CC BY
17
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
бластных клетках, в данном случае 1. То есть все аллели в бла-стах являются мутантными, мутация FLT3/ITD представлена в гомозиготной форме. При нарастании доли бластов AR в этом случае очень быстро вырастет больше критического значения 0.5, но пациент будет отнесен к группе промежуточного риска, если ориентироваться только на аллельное отношение без учета доли бластных клеток.
Выводы. Более 20% (8 из 36) выявленных FLT3/ITD мутаций находятся в гомозиготной форме благодаря однородитель-
ской дисомии 13^ не определяемой стандартным цитогенети-ческим анализом, но являющейся в совокупности с FLT3/ITD фактором плохого прогноза. У пациентов без мутации FLT3/ITD риск потери гетерозиготности 13q значительно ниже (отношение шансов (OR) 7.429). При низком бластозе гомозиготную форму мутации, соответственно, потенциальный рост AR до критического значения 0.5 и выше, может выявить предложенный нами дополнительный параметр - отношение аллельной нагрузки к бластозу.
Ж.З. Рахманова, О.В. Паина, П.В. Кожокарь, А.С. Фролова, Л.А. Цветкова, К.А. Екушов, Н.В. Субора, Е.В. Бабенко, Т.Л. Гиндина, А.Л. Алянский, И.М. Бархатов, А.Д. Кулагин, Е.В. Семенова, Л.С. Зубаровская
ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МОБ ПЕРЕД АЛЛО-ТГСК С РЕЖИМАМИ КОНДИЦИОНИРОВАНИЯ РАЗЛИЧНОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ У ДЕТЕЙ С ОСТРЫМ
МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Научно-исследовательский институт детской онкологии, гематологии и трансплантологии имени Р.М. Горбачевой, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
Введение. Выявление минимальной остаточной болезни (МОБ) у детей с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) позволяет использовать риск-адаптированный подход в терапии после аллогенной трансплантации гемопоэтичских стволовых клеток (алло-ТГСК). Несмотря на удовлетворительные показатели общей выживаемости (ОВ) у детей в первой и второй ремиссии ОМЛ после алло-ТГСК, безрецидивная выживаемость (БРВ) и выживаемость без РТПХ/рецидива (Graft versus host disease/ Relapse Free Survival - GRFS) требует дальнейшего улучшения.
Цель. Оценка результатов алло-ТГСК у педиатрических пациентов с ОМЛ в первой и второй ремиссии с положительным или отрицательным статусом МОБ по данным молекулярно-биологических методов и иммунофенотипирования перед алло-ТГСК с миелоаблативным режимом кондиционирования (МАК) или с режимом кондиционирования со сниженной интенсивностью доз (РИК).
Материалы и методы. Проанализированы данные 87 детей с ОМЛ в первой и второй ремиссии, которым была выполнена аллоТГСК в НИИ ДОГиТ им. Р.М. Горбачевой в период с 2008 по 2020 год. Медиана возраста на момент проведения алло-ТГСК составила 8 лет (5 месяцев-19 лет). Статус МОБ- имели 59 (68%) пациентов, у 28 (32%) пациентов был выявлен статус МОБ+ как по данным молекулярно-генетических исследований, так и по данным проточной цитометрии. МАК на основе бусульфана (1016 мг/кг) получили 40 (46%) пациентов, на основе треосульфа-на -10 (11%) пациентов. РИК на основе мелфалана получили 22 (25%) пациентов, на основе бусульфана (8 мг/кг) -15 (18%) пациентов. Алло-ТГСК от полностью совместимого родственного донора была выполнена 10 (11,5%), полностью совместимого неродственного донора - 37 (42,5%), частично совместимого неродственного донора - 14 (16%), гаплоидентичного донора -
26 (30%) пациентам. Всем пациентам проводили профилактику острой РТПХ: серопрофилактику на основе АТГ использовали у 21 (24%), посттрансплантационного циклофосфамида (ПтЦф) у 59 (68%) пациентов, TCR альфа/бета деплеции у 3 (3%) пациентов.
Результаты. При медиане наблюдения 5 лет в когорте пациентов с статусом МОБ+ ОВ составила 67% vs 72% для пациентов с МОБ- статусом (р=0,880). Безрецидивная выживаемость (БРВ) -60% vs 79%, соответственно (р=0,086). Выживаемость без РТПХ/ рецидива в когорте больных с МОБ+ статусом - 39% vs 45% с МОБ- статусом (р=0,586). ОВ в группе пациентов после МАК с МОБ+ статусом 53,8% vs 78,4% с МОБ- статусом (р=0,206), после РИК 83,6% vs 63,6%, (р=0,280) соответственно. БрВ в когорте детей после МАК с МОБ+ статусом 46,2% vs 75% с МОБ- статусом (р=0,070), после РИК 73,3% vs 86,4%, (р=0,358) соответственно. СИРЗ в группе пациентов после МАК с МОБ+ статусом 30,8% vs 45,9% с МОБ- статусом (р=0,379), после РИК 46,7% vs 45,5%, (р=0,974) соответственно. ОВ у МОБ- статусом пациентов с/без использования ПтЦф 81% vs 52% (р=0,023); БРВ - 80% vs 76%, соответственно. СИРЗ 54% vs 23% соответственно (р=0,001). ОВ, БРВ, СИРЗ у МОБ+ статусом пациентов с/без использования ПтЦф - 64%, 64%, 47% vs 72%, 54%, 27% (р>0,05).
Выводы. У пациентов с положительным статусом МОБ перед алло-ТГСК имеется тенденция к снижению показателей БРВ. При алло-ТГСК ОВ, СИРБ пациентов с ОМЛ в 1 и 2 ремиссии сопоставимы вне зависимости от статуса МОБ и режима кондиционирования (РИК vs МАК), однако имеется тенденция к более высоким показателям БРВ у больных получивших МАК в МОБ-статусе по сравнению с больными, получившими МАК в МОБ+ статусе. ПтЦф статистически значимо улучшает СИРБ и ОВ у детей с ОМЛ при МОБ- статусе перед алло-ТГСК.
Н.В. Рисинская1, Я.К. Мангасарова1, Е.Е. Никулина1, Я.А. Кожевникова2, А.У. Магомедова1, С.К. Кравченко1,
А.Б. Судариков1
ПОТЕРЯ ГЕТЕРОЗИГОТНОСТИ И МИКРОСАТЕЛЛИТНАЯ НЕСТАБИЛЬНОСТЬ КОРОТКИХ ТАНДЕМНЫХ ПОВТОРОВ ОПУХОЛЕВОЙ ДНК ПРИ ПЕРВИЧНОЙ МЕДИАСТИНАЛЬНОЙ В-КЛЕТОЧНОЙ КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМЕ
1Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр
гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва 2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова», г. Москва
Введение. Потеря гетерозиготности (LOH) в локусах коротких тандемных повторов, а также варианты микро-сателлитной нестабильности EMAST (elevated microsatellite alterations at selected tetranucleotide repeats) и MSI (microsatellite
instability) являются уникальными пациент-специфичными молекулярными характеристиками опухоли. Для ряда солидных опухолей показано, что определенные варианты MSI ассоциированы с чувствительностью опухоли к иммунотерапии
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
ингибиторами контрольных точек. Для первичной медиасти-нальной B-клеточной крупноклеточной лимфомы (ПМВКЛ) исследование этих молекулярных факторов для определения прогноза заболевания и выбора терапии практически не проводилось. В нашем пилотном исследовании было показано, что стандартный набор из пяти маркеров мононуклеотидных микросателлитных повторов BAT-25, BAT-26, NR21, NR-24 и NR-27, традиционно используемый для анализа MSI в солидных опухолях, не информативен при ПМВКЛ из-за низкой встречаемости MSI при данной патологии (до 5%). Также в половине случаев MSI второй аллель выявляется как в опухоли, так и в контрольном материале, что объясняется наличием у больного редкого герминального варианта микросателлита, а не особенностью опухолевых клеток. Перекрывающиеся комбинации ферментов комплекса репарации ДНК ответственны как за восстановление неспаренных оснований, так и за удаление вставок петель олигонуклеотидов. Несостоятельность ферментов комплекса репарации ДНК может привести как к MSI, так и к EMAST. Возможно, исследование EMAST при ПМВКЛ будет более информативным, чем исследование MSI.
Цель. Проанализировать частоту LOH и EMAST в опухолевых клетках пациентов с ПМВКЛ в дебюте заболевания и проверить возможную ассоциацию с гиперэкспрессией мРНК PD-L1 (лиганда белка программируемой клеточной смерти).
Материалы и методы. STR-профили ДНК опухолевых клеток были проанализированы для когорты из 72 пациентов (медиана возраста 32 года, 23 мужчины,49 женщин) с диагнозом ПМВКЛ de novo, получавших терапию по протоколу R-DA-EPOCH (n=62) или R-NHL-BFM-90 (n = 10) в Национальном медицинском исследовательском центре гематологии (Москва, Россия). ДНК была выделена из архивных образцов биоптатов опухоли, взятых при установлении диагноза. Контрольные образцы ДНК выделяли из крови пациентов в ремиссии или из буккального эпителия. STR-профили для анализа LOH и
EMAST оценивали с помощью STR-ПЦР, используя мультиплексный набор для амплификации 19 STR-маркеров и ло-кусов амелогенина COrDIS Plus (ООО «Гордиз», Россия). Фраг-ментный анализ был выполнен на генетическом анализаторе ABI3130. Для 15 пациентов статус LOH и EMAST сравнивали с уровнем экспрессии мРНК PD-L1, определенного ранее, непосредственно в дебюте заболевания, но на тех же образцах.
Результаты. Потеря гетерозиготности выявлена у 37 из 72 пациентов (51,4%). EMAST обнаружили у 40 пациентов (55,5%); у 24 из них в комбинации с LOH. Для всех EMAST-положительных пациентов количество вовлеченных локусов было не более 4 из 19 (EMAST-low, менее трети панели микро-сателлитных маркеров). Показано, что общая и бессобытийная выживаемость были самыми высокими у пациентов со стабильным STR-профилем опухоли. Среди 15 пациентов с известным уровнем экспрессии мРНК PD-L1 у шести пациентов не было выявлено ни EMAST, ни гиперэкспрессии PD-L1. У трех пациентов EMAST с 2-3 вовлеченными STR-локусами сочетался с гиперэкспрессией PD-L1. Для 4 пациентов была выявлена комбинация EMAST и нормальной экспрессии PD-L1, и для двух пациентов гиперэкспрессия PD-L1 была выявлена при стабильном STR-профиле опухоли. Несмотря на малый объем выборки и невозможность достоверной статистической оценки связи неэффективности стандартной терапии и комбинации EMAST и гиперэкспрессии PD-L1, необходимо отметить, что у всех пациентов этой группы (3 человека) стандартная терапия была неэффективна.
Выводы. LOH и EMAST при ПМВКЛ, возможно, ассоциированы с меньшей эффективностью стандартной терапии у пациентов. Исследование EMAST как варианта микросател-литной нестабильности, особенно в сочетании с оценкой экспрессии PD-L1, может быть важно для прогнозирования ответа на терапию ингибиторами контрольных точек. Работа поддержана грантом Ракфонда 2/2020.
Н.Р. Рябчиковаг, Г.Ш. Сафуанова Ь4, И.Р. Минниахметов 2;3, Э.К. Хуснутдинова2, Д.Р. Сафуанова5, А.А. Латыпова4
АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ОНКОСУПРЕССОРОВ PTPN1 И NF1 В КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ К562 В ЛЕЙКОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОЛЕЙКОЗОМ
1Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Башкирский
государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения России, г. Уфа 2Институт биохимии и генетики - обособленное структурное подразделение Федерального государственного
бюджетного научного учреждения Уфимского федерального исследовательского центра Российской академии наук, г. Уфа
3Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Республиканский медико-генетический центр, г. Уфа 4Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Республиканская клиническая больница им Г.Г. Куватова, Уфа 5Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Ключевую роль в возникновении онкологических заболеваний играют нарушения функции протоонкоге-нов, опухолевых супрессоров и так называемых мутаторных генов (Копнин Б.П., 2004). В настоящем исследовании проведен анализ уровня экспрессии генов тирозиновой фосфатазы первого типа PTPN1 и нейрофиброматоза первого типа №1, предположительно являющихся супрессорами опухолевого роста в развитии многих онкологических заболеваний.
Цель. Провести анализ экспрессии генов онкосупрессоров PTPN1 и №1 в клеточной ливни ХМЛ К562, в лейкоцитах периферической крови больных хронического миелолекоза (ХМЛ) и индивидов контрольной группы
Материал и методы. Генетические исследования проводились у 114 пациентов с клинически и цитогенетически установленным диагнозом ХМЛ в хронической стадии, находившихся под наблюдением гематологов Республиканской клинической больницы. Мужчин было 55, женщин 59, медиана
возраста составила 43 года (от 14 до 76 лет). Все больные получали лечение ингибиторами тирозинкиназ (ИТК) (согласно национальным клиническим рекомендациям и ELN). Сравниваемые группы были рандомизированы и сопоставимы по полу и возрасту. Определение уровня экспрессии генов PTPN1 и NF1 проводилось методом ПЦР, а также в клеточной линии ХМЛ К562, при анализе использовали соответствующие праймеры RT2 gPSR Hrimer Assays, RT2 SYBR Green/Fluorescein gPSR Master Mix (Super Ату Bioscience,USA). Статистическая обработка полученных данных проводились на персональном компьютере типа IBM PC/AT с использованием стандартной программы «Microsoft Office Excel» и пакета прикладных программ статистической программы «Statistica 6.0 for Windows», SAS v.9.3.
Результаты. При анализе уровня экспрессии гена PTPN1 в лейкоцитах периферической крови выявлены статистически значимые различия между контрольной группой и больными, резистентными к терапии НТК. В клеточной линии К562
