CC BY
9
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
51
с везикулами естественного происхождения (ЕВ) (без добавления цитохалазина В). ЕВ получали с помощью ультрацентрифугирования.
Для определения морфологии и размеров иМВ и ЕВ, выделенных из МСК и SNB-19 использовалась сканирующая электронная микроскопии, которая показала, что везикулы имеют округлую морфологию и размер иМВ МСК в среднем составляет 150 нм, а иМВ SNB-19 около 248 нм. Размер ЕВ, выделенных с помощью ультрацентрифугирования в среднем, составляет 148 нм для ЕВ МСК и 233 нм для ЕВ SNB-19. Полученные данные демонстрируют, что иМВ и ЕВ не отличаются размерами друг от друга. Было показано, что иМВ, как и ЕВ могут взаимодействовать с опухолевыми клетками MCF7 в монослойной культуре. Добавление иМВ МСК к данным сфероидам в концентрациях 5 мкг, 10 мкг, 20 мкг увеличивало их количество. Окрашивание сфероидов Annexin V показало, что концентрация 20 мкг иМВ МСК снижала жизнеспособность опухолевых клеток в сфероидах. Добавление иМВ SNB-19 к опухолевым сфероидам MCF7 также увеличивало их количество, однако, концентрация 20 мкг иМВ SNB-19 увеличивала жизнеспособность опухолевых клеток в сфероиде по сравнению с иМВ МСК. Добавление иМВ МСК влияло на экспрессию генов OCT4 и NANOG в сфероидах. При добавлении иМВ SNB-19 увеличивается экспрессия генов OCT4 и SOX2. Также статистически достоверная разница в экспрессии гена SLUG по сравнению с контролем наблюдалась при добавлении иМВ SNB-19.
Таким образом, был проведен сравнительный анализ влияния иМВ МСК и иМВ SNB-19 на формирование и качество сфероидов. Работа выполнена при поддержке Программы стратегического академического лидерства Казанского (Приволжского) федерального университета (ПРИ0РИТЕТ-2030), за счет средств Российского научного фонда (грант № 21-74-10021).
ПРИМЕНЕНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ ПЛАЗМЫ, ОБОГАЩЕННОЙ ТРОМБОЦИТАМИ, У ПАЦИЕНТОВ ХИРУРГИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ
И.В. Гилевич1, 2, Е.А. Коломийцева1, Э.Н. Шубров1, 2, С.Н. Лепетунов1, Г.А. Забунян1, Р.В. Чучварев1
1 ГБУЗ НИИ Краевая клиническая больница № 1 им. профессора С.В. Очаповского МЗ КК, Краснодар, Россия
2 ФГБОУ ВО Кубанский государственный медицинский университет Минздрава России, Краснодар, Россия
e-mail: giliv@list.ru
Ключевые слова: плазма, обогащенная тромбоцитами, лизат тромбоцитов, тромбогель, клиническое применение, хирургия
Плазма, обогащенная тромбоцитами (ОбТП) — фракция, выделенная из периферической крови, содержание тромбоцитов в которой превышает физиологический уровень. Считается, что концентрация тромбоцитов в ОбТП должна составлять не менее 1000000/мкл, больше или меньше не будет оказывать регенеративный эффект. По мнению Marx R.E. ОбТП может называться только тот продукт, в котором в небольшом количестве плазмы содержится увеличенное количество тромбоцитов. Перед введением тромбоциты дополнительно активируются (Ca2+, тромбин, температурный режим).
В нашем исследовании одной из задач стояло получение конечного продукта объемом 20-30 мл, соблюдая
необходимые требования. При этом важно было определить наиболее подходящий способ активации, что, прежде всего, было обусловлено точкой приложения, особенностями хирургического вмешательства. Разработанный нами протокол выделения ОбТП и ее активации обеспечивал следующие характеристики конечного продукта: объем конечного продукта составлял 20-50 мл, стерильный. Клеточный состав готового продукта: содержание тромбоцитов составляло, в среднем, 1098 ± 58,68х 109/л, по сравнению с исходным уровнем - 312,3 ± 16,62х109/л, p<0,0001, при этом отсутствовало содержание лейкоцитов и эритроцитов. Для получения ОбТП был отработан протокол двойного центрифугирования: сначала на мягком режиме, чтобы получить наибольшую концентрацию тромбоцитов в плазме, далее жесткий режим, для уменьшения объема ОбТП. С целью активации был использован режим глубокой заморозки при -80С, с последующим размораживанием и хранением при -20С. Другой способ был основан на введении CaCl2 для активации аутологичного тромбина и далее смешивание тромбина с ОбТП для получения тромбогеля.
За период с 2017г. по 2021г. всего в исследовании приняло участие 166 человек с разной нозологией. В зависимости от заболевания пациенты были разделены на группы: стриктура уретры - 29 человек, интерстици-альный цистит — 36 человек, трофическая язва — 46 чел, хронический остеомиелит нижних конечностей - 8 чел., 47 пациентов с дефектами лицевого скелета. Для заполнения костных полостей был использован тромбогель. Для лечения трофических язв тромбогель и лизат тромбоцитов, в урологии применяли лизат тромбоцитов, курсами. При анализе полученных данных побочные эффекты выявлены не были, у пациентов с интерстициальным циститом и трофическими язвами наблюдалась длительная ремиссия. При применении производных плазмы, обогащенной тромбоцитами, во время оперативных вмешательств сокращался восстановительный послеоперационный период, не было отмечено развития гнойных осложнений.
Таким образом, продукты из плазмы, обогащенной тромбоцитами, могут служить дополнительным способом стимуляции восстановления ткани и лечения тяжелых рецидивирующих заболеваний с нарушением процессов регенерации.
ВЫБОР ОПТИМАЛЬНЫХ УСЛОВИЙ
СОХРАНЕНИЯ СУСПЕНЗИИ КЛЕТОК,
ПРЕДНАЗНАЧЕННОЙ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
И.В. Гилевич1, 2, Е.А. Коломийцева1, В.Р. Потапова2
1 ГБУЗ НИИ Краевая клиническая больница
№ 1 им. профессора С.В. Очаповского МЗ КК, Краснодар, Россия
2 ФГБОУ ВО Кубанский государственный медицинский университет Минздрава России, Краснодар, Россия
e-mail: giliv@list.ru
Ключевые слова: дермальные фибробласты,
культивирование
В нашей работе мы анализировали влияние температурного режима и длительности хранения на функциональную активность клеток, подготовленных для использования (для экспериментального или клинического применения).
Для исследования были использованы дермальные фибробласты четвертого пассажа, культивированные при стандартных условиях в полной питательной среде,
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
