CC BY
10
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
В.Г. Потапенко13, В.В. Байков3, А.В. Горбунова2, А.В. Климович1, Ю.А. Криволапов2, Е.А. Филиппова3, Н.В. Медведева2
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ МИШЕНЕЙ У ПАЦИЕНТОВ СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ГИСТИОЦИТОЗАМИ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДОВ
МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
1Санкт-Петербургское государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Городская клиническая больница № 31», г.Санкт-Петербург
2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
3Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
Введение. Описана эффективность таргетных препаратов при выявлении мутаций в генах BRAF, MAP2K1 и ALK у пациентов со злокачественными новообразованиями, в том числе гистиоцитозами.
Цель. Определение потенциальных терапевтических мишеней у больных со злокачественными гистиоцитозами.
Материалы и методы. В исследование включено 8 пациентов: 4 мужчины и 4 женщины, медиана возраста 47 (38-69) лет. У всех на основании критериев ВОЗ диагностированы: болезнь Эрдхейма-Честера (n=1), болезнь Розаи-Дорфмана-Дестомбс (n=2), диссеминированная форма гистиоцитоза из клеток Лангерганса (n=2), недетерминированный (n=2) и ALK-позитивный гистиоцитоз (n=l). Для молекулярного анализа использованы биоптаты опухолевой ткани фиксированные формалином и залитые в парафин. Проведено сек-
венирование нового поколения, а также аллель-специфичная полимеразная цепная реакция (ПЦР) для обнаружения мутаций BRAF, MAP2K1 и ALK.
Результаты. У 5 пациентов выполнена ПЦР для определения мутации BRAFV600E. Мутация обнаружена у 1 больного с болезнью Эрдхейма-Честера. У 4 пациентов проведено секвенирование нового поколения. У обоих больных с болезнью Розаи-Дорфмана выявлены мутации MAP2K1 F53L и I103N (класс патогенности 5), при недетерминированном гистиоцитозе обнаружена мутация BRAF c.[1337C>T; 1340 G>A] (класс патогенности 4) и при ALK-позитивном гистиоцитозе - слитный ген SQSTM1-ALк(класс патогенности 5).
Выводы. С помощью методов молекулярной диагностики у 5 из 8 пациентов со злокачественными гистиоцитозами определены потенциальные терапевтические мишени.
А.С. Пшеничный, Н.В. Рисинская, А.А. Юшкова, А.Б. Судариков
СВЯЗЬ ПОТЕРИ ГЕТЕРОЗИГОТНОСТИ 13Q И МУТАЦИИ FLT3/ITD В ГЕНОМЕ
ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК У ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. Острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) - это кло-нальное опухолевое заболевание кроветворной ткани. Многочисленные исследования показали, что внутренняя тандемная дупликация фрагмента ДНК околомембранного домена гена FLT3 (13q12.2) (FLT3/ITD - internal tandem duplication) является наиболее частой (от 13% до 32%) мутацией у взрослых больных ОМЛ, в том числе с нормальным кариотипом. В мировой практике критерием включения пациентов с FLT3/ITD в группу высокого риска является аллельное отношение AR (allele ratio) выше 0.5. Величина отношения мутантного аллеля гена FLT3 к дикому зависит от двух параметров - доли опухолевых клеток в образце и формы мутации - гомозиготной или гетерозиготной.
Цель. проанализировать аллельное отношение и аллель-ную нагрузку у пациентов с выявленной мутацией FLT3/ITD и предложить подходы для коррекции этих параметров с учетом количества опухолевых клеток в образце и зиготности мутации.
Материалы и методы. В ретроспективный анализ включен материал от 36 больных ОМЛ, имеющих мутацию FLT3/ITD, выявленную методом ПЦР с последующим фрагментным анализом ПЦР-продуктов на генетическом анализаторе ABI 3130 (Thermofisher Scientific, USA). Контрольная группа пациентов с ОМЛ без мутации FLT3/ITD включала 27 человек, для которых тоже было проведено исследование STR-профилей опухолевой ДНК. Для двоих пациентов с мутацией FLT3/ITD и выявленной потерей гетерозиготности в sTR-локусе D13S317 (13q31.3) был выполнен хромосомный микроматричный анализ (ХМА). Для каждого больного рассчитано отношение аллельной нагрузки к бластозу, и при величине отношения больше 0.5 (в бластах
преобладает мутантный аллель) проведен сравнительный анализ STR профилей данного образца ДНК и контрольного, выделенного из крови или костного мозга этого пациента в ремиссии или буккального эпителия, если ремиссия не доказана.
Результаты. В контрольной группе потеря гетерозиготности в локусе D13S317 была выявлена только у одного пациента из 27 (3.7% против 22% в группе с мутацией FLT3/ITD, р=0.038). Из 8 пациентов с высоким аллельным отношением и аллельной нагрузкой FLT3/ITD у 6 обнаружена потеря гетерозиготности в локусе STRD13S317 (13q31.3), у двоих пациентов этот локус был гомозиготным и в контрольной ДНК. У двух пациентов, которым удалось провести ХМА, была выявлена однородительская дисомия 13q (потеря гетерозиготности с сохранением копийности ДНК l3q). Для всех восьми пациентов были отмечены рецидивы заболевания (в том числе множественные) даже после трансплантации костного мозга. Однако, в рецидивах у некоторых пациентов AR не превышало 0.5 из-за того, что бластоз в момент анализа был еще низким, и соответственно, вклад аллелей дикого типа из здоровых клеток - высоким. Поэтому нами предложен дополнительный параметр - отношение аллельной нагрузки к бластозу, помогающий выявить гомозиготную форму мутации при низком бластозе. Например, при бластозе 25% и гомозиготной форме мутации AR будет 0,33 (отношение суммы мутантных аллелей к сумме диких), аллельная нагрузка 25% (отношение суммарного флуоресцентного сигнала от ампликонов всех мутантных аллелей к сумме сигналов всех аллелей). При делении на долю бласт-ных клеток в образце мы получаем долю мутантных аллелей в
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
бластных клетках, в данном случае 1. То есть все аллели в бла-стах являются мутантными, мутация FLT3/ITD представлена в гомозиготной форме. При нарастании доли бластов AR в этом случае очень быстро вырастет больше критического значения 0.5, но пациент будет отнесен к группе промежуточного риска, если ориентироваться только на аллельное отношение без учета доли бластных клеток.
Выводы. Более 20% (8 из 36) выявленных FLT3/ITD мутаций находятся в гомозиготной форме благодаря однородитель-
ской дисомии 13^ не определяемой стандартным цитогенети-ческим анализом, но являющейся в совокупности с FLT3/ITD фактором плохого прогноза. У пациентов без мутации FLT3/ITD риск потери гетерозиготности 13q значительно ниже (отношение шансов (OR) 7.429). При низком бластозе гомозиготную форму мутации, соответственно, потенциальный рост AR до критического значения 0.5 и выше, может выявить предложенный нами дополнительный параметр - отношение аллельной нагрузки к бластозу.
Ж.З. Рахманова, О.В. Паина, П.В. Кожокарь, А.С. Фролова, Л.А. Цветкова, К.А. Екушов, Н.В. Субора, Е.В. Бабенко, Т.Л. Гиндина, А.Л. Алянский, И.М. Бархатов, А.Д. Кулагин, Е.В. Семенова, Л.С. Зубаровская
ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МОБ ПЕРЕД АЛЛО-ТГСК С РЕЖИМАМИ КОНДИЦИОНИРОВАНИЯ РАЗЛИЧНОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ У ДЕТЕЙ С ОСТРЫМ
МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ
Научно-исследовательский институт детской онкологии, гематологии и трансплантологии имени Р.М. Горбачевой, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
Введение. Выявление минимальной остаточной болезни (МОБ) у детей с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) позволяет использовать риск-адаптированный подход в терапии после аллогенной трансплантации гемопоэтичских стволовых клеток (алло-ТГСК). Несмотря на удовлетворительные показатели общей выживаемости (ОВ) у детей в первой и второй ремиссии ОМЛ после алло-ТГСК, безрецидивная выживаемость (БРВ) и выживаемость без РТПХ/рецидива (Graft versus host disease/ Relapse Free Survival - GRFS) требует дальнейшего улучшения.
Цель. Оценка результатов алло-ТГСК у педиатрических пациентов с ОМЛ в первой и второй ремиссии с положительным или отрицательным статусом МОБ по данным молекулярно-биологических методов и иммунофенотипирования перед алло-ТГСК с миелоаблативным режимом кондиционирования (МАК) или с режимом кондиционирования со сниженной интенсивностью доз (РИК).
Материалы и методы. Проанализированы данные 87 детей с ОМЛ в первой и второй ремиссии, которым была выполнена аллоТГСК в НИИ ДОГиТ им. Р.М. Горбачевой в период с 2008 по 2020 год. Медиана возраста на момент проведения алло-ТГСК составила 8 лет (5 месяцев-19 лет). Статус МОБ- имели 59 (68%) пациентов, у 28 (32%) пациентов был выявлен статус МОБ+ как по данным молекулярно-генетических исследований, так и по данным проточной цитометрии. МАК на основе бусульфана (1016 мг/кг) получили 40 (46%) пациентов, на основе треосульфа-на -10 (11%) пациентов. РИК на основе мелфалана получили 22 (25%) пациентов, на основе бусульфана (8 мг/кг) -15 (18%) пациентов. Алло-ТГСК от полностью совместимого родственного донора была выполнена 10 (11,5%), полностью совместимого неродственного донора - 37 (42,5%), частично совместимого неродственного донора - 14 (16%), гаплоидентичного донора -
26 (30%) пациентам. Всем пациентам проводили профилактику острой РТПХ: серопрофилактику на основе АТГ использовали у 21 (24%), посттрансплантационного циклофосфамида (ПтЦф) у 59 (68%) пациентов, TCR альфа/бета деплеции у 3 (3%) пациентов.
Результаты. При медиане наблюдения 5 лет в когорте пациентов с статусом МОБ+ ОВ составила 67% vs 72% для пациентов с МОБ- статусом (р=0,880). Безрецидивная выживаемость (БРВ) -60% vs 79%, соответственно (р=0,086). Выживаемость без РТПХ/ рецидива в когорте больных с МОБ+ статусом - 39% vs 45% с МОБ- статусом (р=0,586). ОВ в группе пациентов после МАК с МОБ+ статусом 53,8% vs 78,4% с МОБ- статусом (р=0,206), после РИК 83,6% vs 63,6%, (р=0,280) соответственно. БрВ в когорте детей после МАК с МОБ+ статусом 46,2% vs 75% с МОБ- статусом (р=0,070), после РИК 73,3% vs 86,4%, (р=0,358) соответственно. СИРЗ в группе пациентов после МАК с МОБ+ статусом 30,8% vs 45,9% с МОБ- статусом (р=0,379), после РИК 46,7% vs 45,5%, (р=0,974) соответственно. ОВ у МОБ- статусом пациентов с/без использования ПтЦф 81% vs 52% (р=0,023); БРВ - 80% vs 76%, соответственно. СИРЗ 54% vs 23% соответственно (р=0,001). ОВ, БРВ, СИРЗ у МОБ+ статусом пациентов с/без использования ПтЦф - 64%, 64%, 47% vs 72%, 54%, 27% (р>0,05).
Выводы. У пациентов с положительным статусом МОБ перед алло-ТГСК имеется тенденция к снижению показателей БРВ. При алло-ТГСК ОВ, СИРБ пациентов с ОМЛ в 1 и 2 ремиссии сопоставимы вне зависимости от статуса МОБ и режима кондиционирования (РИК vs МАК), однако имеется тенденция к более высоким показателям БРВ у больных получивших МАК в МОБ-статусе по сравнению с больными, получившими МАК в МОБ+ статусе. ПтЦф статистически значимо улучшает СИРБ и ОВ у детей с ОМЛ при МОБ- статусе перед алло-ТГСК.
Н.В. Рисинская1, Я.К. Мангасарова1, Е.Е. Никулина1, Я.А. Кожевникова2, А.У. Магомедова1, С.К. Кравченко1,
А.Б. Судариков1
ПОТЕРЯ ГЕТЕРОЗИГОТНОСТИ И МИКРОСАТЕЛЛИТНАЯ НЕСТАБИЛЬНОСТЬ КОРОТКИХ ТАНДЕМНЫХ ПОВТОРОВ ОПУХОЛЕВОЙ ДНК ПРИ ПЕРВИЧНОЙ МЕДИАСТИНАЛЬНОЙ В-КЛЕТОЧНОЙ КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМЕ
1Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр
гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва 2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова», г. Москва
Введение. Потеря гетерозиготности (LOH) в локусах коротких тандемных повторов, а также варианты микро-сателлитной нестабильности EMAST (elevated microsatellite alterations at selected tetranucleotide repeats) и MSI (microsatellite
instability) являются уникальными пациент-специфичными молекулярными характеристиками опухоли. Для ряда солидных опухолей показано, что определенные варианты MSI ассоциированы с чувствительностью опухоли к иммунотерапии
