CC BY
10Научные статьи
УДК 616.216.1-002-036.12:616.155.3-008.13:001.891.53
РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ФУНКЦИИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ РИНОСИНУСИТОМ. Часть I
Д. Ю. Семенюк1, С. А. Артюшкин2, В. Г. Конусова3, А. С. Симбирцев3, А. Н. Мироненко4, Л. Э. Тимчук5
THE RESULTS OF THE STUDY OF THE FUNCTION OF NEUTROPHILIC GRANULOCYTES IN PATIENTS WITH CHRONIC RHINOSINUSITIS. PART I
D. Y. Semeniuk, S. A. Artyushkin, V. G. Konusova, A. S. Simbirtsev, A. N. Mironenko, L. I. Timchuk
1 ГБУЗ «Городская Мариинская больница», Санкт-Петербург, Россия (Главный врач - проф. О. В. Емельянов)
2 ГБОУ ВПО «Северо-Западный ГМУ им. И. И. Мечникова», Санкт-Петербург, Россия (Зав. каф. оториноларингологии - проф. С. А. Артюшкин)
3 ФГБУ «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА, Санкт-Петербург, Россия
(Директор - проф. А. С. Симбирцев)
4 ГБУЗ «Городская больница № 15», Санкт-Петербург, Россия (Главный врач - докт. мед. наук А. Н. Мироненко)
5ФГБУ «Санкт-Петербургский НИИ уха, горла, носа и речи» Минздрава России, Россия (Директор - засл. врач РФ, член-корр. РАМН, проф. Ю. К. Янов)
Последовательная цепь взаимодействий цитокинов является важнейшим инструментом иммунной системы, определенной с периода рождения ребенка набором генотипов, определяющих интенсивность и исход воспалительного ответа. Одну из ключевых ролей в развитии и регуляции воспалительного процесса играет синхронизация продукции, экспрессии и ингибиции синтеза белков семейства IL-1. Нарушение баланса продукции IL-ip и IL-1RA в сторону увеличения доли IL-1RA на системном уровне и в очаге воспаления способствует торможению эффектов IL-ip и может служить признаком хронизации воспалительного процесса. В ходе проведенного исследования выявлено, что функциональный полиморфизм генов IL-ip и IL-1RA меняет характер ответа нейтрофильных гранулоцитов на индукторы в реакции люминолзависимой хемилюминисценции.
Ключевые слова: цитокины, риносинусит, полиморфизм, гены, фагоцитоз.
Библиография: 9 источников.
A series circuit interactions of cytokines is an essential tool immune system, with a particular period of childbirth set of genotypes that determine the intensity of the inflammatory response and outcome . One of the key roles in the development and regulation of the inflammatory process plays synchronization products, expression and inhibition of protein synthesis, IL-1 family . Imbalance products IL-ip and IL-1RA in the direction of increasing the proportion of IL-1RA at the system level and in the inflammation contributes to inhibition of the effects of IL-ip , and may be a sign of chronic inflammation. In the course of the study revealed a functional gene polymorphism IL-ip and IL-iRA changes the nature of the response of neutrophils in response to inducers of luminol chemiluminescence.
Key words: cytokines, rhinosinusitis, functional gene polymorphism, phagocytosis.
Bibliography: 9 sources.
Проблема изучения патогенеза воспалительных заболеваний полости носа и околоносовых пазух занимает одно из лидирующих мест в современной ринологии. В иммунопатогенезе острого и хронического риносинусита про- и противовоспалительные цитокины играют доминантную роль [1, 3, 5, 7].
Цитокины - это иммунорегуляторные пептиды, выступающие в роли медиаторов межклеточного взаимодействия, которые при развитии воспаления координируют иммунные реакции
организма. Последовательная цепь взаимодействий цитокинов является важнейшим инструментом иммунной системы, определенной с периода рождения ребенка набором генотипов, определяющих интенсивность и исход воспалительного ответа. Структура генов может иметь измененную последовательность, которую определяют точечные замены единичных нуклеоти-дов (SNP - single-nucleotide polymorphism) или тандемные повторы частей гена (VNTR - variable number tandem repeat) [2, 4, 8].
Известно, что изменения в структуре генов могут влиять на скорость продукции кодируемых ими белков и тем самым приводить к неадекватному иммунному ответу.
Одним из факторов, определяющих имму-нопатогенез хронического риносинусита (ХРС), является несостоятельность факторов защиты как местно в очаге воспаления, так и в целом организме. Ранее изучен и описан рядом авторов дисбаланс продукции цитокинов семейства интерлейкина-1 (^-1), в частности нарушение соотношения продукции Ш-1р и рецепторного антагониста Ш-1 (IL-1RA) в сторону увеличения доли последнего в очаге воспаления при ХРС [1, 8]. Одну из ключевых ролей в развитии и регуляции воспалительного процесса играет синхронизация продукции, экспрессии и ингибиции синтеза белков семейства 1Ь-1. Нарушение баланса продукции Ш-1р и IL-1RA в сторону увеличения доли IL-1RA на системном уровне и в очаге воспаления способствует торможению эффектов Ш-1р и может служить признаком хронизации воспалительного процесса [1, 8].
Рядом авторов показано, что приводить к дисбалансу функционирования системы Ш-1 может функциональный полиморфизм генов, кодирующих белки семейства Ш-1, несущих небольшие мутационные изменения (точечные замены ну-клеотидов, тандемные повторы частей гена). Следствием функционального полиморфизма гена является искаженный характер экспрессии и продукции кодируемого им белка. Например, носительство полиморфного варианта высоко-продуцирующего гена IL-1RA (IL-1RA*2) связано с повышенным уровнем циркулирующего IL-1RA и уровнем экспрессии мРНК этого белка в ходе воспаления [1, 4, 8]. В то же время моноциты лиц, гомо- и гетерозиготных по полиморфному варианту гена Ш-1р (+3953) продуцируют соответственно в 4 и 2 раза большее количество этого цитокина, чем моноциты лиц гомозиготных по нормальному варианту гена [1, 4, 8]. Таким образом, присутствие в геноме человека сочетаний Ш-1Р (+3953)+/Ш1^*2-, Ш-1Р (+3953)-/ IL-1RA*2+ и Ш-1Р (+3953)+/IL-1RA*2+ нарушает соотношение экспрессии и продукции этих белков в процессе воспаления. Продукция про- и противовоспалительных цитокинов стимулирует ге-мопоэз и контролирует практически все функции иммунокомпетентных клеток, в частности клеток нейтрофильного звена [2-4, 6, 8, 9]. В настоящее время данные о значительной ассоциации определенного генопипа с функциональной активностью нейтрофилов в литературных источниках практически не освещены.
Пациенты и методы. В СПб НИИ уха, горла носа и речи проведено обследование больных на базе клиники патологии верхних дыхатель-
ных путей в период с 2007 по 2010 г. Были обследованы 93 пациента с ХРС в возрасте от 18 до 60 лет. Из них 41 мужчина и 52 женщины. Большинство отобранных для исследования больных имели давность заболевания от 5 до 10 лет. Следовательно, заболевание имело длительное течение. Благодаря этому можно объективно оценить результаты обследования больных. В группу сравнения вошли 152 здоровых донора.
Метод хемилюминесценции (ХЛ), получивший в последние годы широкое распространение, основан на том, что любой биологический процесс в живом организме сопровождается выбросом кванта света. Однако световой импульс очень мал, уловить его можно только многократно усилив, с помощью специальных реагентов аппли-фикаторов (люминол, люцегинин). Регистрация усиленного сигнала производится приборами лю-минометрами. Наши исследования были проведены с помощью мультисканирующего люмино-метра Victor-2, позволяющего использовать очень малые количества реагентов.
Для исследования использовали венозную кровь, стабилизированную гепарином (20 МЕ/мл).
Алгоритм проведения реакции:_в лунки 96-лу-ночной белой, непрозрачной платы раскапывали по 20 мкл исследуемого материала (кровь, смыв из околоносовых пазух), добавляли вещества, стимулирующие функциональную активность клеток воспаления (форбол-миристат ацетат, оп-сонизированный зимозан), содержащихся в исследуемом материале, 40 мкл раствора люминола в конечной концентрации 10-4 М, общий объем реактогенной среды доводили раствором Хенкса до 200 мкл. Все исследования проводили в трех параллелях. Регистрацию реакции проводили в течение 1 ч при 37 °С. Результат реакции выражали светосуммой, т. е. количеством импульсов, накопленных за время эксперимента.
Приготовление реагентов
Люминол является веществом, акцептирующим на себя весь пул свободнорадикальных форм кислорода (супероксидрадикал, гидроксил радикал, синглентный кислород), а также перекиси водорода и миелопироксидазы, продуцируемых клетками воспалительной реакции (ней-трофилы, макрофаги) при их активации. 17,7 мг люминола растворяли в 10 мл диметилсульфок-сида (ДМСО), получали маточный раствор, который хранили при температуре холодильника в течение 1 месяца. Перед исследованием готовили рабочий раствор, растворяя 1 объем маточного раствора люминола в 10 объемах раствора Хенкса.
Форбол-миристат ацетат (ФМА) относится к группе форболовых эфиров, является неспецифическим активатором функциональной
активности клеток воспаления, действует непосредственно через протеинкиназный путь активации, минуя рецепторный аппарат. ФМА вызывает ряд последовательных реакций в клетке, приводя к мощному оксидативному взрыву и выбросу свободнорадикальных форм кислорода. Использование данного активатора, по мнению большинства исследователей, позволяет оценить оксидативный потенциал клетки. ФМА использовали в реакции в концентрации 10 нг/мл.
Зимозан - фрагмент клеточной стенки пекарских дрожжей, употребляется в реакции также в качестве активатора клеток воспалительной реакции. Использование данного активатора позволяет оценить интенсивность оксидативного взрыва, возникающего в нейтрофильных клетках в результате рецепторного взаимодействия опсо-низированного компонентами комплемента зи-мозана с С3в рецепторами на поверхности клетки. Проведение реакции с опсонизированным (опс) зимозаном является вариантом реакции фагоцитоза.
Зимозан в количестве 10 мг разводят в 10 мл раствора №С1 0,9%, кипятят в течение 30 мин для получения гомогенной взвеси, дважды отмывают изотоническим раствором, ресуспеди-руют в 2,5 мл того же раствора, добавляют эквивалентное количество пулированной (не менее 4 человек) сыворотки крови человека и помещают на 40 мин в термостат при температуре 37 °С. После отмывания от избытка сыворотки зимозан разводят 10 мл изотонического раствора и алик-вотируют по 500 мкл в пластиковые пробирки. Хранят при £ -18 °С в течение месяца.
Выделение лейкоцитов для ДНК типирования проводили из 4 мл крови. В кровь с антикоагулянтом EDTA добавляли желатин в соотношении один объем желатина на десять объемов крови, перемешивали и оставляли на 15-20 мин в термостате при 37 °С для оседания эритроцитов. Затем надосадок, содержащий лейкоциты, отбирали в эппендорфы объемом 2 мл. Центрифугировали в течение 4 мин при 4000 g для осаждения клеток, после чего супернатант сливали. Для удаления оставшихся эритроцитов к осадку добавляли 2 мл 0,83% раствора хлорида аммония, ресуспен-дировали осадок и инкубировали 7 мин при комнатной температуре, после чего повторно осаждали клетки центрифугированием и сливали супернатант. Осадок отмывали два раза в 2 мл физиологического раствора путем ресуспендиро-вания осадка и центрифугирования суспензии в течение 4 мин при 4000 g. Супернатант сливали, а осадок клеток замораживали при -20 °С для хранения.
Для выделения ДНК клетки ресуспендировали в 200 мкл физиологического раствора. К полученной суспензии добавляли 20 мкл 10-кратного рас-
твора Трис-ЭДТА (10 мМ ЭДТА, 100 мМ ТпбНС1, рН 8,0) и 20 мкл 10% раствора додецилсульфата натрия (SDS), после чего суспензию перемешивали. Затем в суспензию вносили 2 мкл раствора протеиназы К (13 мг/мл), вновь перемешивали и инкубировали в течение 1 ч при температуре 56 °С.
К суспензии добавляли 0,2 мл фенола, энергично встряхивали в течение 10-15 с. Для образования плотной интерфазы эппендорфы помещали в морозильную камеру холодильника на 30 мин (можно на ночь). Для разделения фаз эппендорфы центрифугировали в течение 10 мин при 12 000 g.
После центрифугирования верхнюю водную фазу, содержащую ДНК, переносили в новые эп-пендорфы, добавляли 300 мкл хлороформа, встряхивали в течение 10-15 с, вновь центрифугировали 5 мин при 12 тыс. об/мин. Верхнюю водную фазу переносили в новые эппендорфы, добавляли 20 мкл 1,5 М раствора ацетата натрия ^аАс), 500 мкл 96° этилового спирта. Суспензию перемешивали и помещали в морозильную камеру на 2 ч (можно на ночь). Затем ДНК осаждали центрифугированием в течение 10 мин при 12 000^. Супернатант удаляли пипеткой и к осадку добавляли 700 мкл 70° этилового спирта. Эппендорфы вновь центрифугировали в течение 10 мин при 12 000^. Затем супернатант полностью удаляли, а осадок подсушивали течение 5-10 мин в тяге. После этого к осадку добавляли 100 мкл ёёН20 и оставляли эппендорфы при комнатной температуре в течение 30 мин для растворения ДНК. Затем раствор замораживали при -20 °С для хранения.
Для выявления точечных однонуклеотидных замен ^ОТ) в генах Ш-1р (+3953) использовали метод анализа длины фрагментов рестрикции ПЦР-продукта. На первом этапе проводили поли-меразную цепную реакцию (ПЦР) с использованием специфических праймеров (табл. 1), специфичных к участку геномной ДНК, содержащего известные SNP. Реакционную смесь готовили в объеме 30 мкл: 3 мкл 10-кратного буфера; смесь dNTP в концентрации 170 нМ; 50 пМ каждого праймера (0,5 мкл 100 мкМ раствора); 1 ед. Taq-полимеразы; 1-2 мкл ДНК; Н2О до 30 мкл. Режимы амплификации ДНК для каждого из вариантов полиморфизма приведены в табл. 2. Продукт амплификации ДНК осаждали, для чего добавляли к 30 мкл реакционной смеси 90 мкл 96% этанола и 3 мкл 7,5 М ацетата аммония, перемешивали и центрифугировали на микроцентрифуге в течение 15 мин с ускорением 10 000^, су-пернатант удаляли пипеткой, добавляли 400 мкл 70% этанола и снова центрифугировали при ускорении 10 000^ в течение 6 мин, после чего удаляли спирт, а осадок подсушивали при 56 °С и растворяли в 9 мкл дистиллированной воды.
Т а б л и ц а 2
Режимы амплификации ДНК, примененные для отдельных вариантов полиморфизма
Т а б л и ц а 1
Характеристики исследуемых ( + 3953), IL-1RA (УЭТН.) полиморфизмов и праймеры, использованные
при их анализе методом ПДРФ-ПЦР
Локализация полиморфизма Используемые праймеры Длина фрагмента (п. о.) Рестриктаза; фрагменты, получаемые после рестрикции Ссылка
IL-1ß (+3953) Первый вариант: F-5'-GTT GTC ATC AGA CTT TGA CC-3' R-5'-TTC AGT TCA TAT GGA CCA GA-3' 250 Taq 1 137 и 113 Rudack C. et al., 1998
Второй вариант: F-5'-CTC AGG TGT CCT CGA AGA AAT CAA A-3' R-5'-GCT TTT TTG CTG TGA GTC CCG-3' 194 Аллель 1 - 97, 85, 12 Аллель 2 -182 и 12 J.-Y. Um et al., 2003
IL-1RA (VNTR) F-5-CTC AGC AAC ACT CCT AT-3' R-5'-TCC TGG TCT GCA GGTAA-3' Аллель 1 - 410 Аллель 2 - 240 Аллель 3 - 320 Аллель 5 - 500 Аллель 6 - 590 J.-Y. Um et al., 2003
Локализация полиморфизма Денатурация ДНК Режим амплификации Окончательная элонгация
IL-1ß ( + 3953) -первый вариант 94 °С - 5 мин 94 °С - 60 с, 53 °С - 60 с, 72 °С - 45 с; 35 циклов 72 °С - 10 мин
IL-1RA (VNTR) 94 °С - 5 мин 94 °С - 60с, 60 °С - 60 с, 72 °С - 45 с; 40 циклов 72 °С - 7 мин
Для проведения рестрикции ПЦР продукт инкубировали в течение 3 ч с соответствующей ре-стриктазой (табл. 1). Продукты рестрикции разделяли электрофоретически в 2% агарозном геле с бромистым этидием и визуализировали в УФ-свете на трансиллюминаторе. В качестве маркера размера полученных фрагментов ДНК использовали маркеры молекулярной массы с шагом 100 п. о. (рис. 1).
Генотипирование IL-1RA (VNTR) проводили в тех же условиях методом PCR: амплифицировали участок ДНК, содержащий тандемные повторы по 86 п. о. в районе интрона 2, аллельный вариант определяли по длине получаемого продукта с помощью электрофореза (табл. 1, рис. 2).
Характеристика полиморфных сайтов генов цитокинов IL-1ß (+3953), IL-1RA (VNTR) представлена в табл. 3.
Результаты. Эффекторные клетки - нейтро-филы - всегда рассматривались как основные маркеры при остром и (или) при обострении хронического воспаления. Современные литературные данные широко освещают способности нейтрофилов, эозинофилов и тучных клеток реа-лизовывать механизмы врожденного иммунитета,
с формированием внеклеточных ловушек для захвата и киллинга патогенных микроорганизмов и вирусов. Существуют два механизма киллинга патогенов - кислородзависимый и кислородне-зависимый. Активированные нейтрофильные гранулоциты продуцируют широкий спектр цитокинов и могут таким образом не только влиять на активность иммунокомпетентных клеток, но и регулировать иммунный ответ.
McDonald в 1997 году установил наличие в нейтрофилах транскрипционного фактора NF-кВ, контролирующего экспрессию генов, кодирующих синтез цитокинов. Кроме явной (внешне заметной) стимуляции, нейтрофилы, как и другие клетки, подвергаются латентному раздражению, меняющему их чувствительность к вторичным стимулам. Скрытая переадаптация проявляется в двух вариантах - ослаблении (деактивации) и усилении (праймировании) реакций. Праймирование наблюдается в том числе при контакте нейтрофилов с цитокинами, бактериальными липополисахаридами и при местном и системном воспалении. Позитивное кондиционирование сопровождается активацией рецепторов через гетеротримерные G-белки. Прямая актива-
Рис. 1. Картина электрофореза после проведения ПДРФ, полиморфный сайт - ^-1р (+3953). Ряды: 1 -гомозигота по аллелям 2/2; 2 - гомозигота по аллелям 1/1; 3 - гетерозигота с аллелями 1/2; 4 - маркер молекулярный весов ДНК, по 100 пн.
ция G-белков возможна под воздействием цито-кинов. Наряду с множеством провоспалительных цитокинов одним из наиболее активных прай-мирующих провоспалительных белков является
Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов, праймированных провоспали-тельными цитокинами, находит свое отражение в реакциях хемилюминесценции, в том числе индуцированной форболмиристат ацетатом и (или) зимозаном.
У 93 больных хроническим риносинуситом в момент обострения оценивали реакцию спонтанной и индуцированной хемилюминесценции. Если спонтанная хемилюминесценция не отличалась от таковой в группе здоровых, то индуцированная хемилюминесценция в ответ на ФМА и зимозан колебалась от низкой (при сравнении с группой контроля) до высокой реакции.
В связи с этим из 93 обследованных больных с ХРС были сформированы три группы. Формирование групп осуществляли по уровню данных реакции хемилюминесценции в ответ на ФМА и зимозан:
1) нейтрофилы пациентов 1-й группы характеризовались низким уровнем ответа в реакции хемилюминесценции в ответ на ФМА и зимозан;
2) нейтрофилы 2-й группы пациентов в ответ на ФМА и зимозан характеризовались сред-
Рис. 2. Картина электрофореза после проведения ПЦР, полиморфный сайт - ^-1ЯА (УТМТЯ). Ряды: 1 - гетерозигота по аллелям 1/2; 2 - гомозигота по аллелям 1/1; 3 - маркер молекулярный весов ДНК, по 100пн; 4 - гомозигота с аллелями 2/2.
ним уровнем ответа в реакции хемилюминес-ценции;
3) нейтрофилы 3-й группы пациентов в ответ на ФМА и зимозан характеризовались высоким уровнем ответа в реакции хемилюминес-ценции.
Хемилюминесценция нейтрофильных грану-лоцитов в различных группах пациентов с ХРС в сравнении с контролем представлены в табл. 4.
Как видно из таблицы, спонтанная хемилю-минесценция во всех трех группах была одинаковой и не отличалась от таковой в группе здоровых лиц, а в ответ на индукторы 28 больных имели низкий вариант ответа и 30 - высокий, а показатели индуцированной хемилюминесцен-ции нейтрофилов 35 больных ХРС были промежуточными и колебались между высоким и низким ответами. Показатели индуцированной хемилю-минесценции в 3-й группе обследованных пациентов достоверно превышали результаты, полученные при обследовании здоровых лиц.
Учитывая, что активация продукции про-воспалительных цитокинов и нейтрофилов идет через транскрипционный фактор ОТ-кВ (универсальный фактор транскрипции, контролирующий экспрессию генов иммунного ответа, апоптоза и клеточного цикла), представлялось интересным выявить зависимость способности нейтрофилов отвечать на стимул в реакции люминолзависи-мой хемилюминесценции в зависимости от им-муногенетических особенностей индивида - наличия в генотипе тех или иных аллелей Ш1р и
Т а б л и ц а 3
Характеристика полиморфных сайтов генов цитокинов ^-1р ( + 3953), IL-1RA СУОТК)
Локализация сайта Номер по базе dbSNP Аллельные варианты Аллели (обозначение в данной работе)
т-1р (+3953) ГБ1143634 С/Т С (1),Т(2)
^-1ЯА (УОТЯ) нд Повторы по 86пн 1 - 4 повтора 2 - 2 повтора 3 - 3 повтора 5 - 5 повторов 6 - 6 повторов
4111^*
Российская оториноларингология № 6 (67) 2013
Т а б л и ц а 4
Деление больных ХРС по группам в зависимости от характера ответа в реакции хемилюминесценции
(имп./с)
Хемилюминесценция Пациенты с ХРС, п = 93 Здоровые п=152
I группа П = 28 II группа П = 35 III группа п = 30
Спонтанная 5,2±0,2 5,1±0,1 5,1±0,1 5,3±0,1
ФМА 12,6±0,5 14,3±0,5 30,4±2,4* 20,7±2,1
Зимозан * р < 0,05 по сравнению с грут 13,7±0,6 шой здоровых. 31,1±2 71,5±4,3З* 25,3±1,9
IL1RА (данные сравнения представлены на рис. 3 и в табл. 5).
Анализ частоты встречаемости генотипов показал, что пациенты с аллелями без мутаций в генах Ш1р и IL1RА (генотип «1/1»т-1р+«1/1»т-1RA) составили 7,5% (7 человек).
Нейтрофильные гранулоциты 4 пациентов этой же группы (57,1%) характеризовались низким ответом на индуктор в реакции хемилюминесценции. Средний по интенсивности ответ давали нейтрофилы 2 пациентов (28,6%), высокий по интенсивности индуцированный ответ был характерен для нейтрофилов 1 пациента (14,3%).
Сочетание генотипов «1/1»Ш-1р+«1/2»Ш-1RA встречалось у 12 больных (12,9%), из них:
низкий тип ответа реакции хемилюминесценции наблюдался у 7 пациентов (58,3%), средний -у 4 пациентов (33,3%) и у 1 больного (9,2%) был высокий ответ.
У 9 (9,7%) обследованных пациентов были выявлены генотипы «1/2»IL-lp+«1/1»IL-1RA. В группе с такими аллельными вариантами Ш-1р и IL-1RА не было выявлено пациентов, у которых нейтрофи-лы в ответ на стимул давали бы низкий по интенсивности ответ в реакции хемилюминесценции, у 1 больного (11,1%) нейтрофилы давали средний ответ, у 8 больных (88,9%) отмечался высокий по интенсивности тип ответа нейтрофилов.
У 11 пациентов (11,8%) с генотипом «1/1»Ш-lp+«2/2»IL-1RA варианты ответа нейтрофилов
Рис. 3. Анализ частоты встречаемости генотипов.
Т а б л и ц а 5
Варианты ответа нейтрофилов в реакции хемилюминесценции у пациентов ХРС с различными
аллельными вариантами ^-1р и ^-^А (%)
Аллельные варианты Низкий ответ Средний ответ Высокий ответ
«1/1»IL-lp+«1/1»IL-1RA 57,10 28,60 14,30
«1/1»т-1р+«1/2»т-1НА 58,30 33,30 9,20
«1/2»т-1р+«1/1»т-1НА - 11,10 88,90
«1/1»т-1р+«2/2»т-1НА 81,80 18,20 -
«1/2»IL-lp+«2/2»IL-1RA 40,00 60,00 -
«1/2»IL-lp+«1/2»IL-1RA - 58,30 41,70
«2/2»IL-lp+«1/1»IL-1RA - - 100,00
Рис. 4. Доля каждого типа ответа для всех генотипов (%).
в реакции хемилюминесценции распределились следующим образом: низкий ответ был выявлен у 9 пациентов (81,8%), средний - у 2 пациентов (18,2%), высокий по интенсивности ответ ней-трофилов в реакции хемилюминесценции не был зафиксирован.
Пациенты с генотипом «1/2»Ш-1р+«2/2»Ш-1ЯА составили 20 человек (21,5%). Из них 8 пациентов (40,0%) имели низкий ответ реакции хеми-люминесценции и 12 больных (60,0%) - средний. Высокий по интенсивности ответ нейтрофилов в этой группе не отмечался.
Сочетание аллелей «1/2»Ш-1р+«1/2»Ш-1ЯА имели 24 пациента (25,8%). Низкий уровень ответа нейтрофилов не был выявлен в этой группе пациентов, однако у 14 (58,3%) отмечался средний уровень ответа и у 10 (41,7%) - высокий.
Генотип «2/2»т-1р + «1/1»т-1ЯА имели 10 человек (10,8%). Нейтрофильные гранулоциты всех пациентов (100%) характеризовались высоким уровнем ответа в реакции хемилюминес-ценции.
Складывается впечатление, что влияние ал-лельных вариантов Ш-1ЯА более значимо в случае гомозиготности по этому гену, тогда как появление даже в гетерозиготном варианте аллеля гена ^-1р, который связан с повышенной продукцией провоспалительного цитокина, меняет
характер ответа нейтрофильных гранулоцитов на индуктор в реакции люминолзависимой хемилю-минисценции (рис. 4).
В нашей работе выявлены определенные генотипы, влияющие на функциональную активность клеток нейтрофильного звена.
В целом влияние функционального полиморфизма генов Ш-1р и Ш-1ЯА на характер ответа нейтрофильных гранулоцитов в реакции люминолзависимой хемилюминисценции, по-видимому, можно описать в виде следующих закономерностей: носительство высокопроду-цирующих генов Ш-1р определяет более тяжелое течение периода обострения хронического риносинусита, сопровождающееся высокими значениями температуры тела, резким затруднением носового дыхания, головными болями, обилием слизисто-гнойного отделяемого из полости носа, то время как у носителей генетически обусловленного перевеса в сторону выработки Ш-1ЯА воспалительный ответ снижен за счет блокады Ш-1р его антагонистом, что определяет затяжное умеренно выраженное воспаление околоносовых пазух, зачастую характеризующееся стертой клинической картиной.
Продолжение статьи читайте в следующем номере журнала.
ЛИТЕРАТУРА
1. Влияние функционального полиморфизма генов семейства интерлейкина-1 на предрасположенность и характер течения хронического гнойного риносинусита и эффективность терапии рекомбинантным интер-лейкином-1 бета (беталейкин) I. Ассоциация полиморфизма генов семейства интерлейкина-1 с заболеваемостью хроническим гнойным риносинуситом и дисрегуляцией воспалительного ответа / А. Ю. Громова [и др.] // Рос. оторинолар. - 2005. - № 2. - С. 5-12.
2. Дранник Г. Н. Клиническая иммунология и аллергология. - М.: МИА, 2003. - 603 с.
3. Иммунология и аллергология для ЛОР-врачей / Д. К. Новиков [и др.]. - М.: МИА, 2006. - 498 с.
4. Кетлинский С. А., Симбирцев А. С. Цитокины. - СПб.: Фолиант, 2008. - 552 с.
5. Козлов В. С., Шиленкова В. В., Шиленков А. А. Синуситы: современный взгляд на проблему // СопбП. medi-сит. - 2003. - Т. 5. - № 4. - С. 212-219.
6. Конусова В. Г., Симбирцев А. С. Влияние беталейкина на функциональную активность нейтрофилов человека // Мед. иммунолог. - 2000. - Т. 2. - С. 221-222.
4113^
7. Пискунов Г. З., Пискунов С. З. Клиническая ринология. - М.: МИА, 2006. - 559 с.
8. Симбирцев А. С. Интерлейкин-1. Физиология. Патология. Клиника. - СПб.: Фолиант, 2011. - 473 с.
9. Differential regulation of cytokine release and leukocyte migration by lipopolysaccharide-stimulated primary human lung alveolar type II epithelial cells and macrophages / A. J. Thorley [et al.] // J. Immunol. - 2007. - N 178 (1). -P. 463-473.
Семенюк Дарья Юрьевна - врач-оториноларинголог Мариинской больницы. 191104, Санкт-Петербург, Литейный пр., д. 56; тел.: 8-911-975-19-46, e-mail: d@gmail.com
Артюшкин Сергей Анатольевич - докт. мед. наук, профессор, зав. каф. оториноларингологии СевероЗападного ГМУ им. И. И. Мечникова. 191015, Санкт-Петербург, ул. Кирочная, д. 41; тел.: (812) 303-50-00, e-mail: Sergei.Artyushkin@spbmapo.ru
Конусова Валентина Георгиевна - канд. мед. наук, ст. н. с. НИИ особо чистых биопрепаратов. 197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, д. 7; тел.: (812)336-55-91, е-mail: onir@hpb-spb.com
Симбирцев Андрей Семенович - докт. мед. наук, профессор, директор НИИ особо чистых биопрепаратов. 197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, д. 7; тел.: (812)336-55-91, е-mail: onir@hpb-spb.com
Мироненко Александр Николаевич - докт. мед. наук, главный врач городской больницы № 15. 198205, Санкт-Петербург, ул. Авангардная, д. 4; e-mail: mironenko@hotbox.ru
Тимчук Лола Эркиновна - канд. мед. наук, н. с. Санкт-Петербургского НИИ ЛОР; тел.: 8-812-316-15-23, е-mail: lola-timchuk@mail.ru
УДК 616.216-089
МАТЕМАТИЧЕСКАЯ МОДЕЛЬ ВОЗРАСТНЫХ ПАРАМЕТРОВ ХИРУРГИЧЕСКОЙ АНАТОМИИ ВЕРХНЕЧЕЛЮСТНОЙ ПАЗУХИ
С. В. Сергеев, Е. С. Григорькина, В. В. Смогунов, А. В. Кузьмин, Н. А. Волкова
AGE SPECIFIC OF MAXILLARY SINUS ANATOMY
S. V. Sergeev, E. S. Grigorkina, V. V. Smogunov, A. V. Kuzmin, N. A. Volkova
ФГБОУ ВПО «Пензенский государственный университет», Россия (Ректор - проф. А. Д. Гуляков)
Целью исследования было изучение возрастных изменений параметров верхнечелюстной пазухи, как абсолютных, так и в системе лицевого скелета. Для этого было изучено 314 рентгенограмм пациентов в прямой носоподбородочной проекции в возрасте от 5 до 75 лет. Измерения проводили в графическом редакторе GIMP после предварительного сканирования снимков. Изучали как размеры пазух и основных структур средней части лица, так и их соотношения, для чего использовали регрессионный и корреляционный анализ. Авторами установлено, что в течение всей жизни пазуха претерпевает изменения формы и размера, меняются ее пропорции относительно лицевого скелета в целом, причем этот процесс имеет выраженные половые отличия. В частности, у мужчин рост и развитие пазухи происходит более равномерно и менее выражено, чем у женщин. Были выведены зависимости, позволяющие использовать данные о возрасте и верхней высоте лица пациента для определения высотных параметров верхнечелюстной пазухи при выборе хирургического доступа.
Ключевые слова: верхнечелюстная пазуха, анатомия, возрастные особенности, рост, развитие, закономерности, математическая модель, регрессионный анализ.
Библиография: 9 источников.
The goal of our investigation was to study age specific of maxillary sinus parameters, both the absolute and relative facial skeleton. 314 X-ray pictures of patients between 5 and 75 years old in direct projection were evaluated. All pictures had been scanned and saved. For measurement redactor GIMP was used. In this investigation sinus and facial sizes as well as their relations were studied. We concluded, that for the human's life maxillary sinus changes form, size and proportions in relation to middle third of face. This process has sex differences. In men growth and development of sinus is more evenly and less manifest, than in women. We calculated relations, which can help to use age and upper facial height to consider height of maxillary sinus to choose surgical access.
Key words: maxillary sinus, anatomy, age specific, growth, development, regularities.
Bibliography: 9 sources.
