CC BY
22=
57-ая конференция молодых ученых. 28-29 января 2010 года
4. Клинико-иммунологические особенности бронхиальной астмы, ассоциированной с хламидийной инфекцией. / Зайцева О. В. [и др.] // Int. J. Immunorehabil.. 1999, N 12, С. 21.
5. Community study of role of viral infections in exacerbations of asthma in 9-11 year old children. Johnston, S. L. [et al.] //Br. Med. J., 1995, v. 310, P. 1225-1229.
6. Cytomegalovirus Infection Alters Th1/Th2 Cytokine Expression, Decreases Airway Eosinophilia, and Enhances Mucus Production in Allergic Airway Disease. Wu C. A. [et al.] // J. Immunol., 2001, V. 167(5), P. 2798 - 2807.
7. Gern JE, Lemanske RF. Infectious triggers of pediatric asthma// Pediatr Clin North Am., 2003, V. 50(3), P. 555-575.
8. Sigurs N. Epidemiologic and clinical evidence of a respiratory syncytial virus-reactive airway disease link. /Am. J. Respir/ Crit. Care Med., 2001, V. 163(3),P. S2-S6.
9. Stark J. M. Respiratory virus infection and airway hyperreactivity in children. //Pediatr Allergy Immunol, 1991; 2, P. 95.
10. The relationship between upper respiratory infections and hospital admissions for asthma: a time trend analysis. Johnston, S. L. [et al.] //Am. J. Respir. Crit. Care Med., 1996, V. 154, P. 654-660.
11. Virus-induced Airway Hyperresponsiveness and Asthma. Am.J. Respir. Folkerts G. [et al.] //Crit. Care Med.,1998, V. 157(6), P 1708-1720.
УДК: 616. 155. 3-008. 13:535. 379
ОЦЕНКА ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ МЕТОДОМ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ Л. Э. Тимчук1, Ю. К. Янов1, А. С. Симбирцев2, Д. Ю. Семенюк1,
В. Г. Конусова2, А. Ю. Громова2, А. Ю. Котов2А
EVALUATION OF NEUTROPHILIC GRANULOCYTES PHAGOCYTIC
ACTIVITY BY CHEMILUMINESCENCE
L. I. Timchuk1, Yu. K. Yanov1, A. S. Simbircev2,
D. Yu. Semenyuk1, V. G. Konusova2, A. Yu. Gromova2, A. Yu. Kotov1a
1ФГУ СПб НИИ уха, горла, носа и речи, Росмедтехнологий (Директор - Засл. врач РФ, проф. Ю. К. Янов)
2 ФГУ СПб НИИ особо чистых биопрепаратов» ФМБ Агентства (Директор - докт. мед. наук В. П. Добрица)
Оценка фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов методом люминолзави-симой хемилюминесценции представляет собой важный компонент анализа состояния защитных факторов при воспалении слизистой оболочки околоносовых пазух. Полиморфизм генов семейства IL-1 влияет на показатели функционального состояния фагоцитирующих клеток.
Ключевые слова: цитокины, риносинусит, полиморфизм, гены, фагоцитоз.
Библиография: 10 источников.
Evaluation of neutrophilic granulocytes phagocytic activity by luminol-dependent chemiluminescence is an important component for the mucosal immunity analysis in paranasal sinuses. IL-1 family cytokine gene polymorphism influences the parameters of phagocytic cells functional activity
Key words: cytokines, rhinosinusitis, functional gene polymorphism, phagocytosis.
Bibliography: 10 sources.
В настоящее время хронические синуситы представляют собой серьезную проблему оториноларингологии в силу широкой их распространенности, определенных трудностей диагностики и лечения. Следует отметить, что тенденции к снижению заболеваемости за последние десятилетия не наблюдается. Отмечается постоянное увеличение хронических форм заболевания.
Большое значение уделяется изучению системного и местного иммунитета при этой патологии. Одним из факторов, определяющих патогенез хронического риносинусита, является несостоятельность местных факторов защиты в очаге воспаления.
Общеизвестно, что жизнедеятельность организма в физиологических и патологических условиях протекает при активном участии иммунной и лимфатической систем.
Российская оториноларингология №1 (44) 2010
В ответ на различные инфекционные агенты или повреждение тканей происходит синтез и секреция низкомолекулярных протеинов, объединенных под общим названием «цитокины». Продукция цитокинов служит первым звеном активации неспецифической резистентности, а затем и специфического иммунитета. Среди большого количества открытых в настоящее время цитокинов можно выделить наиболее важные в развитии воспалительного ответа, так называемые провоспалительные цитокины, продуцируемые моноцитами/макрофагами - ФНОа, ИЛ-1 и ИЛ-8. Провоспалительные цитокины индуцируют и развивают воспалительные реакции, направленные на деструкцию и удаление патогена путём фагоцитоза; отвечают за развитие, как местной воспалительной реакции, так и острофазового ответа организма. Использование разнообразных методов для оценки уровней продукции провоспалительных цитокинов клетками крови и в различных биологических жидкостях стало очень важным, так как цитоки-ны являются регулирующими и связующими молекулами, вовлеченными в патогенез многих заболеваний человека..
В последние годы был достигнут значительный прогресс в понимании роли провоспали-тельных цитокинов в норме и при патологии. Однако роль отдельных цитокинов, их уровни в патогенезе заболеваний человека, особенно при местных воспалительных процессах, полностью не выяснена, кроме того, в литературе существует масса противоречивых данных по данному вопросу. Поэтому поиск диагностических критериев для определения высокой или низкой продукции провоспалительных цитокинов при различных патологиях, является очень важным для оценки цитокинового статуса и может служить существенным дополнением в понимании причин заболевания и методов его лечения. Кроме того, в последние годы появились новые иммуномодулирующие препараты на основе рекомбинантных цитокинов и, несомненно, очень важным является изучение фармакокинетики этих препаратов, а также способности клеток организма индуцировать цитокины стимулирующие процесс фагоцитоза. Все это открывает новые возможности исследования иммуногенетического статуса человека.
Как было отмечено ранее [2], нами было предложено изучение люминолзависимой хеми-люминесценции (ЛЗХЛ), используя два индуктора: неспецифический индуктор «кислородного взрыва» - форболовый эфир ФМА (форбол миристат ацетат) и специфический индуктор - опсо-низированный сывороткой крови человека зимозан, включающий окислительно-восстановительные процессы в клетке через С3Ь рецепторы, опосредующие фагоцитарный процесс.
Данная схема исследования позволяет одновременно оценивать окислительно-восстановительный потенциал воспалительных клеток, а также оценивать их фагоцитарную активность.
Пациенты и методы. При обследовании 93 больных, на базе СПб НИИ ЛОР, хроническим риносинуситом (ХРС) выявлено, что 30 пациентов являлись носителями генотипа «1/1»^-1е.
Рис. Уровни ХЛ у больных хроническим синуситом с различными генотипами.
57-ая конференция молодых ученых. 28-29 января 2010 года
Спонтанная реакция хемилюминесценции 5,2(±0,2) (рис.), ЛЗХЛ в ответ на ФМА 13,7(±0,9) и ответ на зимозан 22(±3,4). Больные с низким хемилюминесцентным ответом на оба индуктора имеют резко сниженную функциональную активность фагоцитирующих клеток: у них угнетены окислительно-восстановительные процессы, а также снижена экспрессия рецепторов, опосредующих фагоцитоз. Наблюдающаяся картина при изучении фагоцитарных показателей крови у больных носителей низкопродуцирующих аллелей гена «1/1»^-1е характеризуется весьма низкими показателями фагоцитоза, не доходившими до умеренных значений, а у отдельных больных отмечалось значительное снижение.
Анализ данной группы показал, что больные носители «1/1»^-1е#страдали затяжными периодами гнойно-воспалительного процесса в околоносовых пазухах. Именно в данной группе закономерного повышения фагоцитоза в периоды обострения не наблюдается. Фагоцитарная активность характеризуется сниженной реакцией, которая проявляется почти на всём протяжении обострения слабым фагоцитозом.
Пациенты носители гетерозиготы «1/2»^-1е имели низкую спонтанную продукцию ХЛ 5(±0,1), в сравнении с другими группами показатель не отличался значительно.
ЛЗХЛ в ответ на ФМА не превышала 20,6(±1,8) и ответ на зимозан в среднем равнялся 42,6(±3,8). У больных этой группы был снижен окислительный потенциал, но фагоцитарная активность клеток была сохранна. Показатели реакции ХЛ у больных носителей «1/2»^-1е свидетельствуют, что при возникновении обострения, по мере течения воспаления, активность фагоцитоза повышается, это повышение носит вполне закономерный характер, однако снижение окислительного потенциала значительно тормозит процесс завершения фаз фагоцитоза. При воспалительном процессе возникает усиление активности нейтрофильных гранулоцитов, достигающей умеренной силы к 4-5 дню заболевания и повышающейся к 7-8 дню, совпадая с периодом выздоровления.
Отмечались пиковые значения хемилюминесценции у 10 больных, носителей высокопро-дуцирующих аллелей гена «2/2»^-1е: так, спонтанная реакция равнялась 5,3(±0,1), ЛЗХЛ в ответ на ФМА 26,1(±1,9) и ответ на зимозан 69,6(±7,1). Больные с высокими показателями ЛЗХЛ в ответ на оба индуктора - имели ответ на опсонизированный зимозан, в 3-4 раза превышающий нормальные показатели.
Фагоцитоз у больных данной группы активизируется повышенным содержанием ^-1е&ак в очаге воспаления, так и в организме в целом. Анализируя реакцию фагоцитоза у больных, носителей высокопродуцирующих аллелей гена ^-1е, можно констатировать, что показатели в самом начале обострения, когда они должны находится на среднем уровне - выше, чем у больных первых двух групп. Умеренно повышенные показатели ХЛ носят вполне закономерный характер фагоцитоза, однако при значительном увеличении спровоцированном провос-палительными белками семейства ^-1 происходит гиперреакция, ускоряющая смену фаз фагоцитоза, которые не являются состоятельными и не приводят к полной элиминации патогенов.
При обследовании больных, носителей высокопродуцирующих аллелей «2/2»^-1е выявлена сенсибилизация к бытовым и пищевым аллергенам, по данным «прик - теста», что указывало на наличие аллергического ринита.
При анализе анамнестических данных установлено, что именно эти больных имели эпизоды атаки ревматоидного артрита, в связи с чем находились на учёте у ревматологов; страдали острым периодонтитом и наблюдались фтизиатрами в городских противотуберкулёзных диспансерах с диагнозом - туберкулёз лёгких в стадии ремиссии.
По данным литературных источников для ревматоидного артрита, острого периодонтита и туберкулёза лёгких характерна ассоциация с высокопродуцирующими аллелями провоспа-лительного цитокина ^-1е(+3953) [3-8].
Больные с высокими показателями ХЛ отмечали в периодах обострения заболевания высокую температурную реакцию с максимальными цифрами, доходящими до 39°С, обилие гнойного отделяемого из носа, головные боли пульсирующего характера, заложенность носа. Рецидив у данной группы больных купировался несколькими курсами антибактериальной терапии и заканчивался назначением респираторных фторхинолонов. Наступающий период выздоров-
Российская оториноларингология №1 (44) 2010
=
ления, возможно, обусловлен способностью хинолонов связываться с сывороточными белками на 46% и проникать в различные органы, ткани и клетки, создавая в них концентрации, превышающие во многих случаях сывороточные [1], соответственно, действуя на моноциты человека, а также влияя на гуморальный и клеточный иммунитет, «сглаживая» острофазовый ответ.
Из частных проявлений иммунитета следует обратить внимание на изучение иммуногене-тической регуляции фагоцитоза. Фагоцитозу принадлежит выдающаяся роль в защите организма, однако, исследований по генетической регуляции фагоцитоза, несмотря на их перспективность и важность исчисляются единицами.
На основании вышеизложенного можно сделать выводы:
В центре внимания фагоцитарной активности должна оставаться проблема иммуногенетической основы, определяющей и регулирующей иммунологические процессы в очаге воспаления и в организме.
Поскольку в предыдущих исследованиях изучение патофизиологических закономерностей приурочивалось главным образом к продукции провоспалительныхи противовоспалительных цитокинов, являющихся лишь определёнными индикаторами иммунных процессов и состояний в околоносовых пазухах, необходимо проведение исследований на выявление полиморфных генов, которые могут быть маркерами для диагностики и лечения различных воспалительных заболеваний околоносовых пазух.
ЛИТЕРАТУРА
1. Лучихин Л. А., Троицкий С. А. Этиотропная терапия спарфлоксацином в ЛОР - практике // Вестн. оторинолар. - 2005. - №6. - С. 43-45.
2. Тимчук Л. Э., Янов Ю. К., Симбирцев А. С. Функциональная активность фагоцитирующих клеток нейтрофильного звена и особенности продукции провоспалительных цитокинов в иммунопатогенезе хронического гнойного риносинусита // Рос. оторинол. - 2008. - прилож. N3. - C. 344-350.
3. Assessment of the interleukin 1 gene cluster and other candidate gene polymorphisms in host susceptibility to tuberculosis / Bellamy R. [et al.] // Tuber Lung Dis. 1998. - Vol. 79(2). - Р 83-89.
4. Genetic markers for the efficacy of tumour necrosis factor blocking therapy in rheumatoid arthritis / Padyukov L. [et al.] // Ann Rheum Dis. - 2003. - Vol. 62(6). - Р 526-529.
5. Interferon-gamma and interleukin-10 gene polymorphisms in pulmonary tuberculosis / Lopez-Maderuelo D. { et al.] // Am J. Respir. Crit. Care Med. - 2003. - Vol. 167(7). - Р 970-975.
6. Microbiological parameters associated with IL-1 gene polymorphisms in periodontitis patients / Socransky S. S. [et al.] // J. Clin Periodontol. - 2000. - Vol. 27(11). - Р 810-818.
7. Relationship of polymorphisms of the Interleukin-1 gene cluster to occurrence and severity of rheumatoid arthritis / Kaijzel E. L. [et al.] // Tissue Antigens. - 2002. - Vol. 59(2). - P 122-126.
8. Susceptibility for and clinical manifestations of rheumatoid arthritis are associated with polymorphisms of the TNF-alpha, IL-1beta, and IL-1Ra genes / Cvetkovic J. T. [et al.] // J. Rheumatol. - 2002. - Vol. 29(2). - Р 212-219.
