CC BY
11
в ишемизированной скелетной мышце и активации анги-огенеза [2]. В изучении возможного миогенного эффекта выяснилось, что pHGF/VEGF не обладает выраженным влиянием на образование и рост новых миофибрилл в ишемизированной скелетной мышце. С другой стороны, данный факт свидетельствует о безопасности плаз-мидного вектора относительно митогенной активности.
Также в данной работе было впервые исследовано влияние экспрессируемых факторов (VEGF165 и HGF) на ак-сональный рост в средах после трансфекции HEK293T плазмидой pHGF/VEGF. Было установлено, что выраженный рост и ветвление аксонов не наблюдается при воздействии АФР по сравнению со всеми отрицательными контролями, однако, с другой стороны, и не подавляется.
Для клинической картины КИНК характерно наличие воспалительных процессов. По результатам исследования, один из контролей которого — препарат сравнения «Неоваскулген» (ПАО «Институт стволовых клеток человека», Россия), pHGF/VEGF способствует уменьшению воспаления путем снижения инфильтрации макрофагов в ишемизированной мышце. Особенно выражен этот эффект в сравнении с «пустым» вектором (pVAX2), для которого характерно развитие иммунного ответа. Фенотипирование макрофагов позволило детально проанализировать инфильтрацию ишемизированной мышцы: оценивалась как вся популяция CD68+, так и только М2+ субпопуляция. В результате генной терапии с использованием pHGF/VEGF количество M2+ макрофагов в повреждённой ткани значительно возрастало по сравнению со всеми контрольными группами, а также препаратом сравнения «Неоваскулген», что свидетельствует в пользу противовоспалительного действия исследуемого вектора.
Работа поддержана грантом РФФИ № 20-01500181 "Выяснение механизма участия факторов роста эндотелия (VEGF) и гепатоцитов (HGF) при регенерации ишемизированных скелетных мышц.
Литература:
1. Makanevich P.I. et al. PLOS ONE. 2018. Vol. 13 № 5. P. 1-25.
2. Slobodkina E. et al. Pharmaceutics. 2020. Vol. 12. № 12.
P. 1-23.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ МСК КРЫС И ЧЕЛОВЕКА И ИХ КОНДИЦИОНИРОВАННЫХ СРЕД ПРИ МЕСТНЫХ ЛУЧЕВЫХ ПОРАЖЕНИЯХ НА МОДЕЛИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
A.А. Расторгуева. Т.А. Астрелина,
B.А. Брунчуков. Ю.Б. Сучкова. И.В. Кобзева. Д.Ю. Усупжанова, Е.Е. Ломоносова. В.А. Никитина. В.А. Брумберг. А.М. Комлев. А.С. Самойлов
Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна ФМБА России, Москва, Россия
e-mail: rastorgueva.ann@gmail.com
Ключевые слова: мезенхимальные стволовые клетки, местные лучевые поражения, кондиционированная среда, клеточные технологии, рентгеновское излучение.
Местные лучевые поражения (МЛП) могут возникать не только в чрезвычайных ситуациях, но и в рядовых случаях, например у человека, проходящего лучевую терапию. Использование клеточной терапии для лечения МЛП базируется на восстановлении погибших клеток ба-зального слоя эпидермиса, куда входят в том числе про-лиферирующие клетки кожи [1-3].
Цель: изучение процессов регенерации при лечении МЛП кожи МСК и их кондиционированной средой на лабораторных животных.
Материалы и методы: в исследование включено 120 белых крыс-самцов линии Wistar рандомизированых на 6 групп: контроль (К), животные не получали терапию; контроль с введением концентрата культуральной среды (КС) трехкратно на 1,14,21 сутки; введение МСК слизистой десны человека (ДЧ) в дозе 2 млн на 1 кг трехкратно на 1,14,21 сутки; введение концентрата кондиционированной среды МСК слизистой десны человека (ДЧКС) в расчетной дозе трехкратно; введение МСК слизистой десны крысы (ДК) в дозе 2 млн на 1 кг трехкратно; введение концентрата кондиционированной среды МСК слизистой десны крысы (ДККС) в расчетной дозе 2 млн клеток на 1 кг трехкратно. Проводились гистологическое и иммуногистохимическое исследования. Культивировали МСК по стандартной методике до 3-5 пассажа, осуществляли забор кондиционированной среды и концентрировали ее в 10 раз.
Результаты: на 112-е сутки отмечалось полное заживление язвы кожи у 40 % животных в группе КС, у 60 % в группе ДЧ, у 20 % животных в группах ДЧКС, ДККС, в группах К и ДК не было ни одного животного с затянувшейся раневым дефектом.
Заключение: таким образом, все использованные методы лечения были эффективны при МЛП и приводили к уменьшению площади поражения, сокращению времени заживления язвы, улучшению регенеративных процессов. Положительная экспрессия маркера VEGF отмечалась в группах К и КС на 28-е сутки и в опытных группах (ДЧ, ДЧКС, ДК, ДККС) на 112-е сутки. Статистически значимое увеличение маркера CD68 отмечено в группах К, ДК и ДККС, а в остальных группах отмечено уменьшение количества макрофагов.
Литература:
1. Брунчуков В.А., Астрелина Т.А., Никитина В.А. и др. Гены и клетки. 2019, т.14 Приложение с. 41
2. Zheng K, Wu W, Yang S, Huang L, Chen J et al. 2015. Mol Med Rep 12(5): 7065-7071.
3. Расторгуева А.А., Астрелина Т.А., Брунчуков В.А. и др. Медицинская радиология и радиационная безопасность. 2021. Т. 66. № 4. С.5-12.
РАЗРАБОТКА НОВОЙ ТКАНЕИНЖЕНЕРНОЙ КОНСТРУКЦИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ГЕННО-ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА «НЕОВАСКУЛГЕН» ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕНТАЛЬНОЙ ИМПЛАНТАЦИИ
Т.С. Расулов1, П.С. Тимашев2, П.И. Котенева2, Н.В. Кошелева2, А.Л. Файзуллин2, Т.В. Брайловская1, 2, А.П. Ведяева1, 2
1 ФГБУ НМИЦ ЦНИИС и ЧЛХ Минздрава России, Москва, Россия
2 ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. ИМ. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет), Москва, Россия
e-mail: nasulov.doc@gmail.com
Ключевые слова: тканеинженерная конструкция, мультипо-тентные мезенхимные стромальные клетки, «Неоваскулген», дентальная имплантация
Дефицит костных и мягких тканей десны снижает эффективность дентальной имплантации особенно в эстетически
значимых зонах. Распространённое в клинической практике применение коллагенсодержащих мембран не всегда позволяет восстановить нужный объем десны. Цель работы — разработка новой тканеинженерной конструкции (ТИК) для повышения эффективности восстановления объема мягких тканей десны при дентальной имплантации.
Экстракты коллагенсодержащих мембран Mucoderm (Botiss Biomaterials, Германия) и децеллюляризованного перикарда быка не обладали цитотоксическим действие, не снижали метаболическую (AlamarBlue assay) и пролифе-ративную (PicoGreen asaay) активность мультипотентных мезенхимных стромальных клеток (МСК) десны человека. Дополнительным подтверждением сохранения метаболической активности МСК в присутствии исследуемых образцов послужили результаты теста на высвобождение лактатдеги-дрогеназы. К обоим образцам МСК десны человека успешно адгезировались и формировали монослои живых клеток за 3 и 7 суток на поверхности Mucoderm и Перикарда, соответственно (LiveDead assay). Генно-терапевтический препарат «Неоваскулген» (ФГБУ ГНЦ МЗ РФ), форма плаз-миды, кодирующей эндотелиальный фактор роста сосудов, в максимальной концентрации 1,2мг/мл снижал метаболическую активность МСК десны человека на 60% и снижал уровень пролиферации клеток в два раза относительно контроля в ростовой среде без добавок.
Эффективность восстановления мягких тканей десны сравнивали после проведения аугментации слизистой десны закрытым способом с имплантацией материалов под лоскут кроликам породы Серый великан (n=9), разделенным на 4 группы по имплантированным образцам: 1) перикард, заселенный МСК 2) Mucoderm, заселенный МСК 3) перикард, 4) Mucoderm. Биодеградацию и тканевую реакцию оценивали методом морфометрического анализа. К 10 суткам оба варианта ТИК на основе коллагеновых мембран прошли частичную краевую резорбцию без выраженных признаков тканевой реакции на имплантат, соединительнотканная капсула состояла из незрелой грануляционной ткани с единичными очагами нейтрофилов.
Таким образом, использование коллагеновых материалов в сочетании с МСК и(или) стимулирующим васкуляризацию генно-терапевтическим препаратом может стать альтернативой аутотрансплантации мягких тканей для увеличения толщины десны, что актуально в современной стоматологии при дентальной имплантации. Исследование выполнено за счет средств гранта Российского научного фонда (проект № 18-15-00401).
ВЛИЯНИЕ GDF11 НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПРИ СТАРЕНИИ
А.Ю. Ратушный, Д.К. Матвеева, М.И. Ездакова
ФГБУН ГНЦ РФ Институт медико-биологических проблем РАН, Москва, Россия
e-mail: ratushkin@mail.ru
Ключевые слова: мезенхимальные стромальные клетки (МСК), ASC52telo, GDF11, клеточное старение.
В настоящее время GDF11 активно исследуют в связи с его потенциальными геропротекторными свойствами и возможным применением в терапевтических целях. В нашей модели было изучено его влияние на «молодые» и сенесцентные мезенхимальные стромальные клетки человека, морфофункциональное состояние которых значительно различается.
Эксперименты проводили на иммортализованной стандартной линии МСК - ASC52telo (АТСС® 8030-4000™). Клетки были предоставлены на некоммерческой основе из клеточного депозитария МГУ им. М.В. Ломоносова в рамках проекта «Ноев ковчег». Клеточное старение индуцировали при помощи митомицина С (МмС).
При индукции клеточного старения отмечены характерные морфофункциональные изменения уже через 3 дня. Через 7 и 10 дней увеличение размера становилось более выраженным. Аутофлуоресценция увеличивалась в 7, в 12 и в 15 раз, соответственно, что указывает на накопление липофусцина. Активность лизосомального компар-тмента также увеличивалась в 4-6 раз. Активность мито-хондриального компартмента повышалась не более чем в 1,5 раза. Генерация АФК была увеличена в 1,5-5 раз.
В экспериментах было 4 группы МСК — «молодые» (МмСУЭйП 1-) и сенесцентные (МмС+/ОйИ 1-) клетки без добавления ЭйИ1, а также «молодые» (МмС-/ЭйР11+) и сенесцентные (МмС+/ЭйР1 1 +) клетки с добавлением ЭйШ (10 нг/мл). Анализ проводили через 10 дней.
Оценивали распределение по фазам клеточного цикла (8иЬЭ1 тест) и клоногенную активность. Показано, что воздействие МмС полностью останавливает пролифера-тивную активность. ЭйР11 + культуры не отличались по количеству колоний от ЭйШ- образцов. 8иЬЭ1 тест также не выявил выраженного влияния ЭйП 1 на распределение «молодых» клеток (МмС-) по фазам клеточного цикла.
Жизнеспособность МмС+ клеток была снижена приблизительно на 10% вне зависимости от добавления ЭйП 1. Оценка морфологических показателей Р8С-А и 88С-А выявила увеличение данных показателей при обработке МмС. Добавление ЭйШ приводило к небольшому снижению Р8С-А и 88С-А как МмС-, так и МмС+ клеток. Также через 10 дней экспозиции анализировали активность внутриклеточных компартментов, уровень окислительного стресса и аутофлуоресценцию клеток. Обработка МмС приводила к повышению всех исследованных параметров. Влияние ЭйП 1 было сла-бовыраженным. Тем не менее, отмечен ряд эффектов, обратный эффектам МмС, касающийся, в первую очередь, аутофлуоресценции, активности лизосомального компартмента и окислительных процессов. Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 21-75-10117.
ПРЕДОТВРАЩЕНИЕ ОТДАЛЕННЫХ КОГНИТИВНЫХ НАРУШЕНИЙ У МЫШЕЙ ПОСЛЕ ГАММА-ОБЛУЧЕНИЯ ГОЛОВЫ С ПОМОЩЬЮ ИНТРАНАЗАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ ЭКЗОСОМ НЕЙРАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
М.Г. Ратушняк, А.С. Жирник, А.А. Парфёнова, Ю.П. Семочкина, О.Д. Смирнова
НИЦ Курчатовский институт, Москва, Россия
e-mail: ratushnyak_marya@mail.ru
Ключевые слова: нейральные стволовые клетки, экзосомы, гамма-излучение, головной мозг, облучение головы, когнитивные функции, мыши
Перспективным направлением регенеративной медицины является использование экзосом — мембранных везикул, секретируемых различными клетками и содержащих целый комплекс биологически активных веществ. Терапевтическая эффективность экзосом мезенхималь-ных стволовых клеток показана на моделях различных заболеваний и при ряде патологий. В то же время данные
