CC BY
14Российская оториноларингология №4 (53) 2011
Через 3 месяца после операции типа Льюиса передне-задний размер бифуркации трахеи не меняется в 75 % (22 случая), увеличивается в 15 % (5 случаев), уменьшается в 10 % (3 случая), составляя в среднем 10-18 мм. Располагается ближе к грудине в 77 % (23 случая), составляя 50-95 мм. Относительно позвоночника расстояние уменьшается в 50 % (15 случаев), составляя в среднем 13-30 мм.
Через 6 месяцев передне-задний размер бифуркации трахеи не меняется в 90 % (27 случаев), увеличивается в 10 % (3 случая), составляя в среднем 10-18 мм. Расстояние от грудины не меняется в 50 % (15 случаев), составляя 50-97 мм. Относительно позвоночника положение не меняется в 57 % (17 случаев), составляя в среднем 14-20 мм.
Заключение. Из анализа выше указанных данных следует, что размеры грудного отдела трахеи после операции типа Льюиса увеличиваются (кроме бифуркации трахеи), она располагается правее относительно срединной плоскости, ближе к грудине и дальше от позвоночника. Наибольшие изменения размеров и топографии трахеи происходят к 14 суткам после операции, к 3 месяцам расположение ее стабилизируется и в дальнейшем существенно не меняется.
ЛИТЕРАТУРА
1. Ганул В. Л., Киркилевский С. И. Рак пищевода: Руководство для онкологов и хирургов. Киев, 2003. 200 с.
2. Возможности рентгеновской компьютерной томографии в оценке распространенности опухолей пищевода / А. Б. Лукьянченко [и др.] // Вестн. рентгенологии и радиологии. — 1998. — №5. — C. 11-19.
3. Тюрин И.Е. Компьютерная томография органов грудной клетки. СПб., 2003. 250 с.
Самойлов Петр Владимирович — кандидат медицинских наук, хирург-онколог высшей категории торакального отделения Оренбургского областного клинического онкологического диспансера, 460000, г. Оренбург, пр. Гагарина,
11, телефон 8-3532-33-33-14; Рыков Андрей Евгеньевич — заочный аспирант кафедры оперативной хирургии и клинической анатомии им. С. С. Михайлова, врач рентгенолог первой категории рентгенологического отделения Оренбургского областного клинического онкологического диспансера, 460000, г. Оренбург, ул. Советская 6, телефон 8(3532)77-93-86, [email protected]
УДК: 616.216-002.3-074
ОСОБЕННОСТИ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛО-ЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ГНОЙНЫМ РИНОСИНУСИТОМ
Д. Ю. Семенюк1, Л. Э. Тимчук1, Ю. К. Янов1, А. С. Симбирцев2, А. Н. Мироненко1, А. А. Корнеенков1, В. Г. Конусова2
FEATURES OF THE CHEMILUMINESCENCE OF NEUTROPHIL GRANULOCYTES IN PATIENTS WITH PURULENT RHINOSINUSITIS
D. Y. Semeniuk, L. I. Timchuk, Y. K. Janov, A. S. Simbirtsev, A. N. Mironenko,
A. A. Corneencov, V.G. Konusova
1 ФГУ СПб НИИ ЛОР Минздравсоцразвития России (Директор — Засл. врач РФ, проф. Ю. К. Янов)
2 СПб НИИ особо чистых биопрепаратов» ФМБА России (Директор — проф. А. С. Симбирцев)
Оценка фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов методомлюминолзависи-мой хемилюминесценции представляет собой важный компонент анализа состояния защитных факторов при воспалении слизистой оболочки околоносовых пазух. Полиморфизм генов семейства IL-1 влияет на показатели функционального состояния фагоцитирующих клеток. Ключевые слова: цитокины, риносинусит, полиморфизм, гены, фагоцитоз.
Библиография: 7 источников.
Evaluation of neutrophilic granulocytes phagocytic activity by luminol-dependent chemiluminescence is an important component for the mucosal immunity analysis in paranasal sinuses. IL-1 family cytokine gene polymorphism influences the parameters of phagocytic cells functional activity
Key words: cytokines, rhinosinusitis, functional gene polymorphism, phagocytosis.
Bibliography: 7 sources.
Заболевания околоносовых пазух являются одной из важных проблем современной оториноларингологии. Острые и хронические риносинуситы полиэтиологичны и в каждом конкретном случае зачастую имеют свой патогенез, тесно взаимосвязанный с патологическими процессами в нижних дыхательных путях, сосудистыми и неврологическими проблемами, угнетённым иммунитетом, а также травмами и различными медицинскими манипуляциями [5]. В настоящее время существует точка зрения о том, что воспаление в околоносовых пазухах является результатом снижения иммунокомпетентных сил организма [1, 3, 14]. В патогенезе риносинуситов некоторые авторы описывают изменения в различных звеньях иммунитета, особенно в состоянии общей иммунной защиты [12, 16]. Вялотекущие воспалительные процессы в собственной слизистой оболочке носа и околоносовых пазух приводят к вторичным иммунодефицитным состояниям и угнетению местных защитных механизмов, что приводит к замыканию «порочного круга» [13].
Одним из факторов, определяющих иммунопатогенез гнойного риносинусита (ГРС), является несостоятельность общих и местных факторов защиты в очаге воспаления [1, 2, 4, 9, 13, 15, 17].
Благодаря бурному развитию иммунологии в настоящее время стали известны многие механизмы развития и регуляции воспалительных процессов организма, определены некоторые генетические и приобретённые дефекты функционирования иммунной системы, а также влияния провоспалительных цитокинов на функциональную активность клеток нейтрофильного звена [7].
Известно,что равновесие между продукцией, экспрессией и ингибицией синтеза белков семейства интерлейкина-1 (IL-1) играет одну из ключевых ролей в развитии, регуляции и исходе воспалительного процесса [10]. При ГРС возникает дисбаланс продукции цитокинов семейства IL-1 и нарушение соотношения продукции L-1 в и рецепторного антагониста IL-1 в (IL-1RA) в сторону увеличения доли последнего в очаге воспаления [1, 2, 4]. Изменение соотношения продукции IL-1 в и IL-1RA в сторону увеличения доли IL-1RA на системном уровне и в очаге воспаления, способствует торможению эффектов IL-1 в и может служить признаком хронизации воспалительного процесса.
В настоящее время доказано, что приводить к дисбалансу биологического действия IL-1 может функциональный полиморфизм генов, кодирующих белки семейства IL-1, несущих небольшие мутационные изменения (точечные замены нуклеотидов, тандемные повторы частей гена). Дисбаланс в продукции белков семейства IL-1 может влиять на характер протекания воспалительных заболеваний и являться одним из пусковых моментов для генерации патологических процессов.
Остаётся не выясненным вопрос о возможном влиянии функционального полиморфизма генов семейства интерлейкина-1 на функциональную активность нейтрофилов и клинических проявлений низкой и высокой продукции эндогенного IL-1 в и рецепторного антагониста IL-1 (IL-1RA) у больных ГРС.
Цель исследования. Изучение влияния функционального полиморфизма генов семейства интерлейкина-1 на функциональную активность фагоцитирующих клеток у больных гнойными риносинуситами.
Учитывая иммунологические особенности гнойно-воспалительного процесса, в ходе нашего исследования оценивались особенности функциональной активности клеток нейтрофиль-ного звена в зависимости от генотипа.
Материалы и методы. Материалом для изучения хемилюминесцентной активности являлась венозная кровь больных (93) и здоровых доноров (152) Городской станции переливания крови.
Российская оториноларингология №4 (53) 2011
Метод хемилюминесценции (ХЛ), получивший в последние годы широкое распространение, основан на том, что любой биологический процесс в живом организме сопровождается выбросом кванта света. Однако, световой импульс очень мал, уловить его можно только многократно усилив с помощью специальных реагентов аплификаторов (люминол, люцегинин). Регистрация усиленного сигнала производится приборами люминометрами. Наши исследования были проведены с помощью мультисканирующего люминометра, позволяющего использовать очень малые количества реагентов.
Для исследования от больных получали цельную кровь, стабилизированную гепарином (20 МЕ/мл).
Алгоритм проведения реакции:
В лунки 96-луночной белой, непрозрачной платы раскапывали по 20 мкл исследуемого материала (кровь), добавляли вещества стимулирующие функциональную активность клеток воспаления (форбол-миристат ацетат), содержащихся в исследуемом материале, 40 мкл раствора люминола в конечной концентрации 10-4 М, общий объем реактогенной среды доводили раствором Хенкса до 200 мкл. Все исследования проводили в 3-х параллелях.
Регистрацию реакции проводили в течение 1 часа, при 37 °С.
Результат реакции выражали светосуммой, т.е. количеством импульсов накопленных за время эксперимента.
Реагенты:
Люминол является веществом, акцептирующим на себя весь пул свободнорадикальных форм кислорода (супероксидрадикал, гидроксил радикал, синглентный кислород), а также перекиси водорода и миелопироксидазы, продуцируемых клетками воспалительной реакции (нейтрофилы, макрофаги), при их активации.
Форбол-миристат ацетат (ФМА) относится к группе форболовых эфиров, является неспецифическим активатором функциональной активности клеток воспаления, действует непосредственно через протеинкиназный путь активации, минуя рецепторный аппарат. ФМА вызывает ряд последовательных реакций в клетке, приводя к мощному оксидативному взрыву и выбросу свободнорадикальных форм кислорода. Использование данного активатора, по мнению большинства исследователей, позволяет оценить оксидативный потенциал клетки.
Нами было предложено изучать люминолзависимую хемилюминесценцию, используя неспецифический индуктор «кислородного взрыва» — форболовый эфир ФМА (форбол мири-стат ацетат), что позволяет оценивать окислительно-восстановительный потенциал воспалительных клеток, а также их фагоцитарную активность.
В настоящее время известно, что гиперпродукция IL-1P на фоне воспаления, усугубляет ряд симптомов гнойных заболеваний за счёт общей токсичности и пирогенных свойств белковой молекулы. В то время как пониженная продукция IL-1P оказывает существенное влияние на хронизацию процесса воспаления в околоносовых пазухах, характеризующуюся длительным течением периода заболевания с короткими промежутками ремиссии.
Для формирования специфического иммунного ответа в системе приобретённого иммунитета клетки нейтрофильного звена, являются важными вспомогательными элементами, играющими ключевую роль в разрешении воспаления. Учитывая тот факт, что активация макрофагов происходит под действием секретируемых цитокинов ответственных за генирализованное действие, направленное на уничтожение бактерий путём фагоцитоза. Задачей нашей работы явилось изучение ХЛ ответа у больных ГРС с различными генотипами IL-1 в и IL-RA.
При оценке влияния различных генотипов на течение гнойного риносинусита целесообразно проводить исследование не только клинического анализа крови, подсчитывая количество форменных элементов, включая макрофаги, а смотреть in vitro спонтанную и стимулируемую функциональную активность клеток нейтрофильного звена индуктором (форбол-миристат ацетат), с целью выявления особенностей фагоцитоза, возможно генетически обусловленных.
При изучении уровней спонтанной продукции ХЛ ответа, повышающегося в случае преак-тивации клеток выявлено, что больные носители различных генотипов имели сходный в цифровом значении уровень спонтанной ЛЗХЛ, колеблющийся в диапазоне от 5±0,1 имп/сек до 5,3±0,1 имп/сек.
Уровни ЛЗХЛ больных ГРС значительно не разнились с данными здоровых доноров 5,3±0,1 имп/сек и соответственно не могли быть диагностически показательным для наглядного отображения процесса воспаления в околоносовых пазухах (рис. 1).
На наш взгляд целесообразно было для оценки функциональной активности макрофагаль-ных клеток учитывать уровень ХЛ ответа с использованием специфического индуктора.
У больных образование активных форм кислорода регистрировали по интенсивности ХЛ ответа в присутствии люминола с использованием индуктора — форбол-миристат ацетата, действующего непосредственно через протеинкиназный путь активации, минуя рецепторный аппарат.
Наибольший интерес в нашей работе представлял анализ уровней ЛЗХЛ с различными генотипами, который коррелировал с клиническими проявлениями заболевания.
Так, при сравнении ^-1Р 1/1 (13,7±0,9 имп/сек) с ^-ША 1/1 (23,8±1,7 имп/сек) установлено, что больные ГРС, статистически значимо имели различия в уровнях ответа на ЛЗХЛ в ответ на ФМА. Обращает на себя внимание, что уровень ответа на ЛЗХЛ в ответ на ФМА носителей ^-ША 1/1 (23,8±1,7 имп/сек) практически не отличается от уровня здоровых доноров (20,7±2,1 имп/сек), в то время как уровень носителей низкопродуцирующих аллелей гена ^-1Р*1 был значительно снижен (рис. 2).
Так, при сравнении ^-1Р 1/1 (13,7±0,9 имп/сек) с ^-ША 1/1 (23,8±1,7 имп/сек) установлено, что больные ГРС, статистически значимо имели различия в уровнях ответа на ЛЗХЛ в ответ на ФМА. Обращает на себя внимание, что уровень ответа на ЛЗХЛ в ответ на ФМА носителей ^-ША 1/1 (23,8±1,7 имп/сек) практически не отличается от уровня здоровых доноров (20,7±2,1 имп/сек), в то время как уровень носителей низкопродуцирующих аллелей гена ^-1Р*1 был значительно снижен (рис. 2).
Рис. 1. Уровень спонтанной продукции у больных ГРС с различными генотипами (имп^ек).
Рис. 2. Уровень ХЛ ответа в реакции на ФМА у больных с различными генотипами (имп/сек).
Российская оториноларингология №4 (53) 2011
По нашему мнению, у больных с низким хемилюминесцентным ответом на индуктор резко снижена функциональная активность фагоцитирующих клеток, проявляющаяся угнетением окислительно-восстановительных процессов, а также снижением экспрессии рецепторов, опосредующих фагоцитоз, что клинически может проявляться вялым течением гнойного воспаления в околоносовых пазухах.
Обследование пациентов носителей низкопродуцирующих генов ^-1Р*1 выявило при риноскопии розовую окраску слизистой оболочки полости носа, скудное гнойное отделяемое в средних носовых ходах. На серии компьютерных томограмм околоносовых пазух отмечалось наличие жидкостного компонента в верхнечелюстных пазухах и клетках решётчатого лабиринта, сочетающегося с элементом умеренного отёка слизистой оболочки (рис. 3).
Больные гнойным риносинуситом гетерозиготы (^-1р 1/2 и ^-ША 1/2) имели уровень ЛЗХЛ в ответ на ФМА сходные варианты ответов 20,6±1,8 имп/сек и 20±20,5 имп/сек, соответственно. В сравнении с группой здоровых доноров значимых различий не было выявлено, что позволяет предположить об неадекватности иммунной реакции в период гнойного заболевания околоносовых пазух. Недостаточность функциональной активности нейтрофилов при гнойном процессе может быть обусловлена недостатком продукции эндогенного ^-1Р, который заводит каскад иммунных процессов, опосредованно стимулирующих хемотаксис, адгезию и собственно фагоцитоз. Однако, клинически больные гетерозиготы имели классическую клиническую картину течения заболевания.
Рис.3. Компьютерная томография околоносовых пазух пациента носителя низкопроду-
цирующего гена К-1$*1.
Рис.4. Компьютерная томография околоносовых пазух пациента носителя высоко-продуцирующего аллеля гена К-1$*2.
В группе обследуемых больных были пациенты носители высокопродуцирующих аллелей гена ^-1Р*2 у которых уровнь ЛЗХЛ в ответе на ФМА был повышен (26,1±1,9 имп/сек) в сравнении с больными носителями ^-1Р 1/2 (20,6±1,8 имп/сек) и значительно повышен в сравнении с больными носителями ^-1Р*1 (13,7±0,9 имп/сек).
При изучении уровней ответа нейтрофилов на индуктор и клинических проявлений заболевания, подтверждался ранее описанный механизм действия белков острой фазы на гипоталамус [10], так больные носители высокопродуцирующих генов ^-1Р*2 отмечали выраженную гипертермию на фоне заболевания, значительный отёк в полости носа, обильное слизисто-гнойное отделяемое, что подтверждалось данными эндоскопического осмотра и КТ диагностики (рис. 4).
У больных гнойным риносинуситом носителей высокопродуцирующих аллелей гена ША*2 отмечался сниженный уровнь (13,7±0,5 имп/сек) ЛЗХЛ в ответ на ФМА относительно больных носителей высокопродуцирующих аллелей гена ^-1Р*2 (26,1±1,9 имп/сек) и здоровых доноров (20,7±2,1 имп/сек), носительство высоко и низкопродуцирующих генов имело колоссальное значение. Так варианты генов влияли на клиническую симптоматику ГРС. У носителей одинаковых сочетаний отмечалась схожесть клинических проявлений этого заболевания. Наиболее агрессивно по сумме клинических показателей ГРС протекал у носителей высокопро-дуцирующих аллелей генов провоспалительного цитокина ^-1Р, в то время как у носителей гетерозиготных вариантов этих генов, отмечалось более лёгкое течение заболевания.
В данном исследовании показано, что ГРС ассоциирующийся с определенным генотипом, влияет на характер течения этого заболевания и определяет функциональную активность ней-трофилов.
В целом, влияние функционального полиморфизма генов ^-1 в и ^-ША на макрофагально-фагоцитарное звено, по-видимому, можно описать в виде следующих закономерностей:
Таблица
Уровень хемилюминесцентного ответа у больных гнойными риносинуситами с различными генотипами
Генотип Хемилюминесцентный ответ (имп/сек)
Уровень спонтанной ЛЗХЛ * Уровень ЛЗХЛ в ответ на ФМА
1Ь-1Р 1\1 5,2±0,2 13,7±0,9
1Ь-1Р 1\2 5±0,1 20,6±1,8
1Ь-1Р 2\2 5,3±0,1 26,1±1,9
1Ь -1ЯА 1\1 5,1±0,2 23,8±1,7
1Ь -1ЯА 1\2 5,1±0,1 20±20,5
1Ь -1ЯА 2\2 5,2±0,2 13,7±0,5
Доноры 5,3 ± 0,1 20,7 ± 2,1
у больных ГРС носителей высокопродуцирующих аллелей гена ^-1Р воспаление протекает более остро, так как ^-1 является ключевым медиатором развития воспаления и сопровождается усилением активности клеток нейтрофильного звена;
у больных ГРС носителей высокопродуцирующих аллелей гена ^-ША воспалительный ответ снижен за счет блокады ^-1 в его антагонистом, что может являться причиной хрониза-ции воспаления и сопровождаться замедлением реакций фагоцитоза.
Известно, что продукция белков семейства ^-1 может усиливать, или ослаблять иммунные реакции в организме при различных заболеваниях. Среди белков семейства ^-1 главным эндогенным медиатором защитных реакций организма служит интерлейкин-1в, синтезируемый различными типами клеток в ответ на проникновение инфекционных агентов в слизистую оболочку носа и околоносовых пазух. Одним из главных свойств ^-1в считается способность этого пептида стимулировать функциональную активность многих типов лейкоцитов и лимфоцитов в ходе развития воспаления и иммунного ответа. У больных гнойным риносину-ситом носительство высоко и низкопродуцирующих генов ^-1в совершенно обоснованно гарантирует повышенную или сниженную продукцию кодируемого белка провоспалительного цитокина. При взаимодействии организма с чужеродными объектами возникают реакции «неспецифического иммунитета», в частности «дыхательный взрыв», характеризующийся резким увеличением потребления кислорода за счёт преобразования его в активные формы фагоцитами [6, 8, 11], закономерно приводящее к завершению фаз воспаления как местно в околоносовых пазухах, так и системно в организме. При возникающем дисбалансе в гипер или гипо продукции активаторов воспаления возникает торможение, т.е. хронизация или обострение процесса, которое может спровоцировать риногенные - септические осложнения.
В настоящее время профилактика и лечение заболеваний околоносовых пазух главным образом должно опираться на индивидуальные схемы подбора терапии, основанные на всесторонней диагностике, включающей иммуногенетическую оценку статуса больного с целью подбора препаратов направленных на регуляцию защитных реакций, имеющих решающее значение для выздоровления организма. В современном здравоохранении разнонаправленная иммунозаместительная терапия всё чаще находит применение в клинической практике. Важно правильно подойти к использованию огромного потенциала лекарственных средств, научиться использовать их неограниченные возможности для применения на благо человека.
ЛИТЕРАТУРА
1. Азнабаева Л. Ф. Провоспалительные цитокины в иммунопатогенезе и лечении хронических гнойных риноси-нуситов: автореф. дис. ... док. мед. наук. СПб., 2002. 38 с.
2. Активация местного иммунитета слизистой оболочкиоколоносовых пазух у больных хроническим гнойным риносинуситом при внутривенном введении Беталейкина / Л. Ф. Азнабаева [и др.] // Медицинская иммунология. — 2000. — Т. 2, №1. — С. 59-64.
3. Арефьева Н. А., Азнабаева Л. Ф. Иммунные реакции слизистой оболочки носа: цитологическая диагностика,
методы лечения // Consillium Medicum. — 2009. — Т. 11, № 11. — С. 30-33.
4. Арефьева Н. А., Азнабаева Л. Ф., Симбирцев А. С. Применение Беталейкина в лечении больных риносинуси-
том // Новости оторинолар. и логопатол. — 2001. — № 2(26). — С. 175-178.
5. Говорун М. И., Мигманова К. Л. Особенности в диагностике и лечении ятрогенных синуситов. Матер. XVIII съезда оторинолар. России. — СПб. — Т. 3. — С. 83-86.
6. Грачёва Т. А. Совершенствование хемилюминесцентного метода исследования функциональной активности фагоцитирующих клеток // Клиническая лабораторная диагностика. — № 2. — С. 54-55.
7. Изучение механизмов местного иммуностимулирующего действия интерлейкина-1 бета. Усиление функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов человека в очаге воспаления под влиянием интерлейкина-1 бета / Е. А. Варюшина [и др.] // Иммунология. — 2000. — № 3. — С. 18-21.
8. Использование метода регистрации хемилюминесценции нейтрофилов для оценки сенсибилизации лабораторных животных, иммунизированных бруциллёзной вакциной // Иммунология. — 2005. — №3. — С. 191-193.
9. Калинина Н. М., Хмельницкая Н. М., Тырнова Е. В. Иммунологические механизмы хронического воспаления слизистой оболочки носа // Мед. иммунология — 1999. — Т. 1, № 3-4. — С. 37.
10. Кетлинский С. А., Симбирцев А. С. Цитокины СПб: ФОЛИАНТ, 2008. 550 с.
11. Коленчукова О. А., Савченко А. А., Смирнова С. В. Особенности люминол- и люцигенин-зависимой хемилю-минесценции нейтрофильных гранулоцитов у больных хроническим риносинуситом // Медицинская иммунолог. — 2010. — Т. 12, № 4-5. — С. 437-440.
12. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и концентрации иммуноглобулинов у больных синуситами / Печенюк А. Ф. [и др.]. Мат. XVIII съезда оторинолар. России. СПб. — 2011. — Т. 3. — С. 249-251.
13. Рязанцев С. В., Науменко Н. Н., Захарова Г. П. Принципы этиопатогенетической терапии острых синуситов: метод. рек. СПб., 2006. 18-19 с.
14. Тимчук Л. Э. Янов Ю. К., Симбирцев А. С. Функциональная активность фагоцитирующих клеток нейтрофиль-ного звена и особенности продукции провоспалительных цитокинов в иммунопатогенезе хронического гнойного риносинусита // Рос.оторинол. — 2008. — прилож. N 3. — C. 344-350.
15. Фрейдлин И. С. Кинетика воспаления и иммунного ответа // Медиц. иммунология. — 1999. — Т. 1, № 3-4. — С. 25-26.
16. Шарипова Р. А. Интерлейкин-1 в в иммунопатогенезе рецидивирующих гнойных риносинуситов: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Уфа, 2007. 24 с.
17. Brandtzaeg P. Humorai unimme induction and relation to bacterial respiratory tract infections // J. Infect. Dis. — 1992. — Vol. 65, suppl. 50. — P. 167-176.
Семенюк Дарья Юрьевна — аспирант Санкт-Петербургского НИИ ЛОР; 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д.9, тел.: (812)316-25-01, еmail: [email protected]; Янов Юрий Константинович — Засл. врач РФ, проф., докт. мед. наук, директор СПб НИИ ЛОР. 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9, тел.: (812)313-22-56; Тимчук Лола Эркиновна — канд. мед. наук, науч. сотр. Санкт-Петербургского НИИ ЛОР 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9; тел.: (812)316-25-01, еmail: [email protected]; Симбирцев Андрей Семёнович — докт. мед. наук, проф., директор СПб НИИ особо чистых биопрепаратов». 197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, д. 7, тел.: (812)336-55-91, еmail: [email protected]; Мироненко Александр Николаевич- докт. мед. наук, заместитель директора по развитию медицинской помощи Санкт-Петербургского НИИ ЛОР. 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д.9; тел.: (812)316-39-52; еmail: [email protected]; Корнеенков Алексей Александрович — докт. мед. наук, вед. науч. сотр. лаборатории информатики и статистики Санкт-Петербургского НИИ ЛОР. 190013, Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9; тел.: (812)710-10-10, email: [email protected]; Конусова Валентина Георгиевна - канд. мед. наук, ст. науч. сотр. «СПб НИИ особо чистых биопрепаратов» . 197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, д. 7; тел.: (812)336-55-91, еmail: [email protected].
