CC BY
6
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
195
значимых зонах. Распространённое в клинической практике применение коллагенсодержащих мембран не всегда позволяет восстановить нужный объем десны. Цель работы — разработка новой тканеинженерной конструкции (ТИК) для повышения эффективности восстановления объема мягких тканей десны при дентальной имплантации.
Экстракты коллагенсодержащих мембран Mucoderm (Botiss Biomaterials, Германия) и децеллюляризованного перикарда быка не обладали цитотоксическим действие, не снижали метаболическую (AlamarBlue assay) и пролифе-ративную (PicoGreen asaay) активность мультипотентных мезенхимных стромальных клеток (МСК) десны человека. Дополнительным подтверждением сохранения метаболической активности МСК в присутствии исследуемых образцов послужили результаты теста на высвобождение лактатдеги-дрогеназы. К обоим образцам МСК десны человека успешно адгезировались и формировали монослои живых клеток за 3 и 7 суток на поверхности Mucoderm и Перикарда, соответственно (LiveDead assay). Генно-терапевтический препарат «Неоваскулген» (ФГБУ ГНЦ МЗ РФ), форма плаз-миды, кодирующей эндотелиальный фактор роста сосудов, в максимальной концентрации 1,2мг/мл снижал метаболическую активность МСК десны человека на 60% и снижал уровень пролиферации клеток в два раза относительно контроля в ростовой среде без добавок.
Эффективность восстановления мягких тканей десны сравнивали после проведения аугментации слизистой десны закрытым способом с имплантацией материалов под лоскут кроликам породы Серый великан (n=9), разделенным на 4 группы по имплантированным образцам: 1) перикард, заселенный МСК 2) Mucoderm, заселенный МСК 3) перикард, 4) Mucoderm. Биодеградацию и тканевую реакцию оценивали методом морфометрического анализа. К 10 суткам оба варианта ТИК на основе коллагеновых мембран прошли частичную краевую резорбцию без выраженных признаков тканевой реакции на имплантат, соединительнотканная капсула состояла из незрелой грануляционной ткани с единичными очагами нейтрофилов.
Таким образом, использование коллагеновых материалов в сочетании с МСК и(или) стимулирующим васкуляризацию генно-терапевтическим препаратом может стать альтернативой аутотрансплантации мягких тканей для увеличения толщины десны, что актуально в современной стоматологии при дентальной имплантации. Исследование выполнено за счет средств гранта Российского научного фонда (проект № 18-15-00401).
ВЛИЯНИЕ GDF11 НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПРИ СТАРЕНИИ
А.Ю. Ратушный, Д.К. Матвеева, М.И. Ездакова
ФГБУН ГНЦ РФ Институт медико-биологических проблем РАН, Москва, Россия
e-mail: ratushkin@mail.ru
Ключевые слова: мезенхимальные стромальные клетки (МСК), ASC52telo, GDF11, клеточное старение.
В настоящее время GDF11 активно исследуют в связи с его потенциальными геропротекторными свойствами и возможным применением в терапевтических целях. В нашей модели было изучено его влияние на «молодые» и сенесцентные мезенхимальные стромальные клетки человека, морфофункциональное состояние которых значительно различается.
Эксперименты проводили на иммортализованной стандартной линии МСК - ASC52telo (АТСС® 8030-4000™). Клетки были предоставлены на некоммерческой основе из клеточного депозитария МГУ им. М.В. Ломоносова в рамках проекта «Ноев ковчег». Клеточное старение индуцировали при помощи митомицина С (МмС).
При индукции клеточного старения отмечены характерные морфофункциональные изменения уже через 3 дня. Через 7 и 10 дней увеличение размера становилось более выраженным. Аутофлуоресценция увеличивалась в 7, в 12 и в 15 раз, соответственно, что указывает на накопление липофусцина. Активность лизосомального компар-тмента также увеличивалась в 4-6 раз. Активность мито-хондриального компартмента повышалась не более чем в 1,5 раза. Генерация АФК была увеличена в 1,5-5 раз.
В экспериментах было 4 группы МСК — «молодые» (МмСУЭйП 1-) и сенесцентные (МмС+/ОйИ 1-) клетки без добавления ЭйИ1, а также «молодые» (МмС-/ЭйР11+) и сенесцентные (МмС+/ЭйР1 1 +) клетки с добавлением ЭйШ (10 нг/мл). Анализ проводили через 10 дней.
Оценивали распределение по фазам клеточного цикла (8иЬЭ1 тест) и клоногенную активность. Показано, что воздействие МмС полностью останавливает пролифера-тивную активность. ЭйР11 + культуры не отличались по количеству колоний от ЭйШ- образцов. 8иЬЭ1 тест также не выявил выраженного влияния ЭйП 1 на распределение «молодых» клеток (МмС-) по фазам клеточного цикла.
Жизнеспособность МмС+ клеток была снижена приблизительно на 10% вне зависимости от добавления ЭйП 1. Оценка морфологических показателей Р8С-А и 88С-А выявила увеличение данных показателей при обработке МмС. Добавление ЭйШ приводило к небольшому снижению Р8С-А и 88С-А как МмС-, так и МмС+ клеток. Также через 10 дней экспозиции анализировали активность внутриклеточных компартментов, уровень окислительного стресса и аутофлуоресценцию клеток. Обработка МмС приводила к повышению всех исследованных параметров. Влияние ЭйП 1 было сла-бовыраженным. Тем не менее, отмечен ряд эффектов, обратный эффектам МмС, касающийся, в первую очередь, аутофлуоресценции, активности лизосомального компартмента и окислительных процессов. Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 21-75-10117.
ПРЕДОТВРАЩЕНИЕ ОТДАЛЕННЫХ КОГНИТИВНЫХ НАРУШЕНИЙ У МЫШЕЙ ПОСЛЕ ГАММА-ОБЛУЧЕНИЯ ГОЛОВЫ С ПОМОЩЬЮ ИНТРАНАЗАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ ЭКЗОСОМ НЕЙРАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
М.Г. Ратушняк, А.С. Жирник, А.А. Парфёнова, Ю.П. Семочкина, О.Д. Смирнова
НИЦ Курчатовский институт, Москва, Россия
e-mail: ratushnyak_marya@mail.ru
Ключевые слова: нейральные стволовые клетки, экзосомы, гамма-излучение, головной мозг, облучение головы, когнитивные функции, мыши
Перспективным направлением регенеративной медицины является использование экзосом — мембранных везикул, секретируемых различными клетками и содержащих целый комплекс биологически активных веществ. Терапевтическая эффективность экзосом мезенхималь-ных стволовых клеток показана на моделях различных заболеваний и при ряде патологий. В то же время данные
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
