CC BY
813. Преображенский Б. С. Клиническая классификация хронического тонзиллита и сопряженные с ним другие заболевания // Вестн. оторинолар. - 1964. - № 5. - С. 7-18.
14. Преображенский Б. С., Попова Г. Н. Ангина, хронический тонзиллит и сопряженные с ним общие заболевания. - М.: Медгиз,1970. - 450 с.
15. Сененко А. Н. Роль очаговой инфекции в патологии внутренних органов / Науч. конф. «Роль очаговой инфекции в патологии внутренних органов»: тез. докл. - Л.,1984. - С. 71-73.
16. Солдатов И. Б. Классификация и принципы лечения хронического тонзиллита: метод. рекомендации. - М., 1979. - 20 с.
17. Черныш А. В. Викулов В. В. Волотов П. Н. Морфофункциональное состояние небных миндалин // Рос. оторинолар. - 2004. - № 2 (9). - С. 114.
18. Шматов Г. П., Каргаполов А. В., Брянцева В. М. Основные принципы ИК-спектроскопии: использование ИК-спектроскопии в медицине, экологии и фармации. - Тверь: Триада, 2003. - С. 20-49.
19. Ogino S., Notake N., Matsunaga T. Longterm observation of postoperative conrse of habitual tonsillitis //Acta Otolaryngol. Suppl. Stockh. - 1988. - Vol. 454. - P. 299-304.
20. Parkinson R. H. Tonsil and allied problems / New York, 1951. - P. 191-199.
Портенко Геннадий Михайлович - засл. врач РФ, докт. мед. наук, профессор, зав. каф. оториноларингологии Тверской ГМА. Россия, 170642, Тверь, ул. Советская, д. 4; тел.: 8-4822-775-440, e-mail: gennadijj-portenko@rambler.ru Портенко Елена Геннадьевна - докт. мед. наук, доцент каф. оториноларингологии Тверской ГМА. Россия, 170036, г. Тверь, Санкт-Петербургское шоссе, д. 105, ОКБ; тел.: 8-4822-555-260, e-mail: gennadijj-portenko@ rambler.ru
Шматов Геннадий Павлович - канд. техн. наук, доцент каф. информатики и прикладной математики Тверского ГТУ. Россия, 170026, г. Тверь, Набережная А. Никитина, д. 22; e-mail: gshmatov@yandex.ru
УДК 616.216.1-002-036.12:616.155.3-008.13:001.891.53
РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ФУНКЦИИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ
У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ РИНОСИНУСИТОМ. Часть II
Д. Ю. Семенюк1, С. А. Артюшкин2, В. Г. Конусова3, А. С. Симбирцев3, А. Н. Мироненко4, Л. Э. Тимчук5
THE RESULTS OF THE STUDY OF THE FUNCTION OF NEUTROPHILIC GRANULOCYTES IN PATIENTS WITH CHRONIC RHINOSINUSITIS. Part II
D. Y. Semeniuk, S. A. Artyushkin, V. G. Konusova, A. S. Simbirtsev, A. N. Mironenko, L. I. Timchuk
1 ГБУЗ «Городская Мариинская больница», Санкт-Петербург, Россия (Главный врач - проф. О. В. Емельянов)
2 ГБОУ ВПО «Северо-Западный ГМУ им. И. И. Мечникова», Санкт-Петербург, Россия (Зав. каф. оториноларингологии - проф. С. А. Артюшкин)
3 ФГБУ «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» ФМБА, Санкт-Петербург, Россия
(Директор - проф. А. С. Симбирцев)
4 ГБУЗ «Городская больница № 15», Санкт-Петербург, Россия (Главный врач - докт. мед. наук А. Н. Мироненко)
5ФГБУ «Санкт-Петербургский НИИ уха, горла, носа и речи» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия
(Директор - засл. врач РФ, член-корр. РАМН, проф. Ю. К. Янов)
Последовательная цепь взаимодействий цитокинов является важнейшим инструментом иммунной системы, определенной с периода рождения ребенка набором генотипов, определяющих интенсивность и исход воспалительного ответа. Одну из ключевых ролей в развитии и регуляции воспалительного процесса играет синхронизация продукции, экспрессии и ингибиции синтеза белков семейства IL-1.
Нарушение баланса продукции IL-1p и IL-1RA в сторону увеличения доли IL-1RA на системном уровне и в очаге воспаления способствует торможению эффектов IL-1p и может служить признаком хронизации воспалительного процесса. В ходе проведенного исследования выявлено, что функциональный полиморфизм генов IL-ip и IL-1RA меняет характер ответа нейтрофильных гранулоцитов на индукторы в реакции люминолзависимой хемилюминесценции.
Ключевые слова: цитокины, риносинусит, полиморфизм, гены, фагоцитоз.
Библиография: 9 источников.
A series circuit interactions of cytokines is an essential tool immune system, with a particular period of childbirth set of genotypes that determine the intensity of the inflammatory response and outcome. One of the key roles in the development and regulation of the inflammatory process plays synchronization products, expression and inhibition of protein synthesis, IL-1 family . Imbalance products IL-ip and IL-1RA in the direction of increasing the proportion of IL-1RA at the system level and in the inflammation contributes to inhibition of the effects of IL-ip, and may be a sign of chronic inflammation. In the course of the study revealed a functional gene polymorphism IL-ip and IL-1RA changes the nature of the response of neutrophils in response to inducers of luminol chemiluminescence.
Key words: cytokines, rhinosinusitis, functional gene polymorphism, phagocytosis.
Bibliography: 9 sources.
Научный интерес к проблеме оценки воспалительных реакций в организме человека способствует всем этапам развития медицинской иммунологии. Внимание специалистов к этому вопросу обусловлено в первую очередь ростом заболеваемости населения гнойно-воспалительными патологиями. На сегодняшний день остается открытым широко обсуждаемый вопрос об этиопатогенетическом факторе развития заболеваний, однако остается неизменным мнение о нарушении функции иммунитета. В условиях развития воспаления в ответ на внедрение патогенов большая нагрузка ложится на популяцию нейтрофильных гранулоцитов, являющихся наиболее активными и быстро обновляющимися элементами иммунной системы, так у человека за сутки на 1 кг массы тела появляется около 1 миллиарда клеток [2-6]. При воспалении не только резко меняется количество нейтрофилов, но и изменяется функциональная активность клеток, определяющая их биоцидность и цитотоксические свойства. Нейтрофилы способны синтезировать цито-кины, в то время как и цитокины оказывают стимулирующее действие на клетки нейтрофильного звена [7].
Уникальная роль системы цитокинов в регуляции функции нейтрофильных гранулоцитов и их участие в патогенезе большого круга воспалительных заболеваний делают весьма перспективным использование метода хемилюминесценции как маркера развития иммунопатологических состояний организма [5]. Диагностическая ценность оценки хемилюминесценции в сочетании с генотипированием больных по аллельным признакам полиморфизмов генов цитокинов семейства Ш-1 связана в первую очередь с возможностью запрограммировать вероятность развития осложнений как местно, так и системно в организме. Изменение уровня хемилюминесцентно-го ответа позволяет оценить процессы развития инфекционного ответа. Повышение уровня Ш-1Р у больных носителей высокопродуцирующих
аллелей гена Ш-1р"2 является признаком заболеваний, имеющих в своей основе острое воспаление, и в первую очередь растет ответная реакция хемилюминесценции, где острота процесса коррелирует с содержанием Ш-1р и на местном, и на системном уровнях. Следовательно, развитие хронической затяжной воспалительной патологии чаще развивается у больных носителей высо-копродуцирующих аллелей генов противовоспалительного цитокина Ш-1ЯА"2 [1, 5, 6].
Пациенты и методы. В Санкт-Петербургском НИИ уха, горла носа и речи проводили обследование больных на базе клиники патологии верхних дыхательных путей в период с 2007 по 2010 г. Были обследованы 93 пациента с хроническим риносинуситом (ХРС) в возрасте от 18 до 60 лет, из них 41 мужчина и 52 женщины. Большинство отобранных для исследования больных имели давность заболевания от 5 до 10 лет. Следовательно, заболевание имело длительное течение. Благодаря этому можно объективно оценить результаты обследования больных. В группу сравнения вошли 152 здоровых донора.
Метод хемилюминесценции (ХЛ), получивший в последние годы широкое распространение, основан на том, что любой биологический процесс в живом организме сопровождается выбросом кванта света. Однако световой импульс очень мал, уловить его можно, только многократно усилив с помощью специальных реагентов апли-фикаторов (люминол, люцегинин). Регистрация усиленного сигнала производится люминоме-трами. Наши исследования были проведены с помощью мультисканирующего люминометра УкШг-2, позволяющего использовать очень малые количества реагентов.
Для исследования использовали венозную кровь, стабилизированную гепарином (20 МЕ/мл).
Алгоритм проведения реакции. В лунки 96-луночной белой, непрозрачной платы раскапывали по 20 мкл исследуемого материала (кровь, смыв из околоносовых пазух), добавляли
вещества, стимулирующие функциональную активность клеток воспаления (форбол-миристат ацетат, опсонизированный зимозан), содержащихся в исследуемом материале, 40 мкл раствора люминола в конечной концентрации 10-4 М, общий объем реактогенной среды доводили раствором Хенкса до 200 мкл. Все исследования проводили в трех параллелях. Регистрацию реакции проводили в течение 1 ч при 37 °С. Результат реакции выражали светосуммой, т. е. количеством импульсов, накопленных за время эксперимента.
Приготовление реагентов. Люминол является веществом, акцептирующим на себя весь пул свободнорадикальных форм кислорода (суперок-сидрадикал, гидроксил радикал, синглентный кислород), а также перекиси водорода и миело-пироксидазы, продуцируемых клетками воспалительной реакции (нейтрофилы, макрофаги) при их активации. 17,7 мг люминола растворяли в 10 мл диметилсульфоксида (ДМСО), получали маточный раствор, который хранили в холодильнике в течение 1 месяца. Перед исследованием приготовляли рабочий раствор, растворяя 1 объем маточного раствора люминола в 10 объемах раствора Хенкса.
Форбол-миристат ацетат (ФМА) относится к группе форболовых эфиров, является неспецифическим активатором функциональной активности клеток воспаления, действует непосредственно через протеинкиназный путь активации, минуя рецепторный аппарат. ФМА вызывает ряд последовательных реакций в клетке, приводя к мощному оксидативному взрыву и выбросу свободнорадикальных форм кислорода. Использование данного активатора, по мнению большинства исследователей, позволяет оценить оксидативный потенциал клетки. ФМА использовали в реакции в концентрации 10 нг/мл.
Зимозан - фрагмент клеточной стенки пекарских дрожжей, употребляется в реакции также в качестве активатора клеток воспалительной реакции. Использование данного активатора позволяет оценить интенсивность оксидативного взрыва, возникающего в нейтрофильных клетках в результате рецепторного взаимодействия опсонизированного компонентами комплемента зимозана с С3в-рецепторами на поверхности клетки. Реакция с опсонизированным (опс) зимозаном является вариантом реакции фагоцитоза.
Зимозан в количестве 10 мг разводили в 10 мл раствора №С1 0,9%, кипятили в течение 30 мин для получения гомогенной взвеси, дважды отмывали изотоническим раствором, ресуспендиро-вали в 2,5 мл того же раствора, добавляли эквивалентное количество пулированной (не менее 4 человек) сыворотки крови человека и помещали на 40 мин в термостат при температуре 37 °С.
После отмывания от избытка сыворотки зимозан разводили 10 мл изотонического раствора и алик-вотировали по 500 мкл в пластиковые пробирки. Хранили при 18 °С в течение 1 месяца.
Выделение лейкоцитов для ДНК типирования проводили из 4 мл крови. В кровь с антикоагулянтом EDTA добавляли желатин в соотношении
1 объем желатина на 10 объемов крови, перемешивали и оставляли на 15-20 мин в термостате при 37 °С для оседания эритроцитов. Затем на-досадок, содержащий лейкоциты, отбирали в эппендорфы объемом 2 мл. Центрифугировали в течение 4 мин при 4000 g для осаждения клеток, после чего супернатант сливали. Для удаления оставшихся эритроцитов к осадку добавляли
2 мл 0,83% раствора хлорида аммония, ресу-спендировали осадок и инкубировали 7 мин при комнатной температуре, после чего повторно осаждали клетки центрифугированием и сливали супернатант. Осадок отмывали два раза в 2 мл физиологического раствора путем ресуспенди-рования осадка и центрифугирования суспензии в течение 4 мин при 4000 g. Супернатант сливали, а осадок клеток замораживали при -20 °С для хранения.
Для выделения ДНК клетки ресуспендировали в 200 мкл физиологического раствора. К полученной суспензии добавляли 20 мкл 10-кратного раствора Трис-ЭДТА (10 мМ ЭДТА, 100 мМ тпбнс1, рН 8,0) и 20 мкл 10% раствора додецилсульфата натрия (SDS), после чего суспензию перемешивали. Затем в суспензию вносили 2 мкл раствора протеиназы К (13 мг/мл), вновь перемешивали и инкубировали в течение 1 ч при температуре 56 °С.
К суспензии добавляли 0,2 мл фенола, энергично встряхивали в течение 10-15 с. Для образования плотной интерфазы эппендорфы помещали в морозильную камеру холодильника на 30 мин (можно на ночь). Для разделения фаз эппен-дорфы центрифугировали в течение 10 мин при 12000 g.
После центрифугирования верхнюю водную фазу, содержащую ДНК, переносили в новые эп-пендорфы, добавляли 300 мкл хлороформа, встряхивали в течение 10-15 с, вновь центрифугировали 5 мин при 12 000 об./мин. Верхнюю водную фазу переносили в новые эппендорфы, добавляли 20 мкл 1,5 М раствора ацетата натрия ^аАс), 500 мкл 96° этилового спирта. Суспензию перемешивали и помещали в морозильную камеру на 2 ч (можно на ночь). Затем ДНК осаждали центрифугированием в течение 10 мин при 12 000 g. Супернатант удаляли пипеткой и к осадку добавляли 700 мкл 70° этилового спирта. Эппендорфы вновь центрифугировали в течение 10 мин при 12 000 g. Затем супернатант полностью удаляли, а осадок подсушивали в течение 5-10 мин в тяге.
После этого к осадку добавляли 100 мкл ёёН20 и оставляли эппендорфы при комнатной температуре в течение 30 мин для растворения ДНК. Затем раствор замораживали при -20 °С для хранения.
Для выявления точечных однонуклеотидных замен ^ОТ) в генах Ш-1р (+3953) использовали метод анализа длины фрагментов рестрикции по-лимеразной цепной реакции продукта. На первом этапе проводили ПЦР с использованием специфических праймеров (табл. 1), специфичных к участку геномной ДНК, содержащий известные SNR Реакционную смесь готовили в объеме 30 мкл: 3 мкл 10-кратного буфера; смесь dNTP в концентрации 170 нМ; 50 пМ каждого праймера (0,5 мкл 100 мкМ раствора); 1 ед. Taq-полимеразы; 1-2 мкл ДНК; Н2О до 30 мкл. Режимы амплификации ДНК для каждого из вариантов полиморфизма приведены в табл. 2. Продукт амплификации ДНК осаждали, для чего добавляли к 30 мкл реакционной смеси 90 мкл 96% этанола и 3 мкл 7,5М ацетата аммония, перемешивали и центрифугировали на микроцентрифуге в течение 15 минут с ускорением 10 000 супернатант удаляли пипеткой, добавляли 400 мкл 70% этанола и снова центрифугировали при ускорении 10 000^ в течение 6 мин, после чего удаляли спирт, а осадок подсушивали при 56 °С и растворяли в 9 мкл дистиллированной воды.
Для проведения рестрикции ПЦР продукт инкубировали в течение 3 ч с соответствующей рестриктазой (табл. 1). Продукты рестрикции разделяли электрофоретически в 2% агарозном геле с бромистым этидием и визуализировали в УФ-свете на трансиллюминаторе.
В качестве маркера размера полученных фрагментов ДНК использовали маркеры молекулярной массы с шагом 100 п. о. (рис. 1).
Генотипирование IL-1RA (VNTR) проводили в тех же условиях методом PCR: амплифицировали участок ДНК, содержащий тандемные повторы по 86 п.о. в районе интрона 2, аллельный вариант определяли по длине получаемого продукта с помощью электрофореза (табл. 1, рис. 2).
Характеристика полиморфных сайтов генов цитокинов IL-1ß (+3953), IL-1RA (VNTR) представлена в табл. 3.
Результаты. В нашей работе представляло интерес проанализировать, какие аллельные варианты генов IL-1ß и IL-1RA доминировали при разных вариантах ответа нейтрофилов в реакции хемилюминесценции (табл. 4).
Частота встречаемости различных генотипов IL-1ß и IL1-RA у пациентов с низким вариантом ответа нейтрофилов в реакции хемилюминес-ценции (n = 28) была следующей (рис. 3):
- 9 пациентов этой группы (32,1%) имели генотип «1/1»IL-1ß+«2/2»IL-1RA;
- сочетание аллелей «1/2»IL-1ß+«2/2»IL-1RA встречалось у 8 пациентов (28,6%);
- у 7 больных (25%) был генотип «1/1»IL-1ß+«1/2»IL-1RA;
у 4 пациентов (14,3%) генотип был «1/1»IL-1ß+«1/1»IL-1RA.
Таким образом, низкий уровень ответа нейтрофилов 17 пациентов (60,7%), носителей «1/1»IL-1ß + «2/2»IL-1RA и «1/2»IL-1ß + «2/2»IL-1RA, которые были гомозиготны по аллелям гена IL-1RA в реакции хемилюминесценции, можно объяснить повышенной продукцией противовос-
Т а б л и ц а 1
Характеристики исследуемых ( + 3953), IL-1RA (УЭТН.) полиморфизмов и праймеры, использованные
при их анализе методом ПДРФ-ПЦР
Локализация полиморфизма Используемые праймеры Длина фрагмента (п. о.) Рестриктаза; фрагменты, получаемые после рестрикции Ссылка
IL-1ß (+3953) Первый вариант: F-5'-GTT GTC ATC AGA CTT TGA CC-3' R-5'-TTC AGT TCA TAT GGA CCA GA-3' 250 Taq 1 137 и 113 Rudack C. et al., 1998
Второй вариант: F-5'-CTC AGG TGT CCT CGA AGA AAT CAA A-3' R-5'-GCT TTT TTG CTG TGA GTC CCG-3' 194 Аллель1 - 97, 85, 12 Аллель2 -182 и 12 J.-Y. Um et al., 2003
IL-1RA (VNTR) F-5'-CTC AGC AAC ACT CCT AT- 3' R-5'-TCC TGG TCT GCA GGT AA-3' Аллель 1 - 410 Аллель 2 - 240 Аллель 3 - 320 Аллель 5 - 500 Аллель 6 - 590 J.-Y. Um et al., 2003
Т а б л и ц а 2
Режимы амплификации ДНК, примененные для отдельных вариантов полиморфизма
Локализация полиморфизма Денатурация ДНК Режим амплификации Окончательная элонгация
т-1|3 ( + 3953) -1 вариант 94 °С - 5 мин 94 °С - 60 с, 53 °С - 60 с, 72 °С - 45 с; 35 циклов 72 °С - 10 мин
т-1ЯА (утя) 94 °С - 5 мин 94 °С - 60 с, 60 °С - 60 с, 72 °С - 45 с; 40 циклов 72 °С - 7 мин
Рис. 1. Картина электрофореза после проведения ПДРФ, полиморфный сайт - (+3953). Ряды: 1 -гомозигота по аллелям 2/2; 2 - гомозигота по аллелям 1/1; 3 - гетерозигота с аллелями 1/2; 4 - маркер молекулярный весов ДНК, по 100 пн.
палительного цитокина. У 7 пациентов, носителей «1/1»Ш-11+«1/2»Ш-1ЯА генотипа, с нормальной продукцией и гетерозиготностью по гену Ш-1ЯА низкий уровень ответа нейтрофилов в реакции хемилюминесценции был связан с на-
Рис. 2. Картина электрофореза после проведения ПЦР, полиморфный сайт - ^-1ЯА (УОТЯ). Ряды: 1 - гетерозигота по аллелям 1/2; 2 - гомозигота по аллелям 1/1; 3 - маркер молекулярный весов ДНК, по 100 пн; 4 - гомозигота с аллелями 2/2.
рушением соотношения про- и противовоспалительных цитокинов. Наличие у 4 пациентов, гомозигот по «нормальным аллелям» («1/1»Ш-1|+«1/1»Ш-1ЯА), низкого ответа в реакции лю-минолзависимой хемилюминесценции связано,
Т а б л и ц а 3
Характеристика полиморфных сайтов генов цитокинов ( + 3953), IL-1RA СУОТК)
Локализация сайта Номер по базе МСВ1 Аллельные варианты Аллели (обозначение в данной работе)
т-Щ+3953) ГБ1143634 С/Т С (1),Т(2)
т-1ЯА (утя) нд Повторы по 86 пн 1 - 4 повтора 2 - 2 повтора 3 - 3 повтора 5 - 5 повторов 6 - 6 повторов
Т а б л и ц а 4
Деление больных ХРС по группам в зависимости от характера ответа в реакции хемилюминесценции
(имп./с)
Хемилюминесценция Пациенты с ХРС, п = 93 Здоровые, п = 152
1-я группа п = 28 2-я группа п = 35 3-я группа п = 30
Спонтанная 5,2±0,2 5,1±0,1 5,1±0,1 5,3±0,1
ФМА 12,6±0,5 14,3±0,5 30,4±2,4* 20,7±2,1
Зимозан * р < 0,05 по сравнению с грут 13,7±0,6 шой здоровых. 31,1±2 71,5±4,3З* 25,3±1,9
Рис. 3. Частота встречаемости генотипов для всех ХЛ типов ответов
по-видимому, с аллельными вариантами других про- и противовоспалительных цитокинов.
Совпадение результатов оценки хемилюминес-ценции нейтрофилов и иммуногенетических данных определения аллельных вариантов генов Ш-1р и Ш-1ИА совпали в этой группе в 85,7% случаев.
Обращает на себя внимание влияние носи-тельства высокопродуцирующих аллелей гена IL-1RА («2/2»IL-1RA) на клиническую картину в период обострения у данной группы больных. Так, пациенты отмечали вялотекущее течение заболевания, характеризующееся в первую очередь стеканием слизисто-гнойного отделяемого по задней стенке глотки, умеренной тяжестью в области проекции околоносовых пазух и иногда затруднением носового дыхания. При оценке околоносовых пазух отмечался пристеночный отек слизистой оболочки, чаще верхнечелюстных пазух и клеток решетчатого лабиринта, содержащих жидкостный компонент, частично заполняющий синусы (рис. 4).
Частота встречаемости различных генотипов Ш-1 р и IL-1RА у пациентов со средним уровнем ответа нейтрофилов на индуктор (рис. 5) в реакции хемилюминесценции была следующей (п = 35):
- сочетание генотипа «1/1»Ш-1р+«1/1»Ш-1RA имелось у 2 пациентов (5,7%);
- генотип «1/1»IL-lр+«2/2»IL-1RA был выявлен у 2 пациентов (5,7%);
- 1 пациент (2,9%) имел генотип «1/2»Ш-1Р+«1/1»Ш-1ИА;
- 4 пациента (11,4%) имели генотип «1/1»Ш-1Р+«1/2»Ш-1аА;
- 14 пациентов (40%) в данной группе были гетерозиготами по обоим генам, т. е. имели генотип «1/2»Ш-1р+«1/2»Ш-1аА;
- у 12 пациентов (34,3%) сочетание аллелей было «1/2»Ш-1р+«2/2»Ш-1ИА.
Как видно из представленных данных, соот-носимость результатов индуцированной люми-нолзависимой хемилюминисценции и данных определения аллельных вариантов Ш-1р и IL-1RА была выявлена в 94,3% случаев.
По нашим наблюдениям клинически наиболее тяжелыми были больные с высоким вариантом ХЛ ответа. Частота встречаемости различных аллель-ных вариантов генов Ш-1р и IL-1RА у пациентов с в ы с о к и м уровнем ответа нейтрофилов на индуктор в реакции хемилюминесценции (п = 30) была следующей (рис. 3, табл. 5):
- сочетание аллельных вариантов генов «1/2»IL-lр+«1/2»IL-1RA было у 10 больных (33,3%);
- сочетание аллельных вариантов генов «2/2»IL-lр+«1/1»IL-1RA было у 10 больных (33,3%);
- сочетание аллельных вариантов генов «1/2»Ш-1р+«1/1»Ш-1КА было у 8 больных (26,7%);
Рис. 4. Компьютерная томография больного носителя «1/2»^-1р+«2/2>Л-1КА генотипа.
Средний «мг
Рис. 5. Частота встречаемости генотипов для среднего типа ответа (%).
Т а б л и ц а 5
Варианты ответа нейтрофилов в реакции хемилюминесценции у пациентов ХРС с различными аллельны-
ми вариантами и (%)
Аллельные варианты сочетаний генов Низкий ответ Средний ответ Высокий ответ
«1/1»т-1р+«1/1»т-1ЯА, п = 4 п = 2 п = 1
п = 7 (7,5%) (57,10%) (28,60%) (14,30%)
«1/1»т-1р+«1/2»т-1ЯА, п = 7 п = 4 п = 1
п = 12 (12,9%) 58,30% 33,30% 9,20%
«1/2»т-1р+«1/1»т-1ЯА, - п = 1 п = 8
п = 9 (9,7%) 11,10% 88,90%
«1/1»т-1р+«2/2»т-1ЯА, п = 9 п = 2 -
п = 11 (11,8%) 81,80% 18,20%
«1/2>Л-1р+«2/2»^-1ЯА, п = 8 п = 12 -
п = 20 (21,5%) 40,00% 60,00%
«1/2»т-1р+«1/2»т-1ЯА, - п = 14 п = 10
п = 24 (25,8%) 58,30% 41,70%
«2/2»т-1р+«1/1»т-1ЯА, - - п = 10
п = 10 100,00%
- сочетание аллельных вариантов генов «1/1»Ш-1р+«1/1»Ш-1ЯА было у 1 больного (3,3%);
- сочетание аллельных вариантов генов «1/1»Ш-1р+«1/2»Ш-1ЯА было у 1 больного (3,3%).
Таким образом, высокий уровень ответа нейтрофилов отмечался у 10 пациентов (33,3%), носителей гетерозиготных наборов аллелей «1/2»Ш-1р+«1/2»Ш-1ЯА. У 10 пациентов, носителей «2/2»Ш-1р+«1/1»Ш-1ЯА высокопродуцирующего генотипа, характеризующегося повышенной продукцией («2/2») и гомозиготностью по гену Ш-1ЯА высокий уровень ответа нейтрофилов в реакции хемилюми-несценции был связан с нарушением соотношения про- и противовоспалительных цитокинов с перевесом в сторону выработки Сочетание
аллельных вариантов генов «1/2»Ш-1р+«1/1»Ш-1ЯА, отмечающееся у 8 больных (26,7%), также оказывало влияние на стимуляцию фаз фагоцитоза при воспалении в околоносовых пазухах.
Наличие у 2 пациентов гомозиготы по «нормальным аллелям» («1/1»Ш-1р+«1/1»Ш-1ЯА) и гетерозиготы по высокопродуцирующим аллелям «1/2»IL-1RA («1/1»IL-1р+«1/2»IL-1RA) соответственно высокого ответа в реакции лю-минолзависимой хемилюминесценции связано, по-видимому, с аллельными вариантами других про- и противовоспалительных цитокинов.
Данные совпадения результатов между высоким уровнем ответа нейтрофилов в реакции люминолзависимой хемилюминесценции и наличием в генотипе пациента аллеля IL-lр, ответственного за высокую продукцию провоспали-тельного цитокина, отмечались в 93,4% случаев.
Рис. 6. Компьютерная томография больного - носителя «2/2»1-1р+«1/1>Л-1КА
генотипа.
Детальный анализ клинических случаев хронического риносинусита больных, имевших высокий уровень ответа в реакции ХЛ, показал, что клиническая картина заболевания с периодами обострения существенно отличается от обычной. В первую очередь обращает на себя внимание быстрое развитие интоксикации, характеризующейся, во-первых, повышением температуры тела до 38,8 °С, резким затруднением носового дыхания, обилием слизисто-гнойного отделяемого, общей слабостью, головной болью.
На серии компьютерных томограмм отмечается тотальное заполнение околоносовых пазух жидкостным компонентом, сопровождающееся выраженным отеком слизистой оболочки полости носа и околоносовых пазух (рис. 6). Анализ строения генотипа данной группы пациентов позволяет связать носительство высокопродуцирующих гомо-«2/2»Ш-1р и гетерозиготных аллелей «1/2»Ш-1р с агрессивными клиническими признаками и симптомами хронического риносинусита в период обострения, сопровождающегося нейтрофилезом.
Функциональная значимость увеличения числа нейтрофилов при воспалении в околоносовых пазухах не ограничивается банальным усилением местного барьера. В процессе миграции ней-трофильных гранулоцитов в назальные синусы происходит постоянная секреция биологически активных веществ гранулярного аппарата во внеклеточную среду, в результате чего слизисто-гнойное отделяемое приобретает иммунопротек-торные свойства, обеспечивая тем самым взаимодействие нейроэндокринной и иммунной систем, формирующее местные и общие защитные реакции организма при возникшем воспалении.
Данные литературы свидетельствуют о том, что нейтрофильные гранулоциты имеют существенное значение в обеспечении неспецифической резистентности организма при воспалении околоносовых пазух, но по результатам собственных исследований выявлена зависимость функциональной активности нейтрофилов от носи-тельства определенных генотипов.
Выводы
Проведенное нами исследование показало, что результаты индуцированной люминол-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов (характер ответа - низкий, средний и высокий) в среднем в 90% случаев совпадает с результатами иммуногенетических исследований аллелей генов Ш-1р и IL-1RА, отвечающих за высокую, среднюю или обычную продукцию провоспалительных цитокинов в период воспаления в околоносовых пазухах. Феномен совпадения связан с праймированием нейтрофилов при их контакте с цитокинами, местном и системном воспалении. Однако необходимо учитывать, что этот контакт сопровождается активацией рецепторов нейтрофилов через гетеротримерные G-белки.
ЛИТЕРАТУРА
1. Влияние функционального полиморфизма генов семейства интерлейкина-1 на предрасположенность и характер течения хронического гнойного риносинусита и эффективность терапии рекомбинантным интерлей-
Научные статьи
кином-1 бета (беталейкин) I. Ассоциация полиморфизма генов семейства интерлейкина-1 с заболеваемостью хроническим гнойным риносинуситом и дисрегуляцией воспалительного ответа / А. Ю. Громова [и др.] // Рос. оторинолар. - 2005. - № 2. - С. 5-12.
2. Дранник Г. Н. Клиническая иммунология и аллергология. - М.: МИА, 2003. - 603 с.
3. Иммунология и аллергология для ЛОР-врачей / Д. К. Новиков [и др.]. - М.: МИА, 2006. - 498 с.
4. Кетлинский С. А., Симбирцев А. С. Цитокины. - СПб.: Фолиант, 2008. - 552 с.
5. Конусова В. Г., Симбирцев А. С. Влияние беталейкина на функциональную активность нейтрофилов человека // Мед. иммунолог. - 2000. - Т. 2. - С. 221-222.
6. Симбирцев А. С. Интерлейкин-1. Физиология. Патология. Клиника. - СПб.: Фолиант, 2011. - 473 с.
7. Differentia! regulation of cytokine release and leukocyte migration by lipopolysaccharide-stimulated primary human lung alveolar type II epithelial cells and macrophages / A. J. Thorley [et al.] // J. Immunol. - 2007. - N 178 (1). -P. 463- 473.
Семенюк Дарья Юрьевна - врач-оториноларинголог Мариинской больницы. Россия, 191104, Санкт-Петербург, Литейный пр., д. 56; тел.: 8-911-975-19-46, e-mail: d@gmail.com
Артюшкин Сергей Анатольевич - докт. мед. наук, профессор, зав. каф. оториноларингологии СевероЗападного ГМУ им. И. И. Мечникова. Россия, 191015, Санкт-Петербург, ул. Кирочная, д. 41; тел.: (812) 303-50-00, e-mail: Sergei.Artyushkin@spbmapo.ru
Конусова Валентина Георгиевна - канд. мед. наук, ст. н. с. НИИ особо чистых биопрепаратов. Россия, 197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, д. 7; тел.: (812) 336-55-91, е-mail: onir@hpb-spb.com
Симбирцев Андрей Семёнович - докт. мед. наук, профессор, директор НИИ особо чистых биопрепаратов. Россия, 197110, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, д. 7; тел.: (812) 336-55-91, е-mail: onir@hpb-spb.com
Мироненко Александр Николаевич - докт. мед. наук, главный врач Городской больницы № 15. Россия, 198205, Санкт-Петербург, ул. Авангардная, д. 4; e-mail: mironenko@hotbox.ru
Тимчук Лола Эркиновна - канд. мед. наук, н. с. Санкт-Петербургского НИИ ЛОР. Россия, 190013. Санкт-Петербург, ул. Бронницкая, д. 9; тел.: 8-812-316-15-23, е-mail: lola-timchuk@mail.ru
УДК 616.282-007.65
ВЗАИМОСВЯЗЬ СОМАТОТИПА ЧЕЛОВЕКА С УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ВОЗДЕЙСТВИЮ УСКОРЕНИЙ КОРИОЛИСА
А. В. Соловьев, Л. А. Глазников, Н. Н. Плахов
WITH THE INFLUENCE OF SOMATOTYPE AND RESISTANT
TO THE CORIOLIS ACCELERATION
A. V. Solovyev, L. A. Glaznikov, N. N. Plakhov
ФГБУ «Российский государственный педагогический университет им. А. И. Герцена»,
Санкт-Петербург, Россия
(Зав. каф. медико-валеологических дисциплин - проф. Л. Г. Буйнов )
Несмотря на существование большого количества методик исследования функций вестибулярного анализатора информативность их остается крайне низкой. Результаты экспертной оценки устойчивости человека к укачиванию также часто не соответствуют объективному состоянию организма. Это диктует необходимость разработки новых методических подходов в целях профессионального отбора лиц, работающих в условиях воздействия знакопеременных ускорений.
Конституция индивида позволяет произвести интегральную оценку состояния организма и прогнозировать возможность заболеваний в будущем.
Ключевые слова: конституция человека, устойчивость людей разных соматотипов к воздействию ускорений Кориолиса.
Библиография: 16 источников.
Despite the existence of a large number of methods for studying functions of weight - tibulyarnogo their information content analyzer is extremely low . The results of the expert evaluation of human resistance to motion sickness are also often do not meet the objective of the state of the body. This requires the development of new methodological approaches to professional selection of people working in conditions of alternating accelerations.
