CC BY
32
КЛ1Н1ЧНА МЕДИЦИНА
© Юреева С.С., Юрченко Н.П., 1щенко В.В, Скрипникова Т.П., Баштан В.П. УДК616.31-006.6:611-018.07.
Р53 ТА KI-67 ЯК Б10МАРКЕРИ 0Б'ЕКТИВ13АЩ1 Г1СТ0Л0Г1ЧН01 Д1АГН0СТИКИ ПЕРЕДПУХЛИННИХ СТАН1В ТА РАКУ СЛИ30В01 П0Р0ЖНИНИ Р0ТА НА Б10ПС1ЙН0МУ МАТЕР1АЛ1
Креева С.С., Юрченко Н.П., 1щенко В.В, Скрипникова Т.П., Баштан В.П. Вщдтення бютехшчних проблем д1агностики 1ПКК НАН УкраТни, м. КиТв, УкраТнська медична стоматолог1чна академ1я, м. Полтава
Исследовалась роль иммуногистохимического определения биомаркеров р53 и Ki-67 при гистологической диагностике предопухолевых состояний и рака слизистой полости рта на биопсийном материале. Материалом исследования были биопсии слизистой полости рта, взятые у 21 пациента, которые по гистологическому диагнозу представлены: плоскоклеточная паппилома (2 набл.), лейкоплакия (2 набл.) дисплазия (3 набл.), интраэпи-телиальный рак (3 набл.), плоскоклетточний рак (12 набл.). Обработку материала проводили согласно традиционной гистологической техники. Иммуногистохимическое определение белка р53 и Ki-67 проводили используя первичные моноклональные антитела (антиген р53, clone DO-7, который содержит антитела как к дикому, так и мутированому типу белка р53; антиген Ki-67, clone MIB-1) и системы визуализации, "Dako Cytoma-tion", Дания. Отрицательный контроль проводили без первичного антитела. Окрашивали белки с помощью хромогена-3-диаминобензидина тетрахлорида (ДАБ). Препараты докрашивали гематоксилином. Результаты иммуногистохимической реакции оценивали, подсчитывая процент положительно окрашеных ядер клеток (510 полей) и средний показатель определяли как индекс мечения (ИМ%). Проведенный анализ уровня клеток с р53 и Ki-67 на биопсийном материале предопухолевых состояний и рака слизистой полости рта показал, что применение иммуногистохимических технологий определения белка гена супрессора опухолевого роста р53 и белка пролиферирующих клеток Ki-67 при гистологической диагностике позволяет дать более объективную индивидуальную оценку процессам, которые происходят в предопухолевых состояниях слизистой полости рта, оценить риск малигнизации, пролиферативний потенциал и спрогнозировать злокачественность опухоли.
Ключевые слова: предопухолевые состояния, плоскоклеточный рак слизистой полости рта, р53, Ki-67, гистологическая диагностика
Рак порожнини рота складае приблизно 3% серед редпухлинних сташв слизовоТ порожнини рота може
уах злоякюних пухлин i е суттевою всесвптою про- бути виявленим не ттьки онкологами, а також отола-
блемою здоров'я [5, 6 12, 14]. Не дивлячись на сутте- ринголагами та стоматологами при оглядi порожнини
вий прогрес у методах лкування, 5-ти рiчне виживан- рота у па^ен^в, що звертаються з хворобами Тх про-
ня не покращилось за деюлька останшх десятил^ь i фтю [1,3,4 7,10,14].
все ще складае приблизно 50-60% [12]. Бтьш шж 80% У тепершнш час мутацп в геш Р53 або втрата цьо-
рагав порожнини рота - плоскоштинна карцинома, яка го гену в хромоо^ 17р найбтьш розповсюджена ге-
розвиваеться iз еттелю слизовоТ через прогреаю вщ нетична аномалiя, яка в^^чаеться у злоякюних пух-
пперплази до дисплазп та карциноми in citu i далi до линах людини еппемального генезу (вщ 40% до
швазивного раку. Суттева частка плоскоштинноТ кар- 60%). I найбтьший вщсоток припадае на рак слизовоТ
циноми розвиваеться з передзлоякюних ушкоджень. порожнини рота (60-80%) [19, 20]. У клп"ин головна
Не дивлячись на доступнють порожнини рота для кль функ^я продукту гену супресору пухлинного росту
шчного обстеження, великий вщсоток пухлин дiагнос- бтку р53 полягае у регуляци нормальноТ пролiфера-
туються не на рiвнi передпухлинних сташв, а на цп, активаци та транскрипцп гешв, що задiянi у репа-
останшх стадiяx хвороби. Ранне виявлення раку сли- раци ДНК при ТТ пошкодженнi, та регyляцiТ апоптозу.
зовоТ порожнини рота мае критичне значення для ль Мутацп в геш Р53 та надекспреая протеiнy р53 вва-
кування, тому що строки виживання пом^но покра- жаеться початковою подiею у розвитку карцином у
щуються, якщо патологiя у слизовм порожнини рота порожнинi рота та аеродегестивного шляху i е показ-
виявляеться на раншй стади та квалiфiковано дiагно- ником прогресiТ патолопчного фенотипу, що мае вже
стуеться [1, 6 ,8. 9, 12 ].Слщ в^^тити, що передпух- генетичш змiни в клiтинаx [13, 17, 19, 20]. Бток Ki-67
линш стани та рак на раншй стади у слизовiй протiка- належить до бтюв регyляторiв клiтинного циклу.
ють переважно безсимптомно. Суттевий вщсоток пе- Швидкють росту пухлинних кгмтин е ключовою харак-
Том J1T4. № 3-4 2010 р.
теристикою, що обумовлюе агресивнють пухлини. Ви-значення рiвня експресп бтку Ki-67 дозволяе об'екти-вно оцшити пролiферативну активнiсть пухлин етте-лiального генезу [17, 18]. Для того, щоб попередити переродження передпухлинних сташв у слизовiй по-рожнини рота, потрiбнi багаторазовi адрeснi методи скриншгу серед груп ризику (тютюнопалiння у поед-наннi зi зловживанням алкоголю, професмш тривалi контакти з мутагенами та канцерогенами) для вияв-лення передпухлинних сташв та об'ективiзацií мет^фв дiагностики з використанням сучасних технолопй ви-значення бiомаркeрiв, що передують розвитку раку [1,5,7,8,9].
Мета роботи: дослщити та оцiнити рiвeнь кштин з р53 та Ki-67 при передпухлинних станах та у раку слизово'1' порожнини рота для об'ективiзацií пстолопч-ноí дiагностики на бюпсмному матeрiалi.
Матерiали та методи дослщження
Матeрiалом дослiджeння були бiопсií слизово' порожнини рота, взятi у 21 па^етчв, якi за кшшчним дiа-гнозом мали патологiчнi змЫи у слизовiй, передпух-линнi стани та новоутворення, що потребували псто-логiчноí вeрифiкацií. Методи дослiджeння: пстолопчш та iмуногiстохiмiчнi тeхнологií виявлення ядерного бь лку гену супресора пухлинного росту р53 та ядерного бтку Ki-67, що експресуеться у пролiфeруючих клiти-нах.
Отриманий матeрiал фiксували у 10 % нейтральному формалУ. Обробку матeрiалу проводили згiдно традицмно! гiстологiчноí тeхнiки. З кожного спостере-ження готували дeкiлька прeпаратiв. Препарати фар-бували гeматоксiлин-eозином для пстолопчно! дiагно-стики, решта прeпаратiв використовували для iмуно-гiстохiмiчних тeхнологiй. Змши у слизовiй оцiнювались згiдно критерпв мiжнародноí гiстологiчноí класифiкацií (UICC) [16].
lмуногiстохiмiчнe виявлення окремо бiлкiв р53 та Ki-67, проводили використовуючи первинш монокло-нальнi антитiла (антиген р53, clone DO-7, що мiстить антитта до дикого та мутованого бтку р53; антиген Ki-67, clone MIB-1) та системи вiзуалiзацií, "Dako Cy-tomation", Данiя. Негативний контроль проводили без первинного антитта. Забарвлення бтгав здмснювали за допомогою хромогeну-3-дiамiнобeнзидину тетрах-лориду (ДАБ). Препарати дофарбовували гематокси-лiном. Результати iмуногiстохiмiчноí рeакцií оцшюва-ли шляхом пiдрахунку кiлькостi позитивно забарвле-них ядер клiтин. Рiвeнь мiчeних клiтин р53 та Ki-67 ви-значали у вiдсотках - пщраховували вiдсоток клiтин з маркером у 5-10-ти полях по 100 штин, визначали середшй вiдсоток i його показник оцiнювали як Ыдекс мiчeння (1М %).
Результати та ix обговорення
Розподiл дослiджeних бюпсм за гiстологiчним дiа-гнозом та рiвнeм р53 та Ki-67 представлено у таблиц 1. За пстолопчним дiагнозом дослiджeнi бiопсií роз-подтились: плоскоклiтинна папiлома (2 спост.), лей-коплакiя (2 спост.), дисплазiя (3 спост.), Ытраеппепа-льний рак, (Ca in citu) (3 спост.), плоскоштинний рак (12 cnocт.).
Проведений аналiз клiтин з eкспрeсiею р53 та Ki-67 виявив шдивщуальш особливост як у рiвнях експресп дослiджeних бiомаркeрiв, так i 1х розподiлу у дослiджeних спостереженнях. Так, серед пстолопчно
визначеного паптоматозу (плоскоштинна папiлома) у слизовiй вiдмiчена рiзниця у експресií р53 та Ю-67. Одне спостереження було з ознаками незначно! дис-плазií епiтелiю (низька), де кгмтин зр53 не було вияв-лено, лише мали мюце поодинокi клiтини з Кi-67 у окремих полях пперплазованого папiломатозного епь телiю. У другому спостереженнi в^^чеш паптомато-знi розростання клiтин багатошарового плоского епь телiю з ознаками дисплазп та експресieю р53 у шти-нах у зонi пролiферуючих клiтин, у клiтинах супраба-зального шару, безпосередньо за парабазальним шаром штин епiтелiю. У окремих дтянках паптоматоз-них виростiв виявлено поодинок клiтини з р53 у база-льному та парабазальному шарi та у штинах поверх-невих супрабазальних шарiв та клiтини з експреаею Кi-67 у полях клiтин з ознаками дисплазп. 1М клiтин з р53 та Кi-67 склав 29,6% з коливаннями у окремих полях вщ 19% до 42% та 17,2% з коливаннями 10%-24%, вщповщно. Слщ вiдмiтити, що дисплазiя у цьому спостереженнi морфолопчно була невисокого рiвня, суб'ективно на рiвнi середньо', але визначення сутте-вого рiвня клiтин з р53 i особливо у клiтинах поверх-невих супрабазальних шарiв та пролiферуючих клiтин з Кi-67 дало пщстави визначитись на користь мал^нь зацп.
Це спостереження демонструе як визначення до-слiджених бiомаркерiв та 'х топографiя дозволяють гiстологу позбутись суб'ективних оцiнок при постанов-цi дiагнозу та об'ективiзувати iндивiдуальну дiагности-
ку.
Серед дослщжених лейкоплакiй у одному спосте-реженнi не виявлено штин нi з р53, нi з Кь67, що свь дчить про вщносно спокiйний стан епiтелiю у бюпсш-ному матерiалi цiеí лейкоплаки. У другому спостере-женнi була дiагностована лейкоплакiя з ознаками дисплазп та пролiферацií клiтин базального шару та суттевим рiвнем клiтин з р53 (1М 24,6%, коливання 12%-33% ) та Кi-67(IМ 14,5%, коливання 6%-21%, вщ-повiдно), що може свщчити про порушення у ген суп-ресорi пухлинного росту Р53 та його бiлку р53, що призводять до порушень у регуляци нормально' про-лiферацií, репарацií ДНК та апоптозу [19,20 ]. Про це свщчить i вiдмiчена пролiферацiя клiтин базального шару епiтелiю та визначений рiвень пролiферуючих клiтин у цм лейкоплаки.
У лiтературi накопичеш ретроспективнi данi, про малiгнiзацiю таких лейкоплаш та розвиток раку з них через певний термЫ часу I тага лейкоплакп потребу-ють монiторингу пiсля проведеного лiкування [1,9,15,16].
Серед дiагностованих дисплазiй епiтелiю слизово! у одному спостереженнi з незначною дисплазiею кль тин багатошарового плоского еттелю (дисплазiя вiд низкоí до середньо|) клiтин з р53 та Кь67 не було виявлено. У другому спостереженш багатошарового плоского еттелю з полями дисплазп (низька) виявлено поодинок клiтини з р53 з дуже слабкою iмуноексп-ресiею (1М 1%, коливання 1-2%) i з поодинокими кль тинами з експреаею Кi-67 (1М 0,4%, коливання 0-2%). Для третього спостереження, де було цитоморфоло-пчно виявлено багатошаровий плоский епiтелiй з ознаками дисплазп (середня), у великому сегмент п-стологiчного зрiзу при iмуногiстохiмiчному дослщженш визначено високий рiвень клiтин з р53 та Кi-67 (р53, 1М 44,9%, коливання 35-55%; Кi-67, 1М 27,5%, коли-
вання 20-34%, вщповщно). Характерним для цього мм клони клiтин з iнтенсивною експреаею р53 у супра-спостереження були розммщеш, не зливаючись один з базальних шарах еттелю. одним, розрiзненi групи клiтин, що виглядали як окре-
Таблиця 1
Розподл до^джених бопай за паmгiсmологiчним дiагнозом та рвнем штин з р53 та Ю-67
№ п/п № бюпсп КпУчний д1агноз Патпстолопчний д1агноз р53 (1М %) коливання Ю67 (1М %) коливання
1 2 3 4 5 6
1 49895/08 Бластома л1во' гайморово' пазухи Пап1ломатоз 0,0 0,2 0-2
2 49891-2/08 Пухлина л1во' гайморово' пазухи (В1) Паптоматоз з мал1гн1зац1ею (дисплаз1я середня) 29,6 19-42 17,2 10-24
3 13743/04 Лейкоплак1я боково' поверхж язика Лейкоплаш 0,0 0,0
4 24134 Пперкератоз червоно' кайми нижньо' губи Лейкоплак1я (дисплаз1я висока) 24,6 12-33 14,6 6-21
5 29118-20 Вщокремлений пперкератоз червоно' кайми нижньо' губи Дисплаз1я еп1тел1ю (низька) 0,0 0,0
6 4814/04 Рак слизово' твердого пщнебн ня Дисплаз1я еп1тел1ю (висока) 44,9 35-55 27,5 20-24
7. 37437/08 Рак слизово' дна порожнини рота Дисплаз1я еп1тел1ю (низька) 1,0 1-2 (слабка експреая у по-одиноких шти-нах) 0,4 0-2
8. 5697/04 Пщозра на рак губи Дисплаз1я еп1тел1ю (висока), Ытраеппелальний рак 8,0 2-6 8,4 5-12
9. 48891-2/08 П1дозра на рак слизово' оболо-нки дна порожнини рота Дисплаз1я еп1тел1ю (висока), Ытраеппелальний рак 34,9 10-60 1,5 1-2
10. 20539/04 Пщозра на рак губи Дисплаз1я еп1тел1ю (висока), Ытраеппелальний рак 69,2 62-77 9,6 7-12
11. 44888/08 Дтянка слизово' дна порожнини рота з пюляпроменевим руб-цем Залишки плоско-кл1тинного раку з проникненням пухлинних штин у гранулоцитарну тканину 3,1 1-6 1,7 1-7
12 35951/05 Рак слизово' м'якого пщнебшня Плоскоштинний рак 1,0 0-3 1,0 1-2
13 49839/08 П1дозра на рак губи Плоскоштинний рак 3,75 0-15 8,1 3-26
14 4812/04 Рак слизово' твердого пщнебн ня Плоскокпiтинний рак 15,5 6-32 0,4 0-2
15 30059/04 Рак слизово' дна порожнини рота Плоскоштинний рак 27,6 13-59 7,8 5-14
16 30058/04 Рак слизово' дна порожнини рота Плоскоштинний рак 39,3 28-47 16,3 0-48
17 49893/08 Кусок пухлини л1во' гайморово' пазухи Плоскоштинний рак 34,5 16-45 16,4 4-26
18 4603/04 Пщозра на рак губи Плоскоштинний рак 30,4 21-45 4,2 0-9
19 49894/08 Кусок пухлини л1во' гайморово' пазухи Плоскоштинний рак 18,1 2-38 10,8 6-23
20 4602/03 Пщозра на рак губи (В1) Плоскоштинний рак 23,4 10-43 22,3 10-43
21 29120/04 Обмежений гиперкератоз чер-воно' облям1вки нижньо' губи Плоскоштинний рак 15,3 9-22 13,2 7-22
22 19406/0 4 П1дозра на рак губи Плоскоштинний рак з орого-вЫням 0,0 0,0
Згщно даних лтератури, виявлена супрабазальна iмуноекспресiя р53 строго асо^юеться зi ступенем прояву дисплазп i ризиком малiгнiзацií таких диспла-зiй [2, 17].
Iнтраепiтелiальний рак (3 спост.) було дiагносто-вано також iз залученням до пстолопчно''' характеристики рiвня штин з р5З та Кi-67 у цих спостереженнях.
Для двох спостережень характерним був високий рiвень дисплазп та показнигав дослiджених бюмарке-рiв (р53, 1М 69,2% , коливання 62%-77% та 1М 29,6%, коливання 19-42%; Кь67, 1М 9,6%, коливання 7-12% i 1М 17,2%, коливання 10-24%, вщповщному цих двох спостереженнях у дтянках багатошарового плоского еттел^ з ознаками високо'' дисплазп кгмтини з р53 та
Кi-67 переважали у поверхневих супрабазальних шарах еттелю. У одному спостереженн у багатошаро-вому плоскому епiтелiю за цитоморфолопчними знаками вiдмiчена висока дисплазiя, але з незначним рь внем клiтин з р53 та Ю-67 (р53, 1М 8,0%, коливання 26%, Кi-67, 1М 8,4%, коливання 5-12%, вщповщно). Але визначена експреая цих бтюв у ядрах кштин поверхневих супрабазальних шарiв епiтелiю та суттевий по-казник пролiферуючих клiтин також на рiвнi поверхневих супрабазальних шарiв, де у нормi пролiферуючi клiтини майже вщсутш, (у окремих полях 'х рiвень доходив до 12% ) дозволив у дослщженому бюпсшному матерiалi поставити дiагноз не дисплазiя, а Ытраепь телiальний рак. Це спостереження чпжо демонструе
Том JJ4. № 3-4 2010 р.
як за допомогою ÎMyHoricToxiMÎ4Horo дослщження бю-MapKepiB р53 та Ki-67 на бюпсмному атерiалi можна об'ект^зувати патгiстологiчнy дiагностикy змiн у сли-зовiй порожнини рота.
Як свщчать дослiдження, за допомогою гютолопч-ного аналiзy потенцiйнy загрозу раку при передпухлинних станах слизовоТ можна визначити, але пода-льшу бюлопчну поведiнкy ïx передбачити не можли-во. Проте визначення експресп' дослщжених бюмар-керiв р53 та Ki-67 дозволяе об'ективно пiдiйти до шди-вiдyальноï оцiнки рiвня дисплазп' цього передпухлин-ного стану та подальшоТ тактики лiкyвання [7, 19, 20].
Серед бюпай (12 спост.), де цитоморфолопчно було дiагностовано плоскоклiтинний рак слизовоТ порожнини рота, також виявлеш iндивiдyальнi особли-востi як у рiвнi експресп' дослiджениx бiомаркерiв, так i ïx розподiлy у дослщжених пухлинах, що дозволяе н дивiдyально оцiнити Ух злоякiснiсть та пролiфератив-ний потенцiал [17,18,19]. Так, у одному спостережен-нi, де було дiагностовано рак з ороговЫням, клiтин з р53 та Ki-67 не було виявлено. 1снують спостереження плоскокштинного раку, коли бток р53 мутованого гену iмyногiстоxiмiчно не виявляеться у пухлинних кль тинах, але це не виключае мутацш у генi Р53.
У двох спостереженнях раку визначено низький рь вень кштин з дослiдженими бюмаркерами, що у одному випадку було пов'язано з тим, що у гютолопчний зрiз для iмyногiстоxiмiï не потрапила суттева частина зрiзy з пухлинною тканиною (р53, 1М 1%, коливання 03%, Ki-67, IM 1%, коливання 1-2%, вщповщно) i друге спостереження з ÏM р53- 3,75%, але з коливаннями iвня р53 у дослiджениx полях пухлинних штин вiд 0 до 15% та суттевим рiвнем штин з Ki-67 (IM, 1%, ко-ливання 3-26%).
У одному спостереженш з дiагнозом плоскокштин-ний рак слизовоТ порожнини рота пюля опромiнення (бiопсiя тканини рубця пюля опромшення) серед гра-нyляцiйноï тканини виявлено поля епiтелiальниx кль тин з ознаками променевого патоморфозу та поля штин з ознаками дисплазп (висока), а iмyногiстоxiмi-чно визначено штини з р53 (IM 3,1%, коливання 1 -6% ) та Ki-67 (IM 1,7%, коливання 1% -7%). Збережен-ня пухлинних штин з р53, для яких властива бтьша злоякюнють, та пролiферyючиx клiтин серед них свщчить про можливють рецидиву пухлини у зон сфор-мованого рубця пюля опромЫення. Це спостереження демонструе можливють при iмyногiстоxiмiчномy дослщженш рiвня клiтин з р53 та Ki-67 бiльш об'ективно оцЫити стан слизовоТ пiсля проведеного лкування. В iншиx спостереженнях плоскоклiтинного раку (9 спост.) IM кштин з р53 коливався у межах вщ 15,3% до 39,3%, а IM кштин з Ki-67 у межах вщ 0,4% до 22,3%, вщповщно.
Високий рiвень експресiï молекулярних бюмарке-рiв р53 та Ki-67 у плоскокштинному раку порожнини рота свщчить про високий злоякюний потен^ал цих пухлин. Рiвень пухлинних кштин з р53 е визначальним Ыдивщуальним бiомаркером оцiнки злоякiсностi плос-коштинного раку порожнини рота [18,19].
Таким чином, проведений аналiз рiвня кштин з р53 та Ki-67 на бюпсмному матерiалi передпухлинних станiв та раку слизовоТ порожнини рота свщчить, що застосування iмyногiстоxiмiчниx теxнологiй визначення бтку гену супресору пухлинного росту р53 та бтку пролiферyючиx штин Ki-67 при гiстологiчнiй дiагнос-
TMqi дозволяе дати бiльш об'ективну iндивiдуальну оцiнку процесам, що вщбуваються у передпухлинних станах слизовоТ порожнини рота, оцЫити ризик мал^-шзацп, пролiферативний потенцiал та прогнозувати злоякюнють пухлини.
Лтратура
1. Driemelo Kunkel Н., Hullman Bornstein MM., Luond-Valesheviciute I., Altermatt HJ., Stauffer E., Buser D Oral mucosal lesions diagnosed in a stomatology service. An ex-amication of clinico- pathological findings from the years 2003//Schwez Monataschr zanmed.-2006.-№11 (5).-P.468-475.
2. Cruz IB, Napier S S, van der Waal I, Snijders P J F , Wal-boomers J M M , Lamey J , Cowan С G, Gregg T A, MaKwell C, Meijer CJ . Suprabasal p53 mmunoexpression is strongly associated with high grade dysplasia and risk for alignant transformation in potentially malignant oral lesions from Northern Ireland //J of Clinical Pathology.-2002.-Vol.55.-P.98-104.
3. Epstein J., Gorsky M., Cabay R.,Gonsalves W Screening for diagnosis of oral remalignant lesions and oropharyngeal squamous cell carcinoma// Can Fam hisician.-2008.-Vol.54(6).-P.870-875.
4. Epstein JB, Gorsky M, Lonky S, Silverman S, Jr, Epstein JD, Bride МУ The fficacy of oral lumenoscopy (ViziLite) in visualizing oral mucosal lesions//Spec are Dentist.-2006.-Vol.26(4).-P.171-174.
5. Kademani D Oral cancer. //Mayo Clin Proc.-2007.-Vol.82(7).-P.878-887.
6. Nagao Т., Ikeda N., Fucano H.,Miyazaki H.,Yano M., War-nakulasuriya S Outcome following a population screening programme for oral cancer and precancer in Japan//Oral Oncol.-2000.-Vol.36(40).-P.340-346.
7. Napier SS, Speight PM Natural history of potentially malignant oral lesions and conditions: an overview of the litera-ture//J Oral Pathol Med.-2008.-Vol.37(l).-P.1-10.
8. Neville BW, Day ТА Oral cancer and precancerous le-sions//Ca Cancer J Clin.-2002.-Vol.52(4).-P.195-215.
9. Patton LL The effectiveness of community-based visual screening and utility of adjunctive diagnostic aids in the early detection of oral cancer// Oral Oncol.-2003.-Vol. 39(7).-P.708-723.
10. Pinborg JJ, Reichart PA, Smith CJ, Van der Waal I //World Health Organization international Histological Classification of Tumours Histological typing of cancer and precancer of the oral mucosa.-Berlin: Springer, 1997.
11. Ries LAG, Melbert D, Krapcho M, Stinchcomb DG, Howlader N, Horner MJ, Mariotto A, Miller BA, Feuer EJ, Altekruse SF, Lewis DR, Clegg L, Eisner MP, Reichman M, Edwards BK (eds). SEER // Cancer Statistics Review, 1975-2005, National Cancer Institute. Bethesda, MD, http://seer.cancer.gOv/csr/l9752005/, based on November
2007 SEER data submission, posted to the SEER web site,
2008 [database online]. 2008 Updated 2008.
12. Shin D., Rim J., Ro JY. et al. Activation of p53 gene expression in premalignant lesions during head and neek tumori-genesis // Cancer Res. 1994; 54: 321-326.
13. Silverman S Jr // Demographics and occurrence of oral and pharyngeal cancers. The outcomes, the trends, the challenge. J Am Dent Assoc. 2001; 132 Suppl: 7S-11S..
14. Silverman S, Jr, Gorsky M, Lozada VII Oral leukoplakia and malignant transformation. A follow-up study of 257 patients. Cancer. 1984; 53(3): 563-568.
15. McDowel J.D. An overview of epidemiology and common risk factors for oral squamous cell carcinoma//Otolaryngol Clin North Am.-2006.-Vol.39(2).-P.277-294.
16. 16.Schepman KP, van der Meij EH, Smeele LE, van der Waal I. Malignant transformation of oral leukoplakia: a follow-up study of a hospital-based population of 166 patients with oral leukoplakia from The Netherlands//Oral Oncol.-1998.-Vol.34(4).-P.270-275
17. Takeda Т., Sugihara K., Hirayama Y., Hirano M., Tanuta J-I., Semba I. Immunohistological evaluation of Ki 67, рбЗ, СК19 andp53 expression in oral epithelial dysplasias //J of Oral Pathology and Medicine-2006.-Vol.35(6).-P.369-375.
18. Tumuluri V., Thomas GA., Fraser IS// Analysis of the Ki-67 antigen at the invasive tumor front of human oral squamous
npoSAeMH eKOAorii Ta MeanuHHH
cell carcinoma//J Oral Pathol Med.-2000.-Vol.31(10).-P.598-604.
19. Van Houten V.M.M., Tabor M. P., van den Brekel M.W.M., Kummer J.A., Denkers F., Dijkstra J., Leemans C.R., van der Waal I., Snow G.B., Brakenhoff R.H. Mutated P53 as molecular marker for the diagnosis of head and neck cancer // J. Pathol.-2002.-Vol.198.-P.476-486
20. Voravud N., Chin DM., Ro JY., Lee JS.., Hong W., Hittelman WN. Increased polisomies of chromosomes 7 and 17 during
head and neck multistage tumorigenesis // Cancer Res.-1993.-P.53(12).-P.2874-2883.
21. Warnakulasuriya S, Johnson NW, van der Waal I//Nomenclature and classification of potentially malignant disorders of the oral mucosa//J Oral Pathol Med.-2007.-Vol.36(10)P.575-580.
22. Zakrzewska JM, Martin IC// Oral cancer screening//Br Dent J.-2000.-Vol.189(3).-P.124 - 125.
Summary
P53 AND KI-67 AS BIOMARKERS FOR HISTOLOGICAL DIAGNOSTICS OBJECTIFICATION OF PRECANCER AND
ORAL MUCOSA CANCER BASED ON BIOPSY MATERIALS.
Kirieieva S.S., Yurchenko N.P., Ishchenko V.V., Skrypnykova T.P., Bashtan V.P.
Key works: precancer, oral cancer, p53, Ki-67, histological diagnosis.
The article examines the role of immunohistochemical identification of p53 and Ki-67 biomarkers in histological diagnostics of precancer and oral cancer based on the biopsy materials. The materials were the biopsy specimens of oral mucosa obtained from 21 patients with precancerous lesions and oral mucosa cancer: squamous cell papilloma (2 observations), leukoplakia (2 observations), dysplasia (3 observations), intraepithelial cancer (3 observations), oral squamous cell carcinoma (OSCC) (12 observations). The material was processed in accordance with the traditional histological technique. The immunohistochemical identification of p53 and Ki-67 protein was performed using the monoclonal antibodies: antigen p53 (clone DO-7), antigen Ki-67 (clone MIB-1), and Daco Cytomation imaging system (Denmark). The negative control was performed wighout the primary antibody. The proteins were stained with chromogen - 3-diaminobenzidine tetrachloride, and counterstained with hematoxylin. The results of immunohistochemical reaction were assessed by counting the rate of positively stained nuclei (5-10 fields), the average rate was assessed as the labeling index (LI%).
The performed analysis suggests that the use of immunohistochemical technologies of identification of the tumor growth suppressor gene protein p53 and proliferating cells protein Ki-67 provides the opportunity to give more objective individual estimation of the oral mucosa precancer processes, to assess the risk for malignant transformation; proliferative capacity, as well as to prognosticate tumors. Ministry of Public Health of Ukraine
Department IPKK diagnosis biotechnical problems of NAS of Ukraine, Kyiv
Higher State Educational Establishment of Ukraine "Ukrainian Medical Stomatological Academy", Poltava
Mamepian Hadiumoe do pedaKuil 03.09.2010p.
