CC BY
1
вать на ликвидацию его у данного индивидуума. Но пользоваться огульными данными об употреблении алкоголя — значит методически и практически искажать подлинную действительность.
Поступила 14/УП 1970 г.
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
УДК в 15*9.076:0 10-003.6.05-076.1
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА ПРИЖИЗНЕННОЙ ОКРАСКИ ТКАНЕЙ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ДЕЙСТВИЯ МАЛЫХ ДОЗ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ1
Доценты Б. М. Штабский и М. И. Гжегоцкий, заслуженный деятель науки
УССР проф. В. 3. Мартынюк
Львовский медицинский институт
Метод прижизненной окраски тканей позволяет обнаружить комплекс обратимых неспецифических изменений протоплазмы, обусловленных нарушением нативности клеточных белков, независимо от точки приложения агента (Д. Н. Насонов и В. Я. Александров). При этом увеличение сродства протоплазмы к красителю свидетельствует о денатурационных изменениях (паранекроз), а ослабление сорбции связывается с реализацией репаратор-ных потенций и указывает на гипернативацию клеточных белков (Д. Н. Насонов).
В работах гигиенистов метод прижизненной окраски применяется сравнительно недавно (Б. М. Штабский; А. И. Копанев; И. П. Уланова, и др.). Ослабление же окрашиваемости тканей установлено главным образом в таких экспериментальных условиях, которые для гигиенических исследований нетипичны (Е. М. Граменицкий). Поэтому мы полагаем, что наиболее существенным общим результатом наших предыдущих исследований (М. И. Гжегоцкий и Б. М. Штабский; Б. М. Штабский и М. И. Гжегоцкий; Б. М." Штабский и соавт.) является обнаружение вполне определенного волнообразного характера изменений сорбционных свойств тканей в динамике токсического процесса (прослежено также на математической модели; Б. М. Штабский).
В таблице, представлены новые данные, полученные при однократном исследовании сорбционных свойств тканей (по С. Н. Романову) в конце 12-месячных хронических опытов с 11 гербицидами, каждый из которых вводили 10 белым крысам per os (в водном растворе) ежедневно, кроме воскресений. В отличие от предыдущих опытов испытуемые вещества вводили в дозах, которые ранее (М. И. Гжегоцкий) были квалифицированы как не-
1 Доложено на пленуме секции гигиены воды и санитарной охраны водоемов союзной проблемной комиссии «Гигиена населенных мест». Львов, июнь 1970 г.
Количество нейтрального красного, поглощенного тканями подопытных животных
(в % к контролю)
Вещество Кора Подкорка Мозжечок Сердце Селезенка Печень Почки
ТХП 91,4 83,3« 87,7 122,91 107,8 115,0 101,1
ДКС 105,7 96,3 96,8 142,4» 137,3» 114,4 112,7»
ЦЛТ 89,6 89,8 96,4 139,1» 125,3 148,9» 107,1
ТХА 90,0 95,9 95,4 149,2» 135,5 143,0 122,9»
ПРМ 113,3 100,4 100,8 118,8» 115,9 124,4» 100,7
ДХМ 92.5 85,71 94,0 135,0» 109,5 124,6» 116,6»
СМЗ 101,8 84,0 96,4 120,7» 120,3 117,9» 116,6»
ЗЕЗ 107,5 98,7 102,8 136,7» 99,2 128,8» 125,9»
ППЗ 99,3 96,9 101,2 141,2» 117,8 113,7 122,4»
ПМТ 105,3 106,1 101,8 115,0» 105,3 119,1 109,9
АТЗ 104,7 91,8 98,6 125,8» 112.6 119.3 107,8
I Статистически достоверно (Р-0,05).
действующие по ряду тестов, позволяющих оценивать функциональное состояние центральной нервной системы, печени и почек, картину крови и др. (при продолжительности опытов от 6 до 10 месяцев). Эти дозы составляли: для пирамина (ПРМ), дихлоральмочевины (ДХМ) и пропазина (ППЗ)—
1 мг/кг, для целатокса (ЦЛТ), прометрина (ПМТ), симазина (СМЗ) и атрази-на (АТЗ)— 0,5 мг/кг, для трихлорпропионитрила (ТХП)— 0,1 мг/кг, дикотекса (ДКС) — 0,25 мг/кг, зеазина (ЗЕЗ) — 0,05 мг/кг трихлораце-тата натрия (ТХА) — 3,5 мг/кг (пороговые дозы оценивались на 1 порядок, а действующие — до 2 порядков выше).
Несмотря на то что к концу опытов удалось сохранить лишь часть животных (в группах, которым вводили ДКС, ТХА и АТЗ, всего по 3—4, но в остальных по 5—6, а в группах, которые получали ПРМ, ДХМ и СМЗ, даже по 7 при 8 контрольных), в некоторых тканях каждой группы животных выявлены колебания сорбции, выдерживающие статистическую проверку. Заметим в связи с этим, что убедительное свидетельство воспроизводимости полученных результатов содержится в них самих, а именно в совпадающих значениях величин сорбционных уровней коры головного мозга и мозжечка во всех группах животных, а' в большинстве групп — еще и в подкорковой части мозга и селезенки.
Поэтому полученные нами данные в целом вполне доказательны и в том, что проявлялась все та же волнообразная реакция, которая обнаружена ранее во всех опытах, где для изучения действия более высоких доз веществ (в том числе 7 из 11 названных гербицидов) применен метод прижизненного окрашивания тканей. Остается признать, что в этом смысле принципиальных различий в действии всех испытанных доз не существует, в связи с чем даже наименьшие из них не могут быть призваны недействующими (изменение ПДК, установленных ранее по органолептическому признаку вредности, не требуется, поскольку коэффициенты запаса по санитарно-токсикологическому признаку все еще остаются достаточно высокими).
Если эти наименьшие дозы принять в качестве пороговых, то отношение к ним среднесмертельных доз составит более 1000 мг/кг для каждого гербицида (для большинства из них LD8O>1000 мг/кг). По существующим взглядам, такие отношения характерны лишь для немногих высококумулятивных веществ (Г. Н. Красовский и соавт.), следовательно, результаты наших опытов пришлось бы считать сомнительными. Мы, однако, полагаем, что широкое применение метода прижизненного окрашивания тканей позволило бы эти (и даже более контрастные) показатели отнести к числу типичных.
Действительно, по абсолютной величине самая малая испытанная нами доза составляет 50 мкг/кг (зеазин). Как замечает Р. Барлоу по поводу значительно меньших доз (10"в мкг/кг), количество молекул в их составе еще достаточно велико, чтобы второй закон термодинамики не оказался под угрозой. Понятно, что возможность выявления действия таких доч зависит исключительно от соответствующих характеристик методов исследования (при прочих равных условиях).
В работах гигиенистов используются обычно нейрофизиологические, биохимические и гистологические методы исследования. В отношении последних твердо установлено, что по сравнению с прижизненным окрашиванием на фиксированных препаратах выявляются лишь более грубые изменения, развивающиеся под влиянием больших доз или в более поздние сроки (М. В. Яковлев). Очевидно, в тех случаях, когда логика исследований не вынуждает обращаться к гистологии, схему исследований можно существенно упростить, ограничившись прижизненными исследованиями тканей.
Метод условных рефлексов в этом смысле характеризуется тем, что уже сами условные раздражители в различные сроки после выработки рефлексов определяют изменения сорбционных свойств тканей (С. Н. Романов).
Что касается биохимических тестов, то следует иметь в виду, что первичные реакции взаимодействия химических веществ с нативными макромолекулами основаны на явлениях не столько химической, сколько физической природы. Как указывает М. В. Волькенштейн, «есть все основания думать, что конформационные превращения белков определяют их самые разнообразные функции — ферментативную, механохимическую, перенос кислорода гемоглобином». Но именно эти конформационные перестройки, или (что то же самое) явления обратимой денатурации нативных белков, определяют и большее или меньшее связывание прижизненного красителя. Поэтому по своей чувствительности метод прижизненного окрашивания по меньшей мере, не уступает также любому биохимическому тесту, включая специфические.
Все изложенное, на наш взгляд, заставляет думать не только о целесообразности, но и, по-видимому, об обязательности применения метода прижизненного окрашивания тканей (наряду с другими методами) в работах по гигиенической оценке химических веществ.
ЛИТЕРАТУРА
Волькенштейн М. В. Физика ферментов. М., 1967, с. 153.— Г ж е г о ц-к и й М. И. Гигиеническая и токсикологическая характеристика хлоросодержащих гербицидов корневого действия. Автореф. дисс. докт. Львов, 1970.—Г жегоцкий М. И., Штабский Б. М. Врач, дело, 1968, № 11, с. 121; Гиг. и сан., 1969, № 2, с. 109.— Граменицкий Е. М. Прижизненная окраска клеток и тканей в норме н патологии. Л., 1963.— К о п а н е в А. И. Гиг. и сан., 1965, № 12, с. 54.— Красовский Г. Н., К о р о л е в А. А., Ш и г а н С. А. Там же, 1970, № 3, с. 83.— Насонов Д. Н. Местная реакция протоплазмы и распространяющееся возбуждение. М. — Л., 1962.— H а-сонов Д. Н., Александров В. Я. Реакция живого вещества на внешние воздействия. М. — Л., 1940.— Романове. Н. В кн.: Вопросы цитологии и общей физиологии. М.— Л., 1960, с. 254.— Уланова И. П. В кн.: Гигиена и токсикология пестицидов и клиника отравлений. Киев, 1965, с. 518.— Штабский Б. М. В кн.: Гигиена населенных мест. Киев, 1969, с. 41.— Штабский Б. М., Гжегоцкий М. И. Гиг. и сан., 1968, № 3, с. 113.— Штабский Б. М., Гжегоцкий М. И., M а р т ы н ю к В. 3. Там же, 1969, № 5, с. 98,— Яковлев М. В. Бюлл. экспер. биол., 1958, т. 45, № 5, с. 17, № 6, с. 49; т. 46, № 9, с. 71; № 10, с. 46,— Б а р-л о у Р. Введение в химическую фармакологию. М., 1959.
Поступила 1/VII 1970 г.
