CC BY
6
дисперсионный анализ, post-hoc по критерию Ньюмена-Кейлса. Статистически значимыми считали различия при p<0,05.
Клеточная линия С2С12 (мышиные миосаттелио-циты) является классическим примером миобластов, демонстрирующих миогенез мышечной ткани. На питательной среде с 10%-бычьей сывороткой происходит пролиферация клеток, при замене на среду с 2%-лоша-диной сывороткой, в уже образовавшемся монослое запускается процесс дифференцировки. Добавление сукцината усиливало процесс дифференцировки миоба-стов клеточной линии С2С12 — клетки сливались в ми-отубы. Уровень миозина на 7 день эксперимента, при использовании дифференцировочной среды и среды с сукцинатом увеличивался относительно показателей клеток до дифференцировки на 35,6% (р=0,004) и 60% (р=0,005) соответственно. При использовании сукцина-та отмечалось увеличение содержания а-актина на 50% (р=0,04) по сравнению с клетками до дифференцировки и на 25% (р=0,05) по сравнению с клетками на 7 день дифференцировки.
В ходе данного исследования было установлено, что сукцинат в концентрации 10 мкМ способствует диффе-ренцировке клеток С2С12.
Литература:
1. Mills E., O'Neill L.A.J. Trends in Cell Biology. J. 2014. V. 24.
P. 328.
2. Yaffe D., Saxel O. Nature. 1977. N. 270. P. 727.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ И МЕДИЦИНСКОЕ
ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ РАСТВОРИМЫХ
ФАКТОРОВ ТРОМБОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА
М.П. Потапнёв1, С.И. Кривенко2, В.Г. Богдан3,
Ф.Н. Карпенко1, А.Б. Михновская1, В.И. Асаевич1
1 Республиканский научно-практический центр трансфузиологии и медицинских биотехнологий, Минск, Республика Беларусь
2 Минский научно-практический центр хирургии, трансплантологии и гематологии, Минск, Республика Беларусь
3 Национальная академия наук Беларуси, Минск, Республика Беларусь
e-mail: mpotapnev@yandex.by
Ключевые слова: препараты растворимых факторов тромбоцитов, медицинское применение.
Препараты растворимых факторов тромбоцитов (РФТ) человека за последние двадцать лет вызывают все возрастающий интерес для медицинского применения с целью регенерации поврежденных тканей человека [1, 2]. Получаемые из крови пациентов или здоровых лиц, жидкие или гелеобразные препараты РФТ начали широко использовать как для клеточной терапии (на этапах наращивания мезенхимальных стромальных клеток или их локального введения), так и самостоятельно [3]. Нами отработаны технологии получения и стандартизации этих препаратов как изделий медицинского назначения (ИМН) из концентрата тромбоцитов, полученного из периферической крови пациентов или здоровых лиц — доноров крови [4]. Основное требование к крови — отсутствие признаков воспаления (лейкоцитоз, ней-трофилез), трансфузионно-трансмиссивных инфекций, концентрация тромбоцитов для приготовления ИМН — 1,0-1,5х1012/л, микробиологическая безопасность.
Приготовленные в РНПЦ трансфузиологии и мед. биотехнологий ИМН на основе РФТ хранятся в замороженном состоянии при температуре минус 30-35оС без потери биологической активности (в тесте пролиферации МСК человека in vitro) в течение 2 лет.
Наш опыт местного клинического применение препаратов РФТ показал их эффективность при (особенно инфицированных) язвах кожи, заболеваниях опорно-двигательного аппарата, хронической ишемии нижних конечностей, кератоконъюнктивите. Возможно инъенк-ционное или аппликационное (в том числе вместе с тромбином) введение ИМН пациентам. Наблюдаемое клиническое улучшение у большинства пациентов не зависело от длительности заболевания и проявлялось эффектом обезболивания, ускоренного ангиогенеза, снижения местного воспалительного процесса, повышения работоспособности и качества жизни. В части случаев наблюдали полный возврат к исходному состоянию здоровья больных. Мы не наблюдали осложнений применения препаратов РФТ, хотя в нескольких случаях были краткосрочные реакции на введение, проходившие без врачебного вмешательства. У большей части больных использовали аутологичные препараты РФТ, при наличии противопоказаний и ограничений (возраст более 65 лет, сахарный диабет, тяжесть заболевания) применяли аллогенный препарат РФТ, получаемый от здоровых доноров крови.
Сделано заключение о широкой перспективе использования препаратов РФТ в медицинской практике.
Литература:
1. Andia I., Abate M. Regen. Med. 2013; 8(5): 645-658.
2. Потапнев М.П., Арабей A.A., Кондратенко Г.Г. и др. Здравоохранение, 2014; 9: 32-40.
3. Aprili G., Gandini G., Guaschino R. et al. Blood Transfusion. 2013; 11(4): 611-622.
4. Потапнев М.П., Кривенко С.И., Богдан В.Г. и др. Здравоохранение, 2018; 10: 38-44.
СИСТЕМНОЕ VS ЛОКАЛЬНОЕ ВВЕДЕНИЕ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ДЛЯ ТЕРАПИИ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЧЕЛОВЕКА
М.П. Потапнев1, С.М. Космачева1, Л.А. Репина1, А.Г. Ионова1, Н.В. Гончарова1, Ю.Н. Рушкевич2, С.А. Лихачев2, Т.В. Докукина3, Ф.П. Хлебоказов3
1 Республиканский научно-практический центр трансфузиологии и медицинских биотехнологий, Минск, Республика Беларусь
2 Республиканский научно-практический центр неврологии и нейрохирургии, Минск, Республика Беларусь
3 Республиканский научно-практический центр психического здоровья, Минск, Республика Беларусь
e-mail: mpotapnev@yandex.by
Ключевые слова: мезенхимальные стромальные клетки человека, внутривенное и эндолюмбальное введение, боковой амиотрофический склероз, симптоматическая эпилепсия.
Актуален поиск путей повышения эффективности применения клеточных продуктов на основе мезенхи-мальных стромальных клеток (МСК) человека. Системное (внутривенное, внутриартериальное) введение МСК является широко распространенным (43%) методом
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
клеточной терапии [1]. Его преимущества — системное влияние на пациента, опосредованное иммуномодулиру-ющим, противовоспалительным и антиапоптотическим действием. Недостатки — необходимость высокой терапевтической дозы МСК (1-2 млн/кг веса), риски неблагоприятных реакций и осложнений (лихорадка, микротромбозы, короткий срок жизни, быстрая утилизация) [2, 3]. Локальное (внутрисуставное, внутрисердечное, ин-тратрахеальное, в область поражения) или региональное (внутримышечное, внутрибрюшинное, эндолюмбальное) введение МСК позволяют снизить (в 5-10 раз) терапевтическую дозу клеток и оказать адресное воздействие на поврежденную ткань. Локально вводимые МСК проявляют регенеративную активность, мобилизуя прогени-торные клетки в очаг поражения [2, 4]. Усиление эффективности и пролонгирование локального воздействия может быть достигнуто праймированием МСК при культивировании in vitro и/или введении вместе с биодегра-дируемым гелем [2].
Наш опыт проведения клеточной терапии пациентам с нейродегенеративными заболеваниями базировался на использовании как системного/внутривенного, так и локального/эндолюмбального введения МСК. Один курс клеточной терапии пациентов с боковым амиотро-фическим склерозом или симптоматической эпилепсией предполагал оба пути введения МСК. Такая тактика позволила обеспечить клинический ответ у 80% (в контроле — 5-15%) пациентов в течение 12 месяцев наблюдения.
Сделано заключение о целесообразности комбинированного подхода к использованию МСК для лечения ней-родегенеративных заболеваний человека.
Литература:
1. Kabat M., Bobkov I., Kumar S.et al. Stem cells Transl. Med.
2020; 9:17-27.
2. Levy O., Kuai R., Siren E.M.J.et al. Sci. Adv. 2020;6: eaba6884
3. Zhuang W.Z., Lin Y.H., Wu M.S.et al. J. Biomed. Sci. 2021;
28:28
4. Caplan H., Olson S.D., Kumar A. et al. Front Immunol. 2019;
10:1645.
АНАЛИЗ ВЛИЯНИЯ САПЛИМЕНТОВ НА ПРОЛИФЕРАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ И ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ ФИБРОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА
В.Р. Потапова1, И.В. Гилевич1, 2, Е.А. Коломийцева2
1 ФГБОУ ВО Кубанский государственный медицинский университет Минздрава России, Краснодар, Россия
2 ГБУЗ НИИ Краевая клиническая больница
№ 1 им. профессора С.В. Очаповского МЗ КК, Краснодар, Россия
Ключевые слова: фибробласты, лизат тромбоцитов, сапли-мент, условия культивирования.
Выбор условий культивирования имеет важное значение при разработке биомедицинского клеточного продукта. Используемые при культивировании добавки должны быть безопасны, эффективны и доступны для технологического процесса. Фетальная бычья сыворотка (ФБС), широко используемая при культивировании, как саплимент для продукта клинического назначения, не подходит, так как является ксеногенным материалом. Целью нашей работы стало определение оптимального
саплимента, который будет обеспечивать жизнеспособность и повышать пролиферативную активность клеток.
В эксперименте сравнивали влияние разных условий культивирования на морфофункциональные свойства трёх клеточных линий дермальных фибробластов, 4 пассажа. Фибробласты культивировали в питательной среде DMEM (Gibco, США) и 100 ед/мл антибиотика-антими-котика. В качестве саплиментов использовали: 1) 10% ФБС — контрольная группа (КГ); 2) 10% плазму человека АВ группы, полученную на станции переливания крови — опытная группа (ОГ) № 1; 3) 5% обогащенную тромбоцитами плазму (ОбТП) — ОГ № 2; 4) 5% лизат тромбоцитов (ЛТ) — ОГ № 3. ОбТП выделяли из периферической крови путём двойного центрифугирования и хранили при -20°С. ЛТ готовили из ОбТП, подвергшейся циклу глубокой заморозки при -800С и разморозке при +370С, с последующим хранением при -200С.
Анализ пролиферативной активности клеток при разных условиях показал, что время удвоения популяции клеток в ОГ№ 1 было длиннее и составило в среднем 70,17 часов, в ОГ № 2 и ОГ № 3 наблюдалось сокращение времени удвоения — 58,67 ч. и 47,67 ч., соответственно, по сравнению сКГ (59,17ч.). При одинаковой плотности засеивания наибольшее количество клеток было получено в ОГ № 2 и № 3 по сравнению с КГ и ОГ № 1, что дополнительно подтвердило факт повышения пролиферативной активности клеток с сапли-ментами на основе продуктов из тромбоцитов. Время достижения конфлюэнтности в КГ составило 7 суток, в ОГ № 1 — 9 суток, в ОГ № 2 — 8 суток, и наименьшим время было в ОГ № 3 — 6 суток. Результаты ХТТ-теста показали, что ни один из саплиментов не оказывал ци-тотоксического действия на фибробласты, но при этом наблюдалось значительное увеличение жизнеспособности клеток в ОГ № 2 и № 3 по сравнению с ОГ № 1 и КГ. Цитохимический тест Live and Dead визуально подтвердил сохранение жизнеспособности клеток при разных условиях. Все клетки вне зависимости от условий экспрес-сировали виментин, отсутствовала экспрессия а-sma.
Таким образом, культивирование с 5% ЛТ (ОГ № 3) более эффективно по сравнению с другими, так как использование данного саплимента в качестве добавки к питательной среде даёт возможность в наиболее короткие сроки достичь конфлюэнтности, а также позволяет получить высокую пролиферативную активность и сохраняет жизнеспособность клеток. Культивирование фибро-бластов таким способом может быть рекомендовано для разработки биомедицинского клеточного продукта.
ВЛИЯНИЕ ГЕН-АКТИВИРОВАННОГО МАТЕРИАЛА НА РЕГЕНЕРАЦИЮ ГИАЛИНОВОГО ХРЯЩА И СУБХОНДРАЛЬНОЙ КОСТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ IN VIVO
Е.В. Пресняков1' 2, Н.И. Жемков1, П.С. Подлужный1, В.В. Церцеил1, Е.С. Рочев2, И.Я. Бозо2, Р.В. Деев1' 2
1 Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова», Санкт-Петербург, Россия,
2 ООО «Гистографт», Москва, Инновационный центр «Сколково», Россия,
e-mail: uvpres@gmail.com
Ключевые слова: ген-активированные остеопластические материалы, октакальциевый фосфат, гидрогелевые материалы для регенерации, репаративный остеогенез, репаратив-ный хондрогенез.
Гены & Клетки XVII, №З, 2G22
