (достоверно выявлено по ЧНЭ при всех пяти экспозициях и по Т50) и выше, чем у женщин в I триместре (достоверно выявлено по ЧНЭ при 30-секундной экспозиции). В III триместре и в родах ОРЭ оставалось такой же высокой, как и во II триместре.
Таким образом, при неосложненной беременности ОРЭ возрастает, достигая максимума во II триместре, и сохраняется на этом уровне в I периоде родов. Подобные данные были получены и [21]. Полагаем, что рост ОРЭ при беременности связан с уменьшением в мембране эритроцитов аквапоринов, которые, как известно [15,22], участвуют в трансмембранном транспорте воды, а также с увеличением растяжимости мембраны вследствие изменения ее липидных компонентов. Мы не исключаем, что характерная для беременности
гемодиллюция, облегчающая циркуляцию крови [20], обусловлена снижением трансмембранного переноса воды.
Таблица 1.
Число негемолизированных эритроцитов (М±т) при 30-,45-,60,90 и 120-секундной экспозиции в дистиллированной воде (в % к абсолютному контролю, АЕС) и значение Т50 (М±т), т.е. длительность экспозиции, при которой остается 50% негемолизированных эритроцитов.
Группа п АК, в 1л Время экспозиции в дистиллированной воде, с н 'Л О О
исследуемых (х1012) 30 45 60 90 120
1 Женщины, Фол. фаза 10 4,06 ±0,13 73,9 ±3,6 61,2 ±4,5 42,9 ±4,7 17.9 ±2,4 6,4 ±1,3 53,0±3,2
2 Женщины, лют. фаза 10 4,11 ±0,17 76,5 ±4,4 60,1 ±3,8 44,4 ±4,7 22,5 ±3,3 10,0 ±2,2 52,1±4,4
3.Беременные, 1тр.; 4-11 нед. 11 3,52 ±0,18 75,9 ±3,8 68,4 ±3,5 53,2 ±2,8 42,5 ±3,5 30,0 ±4,2 69,0±6,8
4.Беременные,II тр., 14-20 нед. 11 2,86 ±0,19 87,7 ±2,9 75,3 ±3,8 62,4 ±4,2 49,0 ±6,3 36,6 ±5,9 77,0±8,7
5. Беременные, Штр.,27-38нед. 11 3,35 ±0,19 83,4 ±4,7 74,2 ±4,6 63,5 ±4,5 47,2 ±3,6 34,7 ±4,2 84,4±8,1
6. Роженицы, 38-41 нед 10 3,02 ±0,17 89,6 ±1,9 79,9 ±3,0 62,0 ±3,3 48,0 ±2,7 37,9 ±4,5 85,3±6,1
7. УПР, 21-36 нед 13 3,25 ±0,19 87,5 ±3,5 72,2 ±3,8 60,9 ±3,8 47,2 ±4,2 33,2 ±3,4 83,9±7,5
Межгрупповые различия (Р<0,05) Р 1-3,4,5,6,7 Р 2-3,4,5,6,7 Р 3-4 Р1-4,6,7 Р 2 4,6,7 Рз-4,6,7 Р1-4,5,6 Рг-4,5,6,7 Рзб Рі-4,5,6,7 Рг-4,5,6,7 Р1-3,4,5,6,7 ?2-3,4,5,6,7 Рі-3,4,5,6,7 Рг-3,4,5,6,7 ?1-5,6,7 ?2-3,4,5,6,7
Примечание - Р1-3,4,5,6.,7 и подобные записи указывает на то, что группа 1 (или другая группа) достоверно (р<0,05; по критерию Манна- Уитни) отличается от групп 3,4,5,6,7.
Впервые нами установлено, что при УПР (группа 7) ОРЭ сохранялась такой же высокой, как и во II и III триместрах неосложненной беременности (группы 4 и 5). Это означает, что при УПР, скорее всего, трансмембранный перенос воды в эритроцитах не нарушен.
Общая характеристика адреиореактивиости эритроцитов. Ранее в опытах с эритроцитами небеременных женщин мы показали [7], что активация адреналином бета2-АР снижает ОРЭ, активации альфа-АР и бета!-АР повышает ОРЭ, а одновременная блокада альфа-АР (ницерголином) и бета!-АР (атенололом) усиливает способность адреналина снижать ОРЭ. Результаты, представленные в табл. 2 и 3, подтвердили эти данные и позволили сформулировать следующие 4 положения:
1) Эритроциты небеременных, беременных (в том числе при наличии УПР) и рожающих женщин содержат альфа-АР, бета^АР и бета2-АР. Действительно, в
опытах с интактными эритроцитами адреналин либо снижал ОРЭ, судя по уменьшению ЧНЭ (это указывает на доминирование эффективности активации бета2-АР) либо не изменял ОРЭ (это говорит о балансе между бета2-АР, с одной стороны, и альфа-АР и бетаї-АР с другой). В опытах же с эритроцитами, у которых блокированы альфа-АР и бета,-АР, адреналин, как правило, снижал ОРЭ, причем, это снижение было более выражено, что при действии адреналина на интактные эритроциты.
Таблица 2.
Число негемолизированных эритроцитов при их 45-секундной экспозиции в дистиллированной воде совместно с адреналином (Адр; О адр) или адреналина с блокаторами (Блок; О аДр+блок.) - ницерголином (10'6г/мл) и атенололом (1СГ6 г/мл), в процентах к ЭК45, т.е. числу негемолизированных эритроцитов при их 45-секундной экспозиции в дистиллированной воде без адренергических средств.
Адренерги -ческое средство Концентрация адреналина, г/мл Р
Ю'10 ю-9 10'8 10'7 10'6
1.Женщины, фолликулярная фаза цикла (п= 11; АК= 4,04±0,19 х1012;ЭК45 =2,67±0,11х1012)
Адр. 84,4+4,8* 87,2+4,9* 87,9+4,0* 91,5+4,5 98,9+9,5 -
Адр+Блок. 85,9+5,1* 82,4+9,3 80,9+4,9* 87,8+6,5 81,9+6,5* -
2.Женщины, лютеиновая фаза цикла (п=10; АК= 4,12±0,18 х1012; ЭК45 =2,85±0,15 х1012)
Адр. 94,3+7,8 91,9+5,9 90,5+5,6 90,4+7,7 96,7+8,7 -
Адр+Блок. 87,6+4,6* 85,2+5,3* 97,9+6,7 86,7+4,4 82,1+7,2* -
3. Беременные, I триместр,4-11 нед (п= 11; АК=3,52±0,18 х1012; ЭК45 = 2,38±0,12 х1012)
Адр. 82,2+5,9* 90,7+4,7 84,5+5,8* 82,9+5,7* 89,2+11,3 -
Адр+Блок. 85,4+7,4* 79,4+9,0* 82,5+5,9* 74,1+7,4* 76,9+6,1* -
4.Беременные, II триместр,] 14-20 нед., (п= 11; АК =2,86+0,19 хЮ12; ЭК45 =2,11+0,13 хЮ12)
Адр. 78,2+4,9* 84,7+5,2* 87,5+4,3* 96,4+6,9 96,6+6,9 -
Адр+Блок. 82,0+8,1* 84,4+7,1* 90,2+6,8 81,3+9,3* 72,7+8,2* -
5.Беременные III триместр 27-38 нед. (п= 1; АК=3,35+0,19 х1012;ЭК45 = 2,44+0,13 хЮ12)
Адр. 88,3+7,7 84,9*+6,4 93,2+7,3 97,5+5,4 101,8+5,8 9-6
Адр+Блок. 74,6+7,1* 79,4+6,6* 75,0+5,4*# 77,2+3,4*# 70,8+3,3*# -
б.Роженицы, I период родов 38-41 нед (п=10;АК=3,02±0,17-х1012; ЭК45= 2,39+0,11 х1012)
Адр. 92,2+5,6 97,9+7,7 94,5+4,5 88,9+3,9* 87,2+5,6*
Адр+Блок. 67,1+3,5*# 65,6+4,2*# 67,2+4,2*# 67,4+4,3*# 66,3+4,5*#
7.УПР, 21-36 нед. (п=13;АК=3,25+0,19х1012; ЭК45 =2,33+0,16 хЮ12)
Адр. 109,3+6,1 101,4+5,6 95,7+3,8 100,6+4,8 97,8+5,9 -
Адр+Блок. 85,3+6,5* # 86,4+5,6 93,8+5,8 80,6+5,3 *# 82,3+7,3 -
Р <0,05 для ОаДр Р 7-3,4,5, 6 - - Р7-З; Р5-3 "
Р<0,05 для Оадр блок Р7-6 Р7-5,6 Р 5-2 Р 7-5,6 Рб-5 -
Примечания: АК - абсолютный контроль, т.е. число эритроцитов в 1 л крови; Символы * и # означают, что различие с ЭК45 (*) или с ОддР (#) достоверно (р<0,05) по критерию Манна-Уитни. Р - достоверность различий между показателями (ОдцР или Одцр+блок)-, полученными в опытах с различными концентрациях адреналина; например, запись 10-8,6 означает, что значение, полученное при концентрации адреналина, равной Ю'10 г/мл, достоверно (р<0,05 по критерию Манна-Уитни) отличается от значений, полученных при использовании адреналина в концентрации 10"8 и 10"6 г/мл; знак «- » - различия недостоверны (р>0,05).
2) Эффективность активации бета2-АР эритроцитов, судя по уменьшению ЧНЭ при действии адреналина в условиях блокады альфа-АР и бета!-АР, не меняется на протяжении менструального цикла и возрастает при беременности и в родах.
3) Эффективность активации альфа-АР и бета^АР эритроцитов, судя по изменению ЧНЭ при воздействии адреналина на интактные эритроциты, меняется на протяжении менструального цикла (возрастает в лютеиновую фазу и снижается в фолликулярную) и при беременности (в I и II триместрах она сохраняется такой же низкой, как в фолликулярную фазу цикла, а в III триместре и родах она возрастает до уровня, характерного для женщин в лютеиновой фазе цикла).
4) При УПР эффективность активации бета2-АР ниже, а эффективность активации альфа-АР и бета1-АР, наоборот, выше, чем у женщин с неосложненным течением беременности.
Для подтверждений этих положений рассмотрим первоначально результаты опытов с адреналином при наличии в среде адреноблокаторов, а затем — при действии адреналина в отсутствии блокаторов.
Влияние адреналина на ОРЭ на фоне блокады альфа-АР и бетах-АР (табл.2 и 3). В опытах с эритроцитами женщин групп 1-6 адреналин, как правило достоверно снижал ОРЭ. Это проявлялось в снижении показателя ОаДр+блок, т.е. ЧНЭ при их 45-секундной экспозиции в ДВ с 2,5 мМ СаС12 в присутствии адреналина, ницерголина и атенолола. При этом степень снижения значений показателя Оадр+блок, как правило, не зависела от концентрации адреналина (10'10 -10'6 г/мл), но зависела от этапа репродуктивного процесса.
Действительно, у женщин в фолликулярной фазе цикла (группа 1) показатель Оадр+блок для адреналина в концентрациях Ю'10, 10'9, 10'8, 10'7 и 10'6 г/мл составил соответственно 85,9%*, 82,4%, 80,9%*, 87,8% и 81,9%* от ЭК45 (символ * здесь и ниже означает, что снижение ЧНЭ достоверно по критерию Манна-Уитни, р<0,05), т.е. адреналин достоверно снижал ОРЭ в трех концентрациях (Ю'10, 10'8 и 10'6 г/мл). У женщин в лютеиновую фазу цикла (группа 2) адреналин достоверно снижал ОРЭ в концентрациях Ю'10, 10'9 и 10'6 г/мл. При этом все различия между группами 1 и 2 по значениям показателя ОаДр+блок носили недостоверный (р>0,1) характер. Это означает, что
эффективность активации бета2-АР в лютеиновую фазу была такой же, как в фолликулярную.
У женщин в I триместре беременности (группа 3) адреналин достоверно снижал ОРЭ в пяти концентрациях, что, несмотря на отсутствие достоверных различий с небеременными женщинами по показателю Оадр+блок, указывает на более высокую эффективность активации бета2-АР по сравнению с небеременными. У женщин во II триместре беременности (группа 4) адреналин достоверно снижал ОРЭ в четырех, а у женщин в III триместре (группа 5) - в пяти концентрациях. При этом для каждой из пяти концентрации адреналина различия между группами 3, 4 и 5 по показателю ОаДр+блок носили недостоверный характер. В то же время в группе 5 способность адреналина в концентрации 10'8 г/мл снижать ОРЭ была достоверно выше, чем у женщин в лютеиновой фазе., т.е. в группе 2 (показатель Оадр+блок в группе 5 был достоверно ниже, чем в группе 2 -75,0% от ЭК45 против 97,9%; р<0,05). Таким образом, эффективность активации бета2-АР возрастает уже в начале беременности и сохраняется на этом уровне во
II и III триместрах беременности.
Таблица 3.
Достоверное (по критерию Манна-Уитни) снижение (▼) осмотической резистентности эритроцитов женщин при их 45-секундной экспозиции в дистиллированной воде (ДВ) под влиянием адреналина (10“10-Ю“6 г/мл) или адреналина совместно с ницерголином и атенололом (по данным таблицы 2).
Концентрация адреналина, г/мл Группы женщин
1 (фол. фаза) 2 (лют. фаза) 3 (I тр.) 4 (II тр.) 5 (III тр) 6 (роды) 7 (УПР)
Адреналин
10'10 ▼ - ▼ ▼ - - -
К)'9 ▼ - - ▼ ▼ - -
10'8 ▼ - ▼ ▼ - - -
10'7 - - ▼ - - ▼ -
10'6 - - - - - ▼ -
Адреналин совместно с ницерголином и атенололом (оба-10 6 г/мл)
10'10 ▼ ▼ ▼ ▼ ▼ ▼ ▼
10'9 - ▼ ▼ ▼ ▼ ▼ -
10'8 ▼ - ▼ - ▼ ▼ -
10'7 - - ▼ ▼ ▼ ▼ ▼
10'6 ▼ ▼ ▼ ▼ ▼ ▼ -
Примечание: «-» означают , что адреналин не влияет на ОРЭ
У рожениц (группа 6) адреналин достоверно снижал ОРЭ во всех пяти концентрациях. Для каждой из них различия группы 6 с группами 3, 4 и 5 носили недостоверный характер. Исключение составила концентрация адреналина,
равная 10' г/мл, которая в группе 6 снижала ОРЭ более выражено, чем в группе 5 (показатель ОаДр+блок составил 67,4%* от ЭК45 против 77,2%*; р6-5<0,05). Это означает, что в родах эффективность активации бета2-АР не только не снижается, как предполагалось ранее [18], а даже возрастает.
У женщин с УПР (группа 7) адреналин достоверно снижал ОРЭ только в
1П 7
двух концентрациях (10' и 10' г/мл). В этой группе способность адреналина снижать ОРЭ была достоверно ниже, чем у беременных в III триместре (группа
5) и у рожениц (группа 6). Действительно, достоверные (р<0,05) различия группы 7 с группой 5 отмечены для адреналина в концентрации 10'9 г/мл (показатель Оадр+блок составил соответственно 86,4% против 79,4%*) и 10'8 г/мл (93,8% против 75,0%*). Достоверные различия группы 7 с группой 6 выявлены для концентраций Ю'10, 10'9и 10'8 г/мл (показатель Оадр+блок составил соответственно 85,3%* против 67,1%*; 86,4% против 65,6%* и 93,8% против 67,2%*). Все это означает, что эффективность активации бета2-АР при УПР достоверно ниже, чем у женщин в III триместре неосложненной беременности и в родах.
Влияние адреналина на ОРЭ в отсутствии адреноблокаторов (табл. 2 и
3). В опытах с эритроцитами женщин групп 1-6 адреналин либо не влиял на ОРЭ, либо снижал ОРЭ, т.е. уменьшал значения показателя ОадР! , а степень этого снижения, как правило, не зависела от концентрации адреналина (Ю'10 - О'6 г/мл), но зависела от этапа репродуктивного процесса.
Действительно, у небеременных женщин в фолликулярную фазу цикла (группа 1) адреналин достоверно снижал ОРЭ в трех концентрациях (Ю'10, 10'9 и 10'8 г/мл), а у женщин в лютеиновую фазу ни в одной из пяти концентраций адреналин не изменял ОРЭ. С учетом того, что группы 1 и 2 не различались между собой по влиянию адреналина на ОРЭ в условиях блокады альфа-АР и бетагАР, эти данные мы объясняем тем, что в лютеиновую фазу цикла в эритроцитах повышается эффективность активации альфа-АР и бетагАР при неизменности эффективности активации бета2-АР.
У женщин в I (группа 3) и II триместре (группа 4) беременности адреналин достоверно снижал ОРЭ в трех концентрациях (для группы 3 - это Ю'10, 10'8 и 10'7 г/мл, а для группы 4 - Ю'10, 10'9 и 10'8 г/мл), т.е. как и у женщин в фолликулярную фазу цикла. Это свидетельствует о том, что в I и II триместрах беременности эффективность активации альфа-АР и бетагАР эритроцитов сохраняется такой же низкой, как у небеременных женщин в фолликулярную фазу цикла. Этот вывод не противоречат нашим данным о повышении эффективности активации бета2-АР в I и II триместре беременности. У женщин в
III триместре беременности (группа 5) адреналин достоверно снижал ОРЭ лишь в
О 7
концентрации 10' г/мл. При этом способность адреналина в концентрации 10' г/мл снижать ОРЭ у этих женщин была достоверно (р<0,05) ниже, чем у женщин группы 3 (показатель Оадр составил 97,5% против 82,9%*). Вместе с приводимыми выше данными о высокой эффективности активации бета2-АР в
группе 5, все это означает, что в III триместре беременности в эритроцитах эффективность активации альфа-АР и бета!-АР эритроцитов повышается по сравнению с I и II триместром и становится такой же, как у женщин в лютеиновую фазу цикла.
У рожениц (группа 6) адреналин достоверно снижал ОРЭ в двух концентрациях (10'7 и 10'6 г/мл). Хотя эти женщины не отличались достоверно от женщин групп 1-5 по показателю Оадр, тем не менее, с учетом приводимых выше данных, в том числе о высокой эффективности активации бета2-АР в родах, это означает, что у рожениц эффективность активации альфа-АР и бета!-АР эритроцитов выше, чем у беременных в I и II триместрах.
У женщин с УПР (группа 7) адреналин ни в одной из исследуемых концентраций не снижал ОРЭ. Способность адреналина снижать ОРЭ у беременных с УПР была ниже, чем у женщин в I, II и III триместрах неосложненной беременности и у рожениц. Это установлено для адреналина в концентрации Ю'10 г/мл (показатель Оадр составил 109,3% против соответственно 82,2%*, 78,2%*, 88,3% и 92,2% от ЭК45, р7.3д56<0,05). Даже с учетом того, при УПР снижается эффективность активации бета2-АР, все эти данные позволяют заключить, что при УПР существенно возрастает эффективность активации альфа-АР (и бета!-АР), в результате чего она становиться выше, чем у женщин с неосложненным течением беременности, и выше, чем у женщин в латентную фазу первого периода срочных родов.
Обсуждение
Наши результаты указывают на то, что адренореактивность эритроцитов, т.е. эффективность активации АР зависит от этапа репродуктивного процесса. В частности, они свидетельствуют о том, что при физиологическом течении беременности существенно возрастает эффективность активации бета2-АР, которая сохраняется высокой и в родах (по крайней мере, в латентную фазу I периода родов), а эффективность активации альфа-АР и бета^АР существенно возрастает в конце беременности и в родах. Наши данные о повышении эффективности активации бета2-АР согласуются с результатами исследования адренозависимой СОЭ [5]. Кроме того, вместе с впервые установленными нами данными о предродовом повышении эффективности активации альфа-АР и бета^АР, они подтверждают концепцию о наличии бета-АРИМ и его ключевой роли в торможении СДМ при беременности [18,12,17]. Наши данные также подтверждают представление ряда авторов [5,14,1] о том, что адренореактивность эритроцитов отражает адренореактивность клеток внутренних органов, в том числе миоцитов матки. С учетом данных о повышении при беременности в крови содержания эндогенного сенсибилизатора бета-АР, или ЭСБАР [18,12,17] и снижении содержания в ней эндогенного сенсибилизатора альфа-АР, или ЭССАР [10], мы полагаем, что эта способность безъядерных эритроцитов крови связана с тем, что изменение
адренореактивности клеток организма происходит не только под влиянием гормонов, регулирующих экспрессию генов соответствующих рецепторов, но и в результате встраивания эндогенных модуляторов клеточных рецепторов типа ЭСБАР и ЭССАР в мембрану клеток, в том числе эритроцитов.
УПР, как известно [11,2], характеризуется повышенной С ДМ, что с позиций концепции о бета-АРИМ рассматривается как следствием низкой эффективности активации бета2-АР миометрия [18,12,17]. Наши исследования ОР эритроцитов, помещаемых в ДВ, впервые показали, что при УПР эффективность активации бета2-АР эритроцитов снижена. К подобному заключению пришли Гусева Е.В. и соавт. [5], исследуя адренозависимую СОЭ, а также Бабин А.П. и соавт. [3], изучавшие адренозависимую ОР эритроцитов, помещаемых в гипотонический (0,42% ЫаС1) раствор. Нами впервые показано, что при УПР помимо снижения эффективности активации бета2-АР возрастает эффективность активации их альфа-АР и бета!-АР. Все это вместе с данными о снижении у женщин с УПР способности внутривенно вводимого бета2-адреномиметика партусистена угнетать СДМ и о повышении способности маммарного теста усиливать СДМ [9] подтверждает представление о том, что УПР является следствием снижения сила бетаАРИМ. Кроме того, они подтверждают представление о том, что эритроциты могут отражать адренореактивность миометрия. Это означает, что оценку состояния бета-АРИМ и диагностику УПР можно проводить по изучению адренореактивности эритроцитов, в том числе по адренозависимым ОРЭ и СОЭ.
Вопрос о причинах изменения при УПР эффективности активации АР эритроцитов и АР миоцитов матки остается неясным. С позиций представлений о том, что эффективность активации АР определяется уровнем в крови соответствующих эндогенных модуляторов, можно ожидать, что при УПР содержание в крови ЭСБАР снижено, а содержание ЭСААР повышено. Однако пока исследования не выявили снижение содержания ЭСБАР [9] и рост содержание ЭССАР [10]. Однако мы не исключаем, учитывая гетерогенность формирования УПР (например, вследствие инфекции или иммунного конфликта между матерью и плодом), что дальнейшие исследования, выполненные на большом клиническом материале, подтвердят наше представление о том, что одной из причин развития УПР и ПР является изменение содержания в организме матери эндогенных модуляторов АР. С этих позиций и с учетом данных о наличии экзогенных аналогов ЭСБАР, например, милдроната и гистидина [18,12,16], мы не исключаем, что при лечении УПР с помощью бета2-адреномиметиков может быть эффективно применение аналогов ЭСБАР, например милдронатом, а также блокаторов альфа-АР, например, ницерголин.
Выводы:
1. Осмотическая резистентность эритроцитов (ОРЭ), которая у женщин не зависит от фазы МЦ, возрастает при беременности, в том числе, осложненной УПР и не снижается в родах.
2. На всех этапах репродуктивного процесса эритроциты содержат альфа-АР, бета,-АР и бета2-АР. Активация альфа-АР и бета,-АР повышает ОРЭ, а активация бета2-АР снижает ее.
3. Эффективность активации бета2-АР эритроцитов не меняется на протяжении менструального цикла, но возрастает при беременности и в родах
4. Эффективность активации альфа-АР и бета!-АР меняется на протяжении менструального цикла (возрастает в лютеиновую фазу цикла и снижается в фолликулярную) и при неосложненном течении беременности (в I и II триместрах беременности сохраняется на таком же низком уровне, как в фолликулярную фазу цикла, и возрастает в III триместре и родах).
5. При УПР изменена эффективность активации АР эритроцитов (для бета2-АР она снижена, а для альфа-АР и бета^АР - повышена), что указывает на снижение силы бета-АРИМ и перспективность терапии с участием экзогенных сенсибилизатора бета-АР и блокаторов альфа-АР.
6. Определение адренореактивности эритроцитов по адренозависимой ОРЭ может использоваться как один из способов оценки состояния бета-АРИМ.
Список литературы:
1. Адамян Л.В., Смольникова Т.Ю., Длусская И.Г., Стрюк Р.И., Ляшко Е.С., Бейлин А.Л., Мисхин С.В., Герасимов А.Н., Брагинская С.Г. Метод оценки адренореактивности организма (Р-АРМ) у беременных для прогнозирования течения родов // Проблемы репродукции. 2006. № 1. С.91-97.
2.Айламазян Э.К., Кулаков В.И., Радзинский В.Е., Савельева Г.М. (ред)._ Акушерство. Национальное руководство. М.: «Гэотар-Медиа», 2007. 1197с.
3.Бабин А.П., Дворянский С.А., Циркин В.И., Трошкина Н.А., Гусева Е.В., Круть И.Ю., Костяев А.А. Изменение осмотической резистентности и адренореактивности эритроцитов у женщин при беременности // Гемореология в микро- и макроциркуляции: Материалы международной конференции. Ярославль, 2005. С. 196.
4. Гланц С.Медико-биологическая статистика.М.:Практика, 1999. 459 с.
5.Гусева Е.В., Дворянский С.А., Циркин В.И. Р-адренореактивность эритроцитов женщин при нормальных и осложненных родах//Акушерство и гинекология. 1998.№4.С. 17-22.
6.Крысова А.В., Циркин В.И. Способ оценки альфа- и бета2-адренореактивности
эритроцитов человека по изменению их осмотической резистентности под влиянием адреналина и адреноблокаторов: приоритетная справка №
2011134138/17(050548) от 17.08.2011
7.Крысова А.В., Куншин А.А., Циркин В.И. Роль альфа- и бета-адренорецепторов в реализации способности адреналина изменять осмотическую резистентность эритроцитов небеременных женщин //Вятский мед. вест.2011. № 4.С.10- 15.
8.Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. М.:ГЭОТАР- Медиа, 2007. 800 с.
9.0сокина А. А. Клинико-лабораторная характеристика Р-адренергического механизма при угрозе преждевременных родов // автореф.... дис. к.м.н. Казань, 1998. 20с.
Ю.Самоделкина Е.О., Циркин В.И., Хлыбова С.В., Костяев А.А., Тарлавина М.Г., Норина С.П. Альфа-адреномодулирующая активность сыворотки крови небеременных и беременных женщин //Вестник НГУ. Серия: Биология, клиническая медицина. 2010.Т.8, выпуск 3. С. 52-58.
П.Сидельникова В.М., Антонов А.Г. Преждевременные роды. Недоношенный ребенок. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. 448 с.
12.Сизова Е.Н., Циркин В.И. Физиологическая характеристика эндогенных модуляторов Р-адрено- и М-холинореактивности. Киров: Изд-во ВСЭИ, 2006. 183с.
13.Скворцова М.Ю., Подзолкова Н.М. Профилактика репродуктивных потерь и осложнений гестации у пациенток с невынашиванием беременности // Гинекология. 2010. Т.12, №1.С.40-42.
14.Стрюк Р.И., Длусская И.Г. Адренореактивность и сердечно-сосудистая система. М.: Медицина, 2003. 160 с.
15.Титовец Э.П. Аквапорины человека и животных: фундаментальные и клинические аспекты. Минск: Белорус, наука, 2007. 239 С.
16.Торопов A.JL, Циркин В.И., Костяев А.А. Совместное действие сыворотки крови как источника эндогенного сенсибилизатора Р-адренорецепторов и его аналогов -гистидина, триптофана, тирозина, милдроната и предуктала //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.2011.Т. 151,№ 1. С.96-99.
17.Хлыбова С. В. Состояние адренергического механизма и содержание свободных аминокислот при физиологическом течении гестационного процесса и ряде акушерских осложнений: автореф. дисс...д.м.н. М., 2007. 32 с.
18.Циркин В.И., Дворянский С.А. Сократительная деятельность матки (механизмы регуляции). Киров, 1997. 270 с
19.Циркин В.И., Крысова А.А., Куншин А.А. Способ оценки осмотической резистентности эритроцитов. Патент на изобретение Ru № 2419792 Cl от 07.12.2009. Описание изобретения к патенту РФ. Бюллетень № 5, 2011.
20.Шехтман М.М. Руководство по экстрагенитальной патологии у беременных. М.: Триада-Х, 2004. 815с.
21.Bordin L, Quartesan S, Zen F, Vianello F, Clari G. Band 3 tyr-phosphorylation in human erythrocytes from non-pregnant and pregnant women// Biochim Biophys Acta. 2006. Vol. 1758, № 5. P. 611-619
22. Campos E, Moura TF, Oliva A, Leandro P, Soveral G. Lack of Aquaporin 3 in bovine erythrocyte membranes correlates with low glycerol permeation.// Biochem Biophys Res Commun.2011. Vol.408, № 3. P 477-481.
Сведения об авторах:
1. Крысова Анна Владимировна - очный аспирант кафедры биологии человека и животных Вятского государственного гуманитарного университета.
2. Циркин Виктор Иванович - д.м.н., профессор кафедры нормальной физиологии Казанского государственного медицинского университета, профессор кафедры биологии и научный руководитель НИЛ «Физиологии мышц и биологически активных веществ» Вятского государственного гуманитарного университет, e-mail: [email protected]
3. Куншин Алексей Александрович - к.б.н., доцент ВСЭИ, внештатный научный сотрудник кафедры нормальная физиология
4. Хлыбова Светлана Вячеславовна - д.м.н., доц., заведующая каф. акушерства и гинекологии ИПО
5. Тарлавина Маргарита Геннадьевна - врач гинекологического отделения Кировской областной клинической больницы
6. Норина Софья Павловна - врач гинекологического отделения Кировской областной клинической больницы
